腺病毒介导的hepaCAM基因对膀胱癌细胞周期的影响

目的：以腺病毒为载体,研究hepaCAM基因对膀胱癌细胞T24和BIU-87的细胞周期影响。方法：以带有hepaCAM基因的腺病毒载体pAdH5-hepaCAM感染两株细胞,采用RT-QPCR和Western-blot、细胞免疫荧光方法检测感染pAdH5-hepaCAM组,pAdH5空载组和未感染组的hepaCAM mRNA 、蛋白的表达及其细胞定位。并采用流式细胞术检测hepaCAM对两株细胞周期影响,Western-blot方法检测细胞周期蛋白cyclinD1。结果：感染hepaCAM的T24和BIU-87细胞,hepaCAM mRNA和蛋白水平明显升高。流式结果显示hepaCAM阻滞T24与BIU-87细胞于G0/G1期。Western-blot检测实验组cyclinD1明显低于空载和空白组。细胞免疫荧光显示hepaCAM在单个细胞中主要表达于细胞浆中,在细胞之间表达于细胞连接处。结论：hepaCAM能阻滞膀胱癌细胞T24和BIU-87于G0/G1期,并使G1期关键周期蛋白cyclinD1下调。     

hepaCAM与藏花素联合应用对前列腺癌细胞增殖的影响

目的：研究肝细胞黏附分子（hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM）与藏花素联用对前列腺癌（prostate cancer,PCa）细胞DU145增殖的影响。方法：四甲基偶氮唑盐（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT）法检测细胞增殖效应;克隆形成实验检测细胞克隆形成率;实时荧光定量PCR、Western blot法检测细胞周期调节因子cyclinD1及增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）的表达变化。结果：hepaCAM过表达腺病毒与藏花素单独使用均能抑制PCa细胞DU145的增殖[48 h抑制率分别为（12.0±2.0）%,（22.0±1.0）%],但两者联用比单独应用效果更加明显[48 h抑制率为（54.0±1.0）%,P=0.000]。Real-time PCR结果显示,hepaCAM过表达腺病毒及藏花素联合作用与藏花素单独使用相比,cyclinD1 mRNA表达下调（P=0.048）;两者联合应用与hepaCAM过表达腺病毒或藏花素单独使用相比,PCNA mRNA水平下调（P=0.047,P=0.006）。Western blot结果显示,与单独使用hepaCAM过表达腺病毒或藏花素相比,两者联用组cyclinD1蛋白表达明显降低（P=0.002,P=0.002）,同时PCNA蛋白表达也降低（P=0.000,P=0.003）。结论：hepaCAM基因过表达腺病毒与藏花素联用对PCa DU145细胞增殖的抑制有明显的协同作用,作用机制与下调cyclinD1和PCNA的表达有关。     

5-氮杂胞嘧啶核苷联合hepaCAM腺病毒通过抑制p-AKT诱导膀胱癌细胞T24凋亡

目的：研究5-氮杂胞嘧啶核苷（5-azacytidine,azac）联合肝细胞黏附分子（hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM）腺病毒对膀胱癌细胞T24凋亡的影响及可能机制的探讨。方法：7种不同因素分别处理培养的膀胱癌细胞T24,hoechst 33258染色检测各处理组细胞凋亡率,流式细胞仪（flow cytometry,FCM）检测细胞早期凋亡率,RT-PCR检测hepaCAM及B细胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/lewkmia-2,bcl-2）mRNA的表达,Western blot检测hepaCAM、p-AKT、total-AKT、bcl-2蛋白的表达。结果：hoechst 33258显示,azac联合hepaCAM腺病毒组细胞凋亡率为（45.21±0.06）%,明显高于hepaCAM腺病毒组（15.6０±0.02）%和azac组（26.30±0.02）%,差异有统计学意义（P=0.003,P=0.008）;FCM显示,azac联合hepaCAM腺病毒组细胞早期凋亡率为（16.05±0.06）%,明显高于hepaCAM腺病毒组（3.90±0.02）%和azac组（9.67±0.02）%,差异有统计学意义（P=0.002,P=0.043）;RT-PCR显示,与单独hepaCAM腺病毒组和azac组相比,azac与hepaCAM腺病毒联用可以上调hepaCAM mRNA的表达（P=0.004,P=0.000）,下调bcl-2 mRNA的表达,差异有统计学意义（P=0.026,P=0.030）;Western blot显示,与单独hepaCAM腺病毒组和azac组相比,azac联合hepaCAM腺病毒组可上调hepaCAM蛋白的表达（P=0.003,P=0.003）,同时下调p-AKT（P=0.001,P=0.005）和bcl-2（P=0.000,P=0.002）蛋白的表达,差异有统计学意义。结论：azac联合hepaCAM腺病毒可能通过抑制p-AKT的磷酸化水平加速诱导T24细胞凋亡,可为膀胱癌的治疗提供新的思路。     

F10基因沉默及过表达对绒癌细胞系JAR细胞周期的影响

目的探讨F10基因功能与部分细胞周期蛋白表达的关系。方法选择已建立并筛选的F10基因沉默、稳定过表达绒癌细 胞系JAR,以未处理JAR细胞为对照组,采用流式细胞仪检测细胞周期,Western blotting及免疫荧光细胞化学技术检测细胞周 期蛋白（cyclin）和细胞周期蛋白依赖激酶（CDKs）的表达水平差异。结果流式细胞仪检测细胞周期显示,F10过表达组的JAR 细胞细胞周期较沉默组及未处理组缩短。Western blotting检测结果显示,在F10沉默组、未处理组及F10过表达组的JAR细胞 中cyclinA2、cyclinB1、cyclinD1、cyclinE、CDK2、CDK6、CDK7表达递增,过表达组及沉默组的蛋白表达水平与未处理组相比较 差异有统计学意义（P<0.05）,CDK4除外。免疫荧光细胞技术实验结果与Western-Blot检测结果基本一致。结论F10基因通过 上调细胞周期蛋白cyclinA2、cyclinB1、cyclinD1、cyclinE、CDK2、CDK6、CDK7的表达,加快细胞周期进程,促进细胞增殖,从而 参与调节绒癌细胞的侵袭与转移。     

吡柔比星诱导膀胱癌细胞的凋亡及抑制PLCε基因的表达

目的 探讨吡柔比星对膀胱癌细胞增殖的影响及其作用机制。 方法 膀胱癌细胞T24和BIU-87分别用0.4、0.8、1.6、3.2 mg/L的吡柔比星处理24、48、72 h ,用四甲基偶氮唑盐（MTT）检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率,qRT-PCR、RT-PCR检测磷脂酶Cε（PLCε）mRNA及凋亡调控基因Bcl-2 mRNA的表达,蛋白质印迹法检测PLCε蛋白的表达。将膀胱癌细胞分为空白组、吡柔比星处理组、Ad-shPLCε处理组、吡柔比星联合PLCε干扰腺病毒载体（Ad-shPLCε）处理组,检测并比较各组细胞增殖和Bcl-2蛋白的表达量。 结果 在膀胱癌细胞T24、BIU-87中,吡柔比星对细胞的抑制率呈浓度、时间依赖性,即随着药物浓度增加、处理时间延长,细胞抑制率升高;吡柔比星促进T24和BIU-87细胞凋亡,并且抑制PLCε和Bcl-2表达。吡柔比星处理组、Ad-shPLCε处理组、Ad-shPLCε联合吡柔比星处理组均能抑制细胞增殖和Bcl-2表达,且Ad-shPLCε联合吡柔比星处理组的抑制作用高于吡柔比星处理组,差异有统计学意义 （P<0.05）。 结论 吡柔比星能有效抑制膀胱癌细胞的增殖,可能与其抑制PLCε癌基因及下游Bcl-2基因的表达有关。     

促红细胞生成素通过激活Akt通路促进胶质瘤的快速增殖

目的研究促红细胞生成素（EPO）是否通过Akt信号通路促进胶质瘤的快速增殖。方法通过免疫组化法检测EPO在人 各病理级别胶质瘤中的表达差异;采用胶质瘤U87细胞系建立裸鼠皮下移植瘤模型,分为对照组和EPO处理组,监测肿瘤生长 速度差异及瘤体中EPO与p-Akt表达变化;体外实验分为对照组、EPO处理组及EPO+Akt抑制剂组,分别使用Western blot测各 组间p-Akt及cyclinD1的表达变化、CCK-8法测生长曲线、克隆形成实验检测增殖速度差异、流式细胞术检测细胞增殖周期的变 化。结果人胶质瘤标本中,高病理级别组比低级别组EPO的表达量高（P=0.0002）;裸鼠移植瘤过程中,EPO处理组比对照组瘤 体中EPO及p-Akt表达显著增高（PEPO=0.0006,PP-Akt=0.0003）,瘤体生长明显增快（Pvolume<0.0001,Pweight=0.0003）;体外实验：与对 照组相比,EPO处理组细胞中p-Akt及cyclinD1的表达水平均明显升高（PP-Akt=0.0020,PCyclinD1=0.0022）,细胞生长速度明显增快 （P3天/5天=0.020/0.028,P克隆=0.0010）,增殖指数明显升高（P=0.0028）,EPO+Akt 抑制剂组细胞中p-Akt 及cyclinD1的表达水平较 EPO组明显降低（PP-Akt<0.0001,PCyclinD1<0.0001）,同时细胞生长速度及增殖指数均显著下降（P3天/5天=0.003/0.001,P克隆=0.0017,P增殖指数= 0.0036）。结论本研究发现EPO可通过激活Akt信号通路上调cyclinD1的表达,加快胶质瘤增殖速度。     

PI3K抑制剂LY294002联合吡柔比星对膀胱癌BIU-87细胞增殖作用的影响

目的:探讨PI3K抑制剂联合吡柔比星对人膀胱癌BIU-87细胞增殖作用的影响。方法:用不同浓度的PI3K抑制剂LY294002联合吡柔比星对BIU-87细胞作用0、12、24、36 h后,通过MTT方法检测抑瘤率;通过Western blotting检测Caspase-3、Bax、Bcl-2及P-gp蛋白的表达。结果:THP能明显抑制BIU-87细胞的增殖,并且具有明显的时间的依赖性(P<0.05)。THP联合应用不同浓度LY294002组与单独使用同剂量的THP组比较,BIU-87细胞的增殖随着药物浓度的增加和时间的延长进一步受到抑制,而且,联合应用LY294002的低浓度THP组对BIU-87细胞抑制作用明显强于高剂量THP组(P<0.05)。此外,PI3K抑制剂LY294002联合应用THP后,BIU-87细胞Bax与Caspase-3表达都明显上升(P<0.05),Bcl-2与P-gp表达量明显降低(P<0.05)。结论:PI3K抑制剂联合THP比单独应用THP对人膀胱癌BIU-87细胞抑制作用效果明显。     

HepaCAM基因转染对膀胱癌BIU-87细胞株生长及血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨外源性肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)转染对人膀胱癌BIU-87细胞株生长及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factors,VEGF)表达的影响。方法使用脂质体2000转染法将携带野生型hepaCAM基因的质粒(pEGFPN2-hepaCAM)及空载质粒(pEGFPN2)转染人膀胱癌BIU-87细胞,建立稳定过表达hepaCAM基因的BIU-87细胞株。以转染空载质粒及未转染的BIU-87细胞株作为对照,采用MTT法检测各组细胞生长能力,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测hepaCAM、VEGF mRNA水平的变化,Western blot检测VEGF蛋白水平的变化。结果MTT实验示:hepaCAM基因转染(实验组)BIU-87细胞生长与空载体组和未处理组细胞比较明显受到抑制(P<0.05);hepaCAM基因在膀胱癌BIU-87细胞不表达,转染后hepaCAM mRNA明显增强(P<0.05);实验组VEGF mRNA表达(0.527±0.031)与未处理组(0.803±0.042)、空...     

特异性ILK siRNA对膀胱癌移植瘤生长及p-Akt、p-GSK3β表达的影响

目的 探讨应用整合素连接激酶（integrin-linked kinase,ILK）特异siRNA沉默ILK基因的表达对膀胱癌裸鼠移植瘤生长及p-Akt、p-GSK3β表达的影响。方法实验分3组：BIU-87细胞组（正常BIU-87细胞）、BIU-87-NC组（转染阴性对照质粒的BIU-87细胞）、BIU-87 siR...     

婴儿双歧杆菌介导HSV-TK/GCV对前列腺癌PC-3细胞裸鼠移植瘤细胞凋亡的影响

目的：研究婴儿双歧杆菌（bifidobacterium infantis,BI）介导单纯疱疹病毒胸苷激酶（herpes simplex virus thymidine ki－nase,HSV-TK）/丙氧鸟苷（ganciclovir,GCV）自杀基因系统对PC-3细胞裸鼠移植瘤细胞凋亡的影响。方法：采用前列腺癌PC-3细胞悬液皮下注射法建立裸鼠前列腺癌模型,并随机分为4组,每组各12例,分别经尾静脉注射BI-pGEX-TK（重组质粒组）、BI-pGEX-5X-1（空质粒组）、BI（空婴儿双歧杆菌组）和生理盐水（生理盐水组）,联合腹腔注射GCV,4周后,称取裸鼠质量及肿瘤质量。TUNEL法检测各组肿瘤细胞凋亡情况,real-time PCR、Western blot分别检测各组肿瘤组织中Fas、FAP-1、casepase3和casepase8的mRNA 及蛋白表达水平。结果：重组质粒组荷瘤裸鼠体质量明显高于其余3组（F=12.952,P=0.000）,肿瘤组织质量明显降低（F=7.795,P=0.000）;重组质粒组凋亡指数明显高于其他3组（F=45.895,P=0.000）;重组质粒组Fas mRNA（F=70.077,P=0.000）、casepase3 mRNA（F=70.611,P=0.000）和casepase8 mRNA（F=73.781,P=0.000）的表达明显上调,FAP-1 mRNA（F=46.880,P=0.000）的表达明显下调。重组质粒组Fas蛋白（F=664.116,P=0.000）、casepase3蛋白（F=203.090,P=0.000）和casepase8蛋白（F=654.354,P=0.000）的表达明显上调,FAP-1蛋白（F=318.989,P=0.000）的表达明显下调。结论：婴儿双歧杆菌介导HSV-TK/GCV自杀基因系统可能通过影响Fas介导凋亡信号通路,诱导荷瘤裸鼠前列腺癌细胞的凋亡,发挥抑癌作用。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。