Y27632对脊髓损伤微环境下新生大鼠背根节神经元轴突再生的影响

目的:探讨Rho蛋白激酶Ⅱ(Rho-associated coiled-coil-containing protein kinase Ⅱ,ROCK Ⅱ)特异性抑制剂Y-27632对脊髓损伤微环境下新生大鼠背根节(dorsal root ganglion,DRG)神经元轴突冉生和延长的影响.方法:取新生(<5d)SD大鼠胸腰段DRG神经元进行原代培养、提纯和鉴定.将健康雌性SD成年大鼠15只随机分为脊髓损伤组、假手术组和正常组,每组5只;用WD法制成T9平面脊髓损伤动物模型,造模7d后取T8～T10节段脊髓制作脊髓提取液.将新生大鼠DRG神经元分为5组进行培养:A组,DRG神经元+PBS;B组,DRG神经元+正常组脊髓提取液;C组,DRG神经元+假手术组脊髓提取液;D组,DRG神经元+损伤脊髓提取液;E组,DRG神经元+损伤脊髓提取液+不同浓度(5、10、20、30、40、50μmol/L)Y27632.培养2d后观察并比较各组新生大鼠DRG神经元轴突平均长度和微管(Tubulin βⅢ)荧光表达强度.结果:A、B和C组平均神经轴突长度及轴突远端tubulin βⅢ表达强度比较无统计学差异(P>0.05);D组明显减小,与A、B和C组分别比较有统计学差异(P<0.05).5、10μmol/L Y27632治疗组平均轴突长度以及轴突远端和生长锥tubulin μⅢ表达强度比D组有所增加(P<0.05),10μmol/L Y27632治疗组增加更明显,但小于A、B和C组(P<0.05).20～50μmol/L Y27632治疗组平均轴突长度以及轴突远端和生长锥tubulin βⅢ表达强度三组间比较无统计学差异(P>0.05);与5～10μmol/L Y27632治疗组、D组比较明显增加(P<0.05);与A、B、C组比较平均轴突长度无统计学差异(P>0.05),平均荧光密度明显增加(P<0.05).结论:损伤脊髓提取液能明显抑制新生大鼠DRG神经元轴突生长,导致轴突回缩.加入5～10μmol/L Y27632能促进轴突生长,20～50μmol/L Y27632更能明显促进轴突生长.     

Rho/ROCK Ⅱ特异抑制性小分子多肽对脊髓损伤微环境下新生大鼠背根节神经元轴突再生的实验研究

目的 观察Rho/ROCK Ⅱ特异抑制性小分子多肽在脊髓损伤(SCI)微环境下对新生大鼠背根节神经元(DRGNs)轴突生长的影响. 方法 取健康雌性SD成年大鼠5只,按WD法制成T9平面以下截瘫模型,术后7d取T8-10节段脊髓制作截瘫大鼠脊髓提取液.取新生SD大鼠背根神经节经酶解消化、机械吹打、离心、重悬、纯化,进行原代培养观察.DRGNs体外培养5d后随机分组加入不同物质共同培养:A组:DRGNs +60 μL PBS;B组:DRGNs+60 μL截瘫大鼠脊髓提取液;C组:DRGNs+60 μL截瘫大鼠脊髓提取液+20 μL脂质体;D组:DRGNs+ 60μL截瘫大鼠脊髓提取液+20 μL脂质体+不同量多肽(2、4、6、8、10、12 μg).不同环境下共同培养2d后行免疫荧光,测量神经轴突长度和轴突远端平均荧光密度. 结果 B、C组平均轴突长度和荧光密度均小于其他组,差异有统计学意义(P＜0.05),而B、C组间差异无统计学意义(P＞0.05).8μg多肽组平均轴突长度增长最明显,平均荧光密度最大,与其他多肽组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);2 μg多肽组与4μg多肽组的平均轴突长度和荧光密度比较差异均无统计学意义(P＞0.05);6μg多肽组、10 μg多肽组、12μg多肽组的平均轴突长度和荧光密度比较差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 Rho/ROCKⅡ特异抑制性小分子多肽能促进SCI微环境中DRGNs轴突生长,当多肽含量为8μg时作用最明显.     

β-神经生长因子缓释系统对原代培养鸡胚背根神经节轴突生长的影响

目的 制备β神经生长因子(nerve growth factor,NGF)缓释系统,评价其及其组份对体外培养鸡胚背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)轴突生长的生物学效应.方法 构建含β-NGF 50、100、250μL的缓释系统分别与DRG共同培养,DRG常规培养作为对照组,了解各浓度组DRG的轴突生长;分别利用缓释系统各组份与DRG培养,观察各组轴突生长情况.实验分成6组:对照组(DRG+纤维蛋白原),A组(DRG+纤维蛋白原+肝素结合肽+肝素钠+100 μg/Lβ-NGF),B组(DRG+纤维蛋白原+肝素钠+100μg/Lβ-NCF),C组(DRG+纤维蛋白原+肝素结合肽+100μg/Lβ-NGF),D组(DRG+纤维蛋白原+100μg/Lβ-NGF),E组(DRG+纤维蛋白原+肝素结合肽十肝素钠).结果 50、100和250μg/Lβ-NGF缓释系统轴突生长是对照组的1.31(P>0.05)、3.78(P<0.01)和3.05(P<0.01)倍;100μg/L组较2.50μg/L组DRG轴突生长明显(P<0.05).实验组A、B、C、D和E组的DRG轴突生长分别是对照组的3.75、1.15、1.12、1.10和1.09倍,与对照组比较仅A组差异有统计学意义(P<0.01).结论 β-NGF缓释系统中释放的β-NGF具有生物活性,可明显促进DRG轴突生长.     

不同数量BMSCs对大鼠背根神经节生长影响的实验研究

目的 BMSCs作为雪旺细胞的替代细胞可提高周围神经损伤修复效果,但目前对于神经支架内添加适宜的种子细胞数量未达成共识。研究不同数量BMSCs对大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)生长的影响。方法取4周龄雄性SD大鼠3只,体重80～100 g,体外培养扩增BMSCs。取新生1～2日龄SD大鼠3只,雌雄不限,体重4～6 g,制备DRG。取第3代BMSCs制备BMSCs-生物蛋白胶复合物,按照加入细胞数量的不同,将实验分为A组(1×103个)、B组(1×104个)、C组(1×105个)和D组(0个),并与SD大鼠DRG共培养。48 h后通过形态学观察,神经丝蛋白200和雪旺细胞S-100免疫荧光染色,对SD大鼠DRG轴突生长长度、雪旺细胞迁移距离和轴突面积指数进行定量评价。结果 48 h后可见各组BMSCs生长出多个长突起;雪旺细胞移行和轴突从DRG长出,呈多方向性生长;BMSCs生物蛋白胶具有生物活性且影响DRG生长。A、B、C组DRG轴突生长长度及雪旺细胞迁移距离均明显大于D组(P<0.05),C组小于B组(P<0.05),A、C组间及A、B组间差异无统计学意义(P>0.05)。A、B组轴突面积指数明显大于D组(P<0.05),C组大于D组但差异无统计学意义(P>0.05),A、B、C组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论乳鼠DRG体外培养实验,可作为研究周围神经损伤修复的体外模型。不同数量BMSCs生物蛋白胶复合物对DRG生长的影响具有量效关系,为组织工程神经选用合适数量BMSCs提供了理论依据。     

不同浓度他克莫司对新生大鼠背根神经元生长的影响

目的 观察并寻找适宜新生大鼠背根神经元生长的最佳他克莫司(FK506)浓度.方法 取8只新生24 h SD大鼠的背根神经节,剥除神经外膜,剪成约0.1 mm~3大小的碎块,消化后进行纯化培养,建立体外新生大鼠脊髓背根神经元培养体系.培养96 h后,将背根神经元分为:空白对照组(A组)、1×10~(-10) mol/L FK506组(B组)、1×10~(-9)mol/L FK506组(C组)和1×10~(-8)mol/L FK506组(D组).继续培养48 h后,应用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测细胞活力及逆转录酶-聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测生长相关蛋白-43(GAP-43)mRNA的表达情况.比较4组神经元活力和GAP-43 mRNA的表达情况.结果 A、B、C、D组的OD值分别为0.472±0.030、0.481±0.013、0.573±0.016、0.342±0.004,4组之间比较差异有统计学意义(F=26.753,P<0.01),C、D两组之间比较及C、D组分别与A、B组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).A、B、C、D组的GAP-43 mRNA的表达值分别为0.375±0.016、0.388±0.009、0.490±0.003、0.283±0.009,4组之间比较差异有统计学意义(F=72.374,P<0.01),C、D两组之间比较及C、D组分别与A、B组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 1×10~(-9)mol/L浓度的FKS06对大鼠脊髓背根神经元生长的促进和保护作用最好,1×10~(-10)mol/L浓度的FK506对大鼠脊髓背根神经元生长具有促进和保护作用,1×10~(-8)mol/L浓度的FK506对神经元的生长具有抑制作用.     

葡萄糖原合成酶-3β抑制剂促进大鼠脊髓损伤后轴突再生与下肢功能恢复的研究

目的 探讨葡萄糖原合成酶-3β(GSK-3β)的抑制剂噻二唑-8(TDZD-8)对大鼠脊髓损伤后轴突再生与下肢功能恢复的影响. 方法 健康成年雌性SD大鼠108只,均制作T9平面完全性截瘫的脊髓损伤动物模型,并在L4平面蛛网膜下腔插入注药导管后随机分为3组(n=36):TDZD-8治疗组(A组)经注药导管注入1 mg/(kg·d)的TDZD-8,PBS治疗组(B组)经注药导管注入60 μL/d的磷酸盐缓冲液,C组为空白对照组.各组均在瘫痪后lh开始注射,连续注射3周.注射后2 h、4h、8h、24 h、7 d,TUNEL法观察神经元细胞凋亡的表达;注射后7、14、28 d,兔抗生长相关蛋白-43(GAP-43)的表达;注射后1、2、3、6、8、12周,Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分评估下肢运动功能恢复情况;注射后8周,采用免疫荧光法观察损伤节段轴突再生情况. 结果 脊髓损伤后2h观察到凋亡细胞,注射后2h、4h、8h、24 h、7 dA组的神经元细胞凋亡数明显低于B、C组,各组细胞凋亡表达在注射后8h达到高峰,此后逐渐减少,差异均有统计学意义(P＜0.05);注射后7、14、28 d,A组的GAP-43表达面积明显高于B、C组,各组GAP-43表达在损伤后14 d达到高峰,此后逐渐减少,差异均有统计学意义(P ＜0.05);从注射后3周开始,A组的BBB评分明显高于B、C组,差异有统计学意义(P＜0.05).A组有较多再生神经纤维穿过损伤部位,而B、C组只有少许再生神经纤维穿过损伤部位,注射后8周A组阳性标记的皮质脊髓束纤维面积明显高于B组、C组,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 TDZD-8能够抑制细胞凋亡,减少继发性脊髓损伤,上调GAP-43的表达,促进轴突再生、延长,促进大鼠后肢功能恢复.     

GDNF基因修饰的嗅鞘细胞移植联合IN-1注射修复大鼠急性脊髓损伤

目的 研究胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因修饰的嗅鞘细胞(OECs)移植联合轴突生长抑制蛋白抗体(IN-1)局部持续注射对大鼠急性横断性脊髓损伤(SCI)的修复作用.方法 构建载有GDNF基因的慢病毒(Lentivirus)载体并体外转染OECs,Western Blot检测GDNF的表达.用50只成年雌性SD大鼠建立胸脊髓全横断损伤模型,随机分为A(对照组)、B(IN-1微泵注射组)、C(OECs组)、D(GDNF-OECs组)和E(GDNF-OECs+IN-1组)5组各10只.应用神经丝蛋白200(NF200)单抗免疫组化、生物素化的葡聚糖胺(BDA),顺行神经追踪对SCI区神经纤维再生进行形态学观察.采用BBB评分评估大鼠后肢功能恢复情况.结果 术后共有13只大鼠死亡.术后8周可观察到Hoechst标记的OECs在体内存活并在脊髓内迁移;E组和D组可见SCI区杂乱无序的再生轴突,有连续性神经纤维通过损伤区;C组可见少量无序的再生轴突,可疑连续性神经纤维通过损伤区;B组和A组脊髓残端萎缩,未见轴突再生.A、B、C、D和E组后肢功能运动平均BBB评分分别为7.70±0.24、7.89±0.15、10.50±0.25、11.43±0.23和12.81±0.40.结论 GDNF-OECs移植联合IN-1抗体注射可有效促进损伤脊髓神经轴突的存活、再生,促进损伤脊髓的修复.     

重组人红细胞生成素治疗大鼠急性脊髓损伤的用药时间窗探讨

目的:探讨腹腔注射重组人红细胞生成素(rHuEPO)治疗大鼠急性脊髓损伤(ASCI)的用药时间窗.方法:采用显微血管夹夹伤雌性SD大鼠T10脊髓建立脊髓急性损伤模型,将造模成功后的40只大鼠随机分为A、B、C、D、E组,每组8只.A、B、C、D组分别于损伤后即刻、1h、3h和6h腹腔注射rHuEPO 50001U/kg,E组损伤后立即腹腔注射等量生理盐水,作为对照组.各组大鼠于术后1d、3d、5d、7d进行BBB运动学评分,并于术后3d、7d用TUNEL染色和caspase-3免疫组化染色法检测各组大鼠脊髓神经细胞凋亡情况.结果:术后1d、3d各组大鼠BBB评分无统计学差异(P>0.05);5d时A、B、C三组BBB评分均高于D、E两组(P<0.01),A、B、C 三组间与D、E组间无统计学差异(P>0.05);7d时D组BBB评分高于E组(P<0.01),但低于A、B、C三组(P<0.01),而A、B、C三组间无统计学差异(P>0.05).损伤后3d、7d,A～D组的TUNEL、caspase-3染色阳性细胞均高于E组,且损伤后7d时D组TUNEL染色阳性细胞数高于A、B、C三组(P<0.05),A、B、C三组间无统计学差异;损伤后3d.D组caspase-3染色细胞阳性率高于A、B、C三组(P<0.05),A、B、C三组间无统计学差异(P>0.05),损伤后7d,A～D组间无统计学差异(P>0.05).结论:大鼠ASCI后3h内给予rHuEPO可以显著改善运动功能恢复情况,并抑制伤后脊髓神经细胞凋亡现象的发生;伤后6h给药效果较差.     

嗅鞘细胞对正常及损伤脊髓神经元的保护作用

目的 研究嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)培养液对正常及损伤脊髓神经元的影响,进一步探讨OECs促进及保护脊髓神经元的作用机制.方法 取成年SD大鼠OECs制备OECs培养液(OEC culturemedium,OECCM),倒置相差显微镜观察细胞形态,行兔抗大鼠低亲和力神经生长因子受体p75抗体(nerve growth factorreceptor p75,NGFR p75)细胞免疫组织化学染色观察及纯度计算.取孕15～17 d SD大鼠制备脊髓神经元,并以H2O2制备损伤模型.观察OECCM对正常胚胎SD大鼠脊髓神经元生长发育的影响实验分为对照组(A组)和实验组(B组),OECCM对H2O2致脊髓神经元损伤模型的影响实验也分为对照组(C组)和实验组(D组).A、C组每孔加200 μL完全培养基,B、D组每孔加100 μL OECCM和100 μL完全培养基.4组细胞均作活性MTT比色分析.结果 OECs培养6～9 d后,细胞多呈双极形或梭形:脊髓神经元胞体较大,多呈圆形,培养5～7 d后,突起明显生长,多为双突起.NGFRp75细胞免疫组织化学染色观察示OECs细胞膜棕色深染,胞体清晰,呈梭性或三角形;OECs纯度>90%.培养6～9 d后,与A组相比,B组细胞生长旺盛,密度较高,胞体明显增大.A组胞体平均直径、单个神经元突起数目及细胞突起长度分别为(33.38±6.80)D/μm、(1.67±0.80)个和(91.19±62.64)L/μm,B组分别为(37.39±7.28)D/μm、(1.76±0.82)个和(121.33±81.13)L/μm,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05).A组MTT比色法所测吸光度(A)值为0.402 0±0.586 9,B组为0.466 0±0.479 0,两组比较差异有统计学意义(P<0.01).损伤后2 h,C、D组细胞数量明显减少,存活的神经元胞体皱缩、胞膜不清楚,细胞突起明显回缩或断裂.C组MTT比色法所测A值为0.1490±0.0300,D组为0.1840±0.052 0,两组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 OECCM可促进正常脊髓神经元生长,对损伤脊髓神经元有一定保护作用,OECs分泌的促神经生长因子是OECs发挥脊髓神经元保护作用的机制之一.     

胶原支架结合脑源性神经营养因子移植促进全横断脊髓损伤大鼠轴突再生及运动功能恢复的研究

目的评价胶原支架结合脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)移植修复大鼠全横断脊髓损伤的效果。方法将32只成年雌性SD大鼠随机分成4组(n=8):A组为假手术组,只暴露T_9、T_(10)段脊髓;B、C、D组切除长4 mm的T_9、T_(10)段脊髓后,C、D组分别于损伤处植入相应长度的线性有序胶原支架(linear ordered collagen scaffolds,LOCS)和结合了胶原结合结构域(collagen binding domain,CBD)-BDNF的LOCS。术前及术后3个月内每周对大鼠进行BBB运动功能评分。术后3个月,实施神经电生理检测各组大鼠运动诱发电位(motor evoked potential,MEP);然后于L_2段脊髓组织注射荧光金(fluorogold,FG)实施逆行示踪,1周后取大鼠大脑及胸、腰段脊髓组织,脱水后观察脊髓组织形态;取包含损伤区的胸、腰段脊髓组织作切片。其中,脊髓冠状切片于激光共聚焦显微镜下进行观察,计算FG阳性细胞积分吸光度(IA)值;胸段脊髓组织水平切片采用免疫荧光染色,观察全横断脊髓损伤造模情况、脊髓损伤区轴突再生情况、D组再生轴突的突触形成情况。结果术后各时间点B、C、D组BBB评分均显著低于A组(P0.05);术后2～12周D组BBB评分均明显高于B、C组(P0.05)。电生理检测示,B组未观测到MEP;C、D组MEP潜伏期显著长于A组,C组显著长于D组,差异均有统计学意义(P0.05)。脊髓组织形态观察示,B组脊髓损伤区域向两端延伸,损伤部位组织破坏严重;C、D组脊髓形态恢复较好,D组更接近正常组织形态。逆行示踪结果显示,各组大鼠损伤区以下的腰段脊髓灰质中均充满了FG阳性细胞;在损伤区以上的胸段脊髓中,A组FG阳性区域IA值显著大于B、C、D组(P0.05),C、D组大于B组(P0.05),C、D组间差异无统计学意义(P0.05)。免疫荧光染色示,自同一脊髓背侧至腹侧选出的组织切片显示了明显异于正常组织的全横断脊髓损伤区域。A组NF阳性轴突数明显多于B、C、D组,C、D组多于B组,D组多于C组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 LOCS结合CBD-BDNF移植可以促进大鼠全横断脊髓损伤后轴突再生以及后肢运动功能恢复。     

后根轴突再生重建感觉传入通路的实验研究

目的 将后根分别与脊神经节中枢突支(后根)和周围突支(脊神经)吻合,为通过后根再生重建感觉传入通路奠定组织学基础.方法 SD大鼠74只随机分为三组,左侧为正常对照侧,右侧为手术侧.A组将L4后根近断端L6后根远断端吻合;B组将L4脊神经出椎间孔2 mm处切断,近断端与L6后根远断端吻合;C组手术操作同B组,但不吻合作为假手术组.术后3个月以逆行神经示踪、脊髓后根入口(dorsal root entry zone,DREZ)降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)阳性轴突分布、脊神经节和脊髓后角神经元存活率、光镜和透射电镜评价轴突再生效果.结果 逆行神经示踪证实B组再生轴突轴浆运输功能恢复良好.A组和B组均可见轴突再生通过吻合口,神经纤维数量和髓鞘厚度与正常对照侧比较差异无统计学意义;但A组轴突再生停止于DREZ,脊髓后角CGRP阳性纤维分布密度低于B组和正常对照侧,差异有统计学意义.三组L6脊神经节神经元存活率与正常对照侧比较差异无统计学意义;A组和C组L4脊髓后角神经元存活率低于B组和正常对照侧,差异有统计学意义.结论 后根与脊神经吻合后不影响脊髓后角神经元存活,神经纤维再生、轴浆运输能通过DREZ进入脊髓,是一种理想的修复感觉传导通路的方式.

Abstract：

Objective To provide the morphological evidence for sensory pathway by the repair of dorsal root (DR) in which received transected and anastomosed with central processes (DR) and peripheral processes (spinal nerve) respectively. Methods 74 SD rats were divided into three groups randomly. Group A: the distal ending of L6 DR was sutured to the proximal ending of the L4 DR in right side. Group B: the postganglionic spinal nerve of L4 was cut at a point 2 mm to intervertebral foramen and its proximal stump was reconnected to the distal ending of L6 DR in right side. Group C: under the same operative manipulation on group B, but no anastomosis was performed to serve as the sham operation group. The left side was kept intact and served as a normal control in all groups. The repairing results of DR axonal regeneration were evaluated at 3 months after operation by retrograde tracing, the density of positive Calcitonin gene-related peptide (CGRP) axon in dorsal root entry zone (DREZ), survival rate of neurons in DR ganglia and posterior horn, light and transmission electron microscope. Results HRP retrograde tracing demonstrated axonal axoplasmic transport of regenerative nerve recovered well in group B. Regenerative fibers were found. There was no difference between group A or B and normal control with regard to the number of myelinated axons and the thickness of myelin. Regenerating axon stop at the DREZ in group A and the density of positive CGRP were lower than those in group B and normal control. Survival rate of neurons in L6 DR ganglia had no difference among all groups. However, in posterior horn, a significant increase in death was seen in group A and sham group. Conclusion The ability of axonal regeneration was effective and with no disservice to neurons in posterior horn following anastomosis of postganglionic spinal nerve and dorsal root, by which axoplasmic transport across the DREZ into the spinal cord.     

TDZD-8对小鼠急性胰腺炎的治疗作用

目的：探讨TDZD-8（4-苄基-2-甲基-1,2,4-噻二唑烷-3,5-二酮）对小鼠急性胰腺炎（AP）的治疗作用。方法：54只BALB/c小鼠随机均分为对照组、模型组和治疗组。模型组和治疗组采用腹腔注射雨蛙素[50 μg/(kg·h),共13次]诱导AP,对照组以同样的方式注射同体积的生理盐水,治疗组在末次注射雨蛙素30 min后,腹腔注射10 mg/kg TDZD-8。于末次注射雨蛙素后3,6,12 h,各组分别取动物6只,测定血淀粉酶、白细胞介素6（IL-6）水平,HE染色后观察胰腺组织病理学改变,免疫组化法分析胰腺核因子κB（NF-κB）的表达。结果：与对照组比较,模型组与治疗组血淀粉酶与IL-6水平,胰腺组织病理学评分与NF-κB表达水平明显升高,且均随时间延长而逐渐升高,但治疗组的上述指标在各时间点上均明显低于模型组,所有差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论：TDZD-8对小鼠急性胰腺炎有保护作用,其保护机制可能与抑制NF-κB活性,从而减轻炎症反应有关。

     

曲马多对神经病理性痛大鼠中脑远位触液神经元5-HT1A受体表达的影响

目的 探讨曲马多对神经病理性痛大鼠中脑远位触液神经元5-HT1A受体表达的影响.方法 SPF级雄性SD大鼠40只,体重220～280 g,采用坐骨神经慢性压迫法制备大鼠神经病理性痛模型,随机分为5组(n=8):正常对照组(C组)、生理盐水组(NS组)、曲马多组(T组)、神经病理性痛+生理盐水组(NP+NS组)和神经病理性痛+曲马多组(NP+T组).C组不行任何处理;NS组和T组仅暴露坐骨神经,分别腹腔注射生理盐水2 ml/kg或曲马多10 mg/kg;NP+NS组和NP+T组制备神经病理性痛模型,模型制备后第7天分别腹腔注射生理盐水2 ml/kg或曲马多10 mg/kg.除C组外,其余4组于腹腔注射曲马多或生理盐水前(T1)和注射后1 h(T2)时测定热痛阈和机械痛阈.于模型制备后第5天,左侧侧脑室注射30%霍乱毒素亚单位B与辣根过氧化物酶复合物(CB-HRP)3μl以标记远位触液神经元,并测定远位触液神经元5-HT1A表达水平.结果 与C组比较,NP+NS组中脑远位触液神经元5-HT1A受体表达下调(P＜0.05),其余组差异无统计学意义(P＞0.05);与NS组和T组比较,NP+NS组中脑远位触液神经元5-HT1A受体表达下调,热痛阈和机械痛阈降低,NP+T组热痛阈和机械痛阈降低(P＜0.05),中脑远位触液神经元5-HT1A受体表达差异无统计学意义(P＞0.05);与NP+NS组比较,NP+T组中脑远位触液神经元5-HT1A受体表达上调,热痛阈和机械痛阈升高(P＜0.05).结论 曲马多可下调中脑远位触液神经元5-HT1A受体的表达,该作用可能是其减轻大鼠神经病理性痛的机制之一.     

血液供应对移植大鼠背根神经节内神经元成活的影响

目的 探讨血液供应对成年大鼠背根神经节内感觉神经元的生长与成活的影响.方法 SD大鼠分成A、B、C三组.分别摘取大鼠的一侧L4背根神经节(dorsal root ganglions,DRGs).A组:将DRGs放置于下腹部皮下脂肪内.B组:将DRGs放置于股四头肌肌肉内.C组:剥离神经节外膜后将DRGs放置于股四头肌肌肉内.于移植后3 d,7 d、14 d、21 d和28 d将背根神经节取出,进行Nissl染色和HE染色,观察不同移植环境下背根神经节内感觉神经元细胞的成活情况.同时计数三种环境下背根神经节中感觉神经元的细胞数目,并进行统计学分析.结果 A组背根神经节中成活的感觉神经元细胞数目比B、C两组少,成纤维细胞的增生比B、c两组明显.结论 丰富的供血可有效阻止神经元的死亡,减少成纤维细胞的增生,从而最大限度地增加在移植环境中成活的神经元胞体的数量.     

Neurotrophin-3 prevents the proximal accumulation of neurofilament proteins in sensory neurons of streptozocin-induced diabetic rats

The relation between neurofilament expression and/or phosphorylation in the proximal versus distal components of the sensory peripheral neuraxis was studied and related to disorders in structure and function of the distal axon of streptozocin (STZ)-induced diabetic rats studied for 14 weeks. The ability of neurotrophin-3 (NT-3) to prevent abnormalities in neurofilament biology was also investigated. Compared with age-matched controls, neurofilament heavy (NF-H) (3.3-fold) and neurofilament medium (NF-M) (2.5-fold), but not neurofilament light (NF-L), subunits accumulated in the proximal axon of sensory neurons of the lumbar dorsal root ganglia (DRG) in untreated diabetic rats. Neurofilament accumulation was prevented by NT-3. Small- and large-diameter sensory neurons exhibited elevated levels of NF-H protein accumulation and phosphorylation in the DRG of untreated diabetic rats, levels that were ameliorated by NT-3. The sural nerve of untreated diabetic rats showed a 50% decrease in the levels of NF-H and NF-M, but not NF-L, subunits; NT-3 only partially normalized the defect in NF-M expression. These observations were associated with significant lowering of motor and sensory nerve conduction velocity but no alteration in the mean axonal diameter of myelinated axons in the sural nerve in untreated diabetic rats. It is proposed that the accumulation of NF-H and NF-M subunits in the proximal axon is an etiologic factor in the distal axon degeneration observed in diabetes.     

神经病理性痛大鼠背根神经节神经元高电压激活钙电流的变化

目的 观察神经病理性痛大鼠损伤和邻近未损伤背根神经节神经元高电压激活钙电流的变化.方法 雄性SD大鼠,周龄4～6周,采用结扎左侧L5脊神经的方法制备神经病理性痛模型.于结扎后14 d时采用酶消化法急性分离结扎侧邻近未损伤L4背根神经节神经元(L4组)和损伤L5背根神经节神经元(L5组),另取正常大鼠L4.5背根神经节神经元作为对照组(C组).采用全细胞膜片钳技术记录神经元高电压激活钙电流,绘制钙电流激活曲线及稳态失活曲线;记录各亚型高电压激活钙电流.结果 与C组比较,L4组和L5组峰电流密度降低,L5组钙电流激活曲线向超极化方向移动,N型钙电流比例升高,L型钙电流比例降低(P＜0.05);与L4组比较,L5组峰电流密度降低,钙电流激活曲线向超极化方向移动,N型钙电流比例升高,L型钙电流比例降低(P＜0.05).3组钙电流半数失活电压差异无统计学意义(P＞0.05).结论 损伤背根神经节神经元高电压激活钙电流可能在诱发大鼠神经病理性痛的过程中起主要作用.     

大鼠慢性颈脊髓压迫减压术后神经功能改变及其相关机制探讨

目的:观察大鼠慢性颈脊髓压迫减压术后神经功能的恢复情况,探讨其相关机制。方法:30只成年SD大鼠随机分为假手术组(A组,10只)、压迫组(B组,10只)和减压组(C组,10只)。压迫组和减压组在C6~C7椎板下置入聚乙烯醇丙烯酰胺互穿网络水凝胶制作慢性颈脊髓压迫模型,减压组于造模后4周行手术咬除椎板充分减压。三组均于造模后4周行运动诱发电位(MEP);12周先行MRI和MEP检测,再处死大鼠取出颈段脊髓,行大体形态观察和组织学切片,快蓝(LFB)染色观察三组大鼠脊髓组织髓鞘变化,免疫荧光染色观察神经元数目形态及脑源性神经营养因子(BDNF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的变化。结果:造模后4周时,B、C组MEP潜伏期与A组比较明显延长(P<0.05),波幅与A组比较明显降低(P<0.05),B组和C组比较潜伏期和波幅均无显著性差异(P>0.05)。造模后12周时MRI轴位和矢状位均显示B组大鼠椎管狭窄,颈脊髓明显受压,A组和C组大鼠椎管无明显狭窄,脊髓无明显受压;三组间MEP潜伏期和波幅两两比较差异有显著性(P<0.05),潜伏期A组C组>B组。大体形态观察示A组脊髓形态正常,B组脊髓受压节段压痕明显,C组压痕较B组轻。LFB染色示A组脊髓组织中髓鞘染色密集,B组轴突脱髓鞘明显,C组脱髓鞘现象较B组轻。免疫荧光染色示A组脊髓组织中可见大量形态正常的神经元;B组脊髓受压节段压迫侧神经元明显减少,胞体固缩;C组脊髓受压节段神经元数量比B组多,有轻微细胞固缩,三组神经元计数有显著性差异(P<0.05),A组>C组>B组。免疫荧光染色示A组大鼠脊髓组织有少量BDNF和VEGF的表达;B组大鼠BDNF表达水平较A组有所升高,且主要集中在脊髓受压部位附近的白质区域,VEGF表达无明显增加;C组BDNF和VEGF表达水平明显增加,主要集中在原受压部位白质周围,灰质部位有少量表达。C组BDNF和VEGF表达阳性细胞计数与A、B组比较有显著性差异(P<0.05);B组BDNF表达阳性细胞与A组比较有显著性差异(P<0.05),VEGF表达阳性细胞数与A组无显著性差异(P>0.05)。结论:大鼠慢性颈脊髓压迫减压术后神经功能有所恢复,其可能是通过减轻神经元损伤和轴突脱髓鞘改变、增加BDNF和VEGF的表达水平,从而促进受损脊髓组织的修复。