三氧化二砷对人肝癌细胞作用的研究

目的：应用体外培养的肝癌细胞株(SMMC-7721)观察砷剂(As2O3)的凋亡诱导作用。方法：采用MTT法检测As2O3对肝癌细胞增殖的影响，DNA电泳及流式细胞仪检测不同浓度As2O3作用不同时间对肝癌细胞的凋亡诱导作用及细胞周期的影响。结果：As2O3抑制肝癌细胞的增殖并具有剂量-时效关系；As2O3可使肝癌细胞周期改变，与浓度有关，与作用时间未见明显关系；As2O3诱导肝癌细胞发生凋亡，并与浓度、时间有关。结论：As2O3能抑制肝癌细胞增殖，改变肝癌细胞周期，诱导肝癌细胞凋亡。     

高效表达肝癌相关抗原HAb18G的CHO细胞株的建立

目的 获得高效表达肝癌相关抗原HAb18G的CHO细胞株。方法 构建含有肝癌相关抗原HAb18G基因的真核表达载体并经限制性酶切及部分序列分析证明插入是否正确。用阳离子脂质体介导转染CHO细胞经G418筛选,稳定表达,间接免疫荧光染色证实蛋白表达情况。用有限稀释法将筛选的细胞进行单克隆化,通过流式细胞仪筛选高效表达株。结果 成功构建了真核表达载体pcDNA-3/HAb18G并经限制性酶切及部分序列分析证明基因插入正确。间接免疫荧光染色证实：HAb18G高效表达于转染细胞的胞膜上。流式细胞仪筛选获得了1株高效表达的CHO细胞。结论 实验结果为HAb18G蛋白分子的生物学功能研究奠定了基础。     

热激蛋白在乳腺癌细胞中的表达及其意义

目的：探讨热激蛋白（heat shock protein，HSP）90、70、27在高转移性乳腺癌细胞株MDA—MB-435s和MDA—MB-231中的表达情况及其意义。方法：MTT法检测HSP90抑制剂geldanamycin（GA）对2株乳腺癌细胞株粘附基质胶能力的影响；侵袭小室重组人工基底膜侵袭实验检测HSP90抑制剂GA对2株细胞的侵袭能力的影响；RT—PCR和Western blot实验检测2株细胞中HSP90、HSP70和HSP27mRNA及其蛋白质水平的表达差异。结果：GA能够明显抑制MDA—MB435s和MDA-MB-231细胞粘附基质胶的能力（P〈0．01）；2株高转移性乳腺癌细胞株的侵袭能力比较无显著性差异（P〉0．05），GA能够明显抑制2株乳腺癌细胞的侵袭能力，与对照组相比，MDA—MB-231细胞侵袭能力下降（P〈0．05），MDA-MB-435s细胞的侵袭能力下降更为明显（P〈0．01）。MDA—MB-435s细胞中HSP90蛋白质和HSP90αmRNA表达水平都明显高于MDA-MB-231细胞（P〈0．01），MDA-MB-435s和MDA—MB-231细胞中HSP90βmRNA表达水平没有显著差异（P〉0．05）；MDA-MB-231细胞中HSP27的mRNA和蛋白质的表达水平均明显高于MDA—MB-435s细胞（P〈0．01）；MDA-MB-435s细胞中HSP70蛋白质的表达水平与MDA-MB-231细胞没有显著性差异（P〉0．05），HSP70mRNA表达水平低于MDA—MB-231细胞（P〈0．05）。结论：HSP表达特性与乳腺癌细胞的粘附、侵袭能力相关；MDA—MB-435s细胞中HSP90较高水平表达，MDA-MB-231细胞中HSP27表达水平较高。     

Sox2在肝癌中的表达及其对细胞生长增殖的作用

[目的]明确Sox2蛋白在肝癌组织及肝癌细胞系中的表达,探讨Sox2分子对肝癌细胞生长增殖的作用及机制。[方法]选取临床肝癌组织标本、正常肝细胞系和多种肝癌细胞系为实验对象,从蛋白水平比较Sox2的表达水平;选取高表达Sox2的肝癌细胞系,利用RNA干涉技术降低Sox2表达,运用BrdU掺入实验、MTT实验等技术检测Sox2分子对肝癌细胞生长、增殖的影响,并检测肿瘤相关分子Wnt/β-catenin的表达水平。[结果]Sox2在肝癌组织及几种肝癌细胞中表达明显升高,以HepG2细胞系最多;MTT实验显示,与正常对照组和阴性对照组比较,从第3天开始Sox2干涉组A。值明显降低（P〈0．05）;BrdU掺人实验显示,Sox2干涉组细胞BrdU掺入率明显减少（P〈0．05）;降低Sox2表达后,Wnt/β-catenin水平明显降低。[结论]Sox2在肝癌组织及肝癌细胞中表达升高,并通过Wnt/β-catenin促进肝癌细胞生长及增殖。     

FLNA在肝癌中的表达及其对细胞增殖、侵袭转移的作用

摘 要：［目的］ 探讨细丝蛋白A（FLNA）在肝癌组织中的表达及过表达对肝癌细胞生物表型的影响。［方法］ 采用免疫组织化学方法、Western Blot检测75例肝癌组织及距其癌组织边缘2cm以上的镜下未见癌浸润的37例正常肝脏组织中FLNA的表达情况。采用慢病毒转染建立FLNA过量表达的肝癌HepG2细胞株。荧光定量PCR及Western Blot检测FLNA转染后肝癌HepG2细胞株中FLNA表达含量的变化。MTT法、Transwell检测FLNA过量表达对肝癌细胞增殖及细胞侵袭转移的影响。［结果］ 免疫组织化学结果表明,FLNA蛋白在肝癌组织及正常肝脏组织中的表达阳性率分别为37.3%、89.2%,差异有统计学意义（P＜0.05）。Western Blot结果表明,FLNA 蛋白在肝癌组织的相对表达量较正常肝脏组织明显降低,两者比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。FLNA蛋白表达水平与肝癌有无淋巴结转移、临床分期以及组织学分级有关（P＜0.05）,而与患者年龄、性别、肝癌病理类型及T分期无关（P＞0.05）。FLNA高表达的肝癌细胞其增殖能力明显减弱、侵袭转移能力降低,MMP-9蛋白的表达量明显下调。［结论］ 肝癌组织中FLNA蛋白表达明显下降,可能是正常肝脏组织恶性转变的重要生物学标志,对预测肝癌发生、浸润转移有重要意义。     

三氧化二砷对人肝癌细胞作用的研究

目的 :应用体外培养的肝癌细胞株 (SMMC 772 1)观察砷剂 (As2 O3)的凋亡诱导作用。方法 :采用MTT法检测As2 O3对肝癌细胞增殖的影响 ,DNA电泳及流式细胞仪检测不同浓度As2 O3作用不同时间对肝癌细胞的凋亡诱导作用及细胞周期的影响。结果 :As2 O3抑制肝癌细胞的增殖并具有剂量 -时效关系 ;As2 O3可使肝癌细胞周期改变 ,与浓度有关 ,与作用时间未见明显关系 ;As2 O3诱导肝癌细胞发生凋亡 ,并与浓度、时间有关。结论 :As2 O3能抑制肝癌细胞增殖 ,改变肝癌细胞周期 ,诱导肝癌细胞凋亡     

流式细胞术分析苦参碱诱导人肝癌细胞HepG2凋亡

目的 为探讨苦参碱抑制HepG2增殖的机制。方法 以不同浓度苦参碱作用于HepG2细胞不同时间用PI及AnnexinV-FTTC-PI双标记两法检测凋亡细胞,结果 0.8,1.5,2.0g/L苦参碱处理细胞72h,细胞均出现了凋亡峰,凋亡细胞分别为10.57,16.37,10.85%细胞早期凋亡检测;2.0,1.5,3.0g/L苦参碱分别作6h、12h、12h,凋亡细胞分别达7.7,8.6,15.7%;当3.0g/L苦参碱作用12h,坯 煞费苦心细胞达21.9%。结论 一定浓度苦参碱可诱导HepG2细胞凋亡,凋亡与坏死相伴存在并呈剂量和时间依赖性。     

P-selectin 和CD15在肝癌中的表达及其

目的检测P-selectin、CD15在肝癌中的表达及其与肿瘤侵袭转移的关系。方法应用免疫组化SABC法检测肝癌中P-selectin、CD15的表达。结果P-selectin、CD15在肝癌组织中的阳性表达率显著高于对照组,且与肝癌的侵袭转移相关(P<0.05);P-selectin、CD15表达存在相关关系(P<0.05)。结论P-selectin、CD15与肝细胞癌侵袭转移关系密切,可能成为肿瘤治疗的理想靶分子。     

miR-18a对肝癌细胞侵袭及迁移能力的影响及其机制

目的 探讨miR-18a对肝癌患者血清肝癌细胞侵袭及迁移的影响及其作用机制.方法 细胞经培养、传代、冻存、复苏后采用脂质体介导转染法进行转染.肝癌细胞株HepG2.2.15及HepG2分别转染miR-18a inhibitor和miR-18a inhibitor阴性对照24 h后,应用transwell侵袭和迁移实验测定肝癌细胞的侵袭和迁移能力.肝癌细胞株HepG2和HepG2.2.15分别转染miR-18a inhibitor、miR-1 8a inhibitor阴性对照、共转染miR-18ainhibitor和Dicer siRNA以及共转染miR-18a inhibitor和Dicer siRNA阴性对照48 h后,应用Western blot法比较各组Dicer1蛋白表达的差异,应用transwell侵袭和迁移实验比较各组细胞侵袭以及迁移能力的差异.结果 转染miR-18a inhibitor 后,HepG2和HepG2.2.15细胞的侵袭和迁移能力均降低,差异均具有统计学意义(均P＜0.05).转染miR-18a inhibitor组Dicer1蛋白表达水平较转染miR-18a inhibitor阴性对照组升高,差异具有统计学意义(P＜0.05).共转染Dicer siRNA+ miR-18a inhibitor组Dicerl蛋白表达水平较Dicer siRNA阴性对照+miR-18a inhibitor组降低,差异具有统计学意义(P＜0.05);细胞的侵袭和迁移能力均增强,差异均具有统计学意义(均P ＜0.05).结论 miR-18a 促进肝癌细胞的侵袭和迁移能力,其机制可能与Dicer1蛋白表达抑制有关.     

Smac对肝癌细胞HepG2的体内外抗肿瘤效应

目的研究腺病毒Ad.smac体内外肝癌细胞HepG2的抗肿瘤效应。方法通过表达Smac的腺病毒Ad.smac和对照Ad.GFP作用于肝癌细胞HepG2,评价Ad.smac对HepG2细胞的体外杀伤作用;利用平板克隆形成实验和肿瘤细胞体内致瘤性实验,探讨Smac对HepG2细胞致瘤性的影响;通过对荷瘤裸鼠的抑瘤性实验研究Ad.smac的体内抗肿瘤作用。结果Ad.smac对肝癌细胞HepG2体外有很强的杀伤作用,50MOIAd.smac作用于Smac细胞HepG248h,细胞死亡率达58%,对照组无明显死亡细胞;感染Ad.smacHepG2细胞形成的肿瘤明显小于对照组,P=0.000;Ad.smac治疗荷HepG2细胞瘤的裸鼠,生存率由33%提高到100%。结论Ad.smac有应用于抗肿瘤治疗的前景。     

重组人IL-24蛋白诱导肝癌细胞生长抑制和凋亡

目的研究重组人IL-24蛋白（rhIL-24）选择性诱导肝癌细胞生长抑制和凋亡的作用。方法重组由Igk前导肽、IL-24cDNA（不含自身信号肽）和myc—tag组成的融合基因（Igk7m），构建表达载体pcDNA3．1-Igk7m，稳定转染293细胞，表达并粗提分泌性rhIL-24蛋白。以人肝癌细胞株PLC／PRF／5（p53突变型）、SMMC-7721（p53野生型）和正常人肝细胞株WRL-68为靶细胞，用活细胞计数法和TUNEL法分析rhIL-24处理对培养的靶细胞生长和凋亡的影响。结果经测序鉴定，融合基因各片段的核苷酸序列和总阅读框架完全正确。应用Westernblot在筛选的转基因293细胞克隆和其培养上清中均检测到rhIL-24蛋白，分子量分别约为25kDa和35kDa。与WRL-68对照组相比，分泌性rhIL-24蛋白粗提液处理可显著抑制PLC／PRF／5和SMMC-7721肝癌细胞的生长增殖（P〈0．01）。rhIL-24蛋白处理还可显著增加PLC／PRF／5和SMMC-7721的凋亡细胞百分率（P〈0．01），而对正常肝细胞WRL-68无明显影响（P〉0．05）。结论rhIL-24蛋白能选择性诱导培养的肝癌细胞株PLC／PRF／5和SMMC-7721生长抑制和凋亡。     

Lysophosphatidic acid receptor‐3 increases tumorigenicity and aggressiveness of rat hepatoma RH7777 cells

Lysophosphatidic acid (LPA), which interacts with G protein‐coupled transmembrane LPA receptors exhibits several biological effects, such as cell proliferation, migration, and differentiation. Recently, it has been reported that alteration of LPA receptor genes occurs in several cancer cells. In this study, to assess the biological role of LPA receptor‐3 (LPA₃) in the pathogenesis of tumor cells, we generated the Lpar3‐expressing cells (RHa3B12 and RHa3G8) from rat hepatoma RH7777 cells, and examined their abilities of cell migration and tumorigenicity, compared with the Lpar3‐unexpressing cells. In cell motility and invasion assays, RHa3B12 and RHa3G8 cells showed significantly higher intrinsic activity without LPA treatment than control RH7777AB cells. LPA treatment further increased cell motility and invasion of these cells. The cell motility of RHa3B12 and RHa3G8 cells stimulated by LPA treatment was significantly suppressed by pretreatment with inhibitors of Gi or Gq proteins. In a soft agar assay, the large sized colonies were formed in RHa3B12 and RHa3G8 cells, but not in RH7777AB cells. The cell survival of RHa3G8 cells treated with cisplatin (CDDP) or doxorubicin (DOX) was higher than that of RH7777AB cells, correlating with the elevated expression levels of multidrug‐resistance related genes, Mdr1a, Mdr1b, and Gstp1. These results suggest that LPA₃ may be involved in progression and aggressiveness of rat hepatoma RH7777 cells. © 2011 Wiley Periodicals, Inc.     

放射性粒子125I对H22肝癌细胞凋亡的研究

目的探讨放射性粒子125I组织间植入诱导H22肝癌细胞凋亡的可能机制及影响.方法分别把125I、DDP和两者联合植入荷 H22肝癌小鼠瘤体内28 d,观察肿瘤生长,应用流式细胞术检测离体的H22肝癌细胞凋亡情况.结果125I、DDP植入肿瘤组织后,瘤体生长受到一定的影响;两者合用后致肿瘤生长变慢且出现变性坏死.细胞凋亡率125I组为(16.12±1.46)%;DDP组为(10.30±1.96)%;联合组为(6.61±0.56)%,且有较多的死亡细胞.结论放射性粒子125I组织间植入可诱导肿瘤细胞凋亡,与化疗药合用除诱导肿瘤细胞凋亡,还可导致肿瘤变性、死亡,是一种简便易行,安全有效的新治疗方法.     

食管癌细胞系CSEC的建立及其生物学特性

目的建立人食管癌细胞系为潮汕沿海地区食管癌研究提供实验模型。方法采用胶原酶消化法建立人食管癌细胞系CSEC。研究培养细胞的形态特点、生长特征、对Scid小鼠的致瘤性、细胞遗传学特点及肿瘤相关标志物（AE3、p53）的表达。结果细胞系CSEC在体外持续稳定生长超过13个月，已传至80代以上，群体倍增时间为39．6小时。CSEC细胞具有鳞状细胞的形态和结构特点，胞浆富含张力原纤维束，细胞间可见桥粒。Sdd小鼠移植瘤的组织学形态与患者的原发肿瘤一致。细胞系CSEC呈近四倍体核型，染色体结构改变常见而且复杂。肿瘤相关标志物（AE3、p53）呈强阳性表达。结论人食管癌细胞系CSEC是一分化较高且生物学特性稳定的鳞状细胞癌细胞系，可为食管癌的发病机制和治疗研究提供有价值的实验模型。     

Tsα1诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡和抑制bcl-2基因的表达

目的:研究胸腺肽α1(Tsα1)在诱导肿瘤细胞凋亡中的作用。方法:应用MTT比色分析法研究Tsα1对人肝癌SMMC7721细胞株的细胞毒作用。流式细胞仪检测法分析Tsα1作用后处于G1期SMMC7721细胞的比率和对凋亡抑制基因bcl2蛋白的抑制率。结果:Tsα1(4000μg/mL)体外培养24、48和72h,对SMMC7721肿瘤细胞抑制率分别是(1.92±0.02)%、(3.27±0.03)%和(7.69±0.03)%,P<0.005;凋亡率分别是(2.5±0.1)%、(18.3±0.2)%和(11.6±0.1)%,P<0.001;bcl2蛋白的抑制率为(1.35±0.1)%、(2.2±0.01)%和(5.53±0.01)%,P<0.005,并呈现细胞凋亡的形态学改变,具有剂量和时间依赖性。结论:Tsα1可直接抑制人肝癌SMMC7721细胞株增殖,抑制bcl2基因表达和诱导肿瘤细胞凋亡。     

瘦素对乳腺癌生长细胞动力学和形态学影响的研究

目的：研究瘦素对乳腺癌细胞株MCF-7细胞生长的作用。方法：分别使用0、25、50、100和200nmol／L瘦素作用于细胞株MCF-7细胞，同时在上述作用后24、48和72h采用光学显微镜观察细胞形态学改变，采用MTT比色方法，观察不同浓度瘦素对MCF-7细胞生长刺激的剂量、时间效应，比较在相对应剂量胰岛素情况下，二者对细胞增殖刺激作用的强弱。结果：加用瘦素各组细胞比未加瘦素细胞密度增加，形态变异。与正常对照组相比，各浓度瘦素（25、50、100和200nmol／L）均可明显促进MCF-7细胞增殖，其中50、100和200nmol／L瘦素作用24、48和72h后差异均有统计学意义，P〈0．05。瘦素对MCF-7细胞的增殖作用呈现一定的时间和剂量依赖效应。胰岛素各相对应组之间与瘦素比较，细胞增殖刺激作用差异无统计学意义，P〉0．05。结论：瘦素对乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖有刺激作用，且这种作用呈现一定的剂量、时间依赖效应，结果提示瘦素是促进乳腺癌细胞增殖的因素之一。     

盼生安体外对肝癌细胞株的作用研究

目的 :研究盼生安对BEL 740 2肝癌细胞的抗肿瘤作用。方法 :以 5 -氟尿嘧啶 ( 5 FU)作为阳性对照药物观察盼生安对BEL 740 2肝癌细胞存活曲线、生长曲线和有丝分裂指数的影响 ,应用FACS观察该药物对细胞周期的影响。应用FADU法测定该药对DNA的损伤作用。结果 :盼生安对肝癌细胞 5 0 %的抑制浓度 (IC50 )为 40μg /mL,可明显抑制人肝癌细胞生长 ,其细胞毒作用为 5 FU的 1/67,对肝癌细胞的有丝分裂指数有明显抑制作用 ,可将细胞阻滞于细胞周期的G1/G0 期 ,持续用药 2 0h后出现G1/G0 期的积聚 ,到 2 4h可高达82 9%。盼生安各剂量组间Qd值差异均无统计学意义 ,P >0 0 5 ,故认为不造成DNA损伤。结论 :盼生安是周期特异性药物 ,通过将细胞阻滞于G1/G0 期而抑制其增殖。其抗增殖作用与DNA损伤无关     

瘦素对乳腺癌生长细胞动力学和形态学影响的研究

目的:研究瘦素对乳腺癌细胞株MCF-7细胞生长的作用。方法:分别使用0、25、50、100和200nmol/L瘦素作用于细胞株MCF-7细胞,同时在上述作用后24、48和72h采用光学显微镜观察细胞形态学改变,采用MTT比色方法,观察不同浓度瘦素对MCF-7细胞生长刺激的剂量、时间效应,比较在相对应剂量胰岛素情况下,二者对细胞增殖刺激作用的强弱。结果:加用瘦素各组细胞比未加瘦素细胞密度增加,形态变异。与正常对照组相比,各浓度瘦素(25、50、100和200nmol/L)均可明显促进MCF-7细胞增殖,其中50、100和200nmol/L瘦素作用24、48和72h后差异均有统计学意义,P<0.05。瘦素对MCF-7细胞的增殖作用呈现一定的时间和剂量依赖效应。胰岛素各相对应组之间与瘦素比较,细胞增殖刺激作用差异无统计学意义,P>0.05。结论:瘦素对乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖有刺激作用,且这种作用呈现一定的剂量、时间依赖效应,结果提示瘦素是促进乳腺癌细胞增殖的因素之一。