尼美舒利诱导人鼻咽癌CNE2细胞凋亡作用

目的观察尼美舒利（NIM）诱导人鼻咽癌CNE2细胞凋亡作用。方法0,0.05,0.1,0.2,0.4,0.8 mmol•L－1NIM作用于体外培养的CNE2细胞株,光学显微镜观察细胞形态和数量变化,透射电子显微镜观察细胞形态和结构变化,噻唑蓝（MTT）法检测细胞悬液吸光度值,流式细胞术（FCM）检测细胞周期分布和凋亡率,蛋白免疫印迹反应（Western Blot）检测细胞环氧化酶2（COX 2）蛋白表达情况。结果不同浓度NIM作用3 d后,CNE2细胞皱缩,数量减少,与药物浓度呈正相关;透射电镜下,细胞形态结构随NIM浓度增加而出现不同程度破坏和死亡征象;相同作用时间下,NIM浓度越高,吸光度值越低;FCM结果显示,NIM各剂量组均在G0/G1峰前出现一个亚二倍体峰（凋亡峰）,随着NIM浓度增高,G0/G1期细胞所占比例逐渐下降,G2/M期细胞比例升高,凋亡率逐渐增高;Western Blot结果显示,随着NIM浓度增加,COX 2蛋白表达量逐渐减少。上述结果均与NIM浓度相关,经统计学处理,与对照组和相邻前一浓度组比较,均差异有统计学意义（P＜0.05）。结论NIM能诱导人鼻咽癌CNE2细胞凋亡,且呈剂量依赖性,该作用与抑制COX 2有关。     

尼美舒利和舒林酸对人胃癌SGC-7901细胞COX-2和VEGF表达的影响及意义

目的观察尼美舒利、舒林酸对人胃癌SCK2-7901细胞环氧化酶2（COX-2）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,初步探讨尼美舒利、舒林酸抑制肿瘤血管生成机制。方法对人胃癌SCA2-7901细胞进行细胞培养,免疫组织化学、蛋白质印迹（Western lot）方法检测不同浓度尼美舒利、舒林酸作用后细胞COX-2、VEGF表达的改变。结果尼美舒利100、200μmol／L及舒林酸0．6、1．2mmol／L作用48h后人胃癌SCK2-7901细胞COX-2、VEGF蛋白表达率与阴性对照组相比明显降低（P〈20．05）,并且COX2与VEGF之间具有相关性（P〈005）。随着药物浓度的升高COX2和VEGF表达逐渐减弱。结论抑制COX-2的表达及由此引起的VEGF蛋白表达降低。在非甾体类抗炎药（NSAIDs）抑制肿瘤血管生长机制中可能具有一定作用。     

苦参素对人食管癌Eca-109细胞体外增殖抑制作用初探

苦参素又名氧化苦参碱（oxymatrine，OM）。是从中药苦参中提取分离得到的生物碱，具有抗炎、调节机体免疫、抗病毒等作用，临床主要用于治疗慢性乙型肝炎，以及放疗和化疗等引起的白细胞减少等。近几年研究发现，苦参素还具有抗肿瘤作用。作者本人曾对苦参素对人胃癌细胞系MGC-803的增殖抑制作用及机制进行过相关报道，但是苦参素用于防治我国北方农村高发肿瘤食管癌的研究还未见有报道。     

尼美舒利西药研究

目的对于西药尼美舒利进行西药研究和探讨。方法根据笔者的个人经验并且通过网络和图书馆对于药物的相关资料进行查询,并且请教对药物尼美舒利有研究的相关专家。结论尼美舒利具有高度选择性的抑制环氧化酶2(COX2)活性的作用,可以广泛的应用在对抗组织的炎症当中。     

尼美舒利对人γδ T细胞的作用

目的 探讨尼美舒利在预防消化道肿瘤中与人γδ T细胞关系.方法 用异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδ T细胞.用不同浓度的尼美舒利诱导γδ T细胞和SGC-7901,用流式细胞术检测培养前后的γδ T细胞表面标记和检测尼美舒利诱导的γδ T细胞和SGC-7901凋亡百分率.用乳酸脱氢酶法测定γδ T细胞的杀伤活性.结果 γδ T细胞培养10 d时从扩增前4.21%增加到70.35%, CD44达86.39%.尼美舒利在200 μmol/L时对γδ T细胞的生长抑制率达70%,显著高于对胃癌细胞SGC-7901抑制率(4%).γδ T细胞经不同浓度的尼美舒诱导12 h后杀伤SGC-7901细胞在浓度为3 μmol/L时最强.γδ T细胞经尼美舒利(200 μmol/L)作用12 h后的凋亡率(54.19%)显著高于SGC-7901细胞(6.45%).结论 尼美舒利在临床常规使用的药物浓度时可增强γδ T细胞杀伤瘤细胞作用,超过这一浓度可明显抑制γδ T细胞的增殖能力和杀伤活性.     

槲皮素对人食管癌Eca-109细胞的分化诱导作用

目的探讨槲皮素对人食管癌Eca-109细胞的分化诱导作用。方法将培养的Eca-109细胞分为两组:①加槲皮素组(Q组);②不加药物对照组(C组)。同时培养48h,收集各组细胞制备成细胞硝酸纤维素膜(NCM)标本及提取RNA制备RNA硝酸纤维素膜标本。分别对细胞硝酸纤维素膜(NCM)标本进行PCNA,VEGF的免疫斑点印迹阵列;对RNA硝酸纤维素膜标本EGFR,c-myc及wtp53的RNA斑点印迹阵列。印迹阵列皆用岛津薄层色谱扫描仪(TLC)进行波长523nm的扫描数值比较。结果①免疫斑点印迹显示:Q组的PCNA-IR,VEGF-IR的TLC扫描数值分别比C组低5.5倍,3.5倍;②RNA斑点印迹阵列显示,与C组相比:Q组的EGFR,c-myc的RNA斑点TLC扫描数值分别下调了7倍,2.2倍。而wtp53的RNA斑点TLC扫描数值则上调了2.2倍。结论槲皮素可下调作为肿瘤细胞恶性程度生物学指标的PCNA,EGFR,VEGF,c-myc等的表达,上调抑癌基因wtp53的表达,表明对人食管癌Eca-109细胞具有一定的诱导分化效应。     

尼美舒利联合奥沙利铂对食管癌大鼠移植瘤生长及免疫功能的影响

目的:研究尼美舒利联合奥沙利铂对食管癌大鼠移植瘤生长及免疫功能的影响。方法:将大鼠随机分为模型组(ig羧甲基纤维素钠溶液+尾iv 5%的葡萄糖注射液)、尼美舒利组(ig 20 mg/kg)、奥沙利铂组(尾iv 13.6 mg/kg)及联用组,每组10只,ih食管癌Eca109细胞建立移植瘤模型。建模成功后各组大鼠按相应方式给予相应药物,ig每天1次,尾iv每4 d 1次。8周后处死大鼠,测量各组大鼠瘤体积和瘤质量,计算抑瘤率,检测血清中肿瘤标志物(CEA、CYFRA21-1、SCCAg)含量、外周血中免疫细胞(CD3~+、CD4~+、CD8~+T细胞和NK细胞)百分比。结果:与模型组比较,其余3组大鼠瘤体积和瘤质量减小(P<0.05);肿瘤标志物含量减少(P<0.05);尼美舒利组大鼠CD3~+、CD4~+T细胞和NK细胞百分比增高,CD8~+T细胞百分比降低(P<0.05);奥沙利铂组和联用组大鼠CD3~+、CD4~+T细胞和NK细胞百分比降低,CD8~+T细胞数量百分比增高(P<0.05)。与尼美舒利组和奥沙利铂组比较,联用组大鼠抑瘤率增加(P<0.05),肿瘤标志物含量减少(P<0.05),免疫细胞百分比较尼美舒利组降低、较奥沙利铂组增高(P<0.05)。结论:尼美舒利能增强奥沙利铂对食管癌的抑瘤作用,降低奥沙利铂对大鼠免疫功能的抑制程度。     

丹皮酚诱导人食管癌Eca-109裸鼠移植瘤凋亡的机制探讨

目的通过观察用药后COX-2、Bcl-2和Survivin的变化,探讨丹皮酚(paeonol,Pae)诱导Eca-109食管癌裸鼠移植瘤凋亡的机制。方法体外培养食管癌Eca-109细胞,裸鼠皮下接种Eca-109细胞建立裸鼠移植瘤动物模型,36只荷瘤裸鼠随机分为6组,分别为模型对照组、Pae不同剂量组(25、50、100、200mg·kg-1)和阳性药对照组(cisplatin,CD-DP,5mg·kg-1)。治疗2wk后处死裸鼠,剥取瘤体称瘤重并计算抑瘤率。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测肿瘤细胞凋亡。免疫组化S-P法检测移植瘤组织COX-2、Bcl-2和Survivin的表达。结果Pae50、100和200mg·kg-1组和CDDP5mg·kg-1组均能明显抑制裸鼠皮下肿瘤的生长,抑瘤率分别为23·54%、27·91%、34·46%和58·71%,与模型组比较差异均有显著性(P<0·05orP<0·01)。TUNEL染色可发现棕褐色的凋亡细胞呈散在或片状分布,Pae各剂量组的凋亡指数(apoptosis index,AI)分别为(11·02±2·58)%、(19·80±2·77)%、(24·48±4·35)%和(27·13±4·39)%,与模型组(4·81±0·83)%比较,差异均有显著性(P<0·05orP<0·01)。免疫组化结果显示,Pae能明显抑制移植瘤组织COX-2、Bcl-2和Survivin的表达(P<0·05 or P<0·01)。结论Pae能抑制Eca-109食管癌裸鼠移植瘤生长、诱导凋亡而发挥抗肿瘤作用,其机制可能与下调COX-2的表达并抑制Bcl-2和Sur-vivin的表达有关。     

D-氨基葡萄糖衍生物诱导Eca-109细胞凋亡的机制

目的探讨2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖{2-[(3-carboxy-1-oxoprogy1)amino]-2-deoxy-D-Glucose,CO-PADG}诱导Eca-109细胞凋亡的机制。方法不同浓度COPADG作用于人食管癌Eca-109细胞24h,检测Eca-109细胞的抑制率、凋亡率、细胞内活性氧(reactive oxygen spe-cies,ROS)、线粒体跨膜电位。结果Eca-109细胞凋亡率与COPADG浓度呈正相关,r=1.0,P<0.01;Eca-109细胞线粒体膜电位水平与Eca-109细胞凋亡率相关,r=1.0,P<0.01;ROS水平与Eca-109细胞凋亡率呈正相关,r=1.0,P<0.01;ROS水平与Eca-109细胞线粒体膜电位水平呈负相关,r=1.0,P<0.01。结论COPADG可促进Eca-109细胞凋亡,提高Eca-109细胞内ROS水平,并降低线粒体膜电位。实验结果提示COPADG提高ROS,降低Eca-109细胞线粒体膜电位启动细胞凋亡通路促使Eca-109细胞凋亡,并且线粒体膜电位的下降是通过提高ROS实现的。     

丹皮酚体内外抗人食管癌Eca-109细胞增殖及诱导凋亡的作用

目的研究丹皮酚(paeonol,Pae)在体内外对人食管癌细胞Eca-109的抑瘤作用及其对细胞凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)体外试验法和灌胃给药体内抗肿瘤试验。光镜及电镜观察各组的肿瘤组织的形态学变化。应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法测定细胞凋亡指数。结果丹皮酚在体外对Eca-109细胞有明显的细胞毒作用,半数抑制浓度(IC50)为0.342mmol·L-1;体内灌胃给予丹皮酚25、50、100和200mg·kg-1对裸鼠移植人食管癌Eca-109的抑制率分别为10.67%、23.54%、27.91%和34.46%;顺铂5mg·kg-1组抑瘤率为58.71%;丹皮酚在100mg·kg-1剂量下与顺铂5mg·kg-1联合用药抑制率为77.91%。光镜下用药组可见较多凋亡的肿瘤细胞。透射电镜下可见肿瘤细胞核染色质浓缩边聚、胞质浓缩、核碎裂以及凋亡小体形成等典型的凋亡表现。用药组凋亡指数较对照组明显增加。结论丹皮酚在体内外具有抑制人食管癌Eca-109细胞增殖及诱导其凋亡作用。     

Effect of curcumin on proliferation and cycle of human ECa-109 cells

OBJECTIVE To investigate the mechanism of curcumin on Inhibition of cell proliferation and apoptosis induction in esophageal cancer cells.METHODS Eca-109 cell growth inhibiting rates induced by curcumin were investigated by using CCK-8 assay.Eca-109 cell growth inhibiting rates induced by curcumin were investigated by using DNA gel electrophoresis for detection of DNA Ladder,electron microscopy observation technology for detection of ultrastructure and automatic fluorescence microplate reader.RESULTS Curcumin can inhibit cell proliferation growth inhibition rate had increased in a dose-and time-dependent manner.Caspase 3 activity assay detected that OD value with 20 μmol·L-1,40 μmol·L-1 of curcumin for 24 h,compared with the control group,the difference was statistically significant(P<0.05).Electron microscopy showed that curcumin can damaging cellular ultrastructure.CONCLUSION Curcumin can damage cellular ultrastructure of Eca-109 cells,Inhibit cell proliferation and induce its apoptosis.     

D-氨基葡萄糖衍生物对Eca-109细胞内活性氧、线粒体膜电位的影响

目的：探讨2-（3-羧基-1-丙酰氨基）-2-脱氧-D-葡萄糖（2-[（3-carboxy-1-oxoprogy1）amino]-2-deoxy-D-Glucose,COPADG）诱导Eca-109细胞凋亡的机制。方法：不同浓度COPADG作用于人食管癌Eca-109细胞24h,检测Eca-109细胞的抑制率、凋亡率、细胞内活性氧（ROS）、线粒体跨膜电位。结果：Eca-109细胞凋亡率与COPADG浓度呈正相关（rs=1.0,P〈0.01）;Eca-109细胞线粒体膜电位水平与Eca-109细胞凋亡率相关（rs=1.0,P〈0.01）;ROS水平与Eca-109细胞凋亡率呈正相关（rs=1.0,P〈0.01）;ROS水平与Eca-109细胞线粒体膜电位水平呈负相关（rs=1.0,P〈0.01）。结论：COPADG可促进Eca-109细胞凋亡,提高Eca-109细胞内ROS水平,并降低线粒体膜电位水平。实验结果提示COPADG提高ROS水平,降低Eca-109细胞线粒体膜电位水平,启动细胞凋亡通路,促使Eca-109细胞凋亡,并且线粒体膜电位的下降是通过提高ROS实现的。     

靶向survivin基因的小干扰RNA对食管癌细胞Eca-109 化疗敏感性的影响

目的 利用RNAi (RNA interference, RNAi) 技术抑制食管癌Eca-109细胞survivin基因表达,观察survivin基因沉默后对Eca-109细胞化疗敏感性的影响。方法 构建靶向survivin基因特定序列的小干扰RNA(small interference RNA, siRNA)真核表达载体并转染Eca-109细胞,筛选得到稳定转染的survivin干扰组细胞Eca-109 /si-survivin,同时设转染无关干扰质粒的Eca-109细胞为阴性对照组,未转染的Eca-109细胞为空白对照组;通过Western Blot法检测干扰前后survivin基因沉默抑制效果;随后将各组细胞与不同浓度的氟尿嘧啶(5-Fu)作用,MTT法检测各组细胞对5-Fu的半数抑制浓度(IC₅₀),流式细胞仪分析各组细胞的凋亡率。结果 干扰组Eca-109 /si-survivin细胞survivin蛋白表达水平(18.75±3.12)较阴性对照组Eca-109 /si-control(44.17±3.15)及空白对照组Eca-109 (46.20±2.62)明显下调(P<0.05);联合应用5-Fu的Eca-109 /si-survivin干扰组细胞IC₅₀为(18.75±1.53)mg·L-1,显著低于空白对照组(39.65±1.75)mg·L-1和阴性对照组(38.95±1.34)mg·L-1,差异具有统计学意义(P<0.05);联合应用5-Fu的Eca-109 /si-survivin干扰组细胞凋亡率为(37.35±1.52)%,明显高于空白对照组(11.26±1.21)%和阴性对照组(12.34±1.32)%,差异具有显著性(P<0. 05)。 结论 靶向survivin的siRNA能特异性沉默survivin基因表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,并增强人食管癌Eca-109细胞对5-Fu的化疗敏感性。     

Growth inhibitory effects and molecular mechanisms of crotoxin treatment in esophageal Eca-109 cells and transplanted tumors in nude mice

Aim:

To investigate the antitumor actions of the Crotalus durissus neurotoxin (crotoxin) on human esophageal carcinoma (Eca-109) cells in vitro and transplanted esophageal Eca-109 tumors in nude mice.

Methods:

The growth-inhibitory effect was analyzed in Eca-109 cells using MTT assay. Cell morphology changes in nuclei were observed using Hoechst 33342 staining, while apoptosis and cell cycle distribution were examined by flow cytometry. RT-PCR was used to measure the Bcl-2, p15, and caspase-3 p17 gene expression levels. A tumor transplantation model was established by inoculation of Eca-109 cells were into female Balb/c nude mice. Crotoxin (25, 50, and 100 mg/kg) was subcutaneously injected into the transplanted tumors every 2 d for a total of 10 injections. Tumor size and weight were measured. Bcl-2, p15, and caspase-3 p17 protein expression in transplanted tumors was analyzed using Western blotting.

Results:

Crotoxin (25, 50, and 100 μg/mL) inhibited the growth of Eca-109 cells in a dose-dependent manner with inhibition rates of 22.9%, 35.8%, and 57.2%, respectively. Hoechst 33342 staining revealed apoptotic cells with pyknotic nuclear chromatin after crotoxin treatment. In Eca-109 cells, crotoxin induced apoptosis and G1 block, significantly upregulated the expression of p15 and caspase-3 p17 genes and downregulated the expression of Bcl-2 gene. Furthermore, crotoxin inhibited the growth of Eca-109 tumors in nude mice in a dose-dependent manner. Western blotting showed that crotoxin increased p15 and caspase-3 p17 protein levels and reduced Bcl-2 protein level in tumor specimens.

Conclusion:

Crotoxin inhibits the growth of Eca-109 cells in vitro via apoptosis induction and G1 block. Local administration of crotoxin inhibits the growth of subcutaneously transplanted Eca-109 cells in nude mice, possibly via increasing p15 and caspase-3 p17 protein expression and reducing Bcl-2 protein expression.     

食管癌耐药株Eca-109/VCR的建立及其耐药机制初步探讨

目的:建立食管癌耐长春新碱(vincristine,VCR)细胞株Eca-109/VCR,并对其耐药机制进行初步探讨.方法:采用大剂量间歇冲击给药结合时间递增的方法构建食管癌耐药株Eca-109/VCR.倒置显微镜下观察Eca-109/VCR形态变化;细胞计数法绘制Eca-109和Eca-109/VCR的生长曲线并计算...     

塞来西布对食管癌ECA-109细胞系放射增敏效应的研究

目的：了解环氧化物酶-2（COX-2）选择性抑制剂——塞来西布对食管癌ECA-109细胞系的放射增敏作用。方法：选择ECA-109细胞系作为试验对象,检测ECA-109细胞系的COX-2表达水平,设塞来西布0.25、50、100μmol/L4个实验组,分别予6MV-X线照射0、2、4、6Gy后,再分别行MTT比色试验、克隆形成实验、流式细胞仪计数,检测细胞的增殖能力、克隆形成能力及凋亡3项指标。结果：不同辐射剂量与不同浓度的塞来西布对ECA-109细胞的增殖、凋亡率作用有统计学差异（P〈0.05）,塞来西布与放射对ECA-109细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用随塞来西布的浓度和照射剂量的增加而增强;塞来西布联合放射对ECA-109细胞的存活率、D0值和Dq值作用均小于单纯放射组,Dq变小;塞来西布和4Gy（6MV-X）联合用于ECA-109细胞其凋亡率有统计学差异（P〈0.05）。结论：塞来西布能抑制ECA-109细胞增殖,诱导其凋亡。塞来西布与放射联合应用对ECA-109细胞的增殖抑制、诱导凋亡有协同增强的作用。     

环氧化酶-2在宫颈癌中的表达及其意义

目的探讨宫颈癌组织中环氧化酶-2(COX-2)的表达情况,及其与患者临床病理生理特征之间的关系。方法应用免疫组织化学S-P法,检测50例宫颈癌组织、12例宫颈炎组织、10例CIN组织、10例正常宫颈组织中COX-2蛋白的表达情况。结果COX-2在宫颈癌中的表达水平明显高于宫颈炎、CIN组织(P<0.001),正常宫颈组织中不表达;COX-2在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期宫颈癌中的表达水平呈递增趋势,且有显著性差异(P<0.001);COX-2表达水平与患者年龄、癌肿大小、分化程度、组织学类型均无关(P>0.05)。结论COX-2过表达可能与宫颈癌的发生发展有关。