利妥昔单抗治疗前后弥漫大B细胞淋巴瘤患者Th17细胞及相关细胞因子的变化

 【摘要】　  目的　了解弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者接受利妥昔单抗治疗前后Th17细胞及相关细胞因子的变化及其意义。方法　初治患者31例,化疗后患者60例（RCHOP组29例、CHOP组31例）,以20名体检健康者为健康对照组。采用流式细胞术检测各组外周血中Th17细胞比例,酶联免疫吸附法检测外周血相关细胞因子白细胞介素17（IL-17）、IL-21、IL-23、转化生长因子β （TGF-β）的表达水平。结果　初治组和CHOP-完全缓解（CR）组Th17细胞比例、IL-17、IL-21、IL-23水平分别为（0.67±0.21）%、（5.929±1.342）pg／ml、（130.632±17.945）pg／ml、（51.681±9.808）pg／ml和（1.07±0.37）%、（6.526±0.538）pg／ml、（132.119±7.700）pg／ml、（50.245±7.668）pg／ml,均低于对照组的（2.53±0.63）%、（8.435±2.031）pg／ml、（149.265±12.316）pg／ml、（55.303±7.778）pg／ml（P＜0.05）;初治组TGF-β水平为（370.615±98.444）pg／ml,显著高于对照组的（311.895±73.365）pg／ml（P＜0.05）。RCHOP-CR组Th17细胞比例、IL-17、IL-21、IL-23水平分别为（2.38±0.59）%、（7.724±0.780）pg／ml、（148.412±7.355）pg／ml、（55.668±7.532）pg／ml,均高于初治组和CHOP-CR组（P＜0.05）;RCHOP-CR组TGF-β水平为（283.904±59.223）pg／ml,低于CHOP-CR组的（341.481±95.597）pg／ml（P＜0.05）。结论　Th17细胞可能与DLBCL的发生发展呈负相关,IL-23水平降低和TGF-β水平升高可能抑制Th17细胞的分化;利妥昔单抗可提高DLBCL患者Th17细胞比例,且与化疗效果有关。     

miR－338对人肝癌细胞增殖及迁移的影响

目的：观察过表达miR－338对人肝癌细胞SMMC－7721增殖及迁移能力的影响。方法：化学合成miR－338寡聚核苷酸,并行测序确认。利用pcDNA6．2－GW／Em－GFP－miR 质粒构建miR－338真核表达载体。pcDNA6．2－GW／Em－GFP－miR－338质粒载体瞬时转染SMMC－7721细胞,实时荧光定量PCR检测miR－338的mRNA表达水平。高表达miR－338后,CCK－8法和划痕实验分别检测SMMC－7721细胞增殖能力及迁移能力的变化。结果：设计的miR－338序列与寡核苷酸测序结果比对,匹配程度达100％。pcD-NA6．2－GW／Em－GFP－miR－338质粒瞬转后人肝癌SMMC－7721细胞 miR －338的表达量与对照组相比显著增加（P＜0．05）。miR－338过表达SMMC－7721细胞的增殖能力与各对照组相比均有显著下降（P＜0．05）;miR－338过表达细胞迁移速度降低。结论：上调的miR－338可抑制人肝癌SMMC－7721细胞的增殖及迁移能力。     

IQGAP1诱导肝细胞肝癌干性促进血管生成拟态形成的实验研究

  目的  检测IQGAP1在肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织中的表达并研究其对肝癌细胞血管生成拟态形成能力的影响。  方法  采用免疫组织化学法检测2001年1月至2009年1月天津医科大学肿瘤医院180例肝癌组织中IQGAP1的表达,采用CD31/PAS双染法检测肝癌中血管生成拟态的情况,并分析IQGAP1与血管生成拟态之间的相关性;将IQGAP1过表达质粒和干扰质粒分别转染至肝癌细胞系HepG2和SMMC7721中,使用Western blot法检测转染后HepG2和SMMC7721细胞中干性相关蛋白CD133、CD44、Sox2和ALDH1的表达情况;细胞功能学实验检测IQGAP1对迁移侵袭、增殖、管道形成能力的影响。  结果  免疫组织化学结果显示IQGAP1定位于细胞膜或细胞质,其表达与肿瘤分级、转移和血管生成拟态形成相关（P＜0.05）。在HepG2细胞中上调IQGAP1,增强了HepG2细胞迁移侵袭、增殖、管道行成能力,促进了干性相关蛋白CD133、CD44、Sox2和ALDH1的表达;在SMMC7721细胞中下调IQGAP1,抑制了SMMC7721细胞迁移侵袭、增殖、管道行成能力（P＜0.05）,降低了上述干性相关蛋白的表达。  结论  IQGAP1表达升高促进了HCC的恶性生物学行为,IQGAP1可能通过诱导HCC干性来促进血管生成拟态形成。      

棘霉素对肝癌SMMC7721细胞凋亡相关基因影响的研究

目的：探讨棘霉素诱导肝癌SMMC7721细胞的凋亡作用及对转录因子Twist、p53、Survivin和hTERT（人端粒酶）基因的影响。方法：采用MTT法测定棘霉素对肝癌细胞的生长抑制率；半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测与肝癌的发生和转移密切相关的转录因子Twist，与细胞增殖和凋亡联系紧密的p53、Survivin和hTERT的mRNA表达水平的改变；利用Westernblot方法分析棘霉素治疗后上述基因的蛋白表达情况。结果：体外实验证实，棘霉素浓度〉10．0ng／mL各组对细胞的生长抑制均显著增加，P〈0．05，随棘霉素药物浓度增加，细胞抑制率明显增大。棘霉素抑制肝癌细胞株SMMC7721的作用呈剂量一时间依赖性。RT-PCR方法证实，随着棘霉素剂量的增加，肝癌SMMC7721细胞株中Twist、Survivin和hTERTmRNA表达水平逐渐下调，P〈0．01，p53mRNA表达水平微弱上调，P〈0．05。Westernblot检测显示，Twist、Survivin和hTERT蛋白的表达量呈递减趋势，P〈0．01，p53蛋白的表达微弱上调，P〈0．01。结论：随着棘霉素剂量的增加，细胞凋亡率显著增加。棘霉素能够抑制与肝癌生长密切相关基因的Twist、Survivin和hTERTmRNA表达，促进p53mRNA表达上调，相应蛋白的表达呈下调和上调。棘霉素可能通过抑制肝癌细胞的生长、转移和促进肝癌细胞的凋亡起到抑制肿瘤生长的作用。     

c—met—SF／HGF基因表达对肝癌细胞转移能力的影响

目的：研究c-met-SF/HGF基因表达对肝癌细胞转移能力的影响。方法：采用RT－PCR及Wiestern Blot法检测肝癌细胞株MHCC－1、HepG2,Hep3B,SMMC7721的met-SF/HGF的表达，继而用c-met多克隆抗体阻断met-SF/HGF的信号传导，观察细胞各项能力的改变。结果：转移能力高的细胞株（MHCC－1）c-met的表达量远高于转移能力低的细胞株，并伴有配体SF／HGF的自分泌；MHCC－1上清液能刺激SMMC7721细胞增殖并使其运动能力增强；该作用被抗c-met抗体特异性阻断，当被阻断后，细胞生长及运动能力下降。结论met-SF/HGF 基因表达在肝癌转移中起重要的作用，阻断c-met-SF/HGF的信号传导将降低肿瘤转移的能力。     

含AFP基因调控序列的pAFP-P53-EGFP质粒诱导AFP阳性肝癌细胞凋亡

目的：观察含AFP基因调控序列的载体对AFP阳性肝癌细胞的靶向致凋亡作用。方法：将AFP启动子、沉默子和远端增强子Ⅲ组合为1.2 kb的AFP基因调控序列,构建pAFPEGFP载体,分别转染人肝癌HepG2（AFP阳性）、人肝癌SMMC7721（AFP阴性）和人宫颈癌HeLa（AFP阴性）细胞,荧光显微镜下观察EGFP荧光蛋白表达强度。引入P〖STBX〗53〖STBZ〗基因片段,构建pAFPP53EGFP重组质粒,转染HepG2、SMMC7721和HeLa细胞,Western blotting检测各组细胞P53蛋白的表达,流式细胞术分析各组细胞凋亡率及细胞周期。结果：成功构建了pAFPEGFP和pAFPP53EGFP重组质粒。pAFPEGFP转染后,AFP阳性的HepG2细胞中EGFP荧光蛋白表达显著高于AFP阴性的SMMC7721和HeLa细胞。pAFPP53EGFP转染后,HepG2细胞中P53蛋白的表达量明显高于SMMC7721和HeLa细胞;HepG2细胞的G1期细胞及细胞凋亡率明显高于SMMC7721和HeLa细胞\[(66.7±0.25)% vs（50.5±0.18）%,（51.0±0.20）%,P<0.05;（2.65±008）% vs（0.42±003）%,（0.39±0.02）%,P<0.05\], 但S期细胞明显低于转染后SMMC7721和HeLa细胞\[(20.1±022)% vs（29.8±018）%,（37.8±0.21）%,P<0.05\]。结论：含AFP基因调控序列的pAFPP53EGFP载体可专一性地作用于AFP阳性肝癌细胞,引起肝癌细胞周期阻滞和凋亡。     

乙醇诱导肝癌HCC—9204细胞凋亡的研究

目的：探讨乙醇对肝癌细胞系HCC－9204凋亡的诱导作用。建立乙醇诱导肝癌细胞凋亡的模型。方法：用噻唑蓝（MTT）法检测浓度分别为2％－10％的乙醇对HCC－9204的杀伤作用，然后用6％乙醇作用6h诱导HCC－9204细胞凋亡，以透射电子显微镜，末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法和流式细胞术分别检测凋亡细胞的形态学变化，DNA断裂情况和不同细胞周期的DNA含量变化，结果：乙醇对HCC－9204细胞的杀伤作用随浓度的增加而增加，6％乙醇可使HCC－9204细胞产生明显的凋亡形态学变化，大部分细胞为TUNEL阳性，并且流式细胞仪分析可明显的亚二倍体凋亡峰。结论：低浓度乙醇能有效诱导HCC－9204细胞凋亡。     

叶酸诱导人肝癌细胞凋亡及其机制的研究

目的：研究叶酸诱导人肝癌细胞凋亡的作用及其机制。方法：应用叶酸连续处理体外培养的人肝癌细胞（SMMC－7721）,4天后光镜及电镜观察细胞形态改变,细胞计数测定细胞生长及增殖情况,DNA凝胶电泳分析DNA改变,流式细胞仪检测细胞周期分布,细胞凋亡指数及凋亡相关基因及其表达的改变。结果：10ug/ml叶酸可诱导SMMC－7721细胞出现凋亡特征性形态改变,其细胞NDA电一现“梯状”断裂现象,细胞凋亡指数为16．8％（空白对照组为6．9％）,S期细胞减少,细胞生长和增殖被明显抑制,且凋亡相关基因fas 和p53表达增加,而bcl-2和TGF－β1表达降低。结论：叶酸具有诱导人肝癌细胞凋亡的作用,其机制可能与凋控细胞凋亡相关基因的表达有关。     

基因HC56对人肝癌细胞（SMMC7721）基因表达水平的影响

目的：观测新发现的HC56基因对培养的人肝癌细胞SMMC－7721基因表达的影响。方法：用含HC56cDNA的重组表达载体转染SMMC－7721细胞后,由细胞总RNA反转录为cDNA,与Atlas人类cDNA表达方阵膜片杂交,通过molecular image system分析软件对暴光强度进行密度扫描定量（以看家基因β-actin对照校正）。结果：HC56转染的肝癌7721细胞有3个基因（C-myc,CAMP dependent protein kinasetypel bata regulatory subunit ,β,thymosin β-10)表达上调,3个基因（Glutathione perotidase,fos-related antigen-2,zinc finger protein 1)表达下调。结论;HC56基因转染对体外培养的肝癌细胞的基因表达有着不同的影响。本文为进一步研究HC56基因的功能提供了线索。     

肝癌细胞中血管内皮生长因子的自分泌及其意义

目的 研究人肝癌细胞中血管内皮生长因子(VEGF)的自分泌及其意义。方法：反转录PCR(RTPCR)检测体外培养的人肝细胞肝癌细胞系SMMC7721、HHCC和HepG2中VEGF受体的表达。采用人工合成的反义寡核苷酸(ODN)抑制肝癌细胞VEGF的表达后，分别检测肝癌细胞增殖活性和超微结构的变化，流式细胞仪分析肝癌细胞周期以及VEGF’受体蛋白表达的变化。结果：VEGF受体1(Flt-1)在SMMC7721细胞中有表达，而HHCC和HepG2细胞则表达VEGF受体2(KDR)。反义ODN对HHCC细胞的增殖有抑制作用，且与ODN的作用浓度呈线性关系，浓度为2．5μmol／L、5 μmol／L和10μmol/L时细胞增殖抑制率分别为26％、41％和50％。反义ODN对SMMC7721细胞则无此作用，而正义ODN对上述2种细胞均无作用。反义ODN作用后，HHCC细胞出现S期比率下降，并且在细胞周期曲线中出现凋亡前期峰，而SMMC7721细胞无上述变化。反义0DN能降低HHCC细胞膜表面KDR的表达(阳性率分别为：反义组19.2％，正义组29.8％，对照组31.2％)，对于SMMC7721细胞Flt-1的膜表面表达则无明显影响。结论：人肝癌细胞中存在VEGF的自分泌途径，其机制可能为通过诱导肝癌细胞膜表面KDR的表达及其信号转导作用，从而调节肝癌细胞的分裂增殖。     

艰难梭菌A毒素诱导SMMC7721细胞和Vero细胞凋亡的比较研究

背景与目的:艰难梭菌是假膜性大肠炎及抗生素诱发性腹泻的主要致病菌之一,它产生的毒素具有不同的生物学活性.本实验拟研究艰难梭菌 A毒素诱导人肝癌细胞株( SMMC7721)和非洲绿猴肾细胞( Vero细胞)凋亡的作用. 方法:由脑心浸液对艰难梭菌 VPI 10463菌株培养产毒 , 经甲状腺球蛋白亲合层析和 Q Sephrose层析提纯得到精制 A毒素.对 SMMC7721细胞的研究以 Vero细胞为对照.抑制细胞增殖的检测采用 MTT法;用荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞仪观察细胞形态和细胞周期的改变;采用琼脂糖凝胶电泳法观测 DNA碎片.结果:不同浓度 A毒素 (0.293～ 4.690 mg@ L- 1)明显抑制了 SMMC7721及 Vero细胞的增殖,并且呈时间和浓度依赖性;两种细胞与 A毒素共同培养 48 h,荧光显微镜和透射电镜都观察到典型的凋亡形态变化; SMMC7721细胞与 A毒素共同培养 48 h后,琼脂糖凝胶电泳显示梯形条带.结论: A毒素明显诱导了两种细胞的凋亡 ; A毒素对 SMMC7721细胞具有更强的诱导凋亡作用.     

EGF Reverses Multi-drug Resistance via the p-ERK Pathway in HepG2/ADM and SMMC7721/ADM Hepatocellular Carcinoma Models

Aim: To investigate signaling pathways for reversal of EGF-mediated multi-drug resistance (MDR) inhepatocellular carcinoma (HCC) models. Materials and Methods: HCC MDR cell strain HepG2/adriamycin(ADM) and SMMC7721/ADM models were established using a method of exposure to medium with ADMbetween low and high concentration with gradually increasing concentration. Drug sensitivity and reversalof multi-drug resistance by EGF were determined and the cell cycle distribution and apoptosis were analyzedby flow cytometry. Phosphorylation of ERK1, ERK2, ERK5 and expression of Bim were detected by Westernblotting. Results: The results showed that HepG2/ADM and SMMC7721/ADM cells were resistant not only toADM, but also to multiple anticancer drugs. When used alone, EGF had no anti-tumor activity in HepG2/ADMand SMMC7721/ADM cells in vitro, while it increased the cytotoxicity of ADM. EGF induced cell apoptosis andG0/G1 phase cell cycle arrest in HepG2/ADM And SMMC7721/ADM cells, while enhancing activity of p-ERKsand up-regulated expression of BimEL. Conclusions: EGF might enhance the chemosensitivity of HepG2/ADMand SMMC7721/ADM cells via up-regulating p-ERKs and BimEL protein.     

siRNA 靶向沉默 KIF20A 基因对人肝癌 SMMC -7721细胞体外增殖和侵袭迁移的影响

目的：研究 KIF20A 对肝癌 SMMC -7721细胞系增殖和侵袭迁移能力的影响。方法：利用 RNA 干扰技术下调肝癌细胞系 SMCC -7721中 KIF20A 的表达。qRT - PCR 和 Western blot 分别检测细胞 KIF20A 在mRNA 和蛋白水平表达中的变化。CCK -8实验检测增殖能力的改变。Transwell 实验检测迁移、侵袭能力的改变。结果：qRT - PCR 和 Western blot 结果显示 KIF20A - siRNA 能够成功下调 KIF20A 的表达,CCK -8和Transwell 实验分别证实肝癌 SMMC -7721细胞增殖和侵袭迁移能力下降。结论：抑制 KIF20A 的表达能够降低肝癌细胞的增殖和侵袭迁移能力。     

表达新城疫病毒HN基因重组鸡痘病毒的构建及其抑瘤作用

目的〖HT5”SS〗： 构建表达新城疫病毒（newcastle disease virus, NDV）HN基因的重组鸡痘病毒vFVHN,探讨vFVHN对体外培养人肝癌细胞 SMMC7721的抑制作用和对小鼠荷肝癌模型的体内抑瘤效果。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗： 以野生型鸡痘病毒（fowl poxvirus, FPV）282 E4株为载体,构建表达新城疫病毒HN基因的重组鸡痘病毒vFVHN。采用5溴2脱氧尿苷（5bromo2deoxyribouridine,BrdU）加压法筛选重组体,并通过RTPCR和Western blot等方法对其进行鉴定。采用噻唑蓝（methylthiazoletetrazolium,MTT）染色法检测vFVHN对人肝癌细胞SMMC7721的杀伤率,并通过检测抑瘤率观察其在C57BL/6小鼠荷肝癌模型的抑瘤效果。〖HT5W〗结果〖HT5"SS〗： 成功构建重组鸡痘病毒vFVHN,其对SMMC7721细胞的杀伤率为43.37%,对C57BL/6小鼠肝癌模型的抑瘤率为20.65%。〖HT5W〗结论〖HT5"SS〗： 重组鸡痘病毒vFVHN可有效杀伤体外培养的人肝癌细胞SMMC7721,并对C57BL/6小鼠荷肝癌模型体内的实体肿瘤有一定抑制作用。     

Adenovirus-mediated tissue-specific cytosine deaminase gene therapy for human hepatocellular carcinoma with different AFP expression levels

To evaluate whether in vitro and in vivo transferring of Escherichia coli cytosine deaminase gene to a solid tumor will confer the sensitivity to the prodrug 5-fluorocytosine (5FC) on these cells, we constructed two replication-defective adenovirus vector in which the cytosine deaminase gene was driven by CAG promoter (Adex1CACD) and AFP gene 5'-flanking region (Adex1AFPCD), respectively. By transferring these two vectors to SMMC7721AFP(-) and HepG2 human hepatocellular carcinoma (HCC) cells in vitro, we found that Adex1CACD vector could effectively suppress SMMC7721AFP(-) and HepG2 cells growing in the presence of 5FC even if the infected cell is less to 20%, while Adex1AFPCD vector only conferred HepG2 cells sensitivity to 5FC. When Adex1CACD was directly injected into established subcutaneous SMMC7721AFP(-) tumors in nude mice receiving 5FC, the tumor growth was inhibited significantly, which was consistent with those in vitro results. Furthermore, the Adex1AFPCD plus 5FC suppressed SMMC7721AFP(+) tumor growth in vivo, but not SMMC7721AFP(-) tumor. The results suggested that the CAG promoter-controlled CD gene could effectively mediate the growth inhibition in different kinds of HCC combined with administration of 5FC, and the AFP promoter-controlled CD gene could only suppress the HCCs expressing high levels of AFP. Therefore, adenovirus-mediated tumor-specific gene transfer may be a potential strategy for local control of tumor growth.     

奥曲肽联合阿司匹林增强对肝癌细胞生长的抑制作用

背景与目的:奥曲肽和阿司匹林均能抑制肝癌细胞生长,但两种非细胞毒性药物的抗肿瘤机制不同。从多环节发挥抗癌作用的角度考虑,联合治疗可使多种药物获得协同作用,产生最大的抑瘤效应,减少用药量,降低不良反应。本文旨在探讨奥曲肽联合阿司匹林对人肝癌细胞生长的作用。方法:采用3H-胸腺嘧啶核苷掺入法观察单独或联合应用奥曲肽和阿司匹林对体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721生长的影响,根据中效原理判断两者之间相互作用的关系。建立人肝癌裸鼠原位移植瘤模型,观察奥曲肽和阿司匹林单独或联合作用对体内肝癌生长的影响。结果:奥曲肽与阿司匹林在体外联合作用能显著抑制SMMC-7721生长,其合用浓度与3H-胸腺嘧啶核苷掺入量呈显著负相关,r=-0.9594,P<0.01。奥曲肽与阿司匹林的大多数效应范围尤其是高水平效应时合用指数小于1,具有明显的协同作用。奥曲肽联合阿司匹林能显著抑制人肝癌裸鼠原位移植瘤的生长,抑瘤率高达89.47%,较单用阿司匹林组(69.92%)明显升高,且联合组肿瘤内的纤维组织增生较对照组明显增多。在各组裸鼠的体内实验中未见明显不良反应。结论:奥曲肽联合阿司匹林不仅显著增加单用其中一种药物对人肝癌细胞株生长的抑制作用,也明显提高对裸鼠肝癌原位移植瘤的抑瘤率,提示两者联合应用对抑制肝癌     

POKemon和NF-κB p65在肝癌细胞中的信号调控

目的:旨在探讨原癌基因POKemon和核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB) p65在肝癌细胞中的信号调控作用.方法:采用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)和蛋白质印迹法分别检测POKemon、NF-κB p65 mRNA和蛋白在肝癌细胞株HepG2和SMMC7721及人胚胎肝细胞LO2中的表达情况;随后应用小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)法依次分别抑制POKemon和NF-κB p65在肝癌细胞中的表达,观察二者在肝癌细胞中的变化,并应用FCM法检测对肝癌细胞凋亡的影响.结果:POKemon和NF-κB p65在肝癌细胞HepG2和SMMC7721中的表达量明显高于人胚胎肝细胞LO2;特异性针对POKemon基因的siRNA抑制POKemon的表达后,NF-κB p65在HepG2和SMMC7721细胞中的表达量也明显下降,转染前后分别为2.12±0.14vs 1.37±0.11和2.08±0.16vs 1.35±0.13,差异有统计学意义(P＜0.05),且肝癌细胞凋亡明显增加分别为(5.07±0.46)％vs (39.65±3.75)％和(5.71±0.83)％vs (33.21±3.66)％,差异有统计学意义(P＜0.05);特异性针对NF-κB基因的siRNA抑制NF-κB p65的表达后,POKemon在HepG2和SMMC7721细胞中的表达则无明显变化,其表达量转染前后分别为1.86±0.12vs 1.90±0.13和1.91±0.11 vs 1.85±0.11,差异无统计学意义(P＞0.05),但明显提高HepG2和SMMC7721细胞的凋亡率,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:原癌基因POKemon可通过调控NF-κB p65的表达而阻遏肿瘤细胞凋亡,促进肝癌的发生、发展.     

靶向IGF1R的siRNA抑制人肝癌细胞SMMC7721裸鼠移植瘤的实验研究

背景与目的:利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制哺乳动物基因表达已成为研究基因功能的一种有效方法.本研究探讨人胰岛素样生长因子1类受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R)的短发夹环RNA对人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠移植瘤的抑制作用.方法:设计并合成特异性靶向IGFIR的siRNA片段,构建SMMC7721-IGFlR-siRNA表达质粒,将其转入SMMC7721细胞.通过G418筛选出稳定株,移植裸鼠成瘤.同时设立对照组.根据体积的均数值绘制肿瘤生长曲线,以HE染色法观察质粒处理后瘤组织的病理改变,Western blot检测肿瘤组织中IGF1R的表达变化,免疫组化SP法检测检测瘤组织内微血管密度,原位末端标记法(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果:SMMC7721-IGF1R-siRNA组肿瘤体积与SMMC7721-IGF1R-mutation组、SMMC7721组相比差异有统计学意义(P＜0.05).病理学检查及TUNEL检测发现,SMMC7721-IGF1R-siRNA组肿瘤生长受到抑制,细胞凋亡指数[(50.2±6.4)%]明显高于SMMC7721.IGF1R-mutation 组[(5.4±1.0)%]和SMMC7721组[(6.0±2.1)%](P＜0.05).SMMC7721-IGF1R-siRNA组与SMMC7721-IGF1R-mutation 组、SMMC7721相比,瘤内IGFIR蛋白表达明显下调.SMMC7721-IGF1R-siRNA组微血管密度(11.3±4.4)与SMMC7721-IGF1R-mutation组(36.7±7.6)、SMMC7721组(28.4±6.5)相比明显下降(P＜0.05).结论:构建的SMMC7721-IGF1R-siRNA具有RNA干扰作用,能抑制SMMC7721细胞裸鼠移植瘤的生长.     

三氧化二砷对人肝癌细胞作用的研究

目的 :应用体外培养的肝癌细胞株 (SMMC 772 1)观察砷剂 (As2 O3)的凋亡诱导作用。方法 :采用MTT法检测As2 O3对肝癌细胞增殖的影响 ,DNA电泳及流式细胞仪检测不同浓度As2 O3作用不同时间对肝癌细胞的凋亡诱导作用及细胞周期的影响。结果 :As2 O3抑制肝癌细胞的增殖并具有剂量 -时效关系 ;As2 O3可使肝癌细胞周期改变 ,与浓度有关 ,与作用时间未见明显关系 ;As2 O3诱导肝癌细胞发生凋亡 ,并与浓度、时间有关。结论 :As2 O3能抑制肝癌细胞增殖 ,改变肝癌细胞周期 ,诱导肝癌细胞凋亡     

雷帕霉素上调Beclin 1诱导肝癌细胞死亡的体外研究

 目的研究雷帕霉素诱导肝癌细胞死亡的方式以及时效与量效关系。方法锥虫蓝排斥实验分析雷帕霉素诱导肝 癌细胞死亡的时效、量效关系；透射电镜技术检测雷帕霉素诱导肝癌细胞死亡方式；Western blot检测Beclin 1表 达变化。结果雷帕霉素诱导肝癌细胞死亡具有时效和量效关系；可诱导肝癌细胞的凋亡和自噬性细胞死亡；可上调 Beclin 1蛋白的表达。结论雷帕霉素可能是一种新的有效的肝癌化疗药物。