弓形虫IgM抗体检测方法的研究

本文以鼠抗人μ链单克隆抗体捕获被测人血清中ＩｇＭ抗体，再以辣根过氧化物酶标记的弓形虫抗原进行直接酶联免疫吸附试验，检测人血清中特异性抗弓形虫ＩｇＭ抗体，并以阻断试验证实该方法的特异性。与风疹病毒ＩｇＭ抗体阳性血清，巨细胞病毒ＩｇＭ抗体阳性血清和类风湿因子等无交叉反应。与进口试剂盒以酶联免疫吸附试验双夹心法（ＤＳ－ＥＬＩＳＡ－Ｔｏｘ－ＩｇＭ）进行比较检测了临床血清样品１０５３份，两者阳性符合率为９５．５６％，ＤＳ－ＥＬＩＳＡ阴性血清在Ｄ－ＥＬＩＳＡ法亦阴性，而且后者灵敏度略高。酶标记抗原和包被抗体的酶标板在４℃中保存６个月仍稳定。试剂盒操作简便，快速，适用于弓形虫病的早期诊断。     

抗FMOC—苯丙氨酰氨基己酸的单克隆抗体的制备

为了建立新的非放射性基因标记和检测体系，用化学方法合成了Ｆｍｏｃ－苯丙氨酰氨基己酸。然后将其作为半抗原，与载体蛋白偶联（通过ＥＤＣ），用于免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取脾细胞与Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞融合。经ＥＬＩＳＡ筛选及有限稀释法克隆化，选出一株阳性克隆，分泌专一性抗Ｆｍｏｃ－苯丙氨酰氨基己酸的抗体。用双抗体夹心法测得其亚类为ＩｇＧ１。用间接ＥＬＩＳＡ法测得腹水效价为１．６×１０－５。用竞争性ＥＬＩＳＡ法测得亲和常数为３．６×１０６Ｍ－１。     

细胞ELISA检测血清抗内皮细胞抗体

用培养的人脐带静脉内皮细胞作为抗原，经ＥＬＩＳＡ检测了ＳＬＥ患者血清抗内皮细胞抗体，目的在于建立ＥＬＩＳＡ检测抗内皮细胞抗体的方法，并与细胞毒试验比了比较，结果表明，ＥＬＩＳＡ及细胞毒试验检测抗内皮细胞抗体，阳性率分别为７３％和５１％，差异显著显著；阳性血清用红细胞及淋巴细胞吸收后，抗内皮细胞抗体活性无明显降低，提示该法特异、灵敏、且重复性较好，可进行大批量标本筛选，为研究抗内皮细胞抗体特征及其致     

人巨细胞病毒单克隆抗体的研制检定和应用

采用人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＡＤ１６９株作为免疫原，制备出１３株鼠－鼠杂交瘤细胞系。对其中的６株进行了检定．免疫印迹试验结果表明：单克隆抗体（ＭｃＡｂ）７Ｂ４、７Ｄ７、７Ｅ１１、８Ｅ８和８Ｄ６相对应的ＨＣＭＶ多肽分子量分别为４６、１５０、３８、５１７２和６５ｋＤ．ＨＣＭＶ感染人胚肺二倍体细胞（２ＢＳ）后不同时间制成抗原片，与ＭｃＡｂ作间接免疫荧光试验。结果表明：ＭｃＡｂ８Ｂ８相应的病毒多肽为即刻早期抗原，其它５株ＭｃＡｂ相应的病毒多肽均为晚期抗原，６株ＭｃＡｂ等量混合后，标上辣根过氧化物酶，用于ＩｇＭ抗体捕获法ＥＬＩＳＡ（ＭａｃＥＬＩＳＡ）中，并与间接ＥＬＩＳＡ（ＩＥＬＩＳＡ）同时检测ＨＣＭＶ－ＩｇＭ．在未经选择的１００份脐带血中，两法均为阳性的３份，两法均为阴性的９４份；ＭａｃＥＬＩＳＡ阳性而ＩＥＬＩＳＡ阴性的２份血清的特异性试验证明，ＨＣＭＶ－ＩｇＭ确为阳性．ＩＥＬＩＳＡ阳性而ＭａｃＥＬＩＳＡ阴性的１份血清的特异性试验证明，它是由ＲＦ引起的假阳性。     

ELISA法检测血清中柯萨奇B组病毒抗体

以柯萨奇Ｂ组１－６型病毒感染的Ｖｅｒｏ细胞上清液作抗原，建立了间接ＥＬＩＳＡ法，用于检测心肌炎患者血清中ＣｏｘＢ１－６型病毒ＩｇＧ抗体，ＩｇＧ抗体滴度≥６４００者定为阳性，在４４例心肌炎患者中有３１例为阳性占７０．４５％，其阳性检出率明显高于正常对照组，后者仅占７．４１％。     

测定人血清纤维连接蛋白含量的双抗体夹心ELISA法的建立

４株经细胞融合获得的针对纤维连接蛋白（Ｆｎ）的单克隆抗体，经ＥＬＩＳＡ抗体相加试验和抗体竞争试验证实，为作用于Ｆｎ不同位点的单克隆抗体。选择其中２株单克隆抗体，应用于测定人血清Ｆｎ含量的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法．其批内差异为４．５％，批间差异为５．９％．建立的标准曲线相关系数为０．９８２，测定１３２例献血员血清Ｆｎ合量为０．２５５±０．０２８ｍｇ／ｍｌ，与文献报道相符．     

抗双链DNA抗体测定方法改变的研究

根据亲和素与生物系之间有很强亲和力的原理，用链霉亲和素预包被ＥＬＩＳＡ板加生物素化的双链ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ），使ｄｓＤＮＡ固定到载体上。在此基础上建立了间接法抗－ｄｓＤＮＡ抗体ＥＬＩＳＡ。与放射免疫法对比测定结果，本法的特异性、灵敏度分别为８２．４％、９２．０％，两法符合率８８．１％。本法具有很好的重复性和稳定性，可用于系统性红斑狼疮的临床诊断。     

间接ELISA检测抗核抗体及其临床应用

用小鼠肝细胞核包被聚苯乙烯反应板建立了间接ＥＬＩＳＡ法检测抗核抗体。通过特异性、精密度试验，达到方法学要求。对临床５１例病人检测，与间接荧光抗体法比较，两种方法检出率无明显差异（ｘ２＝３．６７Ｐ＞０．０５）。可进行半定量分析及大批量操作。     

GOR抗体与HCV感染的相关性研究

用工合成的ＧＯＥ肽与ＢＳＡ交联后包被反应板，作为捕获抗原，建立了检测ＧＯＲ抗体的间接ＥＬＩＳＡ。共检测临床各类病人２７８例，正常供血员４８名。结果慢性丙肝患者抗ＧＯＲ阳性检出率为６０．０％（３６／６０），血透患者为４３．６％（１７／３９），白血病患者为５０．０％（６／１２），甲亢患者为４０．４％（１９／４７）。对抗ＧＯＲ抗体阳性的意义进行了分析。     

组合单克隆抗体夹心斑点-ELISA检测日本血吸虫循环抗原的研究

本研究将抗不同表位单抗组合，首次用于夹心斑点-ＥＬＩＳＡ检测血吸由感染。对慢性日本血吸虫病患者的阳性检出率为８５％，１２例急性患者均阳性，１０例晚血病人４例阳性，非疫区正常人的假阳性率为２．２％。用单盲法检测的-组血清其符合率亦较满意。在基本消灭血吸虫病地区检测了１１００人，用夹心斑点-ＥＬＩＳＡ测抗原，阳性率为６．５％，以ＩＨＡ测抗体阳性率为２５．２％。在低年龄组人群，斑点ＥＬＩＳＡ与ＣＯＰＴ符合率为８８．９％，明显高于ＩＨＡ与ＣＯＰＴ的符合率（３５．７％），Ｐ＜０．０５。动物实验中，组合单抗夹心班点ＥＬＩＳＡ对低感染兔的阳性检出率高于单个单抗直接斑点-ＥＬＩＳＡ。     

双抗原夹心ELISA检测抗结核杆菌抗体及初步应用

双抗原夹心ＥＬＩＳＡ检测抗结核杆菌抗体及初步应用鲁严，彭晓红，盛裕芬目前用ＥＬＩＳＡ检测血清中的抗结核杆菌抗体（ＴＢＡｂ）大多为二步法，孵育时间较长，我们建立了双抗原夹心快速ＥＬＩＳＡ检测ＴＢＡｂ获得较好结果，并已制成试剂盒。材料和方法临床确诊的活动...     

HIV-1 p24抗原检测的应用研究

目的：用抗ＨＩＶ－１ｐ２４单克隆抗体和多克隆抗体和多克隆抗体构建的间接ＥＬＩＳＡ试剂,检测ＨＩＶ－１抗体阳性及其它样品,探讨应用的可行性。方法：采用单克隆抗体固相、兔抗ＨＩＶ－１ｐ２４抗体夹心,羊抗兔ＨＲＰ结合物的间接ＥＬＩＳＡ法。结果：显示试剂盒ＨＩＶ－１ｐ２４抗原检出灵敏度为５０ｐｇ／ｍｌ（基因工程抗原）;特异性９９．４６％;ＨＩＶ抗体阳性血样性率３．２％;抗体阴性的特殊人群血样阳性率３．９＆     

化学发光免疫测定抗dsDNA抗体的实验条件分析和初步应用

采用正交设计确定了化学发光免疫测定抗ｄｓＤＮＡ抗体的最适实验条件，并与免疫荧光法（ｌＦ）、酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）和放射免疫测定法（Ｆａｒｒ）比较。结果表明，最适条件：ｄｓＤＮＡ包被浓度为１０μｇ／ｍｌ、ＡＢＥＩ－ＳａＨＩｇＧ结合物使用发光强度为１．０×１０￣４ｍｖ坎德拉，氯化高铁血红素（Ｈｅｍｉｎ）浓度为５μｍｏｌ／Ｌ，Ｈ＿２Ｏ＿２浓度为０．３％，５６份ＳＬＥ患者血清中，化学发光免疫测定法（ＣＬＩＡ）检测抗ｄｓＤＮＡ抗体阳性率为８３．９％，高于ＩＦ和ＥＬＩＳＡ法，接近Ｆａｒｒ法水平。阻断试验证明，本方法检测抗ｄｓＤＮＡ抗体具较高特异性。     

抗Ro／SSA抗体的检测及其方法学比较研究

取人脾脏制成匀浆，经超速离心和ＤＥＡＥ纤维素层析提取Ｒｏ／ＳＳＡ抗原，建立ＥＬＩＳＡ检测抗Ｒｏ／ＳＳＡ抗体的方法。各类风湿性疾病患者的检测阳性率依次为ＳＳ７２．７％、ＳＬＥ４７．４％、ＲＡ２３．０％、ＤＬＥ１４．２％、ＭＣＴＤ１４．２％。此外，ＥＬＩＳＡ与ＣＩＥ的符合率为８５．９％，与免疫印迹法的符合率为８５％     

抗双链DNA抗体测定方法改进的研究

根据亲和素与生物素之间有很强亲和力的原理，用链霉亲和素预包被ＥＬＩＳＡ板加生物素化的双链ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）．使ｄｓＤＮＡ固定到载体上。在此基础上建立了间接法抗－ｄｓＤＮＡ抗体ＥＬＩＳＡ。与放射免疫法对比测定结果，本法的特异性、灵敏度分别为８２．４％、９２．０％，两法符合率８８．１％。本法具有很好的重复性和稳定性，可用于系统性红斑狼疮的临床诊断。     

抗ENA抗体及抗核抗体同时检测的临床意义

系统性红斑狼疮是一种慢性多系统的疾病，伴有多种血清自身抗体，我们采用免疫印迹法技术，对３０例ＳＬＥ患者和２０名正常人进行抗ＥＮＡ抗体的检测，同时用免疫荧光法检测了抗核抗体，测定结果：抗Ｓｍ阳性１０例，为３３．３％，抗ｕ１ＲＮＰ抗体阳性８例为２６．６％，两项均为阳性１１例，为３６．６％；１例为阴性；２０例正常人为阴性。ＡＮＡ３０例均为阳性两种核型１５例，抗ｄｓＤＮＡ阳性４例，为１３．３％，抗ＥＮＡ抗     

眼肌结合抗体的ELISA检测及应用

自猪和牛眼肌提取眼肌抗原，建立了检测人血清中眼肌结合抗体（ＥＭ－Ａｂ）的ＥＬＩＳＡ法。检测４０例甲亢患者阳性率为３０．０％，２３例ＳＬＥ患者阳性率为２６．９％，与正常对照组比较有显著差别（Ｐ〈０．０１）。ＥＭ－Ａｂ与甲状腺疾病的一些自身抗体无显著相关性，提示此是与眼病自身免疫反应有关的一种自身抗体。     

分泌抗登革病毒单抗独特型抗体杂交瘤细胞系的建立

将纯化的登革３型病毒（ＤＥＮ－３）单克隆抗体３Ｄ３（ＡｂＩ）连结到载体分子ＫＬＨ上，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞融合。用ＥＬＩＳＡ夹心法检测阳性克隆，融合率达１００％，阳性率为５％，经２～３次克隆化，获得了６株分泌抗登革病毒单抗的独特型抗体（ＭｃＡｂ２）的杂交瘤细胞系。在进行阳性筛选及特异性鉴定时，选择了以３～５μｇ／ｍｌ的最适Ａｂ１包被浓度，并用正常小鼠Ｉｇ及ＫＬＨ分别包被反应板作对照，以排除其抗异种免疫球蛋白的干扰。     

用间接ELISA法检测柯萨奇B组病毒特异性IgM抗体

用间接ＥＬＩＳＡ法检测柯萨奇Ｂ组病毒特异性ＩｇＭ抗体李晓眠，刘民，罗世春，马海伦，任中原（天津医学院微生物学教研室，天津３０００７０）特异性ＩｇＭ抗体的检测是早期诊断传染病的可靠方法之一。在病毒感染疾病中已广泛应用直接、间接和抗体捕捉ＥＬＩＳＡ法作早...     

CEA单链抗体基因在大肠杆菌中的克隆及表达

目的尝试将ＣＥＡ单链抗体在大肠杆菌中进行高效表达。方法以ＣＥＡ单链抗体基因为模板，设计４对引物，ＰＣＲ扩增，将４条ＤＮＡ扩增片段分别插入原核表达载体ｐＢＶ２２０中；重组质粒转染大肠杆菌ＴＧ１，４２℃热诱导外源蛋白的表达；包涵体经８ｍｏｌ／Ｌ脲溶解及谷胱甘肽系统复性；过离子交换柱进行纯化；ＥＬＩＳＡ夹心法测活性。结果得到了ＳＤ序列与起始密码ＡＴＧ分别相隔着５，６，７，８个核苷酸的重组质粒；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示转染入重组质粒的ＴＧ１菌经热诱导后有分子量约为３×１０４的外源蛋白，表达量最高达９３０ｍｇ／Ｌ培养液，约占菌体总蛋白的５０％；ＥＬＩＳＡ活性测定结果表明复性后的ＳｃＦｖ有较高的抗原结合活性。结论ＣＥＡ单链抗体在大肠杆菌中获得了较高水平的表达，且经复性后有较高的抗原结合活性。