温补肾阳药对甲状腺切除的肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的:研究温补肾阳药对肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组的影响.方法:12只SD大鼠,随机分为3组,每组4只.模型组和治疗组切除两侧甲状腺,正常组做相应的假手术,但不切除甲状腺.喂养7 d后模型组和治疗组大鼠出现拱背耸毛、大便稀溏等肾阳虚的症状.从第8天开始,治疗组每天喂饲温补肾阳药1次,给药剂量6.7 g·kg~(-1),其他2组喂饲等体积的生理盐水,连续6 d后,断头处死3组大鼠,分离提取其肝线粒体蛋白质,分别用荧光染料Cy3,Cy5标记,每个Cy3及Cy5标记的样品与等量Cy2标记的内标混合后在同一块凝胶中进行电泳分离,经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱.经DeCyder 6.5软件进行差异蛋白质组分析,并对差异蛋白质进行质谱鉴定.结果:双向电泳后,平均每块胶检测到997个蛋白质点,其中所有图谱共有的点有687个,并从中筛选到22个差异蛋白,其中热休克蛋白60、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物、氨甲酰磷酸合成酶I,ATP合成酶、乳铁传递蛋白、ATP酶质子通道蛋白、电子传递黄素蛋白和类钙离子激活中性蛋白酶12在肾阳虚状态下表达量均增加,而二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、脂酰辅酶A脱氢酶、鸟氨酸转氨酶和GTP结合调节蛋白在肾阳虚状态下表达量均降低.经温补肾阳药治疗后,热休克蛋白60、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物、ATP合成酶、乳铁传递蛋白、ATP酶质子通道蛋白、电子传递黄素蛋白二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、脂酰辅酶A脱氢酶和GTP结合调节蛋白表达量均增加,而氨甲酰磷酸合成酶I和类钙离子激活中性蛋白酶12表达量减少.结论:温补肾阳药可能通过调节物质代谢、保护线粒体膜稳定性和维护细胞内信号传导而起到治疗肾阳虚的作用.     

温补肾阳药对肾上腺切除的肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的 应用凝胶内差异显示电泳技术和质谱技术研究温补肾阳药对肾上腺切除的肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响。方法：通过切除两侧肾上腺造成肾阳虚模型大鼠和温补肾阳药治疗大鼠肝线粒体蛋白质经荧光染料Cy3、Cy5标记，与等量Cy2标记的内标混合后在同一胶中进行电泳分离，经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。利用DeCyder软件进行差异蛋白质组分析，筛选出18个差异蛋白质进行质谱鉴定，其中15个蛋白质得到鉴定。结果：经温补肾阳药治疗后，肾阳虚动物氨甲酰磷酸合成酶、过氧化氢酶、二氢硫辛酸脱氢酶、热休克蛋白60、亚硫酸氧化酶、ATP合成酶、醛脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、3-巯基丙酮酸转硫酶、腺苷酸激酶同工酶5、谷胱甘肽过氧化物酶表达均增高。结论：温补肾阳药可能通过加快糖、脂类、蛋白质和核酸分解代谢，加快ATP合成以及清除自由基和过氧化物，维持线粒体膜稳定性，从而起到治疗肾阳虚的作用。     

温补肾阳药对丙基硫氧嘧啶引起肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的：应用凝胶内差异显示电泳技术研究温补肾阳药对药物性肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组的影响。方法：正常大鼠、通过喂饲丙基硫氧嘧啶造成肾阳虚模型大鼠和温补肾阳药治疗大鼠的肝线粒体蛋白质经荧光染料Cy2、Cy3、Cy5标记，等量混合后在同一胶中进行电泳分离，经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。经DeCyder软件进行差异蛋白质组分析，筛选出16个差异蛋白质。经质谱测定及数据库比对，其中10个蛋白质得到鉴定。结果：肾阳虚时氨甲酰磷酸合成酶1、二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、泛醇-细胞色素C还原酶核心蛋白I、异戊酰辅酶A脱氢酶、热休克蛋白60、琥珀酰CoA合成酶、羟氨基辅酶A脱氢酶／酮脂酰辅酶乙酰辅酶A脱氢酶α亚基、鸟氨酸转氨甲酰酶、谷胱甘肽过氧化物酶表达量均增加，而鸟氨酸氨基转移酶表达量降低。应用温补肾阳药治疗后，上述蛋白质的表达量均有不同程度的纠正。结论：喂饲温补肾阳药的肾阳虚模型大鼠糖、脂类和蛋白质代谢均得以改善，可能与温补肾阳药维护线粒体膜稳定性有关。     

温补肾阳药对激素依赖性肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组影响的研究

 目的利用双向凝胶内差异显示电泳技术,分析温补肾阳药对激素依赖性肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组影响。方法正常大鼠、肾阳虚大鼠及温补肾阳药治疗大鼠肝线粒体蛋白质样品分别用荧光染料Cy2,Cy3,Cy5标记,经双向电泳后用不同波长光激发扫描后得到不同样品的蛋白质组图谱,经DeCyder软件分析,以肾阳虚动物与正常动物肝线粒体蛋白质相差1.2倍以上的蛋白作为差异蛋白,共获得16个差异蛋白质,经质谱测定和与蛋白质文库比对,其中11个蛋白质得到鉴定。结果肾阳虚动物由于肾上腺皮质功能受损,引起热休克蛋白60和70含量增加,可能起到调整处于应激状态的细胞存活、保护细胞免受损伤的作用;肾阳虚动物糖代谢和脂代谢功能降低,而蛋白质代谢和核酸代谢功能增强,表现为二氢硫辛酰胺脱氢酶和脂酰辅酶A脱氢酶活性降低,而肌氨酸脱氢酶、氨甲酰磷酸合成酶和亚硫酸氧化酶活性增加;肾阳虚动物由于三羧酸循环和脂肪酸β-氧化功能障碍,引起ATP合酶、醛脱氢酶和NADH脱氢酶活性代偿性增加,试图通过增加ATP的产量以缓解能量代谢的不足;但肾阳虚动物由于鸟氨酸氨基转移酶活性降低,导致储存能量的肌酸合成降低,使产生的ATP大部分通过热能形式消耗掉,从而导致肾阳虚的临床虚寒症状。应用温补肾阳药治疗后使热休克蛋白60更趋增加,可能加强对细胞的保护作用;温补肾阳药增加二氢硫辛酰胺脱氢酶的活性,可通过改善糖代谢和促进三羧酸循环功能使机体的能量代谢增强;温补肾阳药还可以通过增加ATP合酶和醛脱氢酶的含量,使ATP的产量增加,缓解能量代谢功能障碍。结论温补肾阳药可以通过调整线粒体内多种与能量代谢相关蛋白质表达而起到治疗肾阳虚的作用。     

RAW264.7细胞中姜黄素抗动脉粥样硬化作用 机制的蛋白质组学研究

目的:应用凝胶内差异显示电泳技术和质谱技术研究姜黄素抗动脉粥样硬化的作用机制.方法:RAW264.7细胞和经过25 μmol.L-1姜黄素处理的RAW264.7细胞蛋白质经荧光染料Cy3,Cy5标记,与等量Cy2标记的内标混合后在同一胶中进行电泳分离,经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱.经DeCyder6.5软件进行差异蛋白质组分析,并对差异蛋白质进行质谱鉴定.结果:ATP合成酶,MHC class Ⅱ,肌球蛋白轻链,细胞色素b5表达量增加,而磷酸二酯酶4D,eIF-3,Hnrpf蛋白,波形蛋白,核仁磷蛋白1,Ran结合蛋白1表达量降低.结论:姜黄素抗动脉粥样硬化作用的机制十分复杂,是其增强细胞抗炎、抗氧化能力以及抑制胆固醇转运,降低细胞内胆固醇积累等因素共同作用的结果.另外,姜黄素可能通过调节细胞的分化及凋亡起到抗肿瘤的作用.     

温热中药对寒症模型大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的 应用双向电泳和质谱技术研究温热中药对寒证模型大鼠肝线粒体蛋白质组的影响,阐述寒证与能量代谢的关系及温热中药的作用。方法 提取正常大鼠、寒证模型大鼠和温热中药治疗后大鼠的肝线粒体蛋白质,经双向电泳分离后获得蛋白质组图谱,用Image Master 2D 6.0软件进行差异蛋白质分析,筛选出差异蛋白,进行质谱鉴定,用Western blotting法验证差异蛋白的表达。结果 寒证大鼠肝线粒体中H⁺转运ATP合酶、电压依从性阴离子选择性通道蛋白1（VDAC）表达量增加,伴侣素groEL、丝氨酸蛋白酶抑制剂、Tu转运延伸因子、乙醛脱氢酶、二甲基甘氨酸脱氢酶、脂酰辅酶A脱氢酶、热休克蛋白60、酰基辅酶A脱氢酶、丝氨酸蛋白酶、电子传递黄素蛋白、腺苷酸激酶、DJ-1蛋白、羧酸酯水解酶、氨甲酰磷酸合成酶1表达量降低;应用温热中药治疗后F1-ATP合酶、H⁺转运ATP合酶表达量降低,丙酰辅酶A羧化酶、二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、Tu转运延伸因子、乙酰辅酶A酰基转移酶、脂酰辅酶A脱氢酶、丝氨酸蛋白酶、丙酮酸脱氢酶、3-巯基丙酮酸硫基转移酶、40 S核糖体蛋白、热休克蛋白1、烯酰辅酶A水解酶表达量增加。结论 寒证模型大鼠线粒体内脂肪酸的β-氧化受阻,蛋白质的合成、折叠及分泌障碍,类固醇激素减少影响糖代谢,导致能量不足。应用温热中药治疗后,糖、脂代谢增强、蛋白质合成增加导致能量代谢活跃。     

六味地黄汤对甲亢型肾阴虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的 应用双向电泳技术和质谱技术研究六味地黄汤对甲亢型肾阴虚大鼠肝线粒体蛋向质组的影响.方法 双向电泳分离甲状腺素造成的肾阴虚模型和六味地黄汤治疗大鼠肝线粒体蛋白质,银染后扫描得到蛋白质组图谱,用Image Master2D6.0软件进行差异蛋白质组分析,筛选差异在2倍以上的蛋白质进行质谱鉴定和生物信息学分析.结果 大鼠Major urinary protein precursor、Peroxiredoxin-6、内质网蛋白29前体、大鼠转甲状腺素蛋白D链表达升高,78 kDa葡萄糖调节蛋白前体、谷胱甘肽硫转移酶Mu 1、热休克蛋白60、肽基脯氨酰顺反式异构酶、核转录因子-κB 2、H~+-转运ATP合酶、BNIP1 protein表达均降低.结论 六味地黄汤滋阴补肾作用机理可能与下调线粒体内H~+-转运ATP合酶表达量从而减缓能量代谢、抑制NF-κB过量表达和活化以调节炎性细胞因子紊乱状态和凋亡抑制状态、上调PDX6表达对抗氧自由基损伤以及增强性激素分泌水平相关.     

肾阳虚大鼠股骨皮质骨差异蛋白质表达分析

目的比较分析肾阳虚证模型大鼠与正常大鼠股骨皮质骨差异表达蛋白质,从骨组织功能蛋白质角度初步探讨肾阳虚证的实质。方法 60只雄性WISTAR大鼠随机分为正常组和肾阳虚组,每组各30只,适应性喂养1周。肾阳虚组:臀部肌肉注射氢化可的松注射液2.5 mg/100 g,每日1次,自由饮水、饮食。正常组:自由饮食、饮水。注射造模干预15 d后继续观察3周。模型鉴定成功后分别获取肾阳虚组和正常组大鼠股骨皮质骨标本,进行总蛋白的提取制备。采用双向凝胶电泳(2-DE)技术展示2组大鼠的皮质骨蛋白质组图谱,应用PDQuest软件分析2组间差异表达蛋白点,采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)初步鉴定差异表达蛋白点。结果 2组皮质骨2-DE凝胶图谱可辨别蛋白点数目为470个;与正常组比较,肾阳虚组皮质骨中存在12个已知的差异表达蛋白,其中载脂蛋白A-I、α烯醇化酶和热休克蛋白60表达上调,原肌球蛋白异构体2α-3链、I型胶原α-1链、GDP解离抑制因子β、LOC683667蛋白、白细胞酪氨酸激酶受体、线粒体ATP合酶亚基α、膜联蛋白A3、丙酮酸激酶同工酶及蛋白质二硫键异构酶A3表达下调。结论股骨皮质骨12个蛋白表达改变可能与肾阳虚证的发生有关。     

肝郁气滞型乳腺增生组织蛋白质组的研究

目的：应用凝胶内差异显示电泳技术和质谱技术进行肝郁气滞型乳腺增生组织的蛋白质组研究。方法：提取正常乳腺组织及肝郁气滞型乳腺增生组织总蛋白,分别用cy3或Cy5标记。每一对Cy3和Cy5标记样品都与一个Cy2标记的内标等量混合,上样于同一胶中进行电泳分离,经不同光激发下扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。所获得的图谱经DeCydcr6．5软件进行分析,筛选表述量有差异的蛋白质进行质谱鉴定。结果：在肝郁气滞型乳腺增生组织中,有8个蛋白质表达水平具显著变化。其中S-腺苷谷胱甘肽水解酶、蛋白体5、超氧化物岐化酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、过氧化物酶5、肽酰脯氨酰顺反式异构酶表达量增加,而三联组氨酸核酸结合蛋白1表达量显著下降。结论：8种差异蛋白质可能与肝郁气滞型乳腺增生疾病的发生与发展有关。     

乳腺纤维瘤组织差异蛋白质组的研究

目的:应用凝胶内差异显示电泳和质谱方法研究乳腺正常组织及纤维瘤组织蛋白质组的变化,探讨乳腺纤维瘤的发病机理。方法:提取乳腺正常组织及纤维瘤组织总蛋白,分别用Cy3或Cy5标记,与一个Cy2标记的内标等量混合后,上样于同一胶中进行电泳分离,经不同光激发下扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。所获得的图谱经De Cyder 6.5软件进行分析,筛选表达量差异超过两倍的蛋白质进行质谱鉴定。结果:15个蛋白质在乳腺正常组织及纤维瘤组织中有显著差异。其中,T细胞受体、钙磷脂结合蛋白A2、a-B crystallin、肌球蛋白轻链\T盒转录因子3、CDC16蛋白、血红素α链、RAB14、烯醇酶1表达量增加,Cu,Zn-超氧化物歧化酶、肽基脯氨酸异构酶、转甲状腺素蛋白、转甲状腺素蛋白突变体、阻抑素表达降低。结论:这15个蛋白质可能与乳腺纤维瘤的发生发展相关,可以作为乳腺纤维瘤早期检测和治疗药物筛选的候选指标。     

浅谈中医对睡眠呼吸障碍的认识及治疗

目的：唤醒广大中医工作者对睡眠呼吸障碍性疾病的认识和重视，从而投入到睡眠呼吸障碍性疾病的研究中来。方法：笔者将自己对该病的参悟，结合近十年来中医文献对于该病的概念、病因病机和治则治法等进行探讨。结论：中医研究睡眠呼吸障碍刚刚起步，尚存在很大的发展空间，中医临床工作者对此应予以关注，探索出更为有效的治疗方案来。     

论正胰腺脏位 还十二指肠腑名

长期以来,大凡认真研读过《黄帝内经》(以下简称《内经》)脏腑理论的中医学者,都会因文中既提"十二藏",又述"五藏六府",以及将一个不具备"藏而不泄"之"脏"功能的"心包"列于脏位。将无"满而不能实","传化物而不藏"之"腑"功能的"三焦"给以腑名,而时有困惑。近年来,随着糖尿病患者,胰腺癌患者及十二指肠球部溃疡等患者的大量涌现。胰腺和十二指肠作为脏腑功能的显现,越来越受到重视。笔者根据《内经》,关于脏与腑功能的界定标准,及现代解剖学,生化学所见,结合长期的临床实践之需求,提出了将人体"胰腺"取代无脏功能的"心包"以正其脏位。并将与胰腺有密切生理关系的十二指肠取代三焦,作为与胰腺相表里的腑。这样就将"五藏六府",正式升级为"六脏六腑"。即:肺与大肠、胰与十二指肠、心与小肠、脾与胃、肝与胆、肾与膀胱,以合《内经》"十二藏"之说。经过如此传承精华与守正创新,则可使《内经》的脏腑理论得以进一步完善。既符合了人体内客观真实的脏腑生理结构状况,而且对中医临床的脏腑辨证论治,提供了理论依据。     

宫颈阴道分泌液中IL-8、铜、锌含量与胎膜早破关系的研究

目的：对胎膜早破（PROM）孕妇宫颈阴道分泌液中基质金属白介素-8（IL-8）、微量元素（铜、锌）的含量与PROM的关系进行探讨。方法：选择足月初产胎膜早破孕妇40例（PROM组）和正常足月初产孕妇未破膜者40例（对照组）,分别用双抗体夹心ELISA法和溶出电极法测定阴道分泌液中IL-8和铜、锌的含量。结果：PROM组阴道分泌液中IL-8水平平均为657．20±83．33μg／ml,明显高于对照组421．54±22．35pg／ml,差异有显著性（P〈0．01）;PROM阴道分泌液中铜、锌的含量分别为2．18±1．57μg／L,0．45±0．17μg／L,均明显低于对照组3．67±2．07μg／L,0．72±0．36μg／L,差异有显著性（P〈0．01）。结论：PROM组孕妇阴道分泌液中IL-8含量明显升高,而铜、锌含量明显降低,对胎膜早破的早期诊断有一定帮助。     

探讨临床护理管理的任务、特点及意义

护理管理学是管理学科中的具体应用,属于专业领域管理学,是以提高护理质量和工作效率为主要目的的活动过程。世界卫生组织（WHO）指出：“护理管理是为了提高人们的健康水平,系统利用护士的潜在能力和有关人员、设备及社会活动的过程。”护理管理过程包括：资料收集、规划、组织人事管理、领导与控制的能力,在有效时间内做最经济有效的运用,为病人提供最优质的护理。护理管理可分为护理行政管理、护理业务管理和护理教育管理三个部分。     

从现代生殖医学角度探讨“肾藏精主生殖”理论

"肾藏精、主生殖"理论是祖国医学藏象学说的重要组成部分,是对人体生殖功能的基本认识。从现代辅助生殖医学理论角度出发,通过"人体生殖能力由肾精、天癸所主导;卵细胞的发生以肾精为基础,卵细胞的排出有赖于肾阳之鼓动;精子的发生以肾精为基础,精子的动力源于肾阳;子宫内膜容受性受肾精主控;胚胎质量及发育潜能由肾精决定"5个方面探讨了"肾藏精、主生殖"的理论,并为今后中医学生殖理论的研究拓展思路和空间。     

剖宫产术后的护理

剖宫产是指采用硬膜外或脊髓麻醉,切开产妇的腹壁及子宫壁取出胎儿、胎盘及附属物的手术,是解除孕产妇及胎儿危急状态的有效方法,它能降低孕产妇及围生儿的病死率,但剖宫产手术伤口大、创面范围广,容易发生产后并发症.所以术后护理就特别重要,不仅可以及时有效地促进患者的康复,还能减少并发症的发生.     

预防产后出血的措施及体会

目的：探讨产后出血的预防措施及体会。方法：回顾性分析我院1995．1-1999．1（3071例）和2000．1-2009．1（3071例）两组住院产妇的临床病例资料,统计产后出血的人数和发生率等数据并进行预防措施的比较。结果：前者产后出血人数39人,发生率为0．65％。后者产后出血人数39人,发生率为0．65％。结论：恰当的预防产后出血的措施是必要而有效的。     

刍议胸痹的命名、病位、病性、病机及治疗

胸痹为临床常见病、多发病,古今医者对其论述颇多。笔者温习经典,查阅今文,验于临床,再谈胸痹的命名、病位、病性、病机及治疗,以就正于方家。 1 命名 “胸痹”一词始见于《灵枢·本脏》:“肺大则多饮,善病胸痹、喉痹、逆气”,然对其内涵并无明确启示。迨至汉·张仲景在《金匮要略·胸痹心痛短气病脉证治》篇中始指出:“胸痹之病,喘息咳唾,胸背痛,短气,寸口脉沉而迟,关上小紧数”,并指出其病机为“阳微阴弦,即胸痹而痛”。然据其所述脉证与病机,与现代医学所称“冠心病”却不尽吻合。若冠心病患者,不合并慢性