低剂量预照射对小鼠放射性肺损伤的预防作用及其可能的机制

目的 评估低剂量辐射预照射对放射性肺损伤的预防作用及其可能机制。方法 320只6周龄雌性C57BL/6j小鼠用随机数表法将其分为对照组(0 Gy)、低剂量组(0.5 Gy)、高剂量组(20 Gy)和低剂量预照射组(0.5 Gy+20 Gy),每组80只。将低剂量组和低剂量预照射组的小鼠于充分清醒的状态下放入固定装置中进行0.5 Gy低剂量X射线全身照射。2周后将高剂量组和低剂量预照射组的小鼠进行麻醉,行20 Gy的高剂量X射线胸部照射。而对照组小鼠行模拟照射(0 Gy)。所有小鼠在完成照射计划后按照设计的时间点(24 h、1个月、3个月和5个月)进行处理,每个时间点处理小鼠20只/组。取小鼠肺组织标本,采用苏木精-伊红染色法(HE染色)和Masson三色染色法观察病理变化;RT-qPCR和Western blot检测肺纤维化相关因子mRNA和蛋白的表达。结果 单次高剂量20 Gy照射后1个月的肺组织发生病理改变,主要表现为放射性肺炎和少量胶原蛋白堆积,随着照射后时间的递增,病理改变越为严重;而低剂量预照射组在各个时间点的肺组织病理学改变均较高剂量组的轻。同时,除照射后3个月和5个月组的proSP-C蛋白外,低剂量预照射组的proSP-C和HOPX的mRNA和蛋白水不同程度地高于高剂量组。更为显著变化的是,高剂量组TGF-β1的mRNA 水平在照射后5个月时是其他组的5.8~13.6倍。 在照射后5个月,高剂量组β-catenin的mRNA和蛋白水平均远高于低剂量预照射组 (t=4.22、5.11,P<0.05)。同时,在照射后24 h和1个月的低剂量预照射组vimentin蛋白水平显著高于高剂量组(t=6.54、4.28,P<0.05)。结论 生物组织接受0.5 Gy低剂量电离辐射预照射可诱导正常组织产生适应性保护反应,进而对后续的治疗剂量的辐射产生耐受作用。     

MMP-12异常表达对放射性肺损伤大鼠肺内成纤维细胞转化的影响

目的 观察放射性肺损伤过程中基质金属蛋白酶12(MMP-12)过表达对肺成纤维细胞转化的作用.方法 32只雄性Wistar大鼠,体重250～280g,随机分为正常对照组(n=8)和照射组(n=24).照射组用20Gy60Co γ射线进行全胸照射,分别于照射后1、2、4周行肺组织取材,每时间点8只.应用明胶酶谱法检测MMP-12酶活性变化,组织特殊染色法观察肺泡壁弹力纤维降解情况,透射电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞与肺间质细胞间的"信号交流"(cross talking)现象,ELISA法检测肺组织中TGF-β1含量,免疫组化检测肺组织a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)表达情况.结果 MMP-12酶活性在照射后1周开始增高,至照射后4周时有所下降;肺泡壁基底膜弹力纤维照射后1周开始出现降解断裂,4周时最为严重;肺组织TGF-β1含量和a-SMA免疫组化阳性信号在1～4周内随照后时间延长而逐渐升高.电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞与肺间质细胞间出现"信号交流"现象.结论 照射后肺组织MMP-12酶活性增高,可能通过降解基底膜弹力纤维促进成纤维细胞转化,启动肺纤维化的发生.     

一种靶向FOXO4的人工合成多肽FOXO4-DRI可逆转放射性肺纤维化

目的探讨FOXO4-DRI能否逆转放射性肺纤维化(RIPF)及其作用机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为对照组、FOXO4-DRI组、照射组、照射+ FOXO4-DRI组, 照射组和照射+ FOXO4-DRI组小鼠右侧全胸接受17 Gy X射线照射, FOXO4-DRI组和照射+ FOXO4-DRI组小鼠照射后第16周和第20周分别腹腔注射FOXO4-DRI。照射后第24周收集小鼠右肺组织, 进行HE染色和Masson三色染色, 观察肺组织形态学改变和胶原沉积情况;免疫组织化学染色法检测肺组织中col1α1和α-SMA的表达;β-半乳糖苷酶(β-gal)染色观察衰老细胞;活性氧试剂盒检测肺组织活性氧水平;RT-PCR检测P21、P16Ink4a和衰老相关分泌表型(SASP)mRNA的表达;Western blot检测相关蛋白表达水平。结果 FOXO4-DRI减少了RIPF小鼠肺组织中胶原组织的沉积(t=6.18, P<0.05), 降低了col1α1和α-SMA的表达(t=4.69、3.20, P<0.05)。FOXO4-DRI减少了RIPF小鼠肺组织中β-gal阳性细胞...     

Ⅳ型胶原、MMP-9和TIMP-1基因表达在早期放射性肺纤维化启动中的作用

目的 观察早期放射性肺纤维化启动过程中Ⅳ型胶原、明胶酶B(MMP-9)、金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)的基因表达特点,探讨其在放射性肺损伤中的作用.方法 C57小鼠于20Gy 60Co γ射线全肺照射后照射后1、2、4周活杀,每个时间点分别配有相应的正常对照组.RT-PCR检测Ⅳ型胶原、MMP-9、TIMP-1 mRNA水平的变化,并应用图像分析仪测定电泳条带的平均光密度值.结果 Ⅳ型胶原mRNA于照射后1周开始增高(0.202),4周达高峰(0.340);MMP-9 mRNA于照射后1周即有明显增高并且达到高峰(0.730),于第2周开始降低(0.592);TIMP-1 mRNA于照射后1周开始轻度增加(0.987),4周时达高峰(2.027).结论 60Co γ射线可刺激Ⅳ型胶原、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达,但随照射后时间的延长呈现不同的变化趋势,它们之间的相互制约导致了放射性肺损伤早期的组织重建,与后来形成的肺纤维化有必然的内在联系.     

GATA-3在放射性肺纤维化中的作用机制

目的 通过建立小鼠放射性肺纤维化模型,了解转录因子GATA-3及白细胞介素-13(IL-13)在放射性肺纤维化形成过程中的表达情况及其意义,为放射性肺纤维化的防治提供实验和理论依据。方法 成年雌性C57BL/6小鼠63只,随机分作2组:对照组21只, 不做任何处理;照射组42只,全肺单次照射12 Gy。于照射后1 h、1、2、4、8、16和24周,取照射组及相同鼠龄对照组小鼠肺组织和血清,分别用HE和Masson染色在光镜下观察组织病理改变和胶原纤维沉积;用碱水解法测定羟脯氨酸含量;用实时定量RT-PCR法检测GATA-3mRNA相对含量;用ELISA法测定血清中IL-13的含量;用Western blot法检测肺组织中GATA-3的蛋白表达变化情况。结果 光镜下,照射组小鼠肺组织较对照组组织学改变和胶原纤维沉积明显;测定羟脯氨酸含量显示,照射组小鼠肺组织中的羟脯氨酸含量较对照组明显增高(Z=3.142,P＜0.05);蛋白和mRNA检测结果显示,较之对照组,GATA-3和IL-13的表达在照射组中明显升高,特别是在肺组织尚未发生明显的纤维化组织学改变时(1~2周),照射组GATA-3表达明显升高(t=6.50,6.33,P＜0.01),IL-13受GATA-3调节,在照射后第16周表达最为明显(t=32.21,P＜0.01)。结论 转录因子GATA-3可以通过诱导Th2免疫细胞因子IL-13的表达,参与放射性肺纤维化的形成。     

小鼠放射性肺损伤中细胞间黏附因子-1的表达

目的利用小鼠放射性肺损伤模型，了解细胞间黏附因子-1（ICAM-1）在放射性肺损伤不同阶段中的表达及其意义。方法成年雌性C57BL／6小鼠90只，按随机表分作2组：①对照组（36只）：不做任何处理；②照射组（54只）：全肺单次照射12Gy。于照射后1、24和72h及1、2、4、8、16和24周取照射组及相同鼠龄对照组小鼠肺组织，分别用HE和Masson染色在光镜下观察组织病理改变和胶原纤维沉积；免疫组织化学S-P法观察ICAM-1蛋白和白细胞共同抗原（CD45）蛋白表达，用碱水解法测定羟脯氨酸含量和实时定量RT—PCR法检测ICAM-1 mRNA相对含量。结果光镜下，照射组小鼠肺组织较对照组组织学改变和胶原纤维沉积明显，免疫组织化学结果显示，对照组小鼠肺组织中ICAM-1和炎性反应细胞的阳性细胞数均相对较低，照射组的阳性细胞数较之明显增高（P〈0．01）；羟脯氨酸含量的测定结果显示，照射组小鼠肺组织中的羟脯氨酸含量较对照组明显增高（P〈0．05）；实时定量RT-PCR的结果显示，照射组的ICAM-1 mRNA的表达水平较对照组均明显升高（P〈0．01）。结论在放射性肺损伤的过程中，ICAM-1是一重要的细胞因子，不仅介导早期炎性反应细胞的黏附和浸润，还参与后期放射性肺纤维化的形成。     

LY2109761对小鼠放射性肺纤维化的治疗作用

目的 研究LY2109761对小鼠放射性肺纤维化的防治作用及机制,为放射性肺纤维的临床治疗提供参考。方法 选取8周龄、雌性、体重为18~22 g的C57BL/6小鼠40只,将小鼠按随机数表法分为空白对照组、单纯照射组、照射+LY 50组和照射+LY100组,每组10只,建立放射性肺损伤小鼠模型。空白对照组为假照射;单纯照射组给予6 MVX射线12 Gy单次照射全肺;照射+LY50组和照射+LY100组为照射后分别给予50和100 mg/kg LY2109761,分2次灌胃。于照射后2周分别对各组小鼠肺组织进行检测：HE染色后镜下观察肺组织病理形态,Masson染色观察肺组织的纤维化程度,免疫组织化学法测定肺内TGF-β1和Smad2的表达水平。结果 通过病理改变及评分,单纯照射组与空白对照组比较,放射后第14天肺泡结构发生变化,成纤维细胞增生;肺泡间隔明显增宽,可见片状的纤维化改变,肺纤维化表现明显。照射+LY100组与单纯照射组比较,放射性肺纤维化程度明显减轻,差异有统计学意义（t=4.668,P<0.05）,而照射+LY50组与单纯照射组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。免疫组织化学检测提示,TGF-β1及Smad2蛋白的表达水平单纯照射组与空白对照组比较,明显升高,差异具有统计学意义（t=13.545、6.418,P<0.05）,而照射+LY100组与单纯照射组比较,其表达水平有明显降低,差异有统计学意义（t=15.263、6.855,P<0.05）,照射+LY50组与单纯照射组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 LY2109761对放射性肺纤维化有治疗作用且可能具有剂量依赖,其机制可能是通过抑制TGF-β1/Smad2通路来实现的。     

RH005对小鼠放射性间质性肺炎的治疗作用研究

目的 探讨Ⅰ类重组蛋白RH005对小鼠放射性间质性肺炎的治疗作用。方法 75只雄性C57BL/6N小鼠随机分为对照组、照射组、RH005组,每组25只。采用20 Gy X射线单次全胸照射复制放射性间质性肺炎模型,剂量率为400 mu/min。RH005组小鼠在照射后24 h予以腹腔注射RH005,5μg/kg,1次/d,连续给药30 d;对照组和照射组小鼠予以腹腔注射等体积生理盐水。于照射后1个月,通过小鼠肺功能检测、肺组织病理观察、肺泡腔面积定量分析、肺组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)及转化生长因子β(TGF-β)免疫组化检测等方法,研究RH005对小鼠放射性间质性肺炎的治疗作用。结果 20 Gy X射线全胸照射可致小鼠放射性间质性肺炎,表现为照射后1个月,照射组小鼠吸气峰值、呼气峰值和每分钟通气量较对照组均显著降低;肺组织炎症细胞浸润且肺泡腔面积减小;TNF-α及TGF-β表达增高。RH005组小鼠吸气峰值、呼气峰值和每分钟通气量均较照射组显著增加;小鼠肺组织炎症细胞浸润较照射组减轻,肺泡腔面积较照射组显著增加;TNF-α及TGF-β的表达较照射组显著减少。结论 RH005能够减轻...     

小鼠放射性肺损伤模型的建立与鉴定

目的建立小鼠放射性肺损伤模型。方法雌性C57BL/6小鼠90只,随机分作2组:(1)对照组(36只)不做任何处理;(2)照射组(54只)全肺单次照射12Gy。于照射后1、24、72h和1、2、4、8、16、24周,取照射组及相同鼠龄对照组小鼠肺组织,分别用HE、Masson染色在光镜下观察组织病理改变和胶原纤维沉积,免疫组织化学法来观察肺组织基底膜连续性和肺泡表面活性物质的表达。用碱水解法来测定羟脯氨酸含量。结果与对照组比较,照射组小鼠的肺组织在照射后存在明显的病理组织学上的改变,早期以急性炎症反应为主,表现为肺充血、水肿、肺间质增厚,后期肺损伤以肺泡间隔的进行性纤维化为特征;免疫组织化学法的结果也进一步证实了病理组织学改变,与对照组相比,照射组小鼠的肺组织的基底膜连续性中断,并且肺泡表面活性物质的表达明显增多;同时,对照组湿肺羟脯氨酸含量为(0·763±0·029)μg/mg,照射组湿肺羟脯氨酸含量(0·875±0·009)μg/mg明显增高(P<0·05)。结论该模型较好地模拟了放射性肺损伤的发生和发展过程,为今后进一步研究放射性肺损伤发生的机制提供了实验基础。     

克唑替尼上调TGF-β1通路对小鼠急性放射性肺损伤的影响

目的研究克唑替尼对小鼠急性放射性肺损伤的影响及其可能机制。方法应用随机数表法将72只小鼠分成4组:健康对照组(NC组)12只、单纯给药组(CRZ组)12只、单纯照射组(RT组)24只、克唑替尼+照射组(RT+CRZ组)24只。采用全肺单次12 Gy X射线照射。分别于照射后1、2、4、8周处死获取肺组织标本及肺泡灌洗液, 光学显微镜下计数有核细胞的总数, 聚氰基丙烯酸正丁酯(BCA)蛋白检测法检测蛋白质浓度, HE染色和MASSON染色观察肺组织病理变化, 实时荧光定量(qPCR)检测转化生长因子β1(TGF-β1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)mRNA水平表达, 免疫组织化学法观察髓过氧化物酶(MPO)和ICAM-1的定位和表达, Western blot法检测TGF-β1、Smad3、p-Smad3及ICAM-1蛋白表达情况。结果在各个时间点上, RT+CRZ组肺组织炎症、渗出表现显著加重, 肺泡灌洗液中的细胞总数及蛋白浓度均较其他3组增多, 与RT组相比, 第4周差异具有统计学意义(t=-5.031、-2.814, P<0.05)。照射后第1、4、8周, 与RT组相比,...     

银翘温胆汤干预大鼠放射性肺纤维化的初步实验研究

目的应用大鼠放射性肺纤维化模型观察银翘温胆汤对早期放射性肺炎和晚期肺纤维化的干预效果。探讨其在治疗放射性肺纤维化中的作用机制,以期为临床应用提供实验依据。方法将雄性大鼠45只随机分为对照组(0Gy+生理盐水)、照射组(20Gy+生理盐水)、银翘温胆汤组(20Gy+中药),单次6MV X线20Gy照射大鼠双肺,建立放射性肺纤维化模型。分别于2、4、6周时各处死5只大鼠取肺组织,进行HE染色观察肺组织病理变化,检测肺系数,用免疫组化法测转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。结果照射组大鼠肺损伤明显,肺系数、肺纤维化和TGF-β1的表达较对照组明显增高(P<0.05),而银翘温胆汤组大鼠比照射组的肺充血、出血、渗出性改变及肺泡壁增厚、肺纤维化程度减轻,且肺系数和TGF-β1的表达有一定程度的下降。结论银翘温胆汤对大鼠早期放射性肺炎和肺纤维化有一定程度的保护作用,其机制可能是通过抑制TGF-β1表达,使放射性肺炎及肺纤维化病变减轻。     

Treg分化对放射性肺损伤的影响

目的 探讨调节性T细胞（Treg）的分化对放射性肺损伤的影响及其作用机制。 方法 建立Treg抑制小鼠模型,按随机数字表法将C57BL/6小鼠分成4组：空白对照组、单纯照射组、照射+免疫球蛋白G（IgG）组和照射+CD25组,每组12只,除空白对照组外其余3组小鼠给予单次20 Gy X射线全胸照射,照射+IgG组和照射+CD25组小鼠每周腹腔注射IgG抗体和CD25抗体。分别于照射后第4周和第8周各处死小鼠6只,采用流式细胞术检测小鼠肺组织内CD25+Foxp3+Treg（Foxp3：叉头样转录因子3）的百分比以鉴定模型是否建立成功;采用Western blot法检测单纯照射组小鼠肺组织内神经纤毛蛋白1（NRP1）的表达;采用免疫荧光法检测每组小鼠肺组织内CD25+NRP1+Treg的百分比;拍照并观察每组小鼠皮肤的损伤情况,采用苏木精-伊红染色法检测小鼠肺组织的病理学改变;采用酶联免疫吸附测定法检测每组小鼠肺组织内转化生长因子β1（TGF-β1）、白细胞介素（IL）-17A、干扰素γ（IFN-γ）、IL-2和IL-4的水平变化。两组间比较采用独立样本t检验。 结果 流式细胞术检测结果显示,照射后第4周和第8周,单纯照射组小鼠肺组织内CD25+Foxp3+Treg百分比[（1.73±0.04）%、（2.13±0.15）%]均较空白对照组[（1.14±0.02）%、（1.70±0.06）%] 明显升高,差异均有统计学意义（t=−26.680、−4.545,P=0.000、0.010）,抑制Treg后,第4周和第8周时照射+CD25组小鼠肺组织内CD25+Foxp3+Treg百分比[（0.72±0.14）%、（0.27±0.02）%]均较单纯照射组明显降低,差异均有统计学意义（t=5.296、37.538,均P=0.000）。Western blot结果显示,照射后第4周和第8周,单纯照射组小鼠肺组织内NRP1蛋白表达水平均较空白对照组升高,差异均有统计学意义（t=−7.341、−9.127,均P=0.000）。免疫荧光法检测结果显示,照射后第4周和第8周,单纯照射组小鼠肺组织内CD25+NRP1+Treg的百分比均较空白对照组升高,而照射+CD25组CD25+NRP1+Treg百分比均较单纯照射组降低,且差异均有统计学意义（t=8.926、14.457,P=0.001、0.000）。观察小鼠皮肤损伤程度后发现,照射后第4周和第8周,单纯照射组小鼠皮肤损伤严重,而照射+CD25组小鼠照射后第4周时皮肤基本完好,第8周时出现脱毛脱皮。病理学结果显示,照射后第4周和第8周,与空白对照组相比,单纯照射组小鼠的肺组织结构破坏,肺泡壁增厚,细胞外基质增多,而照射+CD25组小鼠的肺组织结构完整,肺泡壁纤细。酶联免疫吸附测定结果显示,与空白对照组相比,照射后第4周,单纯照射组小鼠肺组织内IL-17A和IL-4的水平均升高,差异均有统计学意义（t=−8.492、−15.796,P=0.001、0.000）,照射后第8周,TGF-β1和IL-17A水平升高,差异均有统计学意义（t=−11.072、−7.167,P=0.000、0.002）,IL-2水平在第4周和第8周时均降低,IFN-γ水平在第4周时升高,差异有统计学意义（t=−27.393,P=0.000）,第8周时下降;与单纯照射组相比,照射+CD25组小鼠TGF-β1和IL-17A水平在第4周和第8周时均降低（t=6.037、4.524、5.496、4.772,均P=0.000）,IFN-γ水平升高（t=−7.006、−12.565,P=0.002、0.000）,差异均有统计学意义,而IL-2和IL-4水平在第4周时均降低,第8周时均明显升高,差异均有统计学意义（t=2.866、−9.090、8.833、−7.191,均P=0.000）。 结论 放射性肺损伤小鼠的肺组织中出现Treg分化,并增强分泌TGF-β1促炎因子,同时干扰辅助T细胞（Th1、Th2型）细胞因子的平衡来促进放射性肺损伤的发生。     

SD大鼠放射性肺纤维化模型的建立及评价

目的 建立SD大鼠放射性肺纤维化模型,探寻实验中纤维化蛋白、细胞因子等作为组织纤维化程度评价指标的可行性,为放射性肺纤维化的研究提供基础。 方法 选取体重为180~200 g的SD雄性大鼠37只,完全随机分为对照组（5只）和照射组（32只）。照射组采用X射线行右肺单次照射,照射剂量分别为13 Gy（10只）、15 Gy（10只）和17 Gy（12只）,分别于照后4个月和6个月,采用苏木精-伊红染色和马松三色染色评价大鼠肺组织纤维化程度;采用Western blot检测纤维黏连蛋白1（FN1）、基质金属蛋白酶2（MMP2）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在肺组织中的表达;测定肺组织中羟脯氨酸含量以评价肺组织中胶原蛋白表达水平。酶联免疫吸附测定法测定支气管肺泡灌洗液中转化生长因子β（TGF-β）、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、γ干扰素（IFN-γ）的变化。组间比较采用独立样本 t 检验。 结果 与对照组相比,照射组4~6个月后均出现肺纤维化,纤维化程度随照射剂量的增大和照射时间的增长而增加;照射组大鼠肺组织中FN1、α-SMA的蛋白表达水平较对照组升高,MMP2的蛋白表达水平较对照组降低;6个月照射组羟脯氨酸含量较对照组升高,分别从（514.19 ±282.20）μg/mg 增加至（886.13 ±145.01）、（1188.70 ±273.84）、（1700.70 ±590.95）μg/mg,且差异均有统计学意义（t=2.621、3.609、4.004,均P<0.05）;支气管肺泡灌洗液中TGF-β、白细胞介素6、TNF-α分泌量较对照组上调,差异有统计学意义（t=4.030~12.780,均P<0.05）,IFN-γ较对照组下调,差异有统计学意义（t=2.498~4.303,均P<0.05）。 结论 SD大鼠放射性肺纤维化模型构建成功。大鼠肺组织纤维蛋白含量未能反映肺组织纤维化程度,肺组织羟脯氨酸含量与支气管肺泡灌洗液中细胞因子在重度纤维化时可作为评价指标。     

巨噬细胞金属弹力蛋白酶表达在放射性肺损伤形成中的变化特点及意义

目的 观察放射性肺损伤过程中基质金属蛋白酶12(MMP-12,又称巨噬细胞金属弹力蛋白酶)表达的动态变化,探讨MMP-12在放射性肺损伤早期肺组织重建中的作用.方法 雄性Wistar大鼠24只,随机分为正常对照组(不接受照射),照射后1、2、4周组,每组6只.采用60Co γ射线(20Gy)对大鼠进行全肺照射,按照实验分组分别于照射后1、2、4周行肺组织取材.实时荧光定量FCR法检测MMP-12基因表达;Western blotting分析蛋白的表达变化;酶谱分析检测其酶活性;免疫组化观察MMP-12的组织分布;组织特殊染色法观察弹力纤维降解情况.结果 MMP-12 mRNA表达在照射后1周升高,2周下降,4周达高峰;蛋白表达于2周时明显升高,4周略微下降.MMP-12主要表达在肺泡间隔的巨噬细胞和被激活的成纤维细胞中.随着照射后时间的延长,肺组织损伤程度逐渐加重,肺泡壁与间隔增厚,肺泡结构遭到破坏,部分肺泡腔塌陷消失,肺泡基底膜内弹力纤维多发性断裂,呈不规则节段性线条散在分布.结论 60Co γ射线可以刺激MMP-12基因和蛋白的表达,说明MMP-12可能在放射性肺损伤早期起着十分重要的作用,推测可能通过降解弹力纤维,破坏基底膜正常结构,从而启动肺组织重建.     

安多霖预防小鼠放射性肺损伤的初步实验研究

目的 观察安多霖(ADL)对小鼠放射性肺损伤的防治作用.方法 成年雄性昆明种小鼠180只,随机数字表法分为正常对照、照射对照和ADL低、中、高剂量及地塞米松治疗6组,每组30只.后5组小鼠用6MVX射线一次胸部照射20 Gy,均于照射前ld开始灌胃给药,连续6周,ADL剂量分别为2、4和8g/kg,地塞米松为0.12 mg·kg-1·d-1.照射后观察各组小鼠一般状况,呼吸频率;在第2、4和6周时取肺组织做肺系数测定,同时测定小鼠肺羟脯氨酸含量及转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量;HE染色观察肺组织病理改变.结果 ADL低剂量组与照射对照组相比,呼吸频率、肺羟脯氨酸及TGF-β1的含量差异无统计学意义.ADL中、高剂量组和地塞米松组与照射对照组相比,呼吸频率减慢、肺羟脯氨酸及TGF-β1的含量降低差异有统计学意义(F =2.668～161.646,P＜0.05).HE染色观察肺组织病理改变显示,ADL中、高剂量组和地塞米松组与照射对照组相比,肺组织充血、水肿及肺泡壁增厚程度减轻.结论 安多霖可以降低胸部照射后小鼠肺羟脯氨酸及TGF-β1的含量,减轻小鼠放射性肺损伤程度,对放射性肺损伤具有一定的防治作用.     

每周重复照射建立大鼠放射性肺损伤模型的评价

目的评价每周小剂量重复照射大鼠放射性肺损伤模型的可行性、科学性及实用性。方法36只Wistar种雌性大鼠,按5:1比例随机分为照射组(A组)30只、对照组(B组)6只。6-MV直线加速器对A组大鼠右肺进行分次照射(5Gy/次,1次/周,累积剂量最高为30Gy),于照射后第4、6、8、12、26周处死,每时相点处死6只,B组于第4周末处死。观察动物活体外观、肺的大体标本、行HE染色观察大鼠肺组织学变化、ELISA法检测血清和SP法检测肺组织中的TGF-β1蛋白表达。结果A组受照肺组织表现出放射性肺炎及肺纤维化,大鼠血清和肺组织TGF-β1表达第4周表达升高,到第12周达到高峰,26周下降。结论每周小剂量重复照射所制作的大鼠放射性肺损伤模型稳定可靠,动物死亡率低,符合临床放疗实际。     

TGF-β3通过抑制上皮间质转化拮抗放射性肺纤维化

目的检测分析放射性肺纤维化过程中上皮间质转化（EMT）情况,探索转化生长因子β3（TGF-β3）是否通过EMT途径抑制放射性肺纤维化的发生。方法将180只C57BL/6雌性小鼠按体重完全随机分为对照组、单纯照射组（简称照射组）和照射+TGF-β3组（简称TGF-β3组）,照射组和TGF-β3组经20 Gy 60Co γ射线单次胸部照射后,分别腹腔注射0.5 mL 0.9%的生理盐水和TGF-β3（1 μg/kg）,每周1次,于照射后1、3和6个月活杀,用苏木素-伊红（HE）染色、Masson三色染色后观察肺组织病理学改变,用免疫组化法检测肺组织EMT相关的上皮标志物紧密连接蛋白（ZO-1）和间质标志物N-钙粘蛋白（N-cadherin）的表达,用Mann-Whitney U秩和检验和Fisher确切概率法对结果进行统计分析。结果HE和Masson染色结果显示,照射能够引起小鼠肺泡壁增厚、肺泡间隔明显增宽、肺泡结构严重破坏、胶原纤维大量沉积等典型纤维化病理改变;照射后3和6个月,与照射组比较,TGF-β3组小鼠肺纤维化病变明显减轻,差异有统计学意义（Z=-2.562、-2.807,均P<0.05）,胶原沉积显著减少,差异有统计学意义（Z=2.442、2.529,均P<0.05）。免疫组化结果显示,与对照组比较,照射后1、3和6个月,小鼠肺组织ZO-1的表达量明显减少,差异有统计学意义（Z=4.492、5.831、6.064,均P<0.05）,N-cadherin的表达量显著增高,差异有统计学意义（Z=-3.269、-5.520、-6.063,均P<0.05）;与照射组比较,TGF-β3组ZO-1表达量显著增高,差异有统计学意义（Z=-2.881、-4.220、-5.695,均P<0.05）,而N-cadherin表达量显著减少,差异有统计学意义（Z=4.546、3.560、4.919,均P<0.05）。结论TGF-β3可通过抑制EMT拮抗放射性肺纤维化。     

CBLB502对放射性肺炎和肺纤维化的防护作用研究

目的研究CBLB502对放射性肺炎和放射性肺纤维化的防护作用，从而证实CBLB502作为临床抗放射药物的可行性。方法C57BIM6J小鼠20Gy单次照射后24h、1个月、3个月和5个月取肺组织用TUNEL方法对肺泡上皮细胞和血管内皮细胞的凋亡进行检测，HE染色观察纤维化病理变化，免疫组织化学方法检测特异性指标表达，以及受照部位皮毛和皮肤的病理变化。结果CBLB502抑制了照射后小鼠肺泡上皮细胞和血管内皮细胞的凋亡，减缓了肺纤维化进程，同时减少层黏连蛋白表达，维持表面活性蛋白B表达量，受照皮肤的炎症反应也明显减轻。结论CBLB502对照射后放射性肺炎和放射性肺纤维化的发生和进程有防护作用。     

牙龈间充质干细胞抑制Ⅱ型肺泡上皮细胞衰老预防放射性肺纤维化

目的 探讨牙龈间充质干细胞(GMSCs)移植能否抑制辐射诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)衰老,及其在预防放射性肺纤维化(RIPF)中的作用。方法 采用6 Gy照射小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(MLE12)诱导细胞衰老,照后即刻与GMSCs共培养,通过细胞形态、β半乳糖苷酶(β-Gal)染色、衰老分泌相关表型(SASP)检测以评估细胞衰老程度;C57BL/6小鼠单侧右肺17 Gy照射构建RIPF模型,照后1 d移植GMSCs,照后180 d取材,期间记录小鼠生存率,采用肺脏器比、HE染色、Masson染色评估肺内结构及肺间质胶原沉积状况,应用β-Gal免疫组织化学法与AECⅡ免疫荧光共定位评估肺内细胞衰老程度,qRT-PCR检测肺组织SASP表达变化;采用Western blot检测P53-P21、P16通路关键蛋白表达水平,免疫荧光共定位检测AECⅡ中P21表达情况。结果 GMSCs共培养能够有效抑制辐射诱导的MLE12细胞衰老,使照射后升高的β-Gal阳染率降低11.8%(t=6.72,P<0.05),并使SASP(IL-6、IL-8、IL-1β)的表达有效降低(t=28.43、28.43、4.82,P<0.05);GMSCs移植提高了受照小鼠的生存率,改善了照射诱导的肺泡结构塌陷增厚及胶原蛋白沉积情况,照射后肺组织中衰老细胞数目降低23.9%(t=21.83,P<0.05),SASP的表达水平下降(t=8.86、20.63,P<0.05);抑制照射后MLE12及RIPF小鼠肺组织中P53-P21、P16相关蛋白的上调。结论 GMSCs通过下调衰老相关的P53-P21及P16通路蛋白,从而抑制辐射诱导的AECⅡ衰老,达到预防放射性肺纤维化发生发展的目的。     

大剂量γ射线照射对小鼠免疫系统损伤远期影响的研究

目的 探讨亚致死剂量6Gyγ射线一次性全身照射小鼠免疫细胞对脂多糖刺激反应性的远期影响.方法 将实验小鼠分为假照射组和照射组,假照射组不接受照射,照射组给予6 Gyγ射线照射.照射后10周,分别将假照射组和照射组小鼠按组别腹腔注射脂多糖(20 mg/kg),对照组注射等量的生理盐水.分别于24 h和1 h后取材,进行外周血白细胞计数及CD4、CD8、B220细胞比例检测.取脾脏和胸腺称重,计算脏器指数.冲洗单侧股骨进行有核细胞计数.结果 与假照射刘照组小鼠相比,照射对照组小鼠的CD4细胞比例显著升高(t=2.940,P＜0.05),CD8和B220细胞比例显著下降(t=6.485和4.351,P均＜0.01).照射+脂多糖1h组小鼠的CD4 (t=2.510,P＜0.05)、CD8(t=2.862,P＜0.05)和B220(t=7.074,P＜0.01)细胞比例较假照射+脂多糖1h组小鼠显著降低,差异有统计学意义.与假照射+脂多糖24 h组小鼠相比,照射+脂多糖24 h组小鼠单侧股骨有核细胞计数显著升高,差异有统计学意义(t=2.078,P＜0.05).结论 6 Gyγ射线一次性全身照射后10周,小鼠免疫系统尚未完全恢复;与假照射组相比,在接受脂多糖刺激后照射组小鼠胸腺指数和外周血中CD8和B220细胞比例未见显著变化.辐射对小鼠免疫系统损伤的远期影响有待进一步研究.