从感染小鼠获得微小隐孢子虫卵囊方法的改进

目的　建立从感染C5 7BL/ 6N小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法。方法　在饮水中添加不同浓度的地塞米松对人工感染小鼠进行免疫抑制 ,探讨获得最多卵囊数的药物添加量 ;比较不同纯化方法得到的卵囊回收率和纯度 ;探讨来自不同动物、不同纯化方法的卵囊在牛输卵管上皮细胞培养系统的感染情况。结果　地塞米松加入量为 2 0 μg/ml的第 3组获得的卵囊量高达 4 .16× 10 9/ 30个小鼠 ;用饱和盐水漂浮法与用蔗糖密度梯度离心法纯化得到的卵囊具有相同的回收率和纯度 ;从感染小鼠与犊牛中获得的卵囊在感染性上差异不显著。结论　成功地建立了从感染小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法 ,具有简单、方便、快速等优点 ,并且不影响活力。     

液氮保存微小隐孢子虫卵囊对小鼠感染力的研究

目的 观察两种不同保存方法 对微小隐孢子虫卵囊感染小鼠能力的影响.方法 用PBS稀释纯化的卵囊,加入二甲基亚砜(DMSO),置-40℃ 3h后,放入液氮中保存;或加入2.5%重铬酸钾中,4℃保存.3个月后取出,观察它们的脱囊率;分别感染用地塞米松免疫抑制后的BALB/c小鼠,计数卵囊排出量,计算平均每克粪便中的卵囊数目,同时记录两组小鼠的死亡时间.分别采用t检验和成组设计的两样本秩和检验进行统计学分析.结果液氮中保存3个月的卵囊能够感染免疫抑制的BALB/c小鼠,其脱囊率为7.2%～49.6%、卵囊排出量为(4.7～7.3)×10~5/g,接种后实验小鼠死亡时间为124～351 h,与4℃保存的卵囊差别无统计学意义[8.3%～51.2%,(4.6～6.9)×10~5/g,132～348 h,P均>0.05)].结论 液氮中保存3个月的卵囊与4℃保存的卵囊对免疫抑制的小鼠具有同样的感染力,突破了微小隐孢子虫卵囊只能在4℃保存的传统观念,为隐孢子虫卵囊的长期保存提供了理论和实践依据.     

3种微小隐孢子虫卵囊检测方法的比较研究

目的比较3种方法检测鼠粪中微小隐孢子虫卵囊的效果。方法应用改良抗酸染色法(MAFS)、免疫荧光单克隆抗体(IFA-McAb)检测法和PCR检测法分别对含有不同数量隐孢子虫卵囊的鼠粪样品、隐孢子虫病模型小鼠的粪样品和奶牛粪样品进行检测。结果MAFS检测法I、FA-McAb检测法和PCR检测法的检测域值分别为10 g鼠粪中含有隐孢子虫卵囊2.0×104、2.0×104、2.0×102个,操作用时分别为35 min6、0 min3、h,检测鼠粪样品的阳性率分别为65.00%、70.00%、85.00%,检测牛粪样品的阳性率分别为21.21%、18.18%、27.27%。3种方法的阳性率差异无显著性(P>0.05)。结论MAFS检测法简单、快速,费用低,试验条件要求不高,适合对大量样品的检测和流行病学调查;IFA-McAb检测法、PCR检测法更适合用于隐孢子虫的鉴定。     

隐孢子虫卵囊纯化方法的改进研究

用蒸馏水代替PBS稀释Sheather's蔗糖溶液,并测定不同稀释度的蔗糖溶液密度,使用不同密度的蔗糖溶液分离纯化安氏隐孢子虫、贝氏隐孢子虫和猪隐孢子虫卵囊,计算纯化后的卵囊回收率和卵囊活性。安氏隐孢子虫、贝氏隐孢子虫和猪隐孢子虫卵囊纯化后的总回收率分别为47.5%、49.6%和41.7%;孔雀绿染色活性检测的活性率分别为97.9%、96.7%和95.1%;37℃水浴1h后的脱囊率分别为87.9%、80.0%和81.7%。     

上海地区爬行类及两栖类动物隐孢子虫感染调查

目的了解上海地区的蛇,蜥蜴,蟾蜍,龟等部分爬行类动物及两栖类动物感染隐孢子虫情况。方法饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法检测隐孢子虫卵囊。结果改良抗酸染色法检测31条野生蛇,隐孢子虫感染率为45.2%(14/31);改良抗酸染色法检测44份粪样总感染率为13.6%(6/44),蜥蜴感染率为30%(3/9),乌龟感染率为100%(1/1),巨龟感染率为100%(1/1),蟒蛇感染率为25%(1/4);而饱和蔗糖溶液漂浮法检测,仅发现2份蜥蜴样品感染,感染率为22.2%(2/9)。结论本调查表明,来自野外蛇的隐孢子虫感染率要显著高于动物园驯养的爬行动物,对喜食野生蛇类的陋习提出了严重的警示。     

从鼠粪中分离纯化微小隐孢子虫卵囊方法的研究

目的 探索一种实用、纯度和回收率高且卵囊活力强的分离纯化微小隐孢子虫卵囊的方法。 方法 分别采用经典的不连续蔗糖密度梯度离心法、改良饱和盐水漂浮法、氯化铯（CsCl）密度梯度离心法和Percoll密度梯度离心法分离纯化C57BL/6小鼠粪中隐孢子虫卵囊。并将4种方法分离纯化获得的卵囊各10⁵体外感染牛输卵管上皮细胞（BFTE）， 48 h和72 h后油镜下观察各分离法卵囊的发育情况，以比较卵囊的纯度和活性。 结果 经典的不连续蔗糖密度梯度离心法分离获得的卵囊数[（2.86±0.08）×10⁷］与改良饱和盐水漂浮法[（2.88±0.15）×10⁷］无明显差异（P>0.05）， 但高于Percoll密度梯度离心法[（1.52±0.08）×10⁷］（P<0.01）和CsCl密度梯度离心法[（2.46±0.13）×10⁷］（P<0.05）。4种方法分离纯化的卵囊体外感染BFTE 48 h和72 h后隐孢子虫数无明显差异（P>0.05）。但CsCl密度梯度离心法纯化的隐孢子虫卵囊纯度明显高于不连续蔗糖密度梯度离心法。 结论 改良饱和盐水漂浮法较经典的不连续蔗糖密度梯度离心法操作简单、快速；CsCl密度梯度离心法分离的隐孢子虫卵囊纯度较高。     

隐孢子虫感染小鼠动物模型

目的建立隐孢子虫感染小鼠动物模型,为药物筛选和分子生物学研究奠定基础。方法饮水中添加地塞米松(DEX)抑制鼠免疫功能,5d后经口灌喂隐孢子虫卵囊感染小鼠。比较粪便中排卵囊量和小鼠生存情况,从不同品系小鼠(KM、BALB/c)、不同鼠龄(乳鼠断乳2d、56周、1012周)、不同免疫抑制剂量(0,2.5,5,7.5,10,12.5mg/L)、不同卵囊接种量(75,1.5×102,1.5×103,1.5×104,3.0×104)及不同保存时间(1,2,6,8个月)等影响小鼠感染的因素中,选出最佳条件,建立稳定的隐孢子虫感染小鼠动物模型。结果(1)KM、BALB/c两种小鼠都能感染微小隐孢子虫,BALB/c组小鼠开始死亡的时间比KM组的早,BALB/c组收集的卵囊数比KM组的少;(2)乳鼠组小鼠排卵囊的数量总体大于其他年龄段小鼠,但是其生存时间较短;(3)7.5,10mg/LDEX剂量组排卵囊数量较多,且持续整个实验期,低于此剂量组小鼠排卵囊数量少,多于此剂量组易死亡;(4)接种75个以上微小隐孢子虫卵囊均能使小鼠感染;(5)保存1,2,6,8个月的微小隐孢子虫卵囊均能感染小鼠。结论采用56周龄的KM雌性鼠,在饮水中添加7.5～10mg/LDEX,接种75个以上保存时间在8个月内的微小隐孢子虫卵囊可以建立较稳定的感染模型。     

微小隐孢子虫抗原的研究进展

隐孢子虫病是世界最常见的 6种腹泻病之一。其中 ,引起人类腹泻的主要是微小隐孢子虫。近十年来隐孢子虫病的暴发流行引起人们对这一原虫的关注 ,有关隐孢子虫病的免疫学以及分子生物学方面的研究也得到了蓬勃开展。该文对引起人类腹泻的微小隐孢子虫的抗原进行了综述。     

微小隐孢子虫研究进展

隐孢子虫是一种重要的机会性致病原虫.微小隐孢子虫是隐孢子虫属中研究最广泛的一个种.由于历史的原因,微小隐孢子虫的概念和范围一直很模糊.该文从微小隐孢子虫的概念、分类史、基因亚型、流行病学等几个方面对微小隐孢子虫研究进展进行综述.     

隐孢子虫感染小鼠动物模型的建立

目的 建立免疫抑制小鼠的隐孢子虫感染模型。方法 饮水中加地塞米松（DEX）抑制4周龄小鼠免疫功能，人工灌喂隐孢子虫卵囊（CSO）感染小鼠。通过观察小鼠粪便中CSO排出情况和小鼠生存情况，比较5个品系小鼠（BALB／c,C57,ICR,NIH,KM)的易感性，比较不同DEX剂量（1mg/L,2.5mg/L,5mg/L,5mg/L,10mg/L)对小鼠免疫功能的影响，比较不同CSO接种剂量（10^5,10^6)对小鼠感染的影响，从而确定适宜的模型小鼠，DEX剂量和CSO接种剂量，建立小鼠感染模型。结果 （1）5个品系小鼠中KM鼠的CSO排出量最多，而且持续整个实验期，小鼠死亡数较少（NIH鼠全部死亡）；（2）10mg/L，5mg/L DEX组小鼠CSO排出量较多，2．5mg/L，1mg/L组小鼠死亡数少，但卵囊排出量明显低于前两组，且不能持续整个实验组；（3）10^5与10^6个CSO接种量的小鼠CSO排出量没有明显差别，但前者的小鼠死亡数较少。结论 KM鼠饮水中加入DEX5mg/L，每只小鼠接种10^5个CSO，可以建立稳定的感染模型。     

隐孢子虫卵囊分离纯化方法的比较研究

本文对分离纯化隐孢子虫卵囊的四种方法进行了比较研究,结果显示硫酸锌漂浮—耐酸滤过漏斗法具有操作简便、经济、纯化效果好等优点。适合国内普通实验室使用。     

Effect of the mixed-oxidant solution on infectivity of Cryptosporidium parvum oocysts in a neonatal mouse model

Cryptosporidium parvum oocysts were exposed to the mixed-oxidant solution, which was electrochemically generated by Miox Water Disinfection Unit, and sodium hypochlorite in phosphate buffered saline (PBS, pH 7.2) or biologically treated wastewater at 25 degrees by using concentrations of residual chlorine of up to 5 mg/l and contact times of up to 8 h. The effect of two disinfectants on infectivity of the oocysts in a neonatal murine model was comparatively evaluated by determining the total number of oocysts recovered from the intestine. Exposure to the mixed-oxidant solution at 2 and 5 mg/l (residual chlorine) yielded a significant inactivation of infectivity in the dose- and exposure time-dependent manner, while exposure to 5 mg/l (residual chlorine) of sodium hypochlorite for contact times of up to 4 h produced no measurable inactivation of infectivity. Morphological examination also revealed a picture of degenerating oocysts after exposure to 5 mg/l (residual chlorine) of the mixed-oxidant solution, but not with sodium hypochlorite. When the oocysts were exposed to either biologically treated wastewater--or PBS-diluted the mixed-oxidant solution at 5 mg/l (residual chlorine) for 4 h, the disinfectants produced a significant inactivation of infectious oocysts. The decrease number of the oocysts was 0.8 log 10 in the former and 2.1 log 10 in the latter. These results demonstrate that the mixed-oxidant solution may be a useful disinfectant against Cryptosporidium oocysts, but appropriate applications need to be validated.     

不同条件对隐孢子虫卵囊体外脱囊的影响

目的分析隐孢子虫在体外不同条件下的脱囊率,以用于隐孢子虫体外培养及免疫学研究。方法以安氏隐孢子虫卵囊为模型,研究比较卵囊保存方法及时间、卵囊脱囊前处理过程、脱囊温度及时间、脱囊液选择等因素对隐孢子虫卵囊脱囊率的影响。结果0.5%次氯酸钠处理可提高卵囊脱囊率,但与未处理组相比差异不显著(P0.05)。0.75%胆酸盐和0.1%胆汁溶液均可以促进卵囊脱囊,与仅仅使用0.25%胰酶或不使用任何脱囊液组相比差异显著(P0.05)。卵囊在酸性条件下(pH=3)脱囊率略高于中性条件(pH=7.2),差异不显著(P0.05),但均显著高于碱性条件(pH=9)(P0.01)。卵囊脱囊对温度极敏感,24℃水浴卵囊脱囊率极低,显著低于37℃水浴(P0.01),且37℃条件下卵囊脱囊率随脱囊时间而升高。结论温度、酸碱度、脱囊液是影响隐孢子虫卵囊脱囊率的重要因素,采用先将纯化后的卵囊置于0.5%次氯酸钠溶液4℃作用10min,然后在0.75%胆酸盐溶液中37℃孵育3h,可以得到较高的卵囊脱囊率。     

Efficacy of the solar water disinfection method in turbid waters experimentally contaminated with Cryptosporidium parvum oocysts under real field conditions

Objective  To investigate the efficacy of the solar water disinfection (SODIS) method for inactivating Cryptosporidium parvum oocysts in turbid waters using 1.5 l polyethylene terephthalate (PET) bottles under natural sunlight.
Methods  All experiments were performed at the Plataforma Solar de Almería, located in the Tabernas Desert (Southern Spain) in July and October 2007. Turbid water samples [5, 100 and 300 nephelometric turbidity units (NTU)] were prepared by addition of red soil to distilled water, and then spiked with purified C. parvum oocysts. PET bottles containing the contaminated turbid waters were exposed to full sunlight for 4, 8 and 12 h. The samples were then concentrated by filtration and the oocyst viability was determined by inclusion/exclusion of the fluorogenic vital dye propidium iodide.
Results  After an exposure time of 12 h (cumulative global dose of 28.28 MJ/m²; cumulative UV dose of 1037.06 kJ/m²) the oocyst viabilities were 11.54%, 25.96%, 41.50% and 52.80% for turbidity levels of 0, 5, 100 and 300 NTU, respectively, being significantly lower than the viability of the initial isolate ( P  <   0.01).
Conclusions  SODIS method significantly reduced the potential viability of C. parvum oocysts on increasing the percentage of oocysts that took up the dye PI (indicator of cell wall integrity), although longer exposure periods appear to be required than those established for the bacterial pathogens usually tested in SODIS assays.     

生菜污染隐孢子虫卵囊洗脱与巢式PCR检测方法的研究

目的 比较生菜表面污染隐孢子虫卵囊的洗脱与检测方法。方法 对生菜表面人工“种植”的隐孢子虫卵囊的洗脱次数、振荡方式、振荡频率、振荡时间、洗脱液种类等进行比较,以及3种商业化DNA提取试剂盒提取水溶液中隐孢子虫卵囊DNA的效果进行比较。结果 采取往返振荡,振荡频率为100次/min,振荡时间为1 h,洗脱液采用1% Alconox^○R时,其总体回收率最高,达71.40%。不同DNA试剂盒比较显示,土壤DNA提取试剂盒与粪便DNA提取试剂盒较组织DNA提取试剂盒提取水溶液中隐孢子虫卵囊DNA的质与量均高。结论 本研究建立了巢式PCR检测生菜表面微小隐孢子虫卵囊的检测方法,为蔬菜的食品安全提供新的技术方法。     

低剂量隐孢子虫感染正常和免疫抑制小鼠的效应研究

目的 研究低剂量隐孢子虫感染正常和免疫抑制小鼠的相关效应指标，了解低剂量隐孢子虫感染的风险及相关效应。方法 采用地塞米松作为免疫抑制剂，建立小鼠的免疫抑制模型，再给予不同剂量的隐孢子虫攻击，比较不同的效应指标。结果 免疫抑制组小鼠脾重指数、胸腺指数与对照组比较差异有显著性（P〈0．05）。免疫抑制小鼠IgG、IgM含量与对照组比较差异亦有显著性（P〈0．05）。免疫抑制情况下粪便白细胞计数与相应的对照组比较，50、100、500个卵囊剂量组之间差异均有显著性（P〈0．05）。免疫抑制组与对照组的腹泻发生率，500个剂量组差异有显著性（P〈0．05）。将剂量对数和腹泻发生率作回归分析，免疫抑制和对照组的剂量对数和腹泻发生率呈现较好的线性关系（P〈0．05）。结论 较低剂量（10～50个卵囊）的隐孢子虫即可引起小鼠感染并出现腹泻症状，且出现粪便白细胞排出增加。在较低剂量条件下，免疫抑制小鼠粪便白细胞、腹泻发生率均高于相应的对照组，且潜伏期缩短，免疫抑制小鼠感染低剂量隐孢子虫发病的风险更大。     

幽门螺杆菌感染Beagle犬动物模型研究

目的　建立幽门螺杆菌感染Beagle犬动物模型 ,为研究幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)感染的临床治疗及预防提供实验基础。方法　对Beagle犬口服灌喂Hp液体培养悬液 ,通过胃镜观察其胃部组织病理改变 ,酶试验、组织培养、粪便PCR、血清及唾液中抗体和RT PCR法检测脾脏中淋巴细胞细胞因子含量等方法对Hp感染Beagle犬情况进行分析。 结果　Beagle犬感染Hp数月后胃部组织仍有病理改变 ;组织培养、酶试验、粪便PCR及抗体、细胞因子检测均阳性。 结论　Hp可以长时间定植于Beagle犬体内并引起相应的病理改变 ,其可以作为Hp感染动物模型进行相关实验研究。     

Observations on the electrocardiographic changes associated with subarachnoid hemorrhage with special reference to their genesis.

A 36 year old man presented with bizarre behavior and had abnormal electrocardiograms on two occasions. Because of ST-T wave changes, he was treated both times for a possible subendocardial infarction. A more complete evaluation during the second admission revealed a basilar artery aneurysm with subarachnoid hemorrhage as the cause of the central nervous system symptoms. While the aneurysm was successfully clipped, the patient's electrocardiogram was recorded. Several electrocardiographic changes characteristic of intracranial disease were observed during the procedure. These changes developed with distortion of the circle of Willis and reverted when such distortion stopped. We review the spectrum of the electrocardiographic changes associated with intracranial disease. This list of abnormalities was compiled from observations obtained by the impatient tracings of persons with various central nervous system pathology. The mechanisms used to explain the changes are based solely on work performed on laboratory animals. The results of our findings in our patient link electrocardiographic abnormalities directly with a central nervous system lesion.