超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素对荷瘤大鼠胃癌模型炎性介质影响的研究

目的　研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素 (SEA)对荷瘤大鼠胃癌模型炎性介质影响。方法　采用人胃癌细胞 (MGC80 -3 )皮下接种建立大鼠胃癌模型 40只 ,实验组注射SEA ,对照组注射生理盐水 ,检测大鼠体内炎性介质水平。结果　荷瘤大鼠模型SEA处理以后 ,血清IL 1β ,IL 6,IL 12 ,TNF α和内毒素水平均明显上升 ,与对照组相比差异有显著性 ,尤其以血清IL 1β内毒素水平上升明显 (P <0 .0 1)。结论　超抗原SEA可激活大量的T细胞 ,分泌多种细胞因子 ,直接或间接地杀伤肿瘤细胞。     

超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A对小鼠体内肺瘤的抑制作用

我们通过小鼠模型注射超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA），观察SEA对小鼠体内肿瘤的抑瘤效果，并探讨其作用机制。     

超抗原金葡萄球菌肠毒素A对大鼠骨肉瘤的免疫治疗

本实验旨在观察超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对骨肉瘤荷瘤鼠免疫功能的影响及抑瘤效应，并分析其作用机制，以期为成骨肉瘤的免疫治疗寻求一种新方法。     

携带超抗原SEA基因的白蛋白纳米载体的构建及其治疗膀胱癌潜能研究

目的 构建一种非病毒载体基因投递系统-携带超抗原葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因的白蛋白纳米载体,观察白蛋白纳米粒表征并探讨其潜在的靶向基因投递作用和强大的抗瘤机制.方法 采用去溶剂化法制备白蛋白纳米粒,平均粒径(253.1±11.9)nm,Zeta电位(-34.0±4.5)mV,PDI 0.43±0.04;抽提SEA基因质粒(pSEA)260/280:1.84±0.02,pSEA浓度:(85.54±1.43)mg/L;经生物活性及基因测序鉴定后耦合SEA基因质粒和白蛋白纳米载体,并观察耦合物的稳定性及白蛋白纳米载体对SEA基因的保护作用.结果 成功构建携带超抗原SFA基因的白蛋白纳米载体,平均粒径(118.9±4.8)nm,Zeta电位(-43.9±10.5)mV,PDI 0.19±0.02,基因转载率为(97.61±0.06)%,性质稳定、分散性较好,体外实验表明白蛋白纳米载体能保护SEA基因免受DNase Ⅰ的降解.结论 获得符合超抗原SEA基因转染要求的白蛋白纳米载体.

Abstract：

Objective To assess the characteristics of human serum albumin nanoparticles (HSA-NP) as a nonviral vector system for delivery staphylococcal enterotoxin A (SEA) gene and probe into its potential targeted antitumor mechanism.Methods HSA-NP and plasmid containing SEA gene (pSEA)encapsulated in HSA (pSEA-HSA-NP) were prepared by a desolvation-crosslinking method.HSA-NP had a mean size of (253.1 ± 11.9) nm,zeta potential of ( -34.0 ±4.5) mV,polydispersity index of 0.43 ±0.04.The superantigen SEA gene was extracted by the Endo-Free Plasmid Maxi Kit,260/280 of pSEA was 1.84 ±0.02 and the concentration of pSEA was ( 85.54 ± 1.43 ) mg/L.pSEA was verified by sequencing and biological activity survey,the stability of pSEA-HSA-NP was investigated by laying for 10 days at room temperature,and the size and zeta potential were remeasured and contrasted with the samples 10 days before.HSA-NP protecting pSEA from degradation of DNase I was detected by gel electrophoresis.Results Electrophoretic mobility analysis and fluorescent labeling revealed that pSEA-HSA-NP was successfully constructed.PSEA-HSA-NP had a mean size of ( 118.9 ±4.8) nm,zeta potential of ( -43.9 ± 10.5 ) mV,polydispersity index of 0.19 ±0.02 and pSEA encapsulation efficiency of (97.61 ±0.06)%.The characteristics of pSEA-HSA-NP solution laying for 10 days at room temperature indicated a better stability and polydispersity.HSA-NP stabilizing pSEA against DNase I in vitro was also testified by gel electrophoresis.Conclusion pPSEA-HSA-NP served the transfecting needs of superantigen SEA gene.     

超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A锚定的膜表达热休克蛋白70的肠癌瘤苗的抗癌治疗作用研究

目的 研制超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA）锚定的膜表达热休克蛋白（HSP）70的肠癌细胞瘤苗，研究其抗肿瘤治疗作用。方法 以先期实验制备的膜表达HSP70肠癌细胞株CT26。扩增后以本研究组早先研制的跨膜型SEA蛋白转染法锚定肠癌细胞，灭活并制备双重修饰的肠癌细胞瘤苗。观察瘤苗在体外对小鼠脾淋巴细胞的增殖刺激效应；在BALB／c小鼠结直肠癌移植模型中观察瘤苗的抗癌治疗作用：瘤体生长抑制和荷瘤鼠的生存时间；并同时检测实验鼠的自然杀伤细胞（NK）和细胞毒淋巴细胞（CTL）活性。结果 激光共聚焦显微镜和流式细胞术均证明瘤苗细胞的双重修饰：SEA锚定，HSPT0表达并结合在瘤苗细胞膜表面。比较对照。SEA锚定或膜表达HSPT0的单一修饰瘤苗均显示出较高的鼠淋巴细胞增殖刺激效应；较强的瘤体生长抑制。并使荷瘤鼠的生存时间延长。而SEA锚定的膜表达HSP70的双重修饰瘤苗比单一修饰瘤苗，有着更高的淋巴增殖刺激效应，更强的瘤体生长抑制作用，并使荷瘤鼠的生存时间进一步延长。结论 成功研制了超抗原SEA锚定的膜表达HSPT0的肠癌细胞瘤苗，此双重修饰瘤苗对结直肠癌荷瘤小鼠有更强的治疗作用。     

高压氧对人前列腺癌细胞株小鼠荷瘤模型作用的研究

目的 为评估高压氧治疗前列腺癌放疗后出血性膀胱炎的安全性,探讨高压氧对体内前列腺癌细胞生长的影响. 方法 采用人前列腺癌PC-3细胞株皮下接种构建小鼠荷瘤模型(n=40),随机分组,实验组(n=20)每周连续进行5次200 kPa高压氧暴露,共20次,对照组(n=20)常压常氧条件下饲养.连续4周观察2组移植瘤生长体积的变化,免疫组织化学方法分析2组瘤体组织相关病理学特征,包括瘤体微血管密度(CD34)、瘤细胞增殖(Ki-67蛋白)以及瘤细胞凋亡(p53、p27蛋白)等指标. 结果 肿瘤接种后第28天,实验组移植瘤体积为(425.8±13.9)mm3,对照组为(433.6±12.8)mm3,2组比较差异无统计学意义(P>0.05);实验组移植瘤微血管密度及Ki-67、p53、p27蛋白表达的阳性率分别为69.7±9.5、(55.2±6.7)%、(31.2±5.3)%、(80.4±5.7)%,对照组分别为77.15±8.7、(50.65±7.3)%、(30.5±4.7)%、(85.3±6.4)%,2组比较差异均无统计学意义(P>0.05). 结论 高压氧对于前列腺癌细胞生长无促进作用,临床应用高压氧治疗因前列腺癌放射治疗引起的出血性膀胱炎患者可能是安全的.     

高压氧对人前列腺癌LNCaP细胞株小鼠荷瘤模型作用的研究

目的:评估应用高压氧治疗前列腺癌放疗后出血性膀胱炎的安全性,探讨高压氧对体内前列腺癌细胞生长的影响。方法:采用人前列腺癌LNCaP细胞株皮下接种构建小鼠荷瘤模型(n=30),随机分为对照组(n=15)和实验组(n=15)。对照组常压常氧条件下饲养,实验组每周进行5次0.2MPa高压氧暴露,共计20次。连续观察4周两组移植瘤生长体积的变化,应用免疫组化法比较两组瘤体组织相关病理学特征指标:瘤体微血管密度(CD34)、瘤细胞增殖(Ki-67蛋白)以及瘤细胞凋亡(p53、p27蛋白)。结果:肿瘤接种后第28天,对照组移植瘤体积为(122.0±8.2)mm3,实验组为(120.0±7.9)mm3,两组差异无显著性(P>0.05);对照组移植瘤CD34及Ki-67、p53、p27蛋白表达的阳性细胞率分别为(36.2±4.9)%、(75.3±8.4)%、(44.2±5.7)%、(61.5±5.5)%,实验组分别为(39.3±5.2)%、(78.1±7.6)%、(40.4±6.2)%、(63.7±5.1)%,病理学特征均无显著性差异(P>0.05)。结论:高压氧对小鼠荷瘤模型前列腺癌细胞生长无促进作用,对前列腺癌中新生血管也无明显影响。     

金黄色葡萄球菌肠毒素B对膀胱癌作用的实验研究

目的观察金黄色葡萄球菌肠毒素B（staphylococcal enterotoxinB,SEB）对体外自然杀伤细胞（NK）细胞抑制T24膀胱癌细胞增殖及致细胞凋亡作用的影响,探讨SEB尾静脉注射对小鼠T24细胞皮下移植性膀胱肿瘤生长的作用。方法体外细胞实验采用补体裂解法分离收集人血NK细胞,用不同浓度的SEB（10^-5、10^-4和10^-3g/L）与NK细胞作用12h,然后取NK细胞加入T24细胞培养皿中,于12h、24h和48h后测定T24细胞的细胞活力（MTT法）和细胞凋亡率（流式细胞术）。动物实验建立T24细胞小鼠皮下移植膀胱肿瘤模型,30只小鼠随机分为生理盐水组、环磷酰胺组和SEB组（10、50、250μg／kg）,检测各组肿瘤重量、抑瘤率,测定血浆和肿瘤TNF—α和IFN-γ水平（ELISA法）。结果NK细胞经过SEB处理后,T24细胞活力显著降低,凋亡率升高,具有显著的时间和剂量效应。SEB组肿瘤重量明显低于生理盐水组,抑瘤率接近环磷酰胺组,具有时间和剂量效应。血浆和肿瘤TNF—α和IFN-γ水平均高于其余两组。结论SEB可通过NK细胞作用及相关细胞因子等显著抑制T24细胞的体外活力及在体生长。     

超抗原SEA联合树突状细胞诱导特异性抗膀胱肿瘤研究

目的 观察超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)联合树突状细胞(Dc)诱导CTL对膀胱肿瘤高效特异性的免疫杀伤作用和对肿瘤局部免疫提呈功能的改善情况.方法 用GM-CSF和IL-4联合刺激诱导外周血单个核细胞分化为DC.将Dc与同源淋巴细胞(DC-L组)、超抗原SEA淋巴细胞(DC-SEA-L组)共培养,用FCS分析DC供刺激分子表型,酶联免疫吸附测定法检测细胞因子IL-2,MTT法测定激活的CTL对膀胱癌E-J细胞的体外杀伤效应.结果 在体外,DCSEA-L对膀胱癌细胞具有相对特异的杀伤作用,SEA-L和Dc-L则无明显特异性.结论 SEA和Dc联合应用可诱导产生高效并具有相对特异性的抗膀胱癌效应,并改善膀胱癌组织局部的DC抗原提呈功能.     

重组人生长激素在体外对人胃癌细胞株BGC823作用的研究

目的　研究重组人生长激素 (rhGH)对人胃癌细胞生长的影响。方法　利用体外细胞培养测定不同浓度的rhGH对人胃癌细胞株BGC82 3的生长曲线、细胞抑制率和细胞倍增时间的影响。结果　rhGH在体外无明显促进BGC82 3细胞分裂增殖 ,rhGH组与对照组、rhGH +L OHP组与L OHP组比较差异均无显著意义 (P >0 0 5 ) ,且生长曲线没有升高 ;rhGH +L OHP组与对照组比较细胞抑制率为 6 3 2 %和 5 0 8% (P <0 0 1) ,细胞倍增时间为 82 5h和 39 6h(P <0 0 1) ;或rhGH+L OHP组与对应的rhGH组配对比较 ,细胞抑制率为 6 3 2 %和 1 7% (P <0 0 1) ,细胞倍增时间为82 5h和 37 2h(P <0 0 1)。结论　rhGH在体外无明显促进胃癌细胞的分裂增殖 ,与抗肿瘤药合用可提高抗肿瘤药的疗效。     

SEA-Fab''偶联蛋白对胃癌的抑制作用及其机制

目的　研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素SEA Fab’偶联蛋白对体内肿瘤的抑瘤效果及作用机制。方法　取 60只大鼠 ,采用Walker2 5 6细胞株皮下接种建立转移性大鼠胃癌模型 ,用化学方法重组制成SEA Fab’偶联蛋白。分别用SEA Fab’和SEA作用于大鼠胃癌模型 ,对照组注射生理盐水 ,观察肿瘤的发生率及肿瘤的重量。并用免疫组织化学方法探讨其发生机制。结果SEA Fab’组、超抗原SEA组和生理盐水组处理大鼠肿瘤的重量分别为 ( 3 .64± 0 .5 3 ) g、( 0 .78±0 .2 6)g、( 0 .49± 0 .17) g。和生理盐水组比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。SEA Fab’组和超抗原SEA组差异也有显著性 (P <0 .0 5 )。SEA Fab’处理大鼠肿瘤组织有较多的CD4+ T细胞和CD8+ T细胞侵润 ,阳性细胞的百分比高于SEA组和对照组。结论　SEA Fab’偶联蛋白对大鼠胃癌细胞有明显抑瘤效果 ,其作用机制可能为偶联蛋白与肿瘤细胞单向而牢固的抗原抗体特异性的结合 ,有效地将T细胞导向胃癌细胞使之溶解。     

双调控溶瘤腺病毒介导超抗原SEA基因靶向膀胱肿瘤表达

目的 构建携带SEA基因的选择性增殖腺病毒,体外实验观察SEA基因的表达及其刺激淋巴细胞对肿瘤的杀伤功能.方法 构建一种由端粒酶(hTERT)和缺氧反应元件(HIF)双重启动的携带SEA的选择性增殖腺病毒,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测SEA在肿瘤细胞内mRNA表达,免疫荧光定位SEA表达于肿瘤细胞,Western blot测定蛋白表达,显微镜下动态观测淋巴细胞与肿瘤细胞共培养.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素(IL)-4分泌.结果 琼脂糖电泳252 bp处可见清晰条带;免疫荧光及Western blot用考马斯亮蓝染色显示在27 kDa附近可见蛋白清晰表达;淋巴细胞与肿瘤细胞共培养12、24、48 h实验组肿瘤细胞明显少于对照组,ELISA检测IL-4分泌量实验组均高于对照组(t=2.585 P＜0.05).结论 携带SEA基因的选择性腺病毒成功构建并表达目的基因,证明对肿瘤细胞的杀伤作用.     

葡萄球菌肠毒素A对肝癌肿瘤浸润淋巴细胞抗瘤活性的作用

目的探讨葡萄球菌肠毒素A(SEA)对肝癌肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)抗瘤活性的诱导作用。方法取5例手术切除肝癌标本,分离TIL,在SEA作用下进行培养。定时记数,了解其增殖情况。流式细胞仪检测其CD3、CD4、CD8表达情况,噻唑蓝(MTT)比色法测定其对HepG-2肝癌细胞株的细胞毒活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α和γ-干扰素(IFN-γ)浓度。结果在SEA刺激下,2周TIL扩增100倍。1周后CD3+细胞占95%以上,CD8+细胞较CD4+细胞增殖更迅速。TIL细胞毒活性随培养逐渐增强。在培养的前10d内,TIL产生大量的TNF-α峰值达(453.70±9.26)ng/L和IFN-γ,其峰值达(2013.22±20.41)ng/L。结论SEA可高效、迅速诱导肝癌TIL的抗瘤活性。     

超抗原SEA靶向治疗肿瘤途径的研究进展

超抗原具有强大的免疫活化作用,极低浓度即可激活大量淋巴细胞克隆.SEA是目前研究最广泛的超抗原家族之一,但单用SEA有明显的毒副作用,联合单克隆抗体治疗时单克隆抗体制备又困难,导向定位也不理想.随着肿瘤基因治疗的快速发展,研究发现采用PCR技术扩增出SEA 基因片段,借助基因载体转染肿瘤细胞,能提升SEA治疗肿瘤的靶向...     

双镜联合手术治疗胃间质瘤39例

目的：探讨腹腔镜联合胃镜（双镜联合）手术治疗胃间质瘤的临床方法及效果。方法：胃间质瘤患者39例,瘤体直径1.0～4.5cm,平均（2.5±0.5）cm,均采用双镜联合方法手术切除。手术过程：胃镜下确定胃间质瘤的位置、大小,评估切除可能性及方法,腹腔镜下切除肿瘤,闭合切口,取出肿瘤,完成手术。术后接受免疫组织化学检查和肿瘤生物学风险评估,随访复发或转移情况。结果：1例因瘤体过大予以中转开放手术。余38例手术时间35～125min,平均（75±25）min。术中出血10～50mL,平均（25±10）mL;胃管留置时间0～24h,肠道功能恢复时间12～36h,绝对卧床12～24h,术后72～96h恢复流质饮食,术后平均住院5～7d。免疫组织化学结果：CD117阳性36例（92.3%）、CD34阳性32例（82.0%）;肿瘤生物学风险分级：极低危27例,低危10例,中危2例,高危0例。随访1～42个月,未发现种植或转移。结论：双镜联合手术治疗胃间质瘤具有快速定位、优化手术流程、术时短、创伤小、恢复快、安全有效等优点,适合于直径〈5cm、术中仅靠腹腔镜难以定位的瘤灶。手术对瘤体定位、手术组成员配合要求较高,需要富有经验的医师操作。