XCT-790对沉默DKKl、Sost腺病毒载体转染MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2、TNFα的影响研究

目的 研究ERRα抑制剂（XCT-790)对沉默Wnt信号通路抑制因子Dickkopf1(DKK1)、骨硬化蛋白Sclerostin( Sost)重组腺病毒载体转染MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2、TNFα的影响。方法 本实验将培养好的MG63细胞分为空白对照组、沉默DKK1组、沉默Sost组、沉默（DKK1 + Sost)组、XCT-790处理空载腺病毒组、XCT-790处理沉默DKK1组、XCT-790处理沉默Sost组、XCT-790处理沉默（DKK1 + Sost)组,根据组别不同分别用包装好的沉默DKK1、Sost腺病毒载体转染MG63细胞,应用 Western blot检测MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2、TNFα蛋白的表达量。结果 （1 )与空白对照组对比,沉默DKK1、Sost、 DKK1 + Sost可以提高OPG、CTGF、FGF2表达量（P <0. 05),降低TNFα表达量（P <0. 05) ;XCT-790干预MG63细胞可降低OPG、CTGF、FGF2 表达量（P <0. 05),增加 TNFα表达量（P<0. 05) ;(2)与沉默 DKK1、Sost、DKKl + Sost 组比较,XCT-790 处理沉默DKKl、Sost、DKKl + Sost组可降低因沉默DKK1、Sost、DKKl + Sost而增加OPG、CTGF、FGF2的表达量的作用（P <0. 05 ), 增加因沉默DKK1、Sost、DKKl + Sost而降低TNFα的表达量（P <0. 05)。结论 XCT-790可以降低MG63细胞中OPG、CTGF、 FGF2表达量,升高TNF α表达量;还可以调节因沉默DKK1、Sost、DKK1 + Sost而改变的MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2及 TNFα的表达量。     

XCT-790对沉默DKK1、Sost腺病毒载体转染MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2、TNFα的影响研究

目的研究ERRα抑制剂(XCT-790)对沉默Wnt信号通路抑制因子Dickkopf1(DKK1)、骨硬化蛋白Sclerostin(Sost)重组腺病毒载体转染MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2、TNFα的影响。方法本实验将培养好的MG63细胞分为空白对照组、沉默DKK1组、沉默Sost组、沉默(DKK1+Sost)组、XCT-790处理空载腺病毒组、XCT-790处理沉默DKK1组、XCT-790处理沉默Sost组、XCT-790处理沉默(DKK1+Sost)组,根据组别不同分别用包装好的沉默DKK1、Sost腺病毒载体转染MG63细胞,应用Western blot检测MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2、TNFα蛋白的表达量。结果 (1)与空白对照组对比,沉默DKK1、Sost、DKK1+Sost可以提高OPG、CTGF、FGF2表达量(P0.05),降低TNFα表达量(P0.05);XCT-790干预MG63细胞可降低OPG、CTGF、FGF2表达量(P0.05),增加TNFα表达量(P0.05);(2)与沉默DKK1、Sost、DKK1+Sost组比较,XCT-790处理沉默DKK1、Sost、DKK1+Sost组可降低因沉默DKK1、Sost、DKK1+Sost而增加OPG、CTGF、FGF2的表达量的作用(P0.05),增加因沉默DKK1、Sost、DKK1+Sost而降低TNFα的表达量(P0.05)。结论 XCT-790可以降低MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2表达量,升高TNFα表达量;还可以调节因沉默DKK1、Sost、DKK1+Sost而改变的MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2及TNFα的表达量。     

多靶点沉默SOST基因修饰MC3T3-E1细胞注射对小鼠椎体微结构的影响

目的 利用多靶点SOST基因沉默技术修饰小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1,并将其注射到小鼠体内,观察其对小鼠椎体骨密度及微结构的影响。方法 取18只18月龄雌性C57BL/6小鼠在无菌条件下手术切除双侧卵巢制作骨质疏松模型,并分为3组（n=6）：SOST基因沉默组注射采用多靶点SOST基因沉默技术修饰并同时转染CRISPR-sgRNA载体系统和SOST-RNAi修复模板载体假病毒颗粒的MC3T3-E1细胞;阴性组注射同时转染CRISPR-sgRNA载体系统和SOST-N修复模板载体假病毒颗粒的MC3T3-E1细胞;空白组注射不作任何处理的MC3T3-E1细胞。采用HE染色和Masson三色染色观察小鼠椎体骨小梁面积的变化,免疫组化染色观察骨组织中骨保护素（OPG）和RANKL表达的变化,实时荧光定量PCR检测观察各组细胞SOST及骨代谢相关细胞因子（RUNX2、β-catenin、RANKL、OPG）的表达变化。结果 L₁ HE染色和L₂ Masson三色染色结果显示,SOST基因沉默组骨小梁面积大于阴性组和空白组,差异均有统计学意义（P < 0.05）。L₂免疫组织化学染色结果显示,SOST基因沉默组OPG表达量高于阴性组和空白组,RANKL表达量低于阴性组和空白组,差异均有统计学意义（P < 0.05）。L₃实时荧光定量PCR检测结果显示,SOST基因沉默组SOST和RANKL表达量低于阴性组,RUNX2、β-catenin和OPG表达量高于阴性组,差异均有统计学意义（P < 0.05）。结论 多靶点沉默SOST基因修饰MC3T3-E1细胞尾静脉注射能够促进小鼠成骨细胞分化和分泌功能,抑制破骨细胞活性,有效改善小鼠椎体微结构。     

热疗联合特异性沉默趋化因子受体4对骨肉瘤增殖和侵袭的影响

目的观察热疗联合特异性siRNA沉默趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)对骨肉瘤增殖和侵袭的影响。方法培养人骨肉瘤细胞株MG 63至对数生长期,接种于6孔板中,分为三组,空白组细胞不进行任何处理常规培养,control siRNA组以control siRNA转染细胞,CXCR4 siRNA组以CXCR4 siRNA转染细胞,采用Western blot检测各组CXCR4的表达变化,评估CXCR4 siRNA转染效能。细胞及体内实验设置control siRNA组(对照组)、热疗联合CXCR4 siRNA组(联合组)、CXCR4 siRNA组(沉默组)和热疗组,以CXCR4 siRNA转染沉默组和联合组的细胞,control siRNA转染对照组细胞,热疗组和联合组进行热疗处理。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT qPCR)和Western blot检测各组细胞CXCR4的表达变化。CCK 8法和Transwell侵袭实验检测转染后MG 63细胞的增殖能力和侵袭能力变化。流式细胞技术检测转染后MG 63细胞的周期变化。体外裸鼠成瘤实验和肿瘤生长曲线观察转染后MG 63细胞增殖和裸鼠骨肉瘤生长情况。结果CXCR4 siRNA可以有效沉默MG 63细胞中CXCR4蛋白的表达。热疗联合CXCR4 siRNA有效沉默MG 63细胞中CXCR4的表达并能抑制MG 63细胞增殖和侵袭,阻滞细胞周期于G0/G1期(P均<0.05)。体内实验结果显示,从第14天起,联合组裸鼠骨肉瘤体积逐渐小于对照组、沉默组和热疗组,差异有统计学意义(P均<0.05)。联合组的瘤重也低于对照组、沉默组和热疗组,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论热疗联合特异性沉默CXCR4抑制骨肉瘤的增殖和侵袭,可作为一个有效的骨肉瘤基因治疗新方法。     

TiO2喷砂酸蚀处理对人成骨细胞骨保护素和骨保护素配体mRNA表达影响的研究

[目的]探讨纯钛钛片经过喷砂及喷砂酸蚀处理后对人成骨细胞系MG63细胞骨保护素(osteoprotegerin,OPG)及骨保护素配体(osteoprotegerin ligand,OPGL)mRNA表达水平的影响.[方法]纯钛钛片表面分别进行机械打磨、喷砂及喷砂酸蚀处理,将人成骨细胞系MG63细胞接种于钛片表面,采用荧光实时定量PCR法检测OPG、OPGL mRNA表达水平.[结果]MG63细胞在经过喷砂及喷砂酸蚀处理后的钛片上培养后其OPG mRNA水平增高,与机械打磨组相比有统计学意义(P＜0.05),而OPGL mRNA表达水平在各组之间没有明显差异(P＞0.05).[结论]经过喷砂及喷砂酸蚀处理的钛片均可促进人成骨细胞表达OPG,从而调节成骨细胞与破骨细胞之间的平衡,促进骨质重建.     

沉默Piezo1机械敏感型离子通道对MC3T3-E1成骨细胞迁移的影响

目的研究Piezo1机械敏感型离子蛋白在小鼠MC3T3-E1成骨细胞迁移中的作用。方法取第5～10代小鼠MC3T3-E1成骨细胞,分为Piezo1-小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染组(A组)、阴性对照组(B组)和空白对照组(C组)。A、B组分别采用siRNA转染试剂将Piezo1-siRNA或阴性对照siRNA转染入小鼠MC3T3-E1成骨细胞,C组仅加入siRNA转染试剂,在倒置相差显微镜及荧光显微镜下观察细胞形态并计算转染效率。采用免疫荧光染色和Western blot检测各组Piezo1蛋白表达水平;采用Transwell细胞迁移实验和细胞划痕实验检测Piezo1-siRNA转染后MC3T3-E1成骨细胞迁移能力的变化。结果转染48 h后,A组可见细胞体积较未转染细胞略有增大,细胞突变长增粗,但细胞集落有所减少,悬浮细胞较未转染增多,细胞碎片增多。荧光显微镜下可见B组小鼠MC3T3-E1成骨细胞中出现绿色荧光,转染效率为68.56%±4.12%。免疫荧光染色及Western blot检测示,A组细胞内Piezo1蛋白表达水平均显著低于B、C组,差异有统计学意义(P0.05);B、C组间差异无统计学意义(P0.05)。Transwell细胞迁移实验及细胞划痕实验检测示,A组每孔迁移细胞数及培养1～4 d的细胞划痕愈合率均明显低于B、C组,差异有统计学意义(P0.05);B、C组间差异无统计学意义(P0.05)。结论沉默Piezo1基因能显著抑制小鼠MC3T3-E1成骨细胞的迁移能力。     

T3对MG63细胞株增殖及TRAIL，OPG，OPGL表达的影响

目的 观察在不同浓度三碘甲状腺原氨酸环境下人成骨肉瘤MG63细胞株增殖和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其护骨素(OPG)、护骨素配体(OPGL)的表达,探讨甲亢性骨质疏松症的发病机制.方法 用不同浓度T3(0、1.0×10-12、1.0×10-10、1.0×10-8 mol/L)分别刺激培养的MG63细胞24 h,MTT比色分析法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,逆转录PCR(RT-PCR)法检测基因表达情况,免疫细胞化学法检测MG63细胞中TRAIL的表达及分布.结果 T3以浓度依赖方式抑制MG63细胞的增殖,并将细胞阻滞于G1期.T3能下调MG63细胞中OPG的表达,上调OPGL和TRAIL的表达.TRAIL免疫反应阳性物质密度高浓度T3组明显高于对照组.结论 T3可抑制成骨细胞的增殖,导致成骨细胞中TRAIL和OPGL表达增多,OPG的表达减少.这可能是甲亢性骨质疏松症的重要发病机制之一.     

miR-96干扰NKD2表达对骨肉瘤MG63细胞株的增殖、凋亡的影响

目的探究miR-96通过干扰裸露角质蛋白同源物2(naked cuticle homolog 2,NKD2)的表达对骨肉瘤MG63细胞株的增殖、凋亡的影响。方法回顾性分析我院2013年9月至2018年2月收集的骨肉瘤标本57例临床资料作为研究组,同时收集距肿瘤边界5 cm的癌旁组织作为对照组,其中男39例,女18例;年龄21～49岁,平均(28.16±6.73)岁。将骨肉瘤MG63细胞株分为miR-96抑制组与空白对照组,其中miR-96抑制组细胞给予miR-96抑制剂转染,空白对照组细胞不作任何处理。培养48h后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法与Western blot法检测各组人骨肉瘤MG63细胞中miR-96与NKD2蛋白表达水平;采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyltetrazolium assay, MTT)法检测各组细胞增殖情况;采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况与细胞周期分布情况。结果骨肉瘤组织中miR-96表达水平明显高于正常骨组织(P0.05);骨肉瘤组织中NKD2蛋白表达水平明显低于正常骨组织(P0.05);miR-96抑制组骨肉瘤细胞中miR-96表达水平明显低于空白对照组(P0.05);miR-96抑制组骨肉瘤细胞中NKD2表达水平明显高于空白对照组(P0.05);miR-96抑制组骨肉瘤MG63细胞株经miR-96抑制剂转染48h后细胞相对吸光度明显低于空白对照组细胞(P0.05);miR-96抑制组骨肉瘤MG63细胞株细胞凋亡率明显大于空白对照组(P0.05);miR-96抑制组与空白对照组骨肉瘤MG63细胞株细胞周期情况差异明显(P0.05)。结论 miR-96在骨肉瘤组织中呈高表达,NKD2在骨肉瘤组织中呈低表达;miR-96通过抑制NKD2表达而促进骨肉瘤MG63细胞株生长,并抑制骨肉瘤MG63细胞株早期凋亡。     

碱性成纤维细胞生长因子转染对半月板纤维软骨细胞增殖、细胞周期及胶原合成影响的研究

目的探索携带碱性成纤维细胞生长因子(bas ic fibrob last grow th factor,bFGF)基因的重组慢病毒载体转染半月板纤维软骨细胞的效能,观察半月板纤维软骨细胞对bFGF基因转染的反应。方法将从1只3月龄新西兰大白兔分离培养的第1代半月板纤维软骨细胞分为实验组(A组)、对照组(B组)和空白组(C组),3组细胞分别以2×104个/孔接种于24孔培养板。细胞生长至60%融合时,A组与克隆有bFGF基因的重组慢病毒载体悬液共培养,B组与不携带任何基因的慢病毒悬液共培养,C组未接受外加处理。共培养48 h后检测3组的细胞周期、胶原合成能力、培养液中bFGF的表达及不同时间各组细胞的细胞增殖能力的变化。结果共培养48 h后在A组测出bFGF浓度为870±60 pg/m l,而B、C组培养液中未能检测出bFGF的表达;共培养6 d后,M TT法检测,A组吸光度(A)值0.427±0.037与B组0.320±0.042和C组0.308±0.034比较差异有统计学意义(P<0.01)。A组细胞周期较B、C组缩短,A组细胞G1期,S期和G2/M期的时间分别为16.28、12.60和11.04 h;而B、C组分别为23.61、16.90和21.33 h及21.56、19.80和21.41 h;A组与B、C组比较差异有统计学意义(P<0.05)。A组细胞每分衰变数(7 281.69±805.50)高于B组(5 916.40±698.11)和C组(5 883.57±922.63),比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论借助慢病毒载体能有效实现bFGF基因在半月板纤维软骨细胞的转染;bFGF基因转染能促进半月板纤维软骨细胞的增殖和胶原合成能力。     

ERβ通过抑制SOST表达补偿ERα部分功能促进对成骨细胞增殖分化

目的观察ERα和ERβ调控前体成骨细胞增殖和分化中的相互作用及当ERα表达降低时,ERβ的激活能否通过抑制SOST信号传递补偿ERα部分功能调控成细胞增殖。方法利用RNA干扰技术,以小鼠前体成骨细胞株MC3T3-E1为对象,采用随机分层设计的对照研究,将细胞随机分层设计分组为4个组,根据研究需要再将相关组再进一步分为7个亚组,进行相关干预处理。检测各组细胞周期、MTT法绘制细胞生长曲线、检测SOST、OPG和Run X2等细胞因子的表达。应用SPSS16.0进行统计分析各组间差异,显著性差异定为P0.05。结果 ERα表达正常,单独沉默ERβ的表达(D组),细胞增殖稍增加,但与空白对照组(F组)比较,没有显著性差异,P0.05。同时沉默ERα和ERβ(E组),细胞增殖明显减少,SOST基因表达反而增强,但是OPG和Run X2的表达相对于空白对照组显著减弱,与空白对照组和B组比较,有显著性差异,P0.05。沉默ERα表达而保持ERβ正常表达(B组),成骨细胞增殖能力明显减弱,SOST基因表达减弱,OPG和Run X2的表达相对于空白对照组明显减弱,和空白对照组比较差异有显著性P0.05。相反,沉默ERα表达,但应用ERβ激动剂使ERβ过表达(A组),与B组和E组比较,细胞增殖能力反而明显增强,但是SOST基因表达显著降低,OPG和Run X2的表达反而升高,有显著性差异,P0.05。在E组细胞的培养液中加入SOST抗体(G组),和E组比较,OPG和Run X2蛋白表达明显增强,两组间差异有显著性,P0.05;这一结果与A组中应用ERβ激动剂有相似作用。结论 ERβ对ERα调控成骨细胞增殖过程中起着平衡作用,当ERα正常表达或活性增高时,ERβ抵抗ERα在骨形成中的刺激作用;当ERα活性减弱或丧失后,ERβ的激活补偿ERα刺激成骨细胞的增殖和分化,并且这一过程是通过ERβ抑制SOST表达而增强成骨细胞增殖相关细胞因子OPG和Run X2等而独立发挥作用。     

Raji-MG63细胞共培养体系中心肌营养蛋白样细胞因子1(CLCF1)对RANKL/OPG比值及成骨细胞分化的影响

目的 探讨Raji-MG63细胞共培养体系中,心肌营养蛋白样细胞因子1(cardiotrophin-like cytokine factor 1,CLCF1)基因对骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RAN...     

siRNA下调THBS4对人骨肉瘤MG63增殖的影响

目的探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制血小板反应蛋白4(thrombospondin 4,THBS4)基因的表达对骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响及其分子机制。方法将合成的THBS4 siRNA转染到人成骨细胞株MG63,CCK-8法观察对细胞增殖的影响,荧光定量PCR检测THBS4及TGF-beta1的mRNA表达,Western-blotting检测THBS4及TGF-beta1的蛋白表达。结果 Thbs4 siRNA转染后实验组48 h,72 h OD值高于阴性对照组(P0.05),差异具有显著性;Thbs4 mRNA和蛋白的表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P0.01);Thbs4 siRNA转染后MG63细胞中TGF-beta1 mRNA及蛋白的表达水平提高(P0.01)。结论 THBS4 siRNA转染MG63后能够促进细胞增殖,其机制可能是激活TGF-beta1信号通路。     

七氟醚对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、凋亡及化疗敏感性的影响

目的探讨七氟醚对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、凋亡及化疗敏感性的影响。方法选取骨肉瘤MG63细胞,随机分为四组:对照组、1.7%七氟醚组、3.4%七氟醚组和5.1%七氟醚组,分别为不给予七氟醚、给予1.7%、3.4%和5.1%七氟醚处理。采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell细胞侵袭实验检测细胞迁移;给予各组顺铂处理,检测各组细胞凋亡情况。结果培养24、36和72 h的1.7%七氟醚组、3.4%七氟醚组和5.1%七氟醚OD值明显低于对照组(P0.05),培养24、36和72 h的5.1%七氟醚组OD值明显低于1.7%七氟醚组、3.4%七氟醚组(P0.05)。四组细胞凋亡率、细胞迁移数差异无统计学意义。顺铂作用后,1.7%七氟醚组、3.4%七氟醚组和5.1%七氟醚组细胞凋亡率明显低于对照组(P0.05),5.1%七氟醚组细胞凋亡率明显低于1.7%七氟醚组和3.4%七氟醚组(P0.05)。结论七氟醚可抑制骨肉瘤MG63细胞增殖,对细胞迁移、凋亡无明显影响;七氟醚可降低骨肉瘤MG63细胞对顺铂的敏感性。     

负载BMP-2掺锶磷酸钙复合材料对成骨细胞增殖及功能的影响

目的探索负载BMP-2掺锶磷酸钙复合材料对成骨细胞增殖及功能的影响。方法获取SD大鼠成骨细胞,随机分为空白对照组(Con组)、磷酸钙组(CPC组)和复合材料组(BSCPC组);培养基中分别添加安慰剂、磷酸钙和负载BMP-2掺锶磷酸钙共培养一段时间,通过CCK-8法检测成骨细胞的增殖情况,碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)及茜素红染色观察细胞的功能状态,蛋白电泳观察骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factor-KB,RANK)及核因子κB受体活化因子配体(ligand of receptor activator of nuclear factor-κB,RANKL)蛋白的表达情况。结果共培养1、3、5和7 d,和Con组比较,CPC组和BSCPC组的成骨细胞数目明显增加(P0.05),且以BSCPC组成骨细胞数目最多(P0.05);共培养14 d及21 d,和Con组比较,CPC组和BSCPC组的成骨细胞的矿化能力及ALP活性明显增加(P0.05),且以BSCPC组细胞钙化能力最强及ALP活性最高(P0.05);共培养7 d,和Con组比较,CPC组和BSCPC组的成骨细胞的OPG表达明显增加,而RANK及RANKL蛋白表达明显降低(P0.05),且以BSCPC组的成骨细胞蛋白OPG、RANK及RANKL蛋白表达量改善最为显著(P0.05)。结论负载BMP-2掺锶磷酸钙复合材料促进成骨细胞增殖分化和改善细胞活性和功能。     

let-7a对血管平滑肌细胞迁移、增殖功能调控作用的体外研究

目的:观察let-7a对体外培养血管平滑肌细胞(VSMC)迁移和增殖能力的影响。方法:分离大鼠胸腹主动脉VSMC,并传代培养。将培养的VSMC通过慢病毒表达载体分别转染let-7a模拟物(实验组)及其阴性对照物(阴性对照组),或不做转染处理(空白对照组)。通过绿色荧光蛋白的表达估计转染效率;用real-time PCR检测各组细胞let-7a的表达水平;用细胞划痕试验和CCK-8法分别检测各组细胞的迁移能力及增殖情况。结果:荧光显微镜观察显示,96 h后细胞的转染效率达85%以上;real-time PCR结果显示,实验组VSMC的let-7a表达水平明显高于阴性对照组和空白对照组(均P<0.01);细胞划痕试验与增殖检测结果显示,实验组的细胞迁移数及增殖率明显低于阴性对照组和空白对照组(均P<0.01)。阴性对照组与空白对照组间上述项目无明显差异(均P>0.05)。结论:let-7a对体外培养的VSMC迁移与增殖有抑制作用。     

GLP-1受体激动剂艾塞那肽对MG-63细胞增殖及成骨分化的影响

目的探讨GLP-1受体激动剂艾塞那肽(Exenatide)对人成骨肉瘤MG-63细胞株增殖及成骨分化的作用。方法将MG-63细胞制成单细胞悬液,接种于细胞培养板,分别用不同浓度的艾塞那肽(0 mol/L、10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L)处理细胞,24 h后采用CCK-8比色法检测MG-63细胞增殖率,并将艾塞那肽处理后的细胞裂解并取上清,使用碱性磷酸酶测定试剂盒测定AKP活力。结果 (1)艾塞那肽可促进MG-63细胞增殖(P0.05),但随着GLP-1受体激动剂浓度升高,细胞增殖程度降低(P0.05),低浓度的艾塞那肽(10-9mol/L)促增殖能力最强。(2)艾塞那肽不同浓度处理后各组AKP活力增加(P0.05),而且低浓度的艾塞那肽(10-9mol/L)升高AKP活力最明显(P0.05)。结论艾塞那肽能促进人成骨肉瘤MG-63细胞的增殖及成骨分化,且低浓度的艾塞那肽(10-9mol/L)促增殖分化能力最强。     

腺病毒介导的血管内皮生长因子小干扰RNA对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的研究

目的 观察腺病毒介导的血管内皮生长因子(VEGF)的短发夹状小分子干扰RNA(siRNA)对骨肉瘤细胞株MG63增殖和凋亡的影响.方法 将携带VEGF短发夹状siRNA的腺病毒载体Ad-VEGF-siRNA感染MG63.噻唑蓝(MTT)比色分析细胞体外增殖力,Hoechst染色、流式细胞术观察细胞凋亡.建立30只裸鼠移植瘤模型,Ad-VEGF-siRNA组瘤内注射Ad-VEGF-siRNA病毒纯化液0.2ml,通过免疫组织化学技术,观察肿瘤组织中MG63细胞的增殖和凋亡.结果 与对照组比较,Ad-VEGF-siRNA组MG63细胞生长减慢,Hoechst染色可见到典型的凋亡细胞,24、48、72h凋亡率分别为7.27%、12.01%和20.09%.Ad-VEGF-siRNA明显抑制移植瘤生长,抑瘤率达40.7%.Tunel染色可见MG63细胞典型凋亡特征,同时肿瘤组织中PCNA、bcl-2表达明显减少(P<0.01). 结论 Ad-VEGF-siRNA可高效而特异地阻断VEGF基因表达,抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡.     

熊果酸对人骨肉瘤MG63细胞的影响

目的 探讨熊果酸(UA)对人骨肉瘤MG63细胞的影响作用及其机制.方法 体外培养骨肉瘤MG63细胞,应用浓度为10、20、50、100 μmol/L的熊果酸干预骨肉瘤MG63细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测细胞中骨形态发生蛋白(BMP)-2和BMP-6的mRNA的表达,并应用蛋白印记技术检测相应蛋白的表达水平.结果 熊果酸干预组的肿瘤细胞增殖被明显抑制,72 h时100 μmol/L组的增殖活性为(0.25±0.03),而10μmol/L组的增殖活性为(0.86±0.10),差异有统计学意义(P＜0.05),各浓度组在24、48、72 h时的增殖活性差异均有统计学意义(P＜0.05);BMP-2和BMP-6 mRNA和蛋白的表达水平在实验组和对照组间差异均有统计学意义(P＜0.05),而两对照组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 熊果酸能够抑制骨肉瘤MG63细胞的增殖,并能够促进细胞中BMP-2和BMP-6的表达.     

miR-181a-5p通过HOXB4抑制骨肉瘤细胞HOS增殖和迁移

目的：研究miR-181a-5p对HOS骨肉瘤细胞增殖、周期和迁移的影响及其机制。方法 ：采用实时定量PCR检测hFOB1.19成骨细胞和HOS、U2OS、MG63骨肉瘤细胞系中miR-181a-5p及HOXB4的表达情况。利用Lipofectamine 2000将miR-181a-5p mimics和miR-181a-5p inhibitor分别转染至人骨肉瘤HOS细胞中（分别为过表达组和抑制剂组）,并设置miR阴性对照组;CCK-8法检测各组细胞的增殖能力变化,流式细胞术检测各组细胞的细胞周期变化,划痕愈合实验以及Transwell迁移实验检测各组细胞的迁移能力变化。Targetscan网站预测miR-181a-5p的靶向基因,并通过双荧光素酶报告基因系统及Western blot验证靶向关系。结果：与成骨细胞hFOB1.19相比,miR-181a-5p在骨肉瘤细胞HOS、U2OS和MG63中低表达（P<0.05）,而HOXB4在骨肉瘤中高表达（P<0.05）。与阴性对照组相比,过表达miR-181a-5p抑制骨肉瘤HOS细胞的增殖和迁移能力,并且处于细胞周期S期的细胞...