孕激素对兔血管平滑肌细胞AT1受体基因表达的作用差异及机制分析

目的通过观察孕激素对培养血管平滑肌细胞(VSMCs)AT1R mRNA表达的影响,并寻求探索其潜在的分子机制,为临床干预提供实验依据.方法分别用孕激素及其特异性受体拮抗剂对培养的血管平滑肌细胞行不同时间、不同浓度的处理,然后用胰蛋白酶-EDTA消化,离心收集,提取总RNA,用RT-PCR对AT1R mRNA进行半定量分析,利用Western-blot对其相应的蛋白进行测定.结果孕酮对VSMCs AT1R的影响呈现明显的时间依赖性,12 h达到最大值为156%±18%,表现为上调;并呈现浓度依赖性,当孕酮浓度是10-10M时对AT1R mRNA的上调影响达到最大为59.9%±4.2%;孕酮对AT1R mRNA蛋白的上调以12 h为最大,达到最大值为8.44%±1.08%;孕酮受体拮抗剂0.1 nM的米非司酮对VSMCs AT1R mRNA无影响,但米非司酮抵消了孕酮对VSMCs AT1R mRNA的上调作用,而孕酮引起的AT1R mRNA的上调只能被三磷酸肌醇(IP3)的抑制剂Wortmannin所抑制.结论孕酮对VSMCs AT1R mRNA表现为上调,其特征呈现时间和浓度依赖性,其最大上调作用发生于12 h,最大作用的浓度为0.1 nM,孕激素的作用机制可能是与其受体结合后激活了IP3激酶的第二信号系统.     

睾酮对兔血管平滑肌细胞AT1受体基因表达的影响及机制分析

目的通过观察睾酮对培养血管平滑肌细胞(VSMCs)AT1RmRNA表达的影响,并寻求探索其潜在的分子机制,为临床干预提供实验依据.方法分别用睾酮及其特异性受体拮抗剂对培养血管平滑肌细胞行不同时间、不同浓度的处理,用RT-PCR对AT1R mRNA进行半定量分析,Western-blot对其相应的蛋白进行测定.结果睾酮对VSMCs AT1R的影响呈现明显的时间和浓度依赖性,4 h时达到最大值为(40.2±5.3)%;其浓度为10-3M时,达到最大值(52.0±6.3)%;睾酮可以引起AT1 RmRNA蛋白的明显上调,4 h时达到最大值(104.6±1.6)%;与对照组比较睾酮受体拮抗剂对AT1 RmRNA无影响(P＞0.05);睾酮介导的AT1RmRNA的上调只能被丝裂原激活蛋白酶P42/44抑制剂PD98059所抑制,提示睾酮可能通过介导P42/44 MAP途径而影响AT1R的基因表达.结论睾酮可以上调VSMCs的AT1R mRNA,它的特征表现为时间和浓度依赖性,其最大上调作用发生于4 h时,最大作用的浓度为103M,睾酮上调AT1 R mRNA的机制可能是睾酮与其特异的受体结合后激活了MAPK 42/44途径所致.     

血管紧张素（1～7）舒血管机制的研究

目的　探讨血管紧张素(1～7)［Ang(1～7)］对血管功能的作用及机制。方法　应用生理多导仪测定存在和去除内皮后,血管对血管紧张素的反应;用钙敏感指示剂Fura-2/AM检测血管平滑肌细胞（VSMC）内游离钙离子浓度（［Ca2+］i）;RT-PCR检测VSMC血管紧张素受体（ATR）mRNA表达。结果　Ang(1～7)明显抑制AngⅡ对动脉环的收缩作用,在内皮完整的动脉环比去除内皮的动脉环作用更明显;Ang(1～7)同样明显抑制AngⅡ诱导的VSMC［Ca2+］i上升幅度;AngⅡ能下调AT1RmRNA,而Ang(1～7)上调AT1RmRNA,AngⅡ和Ang(1～7)对AT2RmRNA影响不明显。结论　Ang(1～7)通过作用于血管内皮及VSMC内钙信号发挥抑制血管平滑肌收缩的作用。     

血管紧张素（1—7）舒血管机制的研究

目的 探讨血管紧张素（1－7）[Ang(1-7)]对血管功能的作用及机制。方法 应用生理多导仪测定存在和去除内皮后,血管对血管紧张素的反应;用钙敏感指示剂Fura-2/AM检测血管平滑肌细胞（VSMC）内游离钙离子浓度（[Ca^2 ]i);RT－PCR检测VSMC血管紧张素受体（ATR）mRNA表达。结果 Ang(1-7)明显抑制AngⅡ对动脉环的收缩作用,在内皮完整的动脉环比去除内皮的动脉环作用更明显;Ang(1-7)同样明显抑制AngⅡ诱导的VSMC[Ca^2 ]i上升幅度;AngⅡ能下调AT1RmRNA,而Ang(1-7)上调AT1RmRNA,AngⅡ和Ang(1-7)对AT2RmRNA影响不明显。结论 Ang(1-7)通过作用于血管内皮及VSMC内钙信号发挥抑制血管平滑肌收缩的作用。     

17β-雌二醇对牛视网膜毛细血管内皮细胞eNOS mRNA及NO调控的实验研究

目的探讨17β-雌二醇(E2)在不同氧(O2)环境下对牛视网膜毛细血管内皮细胞(BRECs)一氧化氮合酶(eNOS)mRNA及NO的影响。方法在正常O2及缺O2环境下,采用不同生理浓度(10-12、10-10、10-8mol/L)的17β-E2及雌激素受体拮抗剂他莫昔芬处理培养的BRECs。采用RT-PCR检测eNOS mRNA,硝酸还原酶法测定NO。结果①低O2条件下BRECs的eNOS mRNA、NO表达较正常O2条件下明显增多(P<0.05)。②正常O2及低O2条件下,不同生理浓度17β-E2作用24 h后,17β-E2均呈浓度依赖性促进BRECs的eNOS mRNA、NO表达(P<0.05);10-8mol/L 17β-E2作用8、24 h,eNOS mRNA表达量呈时间依赖性增多(P<0.05)。结论生理浓度的17β-E2使BRECs的eNOS mRNA、NO表达呈浓度、时间依赖性增加。     

雌激素对血管平滑肌细胞凋亡及c-myc基因表达的影响

目的探讨17β雌二醇(E2)对血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的影响及其可能机制.方法应用流式细胞仪检测低、高浓度17βE2(10、100 nmol/L)对传代的VSMC凋亡率的影响,并通过细胞免疫组化方法观察对凋亡相关基因c-myc表达的影响.结果17β E2作用下VSMC凋亡率显著高于对照组(P＜0.01),伴随着VSMC凋亡率的增加,c-myc蛋白的表达亦增强,且表现明显的浓度依赖性.结论17β E2具有诱导VSMC凋亡的作用,其部分机制可能是通过上调促凋亡基因c-myc的表达有关.     

大鼠血管平滑肌细胞迁移能力变化与血管紧张素Ⅱ的关系

目的 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ）及其受体拮抗剂对培养的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）迁移能力影响,以探讨AngⅡ介导高血压、动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄斑块形成的生物学机制。方法 采用改良Boyden小室,对不同浓度AngⅡ及其AT1R、AT2R拮抗剂作用下VSMC跨膜 迁移细胞数进行评价。结果 AngⅡ在一定的浓度范围内（10^-11～10^-7mol/L）可以剂量依赖性地刺激体外培养的大鼠VSMC发生迁移。迁移的VSMC数在AngⅡ浓度为10^-7mol/L时达到峰值,更高浓度的AngⅡ(10^-6mol/L）干预VSMC后,VSMC迁移数量的增加幅度反而比较低浓度的AngⅡ作用时减小（与10^-7mol/L AngⅡ组比较,P＜0．01）。AT1R拮抗剂CV－11974剂量依赖性抑制AngⅡ诱导VSMC跨膜迁移,AT2R拮抗剂PD123319对此无影响。结论 AngⅡ在AT1R介导下发挥其影响VSMC迁移行为的生物学效应,较低浓度AngⅡ促进VSMC迁移,高浓度AngⅡ上述作用明显减弱。     

雌二醇和孕酮对人成骨细胞胰岛素受体底物基因表达的时间与剂量依赖性

目的观察雌二醇和孕酮对人成骨细胞和人成骨肉瘤MG63细胞胰岛素受体底物(IRS)mRNA表达的影响。探讨雌、孕激素参与骨代谢的作用机制。方法用半定量RTPCR检测人成骨细胞和人成骨肉瘤细胞IRS1、IRS2mRNA的表达量。结果雌二醇或孕酮均诱导MG63细胞IRS2mRNA的表达上调,具有剂量依赖性(P<0.05)和时效依赖性(P<0.05)。其中分别以10-8mol/L的雌二醇干预24h和10-8mol/L的孕酮干预12h作用最明显,分别为对照组的(421±68)%和(327±54)%(均P<0.01)。雌二醇或孕酮共同干预进一步促进MG63细胞和人成骨细胞IRS2mRNA表达的上调,分别为对照组的(496±54)%和(452±58)%(均为P<0.01)。雌二醇和孕酮不影响人成骨细胞和MG63细胞IRS1mRNA的表达(P>0.05)。结论雌二醇或孕酮均可使人成骨细胞和MG63细胞的IRS2mRNA表达上调,且存在剂量与时间依赖性;但不影响IRS1mRNA的表达。     

大鼠血管平滑肌细胞迁移能力变化与血管紧张素Ⅱ的关系

目的　研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）及其受体拮抗剂对培养的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）迁移能力影响,以探讨AngⅡ介导高血压、动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄斑块形成的生物学机制。方法　采用改良Boyden小室,对不同浓度AngⅡ及其AT1R、AT2R拮抗剂作用下VSMC跨膜迁移细胞数进行评价。结果　AngⅡ在一定的浓度范围内（10-11～10-7mol/L）可以剂量依赖性地刺激体外培养的大鼠VSMC发生迁移。迁移的VSMC数在AngⅡ浓度为10-7mol/L时达到峰值,更高浓度的AngⅡ（10-6mol/L）干预VSMC后,VSMC迁移数量的增加幅度反而比较低浓度的AngⅡ作用时减小（与10-7mol/LAngⅡ组比较,P<0.01）。AT1R拮抗剂CV-11974剂量依赖性抑制AngⅡ诱导VSMC跨膜迁移,AT2R拮抗剂PD123319对此无影响。结论　AngⅡ在AT1R介导下发挥其影响VSMC迁移行为的生物学效应,较低浓度AngⅡ促进VSMC迁移,高浓度AngⅡ上述作用明显减弱。     

17β-雌二醇及Wnt/β-catenin信号通路对人成骨肉瘤细胞基质Gla蛋白表达的影响

目的观察17β-雌二醇(17β-E2 17β-estradiol)对骨肉瘤细胞(osteosarcoma MG 63)基质Gla蛋白(MGP Matrix GLA protein)表达的影响及Wnt/β-catenin信号通路在其中的作用,探讨MGP在骨质疏松症发病过程中的可能机制。方法 17β-E2 10~(-10)、10~(-8)、10-6mol/L及雌激素受体抑制剂氟维司群(Faslodex简称ICI)10-7mol/L,ICI 10-7mol/L+17β-E2 10~(-8)mol/L干预MG63细胞48 h。用10~(-8)mol/L的17β-E2及200 ng/m L Wnt/β-catenin信号通路阻断剂Dickkopf1分泌蛋白-1(DKK-1)干预MG63细胞48 h。用10~(-8)mol/L17β-E2及MGP抑制剂华法林10μmol/L干预MG63细胞48 h。干预后的细胞提取蛋白及总RNA,后用荧光定量PCR及Western blotting观察MGP、β-catenin、Runx2、LRP5蛋白及基因的表达。结果 17β-E2能上调MGP的表达,10~(-10)、10~(-8)、10-6mol/L 17β-E2干预后,MGP mRNA的表达是对照组的4.63、7.16、2.95倍(P0.05),MGP蛋白的表达分别是对照组的1.17、1.58、1.28倍(P0.05),以10~(-8)mol/L 17β-E2的作用最明显。ICI能阻断17β-E2对MGP的上调作用,与单用17β-E2相比,差异有统计学意义(P0.05)。17β-E2能增加Wnt/β-catenin经典信号通路中相关蛋白的表达,β-catenin及Runx2 mRNA及蛋白的表达与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。DKK-1则阻断17β-E2对MGP、β-catenin、Runx2、LRP5的上调作用,与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。华法林可阻断17β-E2的作用,与对照组相比MGP、β-catenin、Runx2、LRP5的表达均下调,差异有统计学意义(P0.05)。结论 17β-E2调节成骨肉瘤细胞内Wnt/β-catenin信号通路同时也调节MGP表达,该作用可能是骨质疏松症发病的机制之一。     

血管紧张素Ⅱ2型受体转染表达对血管平滑肌细胞增殖及迁移的影响

目的　探讨血管平滑肌细胞 (VSMC)转染表达血管紧张素Ⅱ (AngⅡ ) 2型受体 (AT2 R)对其增殖和迁移的影响。方法　构建带AT2 R基因的重组复制缺陷型腺病毒载体 (AdCMV AT2 R) ,体外转染大鼠主动脉VSMC ,用RT PCR方法检测AT2 RmRNA表达 ,流式细胞仪检测AT2 R表达率 ,用细胞周期、分裂指数、MTT比色法和 5 溴尿苷(BrdU)掺入法检测VSMC增殖。VSMC迁移用改良Boyden‘s趋化小室法检测 ,用激光共聚焦显微镜检测细胞骨架蛋白F actin的表达。结果　构建的AdCMV AT2 R体外转染培养VSMC表达率为 89.5 1%。AT2 R峰值表达时 ,其S期和G2 M期细胞比率从 31.7%降低到 13.9% (P <0 0 5 ) ,MTT吸光度和BrdU掺入量分别降低 6 1.4%和 5 1.6 %(P <0 0 (1)。VSMC的跨膜迁移数降低 6 2 .2 % ,F actin表达明显减少。结论　AT2 R转染表达可显著抑制体外培养VSMC的增殖和迁移 ,这一作用对再狭窄防治是有益的。     

尾加压素Ⅱ对大鼠血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察尾加压素Ⅱ(UⅡ)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及凋亡的影响.方法 采用体外培养大鼠VSMC,将不同浓度UⅡ与VSMC孵育不同时间,应用MTT法检测VSMC增殖,流式细胞仪检测VSMC凋亡.结果 体外培养的大鼠VSMC在浓度为(0、10-10、10-9、10-8、10-7、10-6mol/L) 的UⅡ培养液中孵育24 h后,其A值分别为0.457±0.072,0.531±0.065,0.568±0.094,0.614±0.102,0.676±0.048,0.754±0.093;细胞凋亡率分别为2.20%±0.46%,2.80%±0.86%,7.79%±1.70%,13.31%±2.57%,18.71%±1.39%,23.32%±2.88%;表明UⅡ呈浓度依赖性诱导大鼠VSMC增殖和凋亡.在终浓度为10-7mol/L UⅡ的培养液中分别孵育0、6、12、24、48、72 h后,其A值分别为0.499±0.062,0.558±0.081,0.629±0.114,0.685±0.061,0.715±0.131,0.803±0.097;细胞凋亡率分别为1.74%±0.42%,2.36%±0.86%,9.88%±1.45%,16.50%±1.68%,23.14%±2.33%,26.09%±1.66%;表明UⅡ呈时间依赖性诱导大鼠VSMC增殖和凋亡.结论 UⅡ可以诱导VSMC增殖与凋亡,这一双重作用可能是UⅡ参与血管重塑性疾病的作用机制之一.     

吡格列酮通过Wnt/β-catenin信号通路减轻大鼠血管平滑肌细胞钙化

目的:探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)激动剂吡格列酮(PIO)对高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化的作用及其相关机制。方法:利用10 mmol/Lβ甘油磷酸(β-GP)诱导大鼠VSMC钙化,建立钙化模型(即钙化组);同时以完全培养基培养大鼠VSMC为正常对照组,并分别以不同浓度(5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L)PIO干预,观察培养12d,用茜素红染色法检测细胞钙沉积并检测细胞外基质钙离子浓度来观察VSMC钙化程度。Western Blot检测大鼠VSMC的α平滑肌动蛋白(α-SMA)、Runx2、BMP2、Wnt/β-catenin通路相关蛋白(β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β)及核蛋白cyclin-D1的表达情况。选择合适的PIO浓度(20μmol/L)并以PPARγ拮抗剂GW9662(20μmol/L)干预,观察以上指标的变化。结果:(1)钙化组钙离子浓度较正常对照组明显增高(P0.05),而不同浓度PIO均可减轻VSMC细胞外基质的钙离子浓度(P0.05),同时钙化组茜素红染色较正常对照组明显,而20μmol/L PIO干预组茜素红染色较钙化组减轻最为明显;(2)钙化组大鼠VSMC表达Runx2、β-catenin、p-GSK-3β、BMP2、cyclin-D1较正常对照组升高;20μmol/L PIO可显著下调钙化大鼠VSMC表达Runx2、β-catenin、p-GSK-3β、BMP2和cyclin-D1,并上调α-SMA的表达;(3)PPARγ拮抗剂GW9662可部分阻断PIO对钙化大鼠VSMC的干预作用。结论:PPARγ激动剂PIO可减轻β-GP诱导的大鼠VSMC的钙化,其作用机制与下调Wnt/β-catenin信号通路活性有关。     

血管紧张素Ⅱ2型受体转染表达对血管平滑肌细胞增殖及迁移的影响

目的探讨血管平滑肌细胞（VSMC）转染表达血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）2型受体（AT2R）对其增殖和迁移的影响。方法构建带AT2R基因的重组复制缺陷型腺病毒载体（AdCMV-AT2R）,体外转染大鼠主动脉VSMC,用RT-PCR方法检测AT2RmRNA表达,流式细胞仪检测AT2R表达率,用细胞周期、分裂指数、MTT比色法和5-溴尿苷（BrdU）掺入法检测VSMC增殖。VSMC迁移用改良Boyden`s趋化小室法检测,用激光共聚焦显微镜检测细胞骨架蛋白F-actin的表达。结果构建的AdCMV-AT2R体外转染培养VSMC表达率为89.51%。AT2R峰值表达时,其S期和G2-M期细胞比率从31.7%降低到13.9%（P<0.05）,MTT吸光度和BrdU掺入量分别降低61.4%和51.6%(P<0.0(1)。VSMC的跨膜迁移数降低62.2%,F-actin表达明显减少。结论AT2R转染表达可显著抑制体外培养VSMC的增殖和迁移,这一作用对再狭窄防治是有益的。     

雌激素和他莫昔芬对大鼠动脉血管平滑肌细胞雌激素受体及表型蛋白的影响

目的 探讨雌激素(E2)和他莫昔芬(TAM)对血管平滑肌细胞(VSMC)雌激素受体(ERs)及表型蛋白的影响.方法 体外培养大鼠胸主动脉VSMC,应用浓度为10-9、10-8和10-7 mmol/L的17β-雌二醇和浓度为10-8、10-7和10-6 mmol/L的TAM作用于VSMC 24 h.RT-PCR法检测实验后VSMC ERα、ERβ、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和骨桥蛋白(OPN) mRNA表达情况.     

激动β_3肾上腺素受体对载脂蛋白E基因敲除小鼠胰腺血管紧张素受体表达的影响

目的探讨激动β3肾上腺素受体(β3-AR)对载脂蛋白E基因敲除(apoE-/-)小鼠血糖、胰岛素和胰腺血管紧张素Ⅱ受体(ATR)表达水平的影响。方法选用10周龄C57BL/6J小鼠10只为对照组(A组),另选10周龄apoE-/-小鼠50只,高脂饮食至36周龄时随机分为高脂模型组(B组)、阿托伐他汀阳性药物对照组(C组)、β3-AR激动剂小剂量组(D组)、β3-AR激动剂大剂量组(E组)和β3-AR拮抗剂组(F组),干预12周。48周时检测小鼠血糖和胰岛素水平;采用实时定量PCR和Western blot检测各组小鼠AT1R和AT2R表达水平。结果与A组比较,B组血糖、胰岛素明显升高,AT1R明显上调,AT2R明显下调(P<0.01);与B组比较,D组、E组血糖、胰岛素明显降低,AT1R明显下调,AT2R明显上调(P<0.01)。结论长期应用β3-AR激动剂通过下调apoE-/-老年高脂小鼠胰腺AT1R表达和上调AT2R表达,β3-AR与AT1R和AT2R存在交互作用,且与改善糖代谢紊乱有关。     

磷酸二酯酶1A参与调节转化生长因子β1诱导的血管外膜成纤维细胞胶原表达

目的 探讨环核苷酸依赖的磷酸二酯酶1A(PDE1A)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的血管外膜成纤维细胞(AF)Ⅰ型胶原表达中的作用.方法 采用组织块贴壁法培养SD大鼠胸主动脉AF.Bradford方法测定蛋白浓度,免疫印迹技术观察Ⅰ型胶原和PDE1A蛋白表达,Leica Qwin软件进行图像灰度分析.结果 1)TGF-β1上调Ⅰ型胶原蛋白表达呈时间和剂量依赖性,以TGF-β1 (10 ng/mL)诱导AF 24 h上调Ⅰ型胶原蛋白表达最强,较诱导前上调(147.5±38.7)%(P<0.05).2)TGF-β1上调PDE1A蛋白的表达呈时间和剂量依赖性,TGF-β1(20 ng/mL)诱导AF 24 h PDE1A蛋白表达量达(302.7±86.3)%,较诱导前显著上调(P<0.01);3)非特异性PDE抑制剂IBMX和特异性PDE1A抑制剂IC86340均显著抑制TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原的表达,抑制率分别达24.6%和15.8%,(P<0.05,P<0.05).结论 PDE1A参与TGFβ-1诱导的血管外膜成纤维细胞Ⅰ型胶原表达的调节.     

OX-LDL及17β-雌二醇对体外人脐静脉内皮细胞ACE2 mRNA表达的影响

目的探讨氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）及17β-雌二醇（E2）对体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）血管紧张素转化酶II（ACE2）表达的影响。方法以不同浓度的ox-LDL（20,40,80mg/L）及E2（2,10,50nmol/L）分别单独刺激HUVECs 24h并以40mg/L的ox-LDL与不同浓度的E2（2,10,50nmol/L）共同刺激HUVECs 24h。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测ACE2 mRNA的表达情况。结果与对照组比较,ox-LDL单独刺激组ACE2 mRNA表达分别降低为0.74±0.08,0.52±0.07和0.31±0.06（均P<0.01）,E2单独刺激组ACE2 mRNA表达分别增加为1.54±0.19,2.43±0.28和2.89±0.26（均P<0.01）;40mg/L的ox-LDL与2,10,50nmol/LE2共同刺激组,ACE2 mRNA表达分别为40mg/Lox-LDL单独刺激组的1.95±0.38,2.56±0.32和3.22±0.37（3组间均P<0.05）。结论ox-LDL呈浓度依赖性下调ACE2 mRNA表达;E2呈浓度依赖性上调ACE2 mRNA表达,且E2呈正向量效关系抑制ox-LDL引起的ACE2表达下调。     

磷酸二酯酶1A参与调节转化生长因子β_1诱导的血管外膜成纤维细胞胶原表达

目的探讨环核苷酸依赖的磷酸二酯酶1A(PDE1A)在转化生长因子β_1(TGF-β_1)诱导的血管外膜成纤维细胞(AF)Ⅰ型胶原表达中的作用。方法采用组织块贴壁法培养 SD 大鼠胸主动脉 AF。Bradford 方法测定蛋白浓度,免疫印迹技术观察Ⅰ型胶原和 PDE1A 蛋白表达,Leica Qwin 软件进行图像灰度分析。结果 1)TGF-β_1上调Ⅰ型胶原蛋白表达呈时间和剂量依赖性,以 TGF-β_1(10 ng/mL)诱导 AF 24 h 上调Ⅰ型胶原蛋白表达最强,较诱导前上调(147.5±38.7)%(P<0.05)。2)TGF-β_1上调 PDE1A 蛋白的表达呈时间和剂量依赖性,TGF-β_1(20ng/mL)诱导 AF 24 h PDE1A 蛋白表达量达(302.7±86.3)%,较诱导前显著上调(P<0.01);3)非特异性 PDE 抑制剂 IBMX 和特异性 PDE1A 抑制剂 IC86340均显著抑制 TGF-β_1诱导的Ⅰ型胶原的表达,抑制率分别达24.6%和15.8%,(P<0.05,P<0.05)。结论 PDE1A 参与 TGFβ-1诱导的血管外膜成纤维细胞Ⅰ型胶原表达的调节。     

银杏叶提取物对血管平滑肌细胞凋亡的影响及相关因素

目的观察银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,Egb)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)凋亡的影响,初步探讨其可能机制。方法采用组织贴块法培养胎儿主动脉VSMC。在不同Egb浓度及培养时间下,检测各组细胞凋亡率,并检测Fas及Bcl-2的表达量。结果凋亡细胞比率结果显示,Egb组凋亡细胞比率明显增加,在浓度为800μg/mL时间为24 h组的凋亡细胞比率最高,而且最高值已经达到了35.50%±0.63%;Fas蛋白阳性细胞率与Egb浓度和时间的增加呈现一定的正相关。Fas蛋白阳性细胞率在6h组为5.67%±1.04%,24 h组增加为11.00%±0.56%左右,Egb在浓度为800μg/mL时间为24 h组比率最高达到33.20%±1.22%;Bcl-2蛋白阳性细胞率与Egb浓度和作用时间呈现明显的负相关,Egb组在浓度为800μg/mL时间为24 h组比率降低到8.33%±0.87%。结论 Egb可以诱导VSMC的凋亡;Egb诱导VSMC的凋亡过程与Fas表达增加和Bcl-2的表达减少有着直接的联系。