组蛋白去乙酰化酶抑制剂提高腺病毒对K562细胞转染及杀伤效率的研究

 目的　研究通过观察组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase,HDAC）抑制剂曲古抑菌素A（trichostatin A,TSA）对人类白血病细胞系K562 CAR表达水平的影响,并探讨HDAC抑制剂在以腺病毒为载体的基因治疗中的应用价值。方法　在mRNA和蛋白水平检测TSA处理K562细胞前后CAR的表达情况,采用流式细胞术测定病毒的转染效率,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测腺病毒及其携带的基因的体外抗瘤效应。结果　TSA处理后,K562细胞CAR 的mRNA 和蛋白表达明显增高;流式细胞仪分析ADV-GFP转染K562 后GFP的表达发现：未处理组的转染率为（8.74±0.34）％,1、10 和100 nmol／L TSA处理细胞48 h后的转染率分别为（12.26±0.55）％、（20.83±1.22）％和（28.66±0.43）％。未处理组与处理组间及各处理组间转染效率的差异有统计学意义（P＜0.05）。MTT结果表明腺病毒M1介导的体外杀伤效应TSA处理组比未处理组增强（P＜0.05）,TSA各处理组间的体外杀伤效应随TSA浓度的提高而增强（P＜0.05）。结论　低浓度的TSA可以增强腺病毒对K562细胞的感染及杀伤效率,可以提高以腺病毒为载体的血液肿瘤基因治疗的疗效。     

RNA干扰技术逆转神经胶质瘤细胞多药耐药性

目的 探讨利用RNA干扰（RNAi）技术逆转神经胶质瘤细胞多药耐药性。方法 根据多药耐药基因1（MDR1）的碱基序列设计并合成短发夹RNA（shRNA）,构建逆转录病毒质粒载体,用阳离子脂质体法体外转染BT325细胞株,以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）表达作为对照。采用定量PCR、Northern blot检测转染前后MDR1 mRNA的表达,Western blot检测蛋白表达;使用CCK-8试剂盒对转染后的细胞进行化疗药物敏感性试验,评价RNAi对多药耐药性的逆转作用。结果 成功构建RNAi质粒载体。共转染实验组RT-PCR定量MDR1 mRNA相对表达水平均有所下降（P〈0．05）;Northern blot表明,转染48h细胞干扰最强;Western blot显示,siRNA各转染组P-糖蛋白（P-gp）的表达分别降低12．9％、30．3％和4．8％,在48h抑制最强;而药物敏感试验显示,转染siRNA后细胞对药物的敏感性明显增强。结论 RNAi能够明显抑制神经胶质瘤细胞系MDR1 mRNA和P-gp蛋白的表达,进而对多药耐药性发挥明显的逆转作用,为基因治疗提供了一种新的手段。     

CX43腺病毒表达载体的构建及其在人胃癌BGC-823细胞系的表达

目的:构建并鉴定CX43-IRES2-EGFP的重组腺病毒小质粒表达载体,观察其在人胃癌BGC-823细胞系中的表达。方法:将目的基因CX43片段与IRES2-EGFP进行PCR拼接,重组到腺病毒穿梭载体pAd/CMV/V5-DEST上,构建成腺病毒表达载体pAd-CX43-IRES2-EGFP;经酶切后转染293A细胞进行包装,测定滴度;重组病毒转染人胃癌BGC-823细胞后,通过RT-PCR检测耐药基因MDR的变化,Westernblot检测CX43超表达。结果:经测序验证,腺病毒载体pAd-CX43-IRES2-EGFP构建成功。pAd-CX43-IRES2-EGFP病毒的滴度为:2.8×106ifu/ml。转染人胃癌BGC-823细胞后经Western blot检测到CX43蛋白超表达,耐药基因MDR受到抑制。结论:成功构建腺病毒载体pAd-CX43-IRES2-EGFP高效体外转染表达体系,检测其对人胃癌BGC-823细胞系具有超表达CX43和抑制耐药基因MDR的作用,为CX43基因转染的研究及基于CX43为靶标的基因药物筛选平台的奠定了基础。     

shRNA沉默多药耐药胃癌细胞7901/VCR MDR1基因表达的实验研究

目的利用RNAi技术干扰胃癌多药耐药细胞（7901/VCR）多药耐药基因（MDR1）的表达,为临床肿瘤的基因治疗奠定基础。方法根据MDR1的碱基序列设计并合成两对短发夹RNA,构建重组载体,用阳离子脂质体法体外转染7901/VCR;采用MTT法检测转染胃癌细胞的生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期变化,RT-PCR和Western blot检测转染前后MDR1 mRNA和蛋白表达的变化。结果成功构建RNAi质粒载体,转染后细胞IC50明显降低（P〈0.05）;G1期细胞增加,S期细胞减少（P〈0.05）;MDR1 mRNA转录水平下降（P〈0.05）,P-糖蛋白（P-gp）的表达水平降低（P〈0.05）。结论RNAi能明显抑制胃癌细胞7901/VCR MDR1mRNA和P-gp蛋白的表达,进而对肿瘤细胞多药耐药性有明显的逆转作用,为基因治疗提供了一种新的手段。     

稳定转染HBx基因的HepG2细胞对raf-1表达的影响

 【摘要】　目的　探讨乙型肝炎病毒x（HBx）蛋白致癌变的分子机制。方法　构建HBx 基因真核表达载体pCDNA3.1(+)-x，脂质体转染入HepG2 细胞（HepG2X 细胞），以pCDNA3.1空载体为对照（HepG2X0细胞），G418选择培养，克隆扩增转染细胞，并用Western blot检测X蛋白的表达；MTS实验检测细胞增生情况；流式细胞仪检测细胞周期变化；检测转染组及对照组raf-1的表达变化。结果　转染组X细胞在相对分子质量为21×103位置有X蛋白的表达，而对照组HepG2X0细胞及未处理的HepG2细胞未见X蛋白的表达。MTS结果显示X细胞增生能力显著高于其他两株细胞（P＜0.01）。流式细胞仪结果显示转染后的细胞系凋亡率增高，G1／G0期细胞减少，G2期细胞增多。Western blot结果示转染组X细胞raf-1表达明显较其他两组细胞增高。结论　HBx 有推进细胞周期的作用，使细胞快速进入G2期。其机制可能是HBx增加细胞周期蛋白raf-1的表达。     

腺病毒介导的抗MDR1核酶基因转移联合化疗药物治疗恶性淋巴瘤的研究

目的：探讨腺病毒介导的抗MDR1核酶基因转移在体内外逆转肿瘤细胞中P－糖蛋白（P－gp）介导的多重耐药性（MDR）的作用。方法：构建并纯化制备了含有抗MDR1核酶基因的腺病毒Ad-196MDR1-Rz。在体外,用该重组腺病毒转导具有P－gp介导的、MDR特性的人淋巴瘤细胞株Daudi/MDR20,并分别用RT－PCR、FACS分析和MTT法测定核酶基因转导对Daudi/MDR20细胞MDR1 mRNA和膜表面P－gp表达的影响及对长春新碱（VCR）敏感性的改变;在体内,通过局部注入重组腺病毒联合VCR全身化疗,对接种Daudi/MDR20细胞的SCID小鼠进行治疗观察。结果：在感染Ad-196MDR1-Rz后,Daudi/MDR20细胞MDR1 mRNA的表达被阻断,细胞膜表面P-gp表达水平显著降低,细胞对VCR的敏感性增加。在接种Daudi/MDR20细胞后,采用Ad-196MDR1-Rz联合VCR化疗的治疗组小鼠有66．7％（6／9）未发生肿瘤,存活时间超过120d;而采用空载腺病毒联合VCR化疗或单纯VCR化疗的对照组小鼠,其长期存活率分别为12．5％（1／8）和0（0／9）,两组差异有极显著性。结论：Ad-196MDR1-Rz能有效阻断Daudi/MDR20细胞膜表面P－gp表达,并恢复肿瘤细胞对VCR的敏感性。体内联合VCR化疗能有效抑制肿瘤的发生。     

IL-27基因转染对树突状细胞表型和功能的影响

目的 探讨转染IL-27基因体外对人外周血单个核细胞来源树突状细胞表型和功能的影响。方法 采集健康成人外周血,密度梯度离心法获得外周血单个核细胞,用GM-CSF、IL-4诱导树突状细胞（Dendritic cell, DC）,第5天后将DC分为3组：IL-27基因转染组、TNF-α组和阴性对照组。倒置显微镜观察DC形态;流式细胞术检测DC表面分子CD1a、CD80、CD83和CD86的表达情况;MTT法检测DC刺激T细胞增殖的能力;ELISA法检测细胞培养上清中IL-12和IFN-γ的含量。结果 转染IL-27基因后外周血单个核细胞来源DC呈现典型的成熟DC形态学特征。IL 27基因转染组DC表面CD1a、CD80、CD83和CD86表达水平较阴性对照组均明显上调（P<0.05）。IL-27基因转染组DC诱导T细胞增殖的能力较对照组DC明显增高（P<0.05）。IL-27基因转染组DC培养上清中IL-12和IFN-γ的含量均明显高于对照组DC（P<0.01）。结论 转染IL-27基因可以上调成熟DC的细胞表型,增强DC的免疫学活性。     

MDR1及MDR3短发夹RNA逆转乳腺癌细胞阿霉素耐药的实验研究

目的 研究靶向多药耐药(MDR)1及MDR3基因的短发夹RNA(shRNA)在逆转人乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/Adr耐药中的作用.方法 真核质粒介导的针对MDR1及MDR3基因的shRNA转染细胞,空载体转染作为对照.Annexin-Ⅴ和PI双标法、流式细胞术、四甲基偶氮唑蓝(MTT)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化分别检测细胞凋亡、细胞内阿霉素蓄积、细胞增殖活性及对阿霉素的IC50、MDR1及MDR3 mRNA及P-糖蛋白(P-gp)表达.结果 转染后,MDR1组及MDR3组MCF-7/Adr细胞凋亡率分别为30.21%±1.65%和22.07%±2.17%,与未转染组和空载体转染组比较差异有统计学意义(P＜0.01);MCF-7/Adr细胞内的阿霉素积聚浓度显著增加;MCF-7/Adr细胞存活率显著下降,MCF-7/Adr细胞对阿霉素IC50显著降低;相对于空载体转染组,MCF-7/Adr细胞中MDR1和MDR3 mRNA最高分别下降89.5%±0.8%和85.1%±1.2%,mRNA下降水平与孵育时间有关;P-gp表达明显降低,与未转染组和空载体转染组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 shRNA可特异性地沉默MDR1及MDR3基因的表达,逆转P-gp介导的乳腺癌细胞阿霉素耐药,而MDR1的这种作用更为显著.     

Af116609基因对胃癌细胞系SGC7901/VCR耐药性的影响

目的 研究Af116609基因转染胃癌耐药细胞系SGC7901／VCR后,对胃癌细胞耐药性的影响。方法 采用RT-PCR法克隆Af116609基因,用Northern blot检测其差异表达,以基因转染技术调节其表达,通过体外药敏实验观察其对胃癌耐药表型的影响。结果 从胃癌耐药细胞SGC7901／VCR中克隆到Af116609基因的CDS序列327bp,该序列与GenBank登录的一致。Northern blot结果显示,该基因在耐药细胞高表达。体外药敏实验发现,转染正义真核表达载体的药敏细胞中该基因上调,对长春新碱、5-氟脲嘧啶和阿糖胞苷的耐药性增加,而对阿霉素的抗性有损害,对氨甲喋呤的抗性无明显影响;转染反义真核表达载体的耐药细胞中该基因下调,对上述5种药物的抗性均减弱。结论 Af116609基因与胃癌MDR表型相关,可作为逆转胃癌MDR的候选靶分子。     

HDAC抑制剂TSA增强卵巢癌细胞株A2780对腺病毒基因转染效率的体外研究

背景与目的:腺病毒感染依赖于靶细胞表面柯萨奇-腺病毒受体(Coxsackie and adenovirus receptor,CAR)的表达,肿瘤细胞CAR表达的缺失和下调是造成腺病毒为载体基因治疗效果不佳的根本原因。本研究通过观察组氨酸去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂TrichostatinA(TSA)对卵巢癌细胞株A2780CAR表达水平的影响,探讨HDAC抑制剂在腺病毒载体基因治疗中应用的可能性。方法:分别在TSA作用A2780细胞前后检测CARmRNA和蛋白水平的表达,同时采用流式细胞术测定病毒转染效率,MTT实验评价腺病毒携带的胸苷激酶(ADV/TK)的体外抗瘤效应。结果:TSA处理后,A2780细胞内CARmRNA和蛋白表达明显增高。通过流式细胞仪分析GFP/ADV转染后GFP的表达发现,未处理组细胞转染率为(1.24±0.14)%;5nmol/L和100nmol/LTSA处理48h后,细胞的转染效率分别为(7.58±0.32)%和(7.94±0.28)%。MTT结果表明,ADV/TK介导的体外杀伤作用在5nmol/L和100nmol/LTSA处理组较未处理组增强了4～10倍。结论:TSA可以增强针对卵巢癌细胞的腺病毒基因转染效率,为增强卵巢癌基因治疗效果提供可能的方法。     

miRNA 26b靶向IL 6／STAT3信号通路诱导肝癌细胞自噬的实验研究#br# #br#

目的探讨miRNA 26b（miR 26b）在肝癌细胞自噬调控中的作用及可能分子机制。 方法采用荧光定量PCR（QPCR）检测人正常肝细胞系HL 7702和人肝癌细胞系HepG2、Hep 3B、Bel 7402及SSMC 7721中miRNA 26b的表达情况。双荧光素酶基因报告实验评价miR 26b对IL 6的靶向调控作用。向HepG2细胞转染miR 26b模拟物 mimics（转染组）和阴性对照NC（阴性对照组）,Western blotting检测两组IL 6／STAT3信号通路以及自噬相关蛋白的表达。向HepG2细胞转染IL 6 siRNA1和IL 6 siRNA2,Western blotting 检测干扰IL 6后STAT3激活及自噬相关蛋白表达。 结果HepG2、Hep 3B、Bel 7402细胞系中miR 26b表达水平分别为034±0063、069±0092、057±0086,显著低于正常肝细胞系HL 7702的115±0189,差异具有统计学意义（P＜005）。miR 26b可抑制野生型IL 6 3’UTR报告基因载体的荧光素酶活性,而对突变型IL 6 3’UTR MUT的荧光素酶活性无影响。转染miR 26b mimics后IL 6、p STAT3相对表达量显著降低（P＜005）,诱导自噬相关蛋白Beclin1相对表达量和LC3Ⅱ／LC3Ⅰ比值显著升高（P＜005）。沉默IL 6导致p STAT3相对表达量显著降低（P＜005）,诱导自噬相关蛋白Beclin1相对表达量和LC3Ⅱ／LC3Ⅰ比值显著升高（P＜005）。 结论miRNA 26b靶向抑制IL 6／STAT3信号通路的激活,进而诱导肝癌细胞自噬发生。     

小鼠骨髓树突状细胞对胃癌细胞杀伤作用的研究

目的研究小鼠骨髓树突状细胞的制备及其对胃癌细胞的杀伤作用。方法添加细胞因子培养扩增小鼠骨髓源树突状细胞;流式细胞仪检测DC表面标志物CD11c、CD86的表达;MTT法测定DC对胃癌细胞的杀伤作用。结果培养第7天出现扩增之骨髓源DC,加入TNF-α24 h后,成熟骨髓源DC形成。每只615小鼠平均能分离出3×10^7个骨髓细胞,一只小鼠的骨髓单个核细胞DC的产量约为7×10^6个。加入TNF-α48 h后,DC表面标志物CD86阳性表达率较加入TNF-α前增高;CD11c阳性表达率加入TNF–α前后无差别。成熟DC与615小鼠胃癌细胞共孵育24 h、48 h,效靶比分别为10∶1、20∶1、30∶1时,DC对胃癌细胞的杀伤活性随效靶比的增大而增强。结论提取纯化小鼠骨髓细胞,经细胞因子GM-CSF、IL-4、TNF-α的刺激诱导可产生成熟DC,成熟DC对胃癌细胞有较强的杀伤作用,其杀伤活性随效靶比的增大而增强,随共孵育时间的延长杀伤活性有增强的倾向。     

肿瘤坏死因子α仪对骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞TAZ表达和成骨潜能的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)、具有PDZ结合域的转录共刺激因子TAZ和骨髓瘤骨病的关系.方法 分离培养多发性骨髓瘤(MM)患者和正常人的骨髓间充质干细胞(MSCs),鉴定其生物学特性;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测MM患者和正常人骨髓血清中TNF-α的浓度.MM患者骨髓CD138+细胞与正常人MSCs行Transwell成骨共培养后,采用实时定量PCR检测MSCs成骨指标和TAZ mRNA表达量,von Kossa染色法鉴定钙质沉积度.采用实时定量PCR和Westernblot检测MSCs中TAZ mRNA和蛋白质的表达量.结果 MM患者的MSCs成骨潜能和TAZ表达量较正常人降低.MM患者骨髓血清中的TNF-α浓度为(355.4±49.1)pg/ml,正常人为(92.3±17.2)pg/ml.CD138+骨髓瘤细胞可以抑制正常人MSCs向成骨细胞分化,TNF-α单克隆抗体可以部分逆转此抑制效应.随着培养体系中TNF-α(0、0.1、1、10 ng/mL)浓度梯度增加,MSCs中TAZ表达量逐渐降低.结论 MM患者的骨髓MSCs成骨潜能较正常人明显降低.骨髓瘤细胞可能是通过TNF-α抑制TAZ的表达,抑制MSCs的成骨作用.     

外源性人多药耐药基因转染对兔骨髓单个核细胞生物学行为的影响

目的:观察外源性人多药耐药基因(human multidrug resistance gene 1, hMDR1)对新西兰兔骨髓单个核细胞(mononuclear cells, MNCs)生物学行为的影响.方法:用携带目的基因hMDR1和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein, GFP)报告基因的复制缺陷型重组腺病毒(rAd-hMDR1-GFP)转染原代培养的MNCs以获取hMDR1基因修饰的MNCs (MNCs-rAd-hMDR1-GFP),荧光显微镜和FCM法检测转染效率;MTT法绘制MNCs-rAd-hMDR1-GFP细胞生长曲线;FCM检测MNCs-rAd-hMDR1-GFP细胞周期及细胞凋亡情况;RT-PCR及Western印迹法从基因和蛋白水平检测MNCs-rAd-hMDR1-GFP细胞内hMDR1的表达;柔红霉素(daunorubicin, DNR)泵出实验检测导入hMDR1基因的外排泵生理功能.结果:感染复数(multiplicity of infection, MOI)为100时,rAd-hMDR1-GFP对MNCs的转染效率为30%～35%,且不影响MNCs增殖生长;FCM结果提示,rAd-hMDR1-GFP对MNCs细胞周期及凋亡无影响(P＞0.05);rAd-hMDR1-GFP转染72 h后hMDR1转录水平和P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)表达水平均明显升高(P＜0.01),且外源性hMDR1能发挥外排泵功能(P＜0.01).结论:rAd-hMDR1-GFP能将外源性hMDR1基因高效导入兔骨髓MNCs并稳定功能性表达,不影响MNCs细胞周期、细胞凋亡及细胞增殖生长等生物学特性,为进一步研究hMDR1基因的骨髓保护作用提供实验依据.     

基因沉默HIF-1α在结直肠癌SW480细胞的缺氧与上皮-间质转化中的作用

目的通过基因沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),研究其对结直肠癌SW480细胞的生长增殖、侵袭迁移能力,及对锌指转录因子(Snail)与上皮钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响和作用。方法利用氯化钴(CoCl2)化学诱导建立结直肠癌SW480细胞的缺氧模型,设计合成HIF-1α的小干扰RNA(HIF-1α-siRNA)并将其转染入细胞内。通过四甲基偶氮唑兰(MTT)法检测细胞的体外生长增殖活性,体外侵袭实验(Transwell法)检测细胞的体外侵袭迁移力,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫蛋白印迹(Western blot)检测细胞中HIF-1α、Snail及E-cadherinmRNA与蛋白的表达情况。结果 MTT法检测结果显示,缺氧条件下,基因干扰组的OD值及细胞存活率均降低(P<0.05);体外侵袭实验结果显示,基因干扰组侵袭迁移率降低(P<0.05);RT-PCR与Western blot检测结果显示,基因干扰组中HIF-1α和Snail mRNA和蛋白的表达明显降低,E-cadherin mRNA和蛋白的表达明显增强(P<0.05),对3种因子进行相关性分析,结果显示HIF-1α和Snail的表达呈正相关,HIF-1α和Snail均与E-cadherin的表达呈负相关(P<0.05)。结论 RNA干扰沉默HIF-1α基因可抑制结直肠癌SW480细胞的体外生长增殖和体外侵袭迁移能力,其机制可能是由于基因沉默HIF-1α导致细胞中Snail低表达,E-cadherin高表达,抑制了EMT发生、发展所致。     

西黄胶囊对大鼠放射性口腔黏膜炎的防护作用

目的:探讨西黄胶囊对大鼠放射性口腔黏膜炎的防护作用及相关机制。方法:将54只雌性Wistar大鼠随机分为给药组、单纯照射组和空白对照组。除空白对照组,其他两组均以6 MV X射线左侧颊黏膜单次30 Gy照射制作大鼠放射性口腔黏膜炎模型。从第1天开始至照射后第28天连续灌胃,给药组灌西黄混悬液,单纯照射组和空白对照组灌生理盐水。照射后观察大鼠颊黏膜的变化情况,照射后第3、14、28天处死大鼠观察颊黏膜病理切片,用ELISA法检测血清中白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,RT-PCR法检测颊黏膜组织中IL-1β和TNF-α mRNA的表达。结果:与单纯照射组比较,给药组大鼠口腔黏膜炎明显减轻;给药组血清中IL-1β和TNF-α水平及颊黏膜组织中IL-1β和TNF-α mRNA表达均较单纯照射组低(P<0.05)。结论:西黄胶囊能够减轻照射大鼠口腔黏膜的炎性反应,其机制可能与抑制炎性因子IL-1β和TNF-α的释放、下调相关基因的表达有关。     

Down-regulation of SENP1 expression increases apoptosis of Burkitt lymphoma cells

Objective: To investigate the effect of down-regulation of Sentrin/SUMO-specific protease 1 (SENP1)expression on the apoptosis of human Burkitt lymphoma cells (Daudi cells) and potential mechanisms. Methods:Short hairpin RNA (shRNA) targeting SENP1 was designed and synthesized and then cloned into a lentiviralvector. A lentiviral packaging plasmid was used to transfect Daudi cells (sh-SENP1-Daudi group). Daudi cellswithout transfection (Daudi group) and Daudi cells transfected with blank plasmid (sh-NC-Daudi group) servedas control groups. Flow cytometry was performed to screen GFP positive cells and semiquantitative PCR andWestern blot assays were employed to detect the inference efficiency. The morphology of cells was observedunder a microscope before and after transfection. Fluorescence quantitative PCR and Western blot assays wereconducted to measure the mRNA and protein expression of apoptosis related molecules (caspase-3, 8 and 9). Aftertreatment with COCl2 for 24 h, the mRNA and protein expression of hypoxia inducible factor -1α (HIF-1α) wasdetermined. Results: Sequencing showed the expression vectors of shRNA targeting SENP1 to be successfullyconstructed. Following screening of GFP positive cells by FCM, semiqualitative PCR showed the interferenceefficiency was 79.2±0.026%. At 48 h after transfection, the Daudi cells became shrunken, had irregular edgesand presented apoptotic bodies. Western blot assay revealed increase in expression of caspase-3, 8 and 9 withprolongation of transfection (P<0.05). Following hypoxia treatment, mRNA expression of HIF-1α remainedunchanged in three groups (P>0.05) but the protein expression of HIF-1α markedly increased (P<0.05). However,in the sh-SENP1-Daudi group, the protein expression of HIF-1α remained unchanged Conclusion: SENP1-shRNAcan efficiently inhibit SENP1 expression in Daudi cells. SENP1 inhibition may promote cell apoptosis. Thesefindings suggest that SENP1 may serve as an important target in the gene therapy of Burkitts lymphoma.     

小鼠骨髓树突状细胞体外培养扩增与生物学特性研究

目的：建立一种简便高效的体外扩增培养小鼠骨髓树突状细胞（bonemarrowdendriticcell,BMDC）的方法,为树突状细胞（dendl’iticcells,DCs）的理论研究与临床应用提供实验工具。方法：联合应用重组小鼠粒细胞一巨噬细胞集落刺激网子（rmGM—CSF）、蘑纽小鼠白介素（rmlL-4）诱导培养小鼠骨髓单个核细胞,终末加入重组小鼠肿瘤坏死因子（rmTNF—α）,从形态学表型及功能方面进行检测。结果：培养3天后可见大量贴壁细胞及细胞集落形成,第5天,可见典型的树突状突起,光镜下动态观察树突状细胞DC的形态变化,流式细胞仪检测各组DC加入TNF—α前后表面标志物CD11C、CD86的衷达,加入TNF—α后CD86的阳性表达率明显增高,CD11C的阳性表达率变化无统计学意义。结论：此方法能在体外诱导和扩增出大量骨髓源性DC,为抗肿瘤疫苗研究及临床应用奠定基础。