块型重组合异种骨的制备及其在小鼠体内的成骨作用

目的 制备块型重组合异种骨，并利用小鼠股部肌袋模型检测其成骨活性。方法 将牛骨源性的骨形囊发生蛋白（ＢＭＰ）与大块去抗原处理的牛松质骨载体组装、复合成块型重组合异种骨；将块骨重组合异种骨，块型去抗原牛松质骨载体及新鲜牛松质骨植入小鼠股部肌肉内，通过光镜下病理组织学观察及检测组织中碱性磷酸酶活性，比较三种植入物在体内引起的组织反应，观察块型重组合异种骨异位成骨及骨诱导能力。结果 植入块型重组合异种骨     

重组合异种骨的实验研究与临床应用

本文作者以牛ＢＭＰ与同源松质骨组合研制成重组合异种骨。将３６只新西兰家兔桡骨制成１５ｍｍ的骨缺损。Ａ组左侧植入重组合异种骨８０ｍｇ，左侧植入单纯松质骨。Ｂ组左侧植入重组合异种骨和自体红骨髓左侧植入生物陶瓷颗粒。术后１６周内，经放射学、组织学、四环素荧光双标记及免疫光检测。结果提示重组合异种骨的良好的填充修复骨缺损能力。临床应用３８例，其中随防６个月以上者３０例。除１例外，其余２９例均获得满意的骨愈     

块型重组合异种骨的研制及其修复兔桡骨节段性骨缺损的研究

本实验探讨块型去抗原异种松质骨载体（ＭＢＣ）与ｂＢＭＰ复合形成的块型重组合异种骨（ＭＲＢＸ）［１］修复兔桡骨节段性骨缺损的能力,为其临床应用提供实验依据。一、材料与方法１．ＭＲＢＸ的制备：依照Ｕｒｉｓｔ方法提取牛ＢＭＰ。将新鲜牛肱骨上端松质骨制成２０ｍｍ×２０ｍｍ×２０ｍｍ骨块,经脱脂、部分脱钙及过氧化氢浸渍处理制备ＭＢＣ,将ＭＢＣ与粗提ｂＢＭＰ按５∶１重量比复合,透析,冻干,消毒备用。２．兔桡骨干节段性骨缺损的修复：选用成年新西兰大耳白兔５０只,造成桡骨干１５ｍｍ骨骨膜节段性骨缺损,其中４０…     

块形重组合异种骨修复犬桡骨骨缺损

为使异种骨种移植应用于骨干节段性骨缺损治疗。作者将经去抗原处理的牛松质骨骨块与牛骨形态发生蛋白复合形成块形重组合异种骨，通过犬桡骨干中上段２０ｍｍ，骨－骨膜缺损修复模型，综合评价ＭＲＢＸ修复大型动物长骨节段性骨缺损的能力。方法：６只成年犬左侧桡骨节段性骨骨膜缺损处理ＭＲＢＸ，右侧不做修复，为空白对照。     

复合rhBMP_2的异种骨(rhBMP_2/BCB)与骨膜联合移植修复兔桡骨节段性骨缺损

目的　探讨复合基因重组人ＢＭＰ２ 的异种骨（ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ） 移植及其与骨膜联合移植修复节段性骨缺损的效果。方法　将ｒｈＢＭＰ２ 与去抗原牛松质骨载体（ＢＣＢ）复合,制成ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ;并采用兔桡骨干１．５ ｃｍ 缺损的动物模型,通过Ｘ线、生物力学、骨密度、组织学等检测手段,比较单纯ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ移植、ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ 与带血运骨膜联合移植及ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ 与游离骨膜联合移植修复节段性骨缺损的疗效。结果　（１） 单纯ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ 移植,可在１６ 周使节段性骨缺损基本修复,其修复机制与过程和重组异种骨相似;（２）ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ与带血运骨膜联合移植,８ 周即可修复骨缺损,其修复机制与骨折修复相仿,包括膜内成骨和软骨成骨两种机制;（３）ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ与游离骨膜联合移植,在骨缺损修复早期（ ≤１２ 周） ,其成骨速度及成骨质与量均优于单纯ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ移植,约在１２ 周使骨缺损基本修复。结论　上述三种方法均可有效地修复节段性骨缺损,但以ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ与带血运骨膜联合移植较为理想。该方法同时具有良好的骨生成、骨传导和骨诱导作用。     

异种骨移植时T淋巴细胞总数及亚群的变化

以新鲜小牛松质骨（ＦＸ）、脱抗原处理的牛松质骨载体（ＢＣ）及不同复合比例的重组合异种骨（ＲＢＸ）植入Ｂａｌｂ／ｃ小鼠股部肌袋内，正常小鼠模拟手术做为对照组。术后７、１４及２８天，取材做组织学检查，同时以间接免疫荧光法测定外周血及脾脏淋巴细胞中Ｔｈｙ１、Ｌ３Ｔ４、Ｌｙｔ２及Ｔａｃ阳性细胞百分数。结果示：脱抗原载体植入组与正常对照组无明显差异。ＦＸ组阳性淋巴细胞百分数均明显升高，以Ｔａｃ升高显著；组织学示局部免疫排斥而无骨诱导生成。ＲＢＸ植入组Ｔａｃ无增高，组织学见活跃的异位诱导成骨而无免疫排斥反应，但Ｔｈｙ１及Ｌｙｔ２细胞荧光染色阳性率增高，以Ｌｙｔ２增高明显，Ｔｈ／Ｔｓ比值下降或倒置，为ＲＢＸ中所含ＢＭＰ所致。这一现象可能与机体对异种ＢＭＰ及ＲＢＸ不引起明显免疫排斥有关。Ｔａｃ细胞阳性表达率对评价异种骨移植时免疫排斥反应有一定的意义。     

重组合异种骨在小鼠体内诱导成骨活性的剂量依赖性研究

本文是本所重组合异种骨（ＲＢＸ）的系列研究之一。采用碱性磷酸酶和钙量测定，成骨量微机图像分析，对牛骨形态发生蛋白含量不同的ＲＢＸ诱导成骨活性进行了研究。结果提示了ｂＢＭＰ含量不同的ＲＢＸ诱导面骨能力的差异及其下限，并认为实验采用的成骨定量方法，是较可靠易行的指标。     

重组合异种骨移植成骨活性及量效关系的实验研究

观察重组合异种骨的成骨活性及其量效关系。方法采用ＲＢＸ移植建立ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠股后肌袋模型,术后定期对移植组织进行放射学,病理学及碱性磷酸酶活性检查。结果（１）含不同比例的牛骨形态发生蛋白的ＲＢＸ组,成活性与ｂＢＭＰ含量呈正相关,存在着剂量依赖关系;（２）ＲＢＸＩ组成骨良好,同样含量的纯ｂＭＰ组也出现可见的成骨效应,但最终未能成骨;（３）ＡＬＰ活性以术后７天最高,４２例时仍较明显。结论ＲＢＸ是高效     

新型复合异种骨的研制及其修复骨缺损的免疫组化观察

将人重组骨形成成骨白－２与经综合化学处理的新生小羊骨松质结合制备成新型复合异种骨。将其移植修复兔下颌骨缺损，免疫组织化学观察结果表明；复合异种骨移植后，术后各时期移植工成骨活跃，成骨细胞及软骨细胞呈强阳性染以；而单纯松质骨组移植区新骨形成少，染色浅谈，从而证实，ｒｈＢＭＰ－２对复合异种骨内新骨形成具有决定性意义。     

重组合异种骨移植对IL－2生成影响的研究

采用重组合异种骨（ＲＢＸ）移植建立ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠股后肌袋模型，以研究对Ｔ淋巴细胞分泌ＩＬ－２的功能变化及对细胞免疫的影响，结果显示：（１）ＲＢＸ移植后２天ＩＬ－２升高是由于手术创伤刺激所致的应激反应；（２）术后７～１４天ＲＢＸ、ｂＢＭＰ对ＩＬ－２产生有显著的抑制作用，２８～４２天回升：（３）对Ｔ淋巴细胞功能的抑制作用主要是ＢＭＰ所致，经处理的牛板质骨粒不具免疫源性。提示：ＲＢＸ移植无明显免疫排异反应，ＢＭＰ能抑制Ｔ细胞的活化增殖，使细胞因子分泌减少，因而降低厂细胞免疫水平，ＢＭＰ可能属于一种新的兔疫调节因子。实验结果对ＲＢＸ移植既能成骨又不发生明显的免疫排异的机理是一种有意义的探讨。     

复合rhBMP2的异种骨（rhBMP2／BCB）与骨膜联合移植修复兔桡骨 …

目的 探讨复合基因重组人ＢＭＰ２的异种骨（ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ）移植及其与骨膜联合移植修复节段性骨缺损的效果。方法 将ｒｈＢＭＰ２与去抗原牛松质骨载体（ＢＣＢ）复合,制成ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ;并采用桡骨干１．５ｃｍ缺损的动物模型,通过Ｘ线、生物力学、骨密度、组织学等检测手段,比较单纯ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ移植、ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ与带血运骨膜联合移植及ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ与游离骨膜联合移植修复节段性     

抗感染重组合异种骨生物活性的研究

目的：探索开放性骨折骨缺损一期植骨的新途径。材料和方法：以重组合异种骨为载体,采用庆大霉素溶液浸泡和庆大霉素———明胶包裹２种方法制成复合植骨材料,以小鼠肌袋法分别观察此复合植骨材料的成骨活性和体内药物释放特性。结果：２种复合材料的成骨活性均与单纯重组合异种骨无明显差别（Ｐ＞００５）,均较单纯牛松质骨载体成骨活性好（Ｐ＜００１）。２种复合材料均于３ｄ内骨粒及其周围软组织的庆大霉素浓度高于金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度,１２ｈ时在软组织中分别产生１６５６μｇ／ｍｌ和３０４５μｇ／ｍｌ的高浓度。结论：抗感染重组合异种骨有较好成骨活性和一定的抗感染能力,具有较好的临床应用前景。     

活性锻烧骨的临床应用

把骨形态发生蛋白（ＢｏｎｅＭｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃＰｒｏｔｅｉｎ，ＢＭＰ按１：２０的重量比例，与煅烧异种松质骨（ＴｒｕｅＢｏｎｅＣｅｒａｍｉｃ，ＴＢＣ）组成活性煅烧骨（ＢＭＰ／ＴＢＣ复合物）经动物实验揭示该复合体具有良好的填充修复骨缺损的能力，临床应用５３例病人，４８例随访８个月～３．５年，平均１８．６月，均取得满意疗效，作者认为自制煅烧骨是理想的载体。活性煅烧骨（ＢＭＰ／ＴＢＣ复合物）具有高效     

脱蛋白骨、骨形态发生蛋白和三种生长因子重组合人工骨成骨能力的比较研究

目的　比较三种重组合人工骨的成骨能力。方法　在５０ 只兔的１００ 个颅骨缺损动物模型中分别植入：①牛脱蛋白骨（ｂ Ｄ Ｐ Ｂ）／牛骨形态发生蛋白（ｂ Ｂ Ｍ Ｐ）／肿瘤坏死因子α（ Ｔ Ｎ Ｆα）;②ｂ Ｄ Ｐ Ｂ／ｂ Ｂ Ｍ Ｐ／碱性成纤维细胞生长因子（ｂ Ｆ Ｇ Ｆ）;③ｂ Ｄ Ｐ Ｂ／ｂ Ｂ Ｍ Ｐ／表皮细胞生长因子（ Ｅ Ｇ Ｆ）;④ｂ Ｄ Ｐ Ｂ／ｂ Ｂ Ｍ Ｐ。植入后１、２、４、６ 及８ 周行组织学检查及 Ｘ 线摄片; 植入后１０ 及４２ 天行　３５ Ｓ和４５ Ｃａ 液闪计数及灰重测定。结果　成骨能力：ｂ Ｄ Ｐ Ｂ／ｂ Ｂ Ｍ Ｐ／ Ｔ Ｎ Ｆα＞ ｂ Ｄ Ｐ Ｂ／ｂ Ｂ Ｍ Ｐ／ｂ Ｆ Ｇ Ｆ（ Ｐ＜ ０．０１） ＞ ｂ Ｄ Ｐ Ｂ／ｂ Ｂ Ｍ Ｐ／ Ｅ Ｇ Ｆ（ Ｐ＜ ０．０１）;ｂ Ｄ Ｐ Ｂ／ｂ Ｂ Ｍ Ｐ／ Ｅ Ｇ Ｆ 与 ｂ Ｄ Ｐ Ｂ／ｂ Ｂ Ｍ Ｐ 无显著性差异（ Ｐ＞ ０．０５）。结论　 Ｔ Ｎ Ｆα与 Ｂ Ｍ Ｐ及载体复合后,在体内对骨修复产生明显的促进作用,在载体／骨诱导因子／生长因子的重组合人工骨模式中, Ｄ Ｐ Ｂ／ｂ Ｂ Ｍ Ｐ／ Ｔ Ｎ Ｆα是一种有价值的骨移植材料。     

碱性成纤维细胞生长因子增强人重组骨形态发生蛋白-2诱导成骨的调节机理

目的：对ｂＦＧＦ增强ｒｈＢＭＰ－２诱导成骨的调节机理进行探讨。方法：２１０只ＢＡＬＢ／ｃ小鼠随机分为３组,每组７０只,试验侧均位于右后肢。设立ｒｈＢＭＰ－２／牛松质骨载体、单纯牛松质骨载体为对照组,分别于术后１２ｈ～２１ｄ共１１个时间点取材,观察其诱导成骨过程。结果：ｒｈＢＭＰ－２／ｂＦＧＦ／聚乙烯吡咯啉酮／牛松质骨载体组在诱导间充质细胞增殖、分化,软骨细胞、新生骨形成方面均早于ｒｈＢＭＰ－２／牛松质骨载体组,成骨量优于ｒｈＢＭＰ－２／牛松质骨载体组,而单纯牛松质骨载体组在２１ｄ仅出现了少量增殖的间充质细胞。结论：ｒｈＢＭＰ－２和ｂＦＧＦ在诱导成骨调节中存在着协同作用。     

重组合异种骨移植同源抗原刺激对脾细胞上清中IL—2的影响

为探讨重组合异种骨（ＲＢＸ）移植后对机体细胞免疫功能的影响，实验将ＲＢＸ、牛ＢＭＰ、经处理的同源松质骨粒、羟基磷灰石移植建立４组ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠股后肌袋模型，术后２、７、１４、２８、４２天取鼠脾细胞培养上清，３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测体内植骨及体外同源抗原刺激后ＩＬ－２的生物学活性。结果表明，各组移植后２天体内ＩＬ－２均一过性升高；７、１４天ＲＢＸ、牛ＢＭＰ组显著降低；体外抗原刺激３Ｈ－ＴｄＲ掺入ＣＰＭ值明显降低，且与抗原量呈剂量依赖关系。上述结果提示，ＲＢＸ移植对Ｔ淋巴细胞和ＩＬ－２诱导ＣＴＬＬ增殖有明显的抑制效应，可能对ＩＬ－２也有直接的抑制作用；而术后２天各组ＩＬ－２普遍升高可能与手术局部刺激应激反应有关。本研究对ＲＢＸ移植后既能成骨又不发生明显免疫排异的机理提出了初步解释。     

活性煅烧骨的临床应用

把骨形态发生蛋白（ＢｏｎｅＭｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃＰｒｏｔｅｉｎ，ＢＭＰ）按１∶２０的重量比例，与煅烧异种松质骨（ＴｒｕｅＢｏｎｅＣｅｒａｍｉｃ，ＴＢＣ）组成活性煅烧骨（ＢＭＰ／ＴＢＣ复合物），经动物实验揭示该复合体具有良好的填充修复骨缺损的能力，临床应用５３例病人，４８例随访８个月～３．５年，平均１８．６月，均取得满意疗效。作者认为自制煅烧骨是理想的载体。活性煅烧骨（ＢＭＰ／ＴＢＣ复合物）具有高效的诱导成骨能力，不引起免疫排斥反应，来源丰富，易于大量加工贮存，有广阔的临床应用前景。     

骨缺损中内源性BMP的分布及其作用

了解内源性ＢＭＰ的浓度及分布，对提高ＢＭＰ在骨再生中的作用有帮助。本实验在兔桡骨１０ｍｍ骨缺损模型上，利用ＢＭＰ免疫组化技术及真彩色计算机定量分析系统观察了内源性ＢＭＰ在骨缺损中的分布及对骨再生的作用。术后３日，骨端可见“空穴”，骨缺损间血肿ＢＭＰ染色阳性。来自骨内外膜的间质细胞，成软骨细胞。成骨细胞ＢＭＰ阳性。ＢＭＰ分布定量研究表明，骨缺损区存在ＢＭＰ浓度梯度，即距骨端愈远ＢＭＰ量渐渐下降。术后１周，ＢＭＰ值最大。提示内源性ＢＭＰ有骨端坏死，吸收及间质细胞分泌两种来源。据此，作者提出了内源性ＢＭＰ有效量的概念。提高内源性ＢＭＰ浓度，改善其分布，将是骨缺损治疗的有效途径。     

引导性骨再生中内源性BMP的作用

为探讨引导性骨再生中，内源性ＢＭＰ对骨再生过程的作用而进行以下研究。手术的方法造成兔桡骨中段１０ｍｍ缺损。实验侧用硅胶膜管连结骨缺损，作为引导性骨再生模型。另一侧作为对照。１５只新西兰兔分为三组，分别于术后３，７及１４日处死，标本行组织学及ＢＭＰ免疫组化检查。切片上，距骨端１，２，５ｍｍ处设置ａ，ｂ，ｃ线。利用真彩色计算机图像分析系统在三条线上选点测量ＢＭＰ值。实验侧骨缺损区内有一个完整的血肿结构，其ＢＭＰ染色阳性，膜管外组织ＢＭＰ染色几乎完全阴性。对照侧ＢＭＰ弥散于骨缺损周围的肌肉组织中。１周时，实验侧及对照侧均可见新骨形成。２周时，对照侧已停止，实验侧仍可见持续骨再生。ＢＭＰ定量分析中，实验侧三条带的ＢＭＰ值大部分高于对照侧。实验侧和对照侧ｂ，ｃ带之间存在梯度差，但实验侧的差值小于对照侧。这不仅证明了Ｈｕｌｔｈ关于骨折间隙存在ＢＭＰ浓度梯度的假说，也显示膜在引导性骨再生中可将内源性ＢＭＰ局限于骨缺损区内，提高内源性ＢＭＰ浓度并改善其分布的作用。这有利于骨再生，可能是引导性骨再生机理之一。对照侧ＢＭＰ值１周时最高，而实验侧在２周时仍呈持续升高。这说明，内源性ＢＭＰ有两个来源：骨端吸收释放及骨形成细胞合成。     

游离骨膜与复合rhBMP2的异种骨联合移植修复骨缺损的实验研究

目的 探讨复合基因重组人ＢＭＰ２（ｒｈＢＭＰ２）的异种骨与游离骨膜（ＦＰ）联合移植修复节段性骨缺损的效果。方法 将ｒｈＢＭＰ２与去抗原牛松质骨载体（ＢＣＢ）复合,制成ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ;选用新西兰大耳白兔２８只,制成烧骨干１５ｍｍ缺损动物模型,分别行ＦＰ和ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ复合移植（ｎ＝６）、ｒｈＢＭ２／ＢＣＢ移植（ｎ＝６）和单纯ＢＣＢ移植（ｎ＝２）;术后４、８、１２、１６周取材,通过Ｘ线、生