同源异型盒基因DLX4在妊娠期高血压疾病中的表达研究

目的:检测妊娠期高血压疾病胎盘组织中同源异型盒基因DLX4的表达,探讨其在妊娠期高血压疾病发生、发展中的意义。方法:严格设置病例组和对照组,采用半定量逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)和免疫组化SABC法检测40例胎盘组织中DLX4mRNA和蛋白的表达情况。结果:DLX4 mRNA在子痫前期胎盘组织中的表达(轻度为0.17±0.05、重度为0.09±0.03)明显低于对照组(0.49±0.07,P<0.001)。DLX4蛋白在子痫前期胎盘中表达与对照组相比也显著降低(P<0.001)。结论:随着妊娠期高血压疾病临床症状的加重,胎盘组织中DLX4的表达呈明显下降趋势,同源异型盒基因DLX4参与了妊娠期高血压疾病胎盘的发育障碍及功能缺陷。     

DLX4在子痫前期胎盘组织的表达及与上皮细胞间质化相关性的研究

目的:探讨DLX4在妊娠期高血压疾病中的作用及其对滋养细胞EMT的影响。方法:采用Western blot法分别检测子痫前期胎盘组织及缺氧培养的滋养细胞系JEG-3中DLX4蛋白表达的变化;通过实时PCR技术,比较缺氧条件下滋养细胞中DLX4、HIF-1α和E-cad表达变化的差异。结果:滋养细胞缺氧培养后DLX4蛋白表达明显下降(P0.05),与其在子痫前期胎盘组织的表达变化一致;缺氧抑制滋养细胞中DLX4 mR-NA表达,同时伴有HIF-1α和E-cad mRNA表达增加。结论:缺氧引起滋养细胞DLX4表达下调,伴随EMT相关因子表达的改变。子痫前期滋养细胞侵袭力异常可能与缺氧引起DLX4表达下调及滋养细胞EMT异常有关。     

同源异型盒基因与妇科恶性肿瘤

同源异型盒基因是控制女性生殖道胚胎细胞发育和分化的重要因子,近年发现其异常表达与妇科肿瘤发生发展有关。研究发现在卵巢癌中HOXA7,B7,BARX2,DLX4基因与肿瘤的恶性型有关,HOXA9,10,11基因与肿瘤向不同组织类型分化有关,CDX2基因可作为胃肠道转移性卵巢癌的标记;在子宫内膜癌中HOXA13,D10基因对肿瘤的发展分别起促进和抑制作用,HOXA10基因在内膜癌中的作用尚有争议;对宫颈癌的研究发现,部分HOX基因在肿瘤组织中呈过表达;而对滋养细胞肿瘤的研究中发现,DLX4可能参与肿瘤侵袭。     

CD105、BMP9在绒癌组织中的表达及其临床病理意义

目的:研究绒癌化疗前后组织中CD105和BMP9的表达及其临床意义,为绒癌患者的个性化治疗和预后提供判断依据。方法:收集2010年1月至2015年12月于北京协和医院妇产科诊治的绒癌患者的石蜡组织标本41例,其中化疗前(初治组)标本8例,化疗后(化疗组)标本33例。免疫组化法检测CD105和BMP9在绒癌组织中的表达,分析CD105和BMP9表达与绒癌患者临床病理参数之间的关系。结果:初治组中CD105在细胞型、合体型滋养细胞中呈强阳性,在中间型滋养细胞中呈阴性或弱阳性表达;BMP9在中间型滋养细胞中呈强阳性表达,在细胞型、合体型滋养细胞中呈中等阳性表达。不同患者化疗前绒癌组织中CD105、BMP9表达具有相似性。化疗后,CD105、BMP9表达均减弱,表达水平与患者年龄、术前血清β-HCG、是否转移等无关,与患者复发呈正相关。细胞型和合体型滋养细胞中CD105和BMP9表达呈显著相关性(P0.05)。结论:CD105和BMP9在绒癌化疗后组织中表达下调,其表达水平可能与患者化疗耐药的产生和不良预后有关。     

同源异型盒基因与妇科恶性肿瘤

同源异型盒基因是控制女性生殖道胚胎细胞发育和分化的重要因子,近年发现其异常表达与妇科肿瘤发生发展有关.研究发现在卵巢癌中HOXA7,B7,BARX2,DLX4基因与肿瘤的恶性型有关,HOXA9,10,11基因与肿瘤向不同组织类型分化有关,CDX2基因可作为胃肠道转移性卵巢癌的标记;在子宫内膜癌中HOXA13,D10基因对肿瘤的发展分别起促进和抑制作用,HOXA10基因在内膜癌中的作用尚有争议;对宫颈癌的研究发现,部分HOX基因在肿瘤组织中呈过表达;而对滋养细胞肿瘤的研究中发现,DLX4可能参与肿瘤侵袭.     

绒毛膜癌耐药细胞系的建立及人白细胞介素2基因转染后对其多药耐药性的逆转作用

目的 建立绒毛膜癌（绒癌）的耐药细胞系,应用基因工程技术将人白细胞介素2（hIL-1) 基因导入绒癌耐药细胞系,观察hIL-2基因转染后对绒癌耐药细胞耐药性的逆转作用。方法 采用间歇诱导的方法,用鬼臼乙叉甙（VP－16）诱导绒癌细胞系JEG－3,建立耐药细胞系,四甲基偶氮唑蓝比色法检测该耐药细胞系对多种化学治疗药物的耐药指数,及多种耐药基因包括肺耐药蛋白、多药耐药相关蛋白、谷胱甘肽转移酶、二氢叶酸还原酶和多药耐药基因（MDR1）的mRNA表达情况。用逆转录聚合酶链反应技术,克隆hIL-2基因,将hIL-2基因插入真核表达载体pcDNA3.1( )中,提取质粒,通过阳离子脂质体将hIL-2基因转染绒癌耐药细胞系,用新霉素筛选含hIL-2 DNA片段的单个细胞克隆,检测转染hIL-2基因后该细胞耐药指数的变化,测定转染后细胞hIL-2和多种耐药基因mRNA的表达。结果 用VP－16采用间歇诱导法,成功建立绒癌的VP－16耐药细胞系JEG－3／VP－16,并检测出MDR1 mRNA表达。转染hIL-2基因后,绒癌细胞中检测出hIL-2 mRNA表达,转染hIL-2基因的细胞的耐药指数降低,JEG－3／VP－16细胞转染pcDNA3.1( )-hIL-2后,对VP－16的耐药指数由38．7降至6．0－6．1,对甲氨蝶呤的耐药指数由14．5降至2．6－2．5,对更生霉素的耐药指数由13．0降至2．0;MDR1 mRNA表达转阴。结论 hIL-2基因转染后可通过调节MDR1的表达,从而逆转绒癌耐药细胞系的耐药性。     

同源异型盒DLX基因调控妇科恶性肿瘤机制的探讨

同源异型盒基因DLX编码重要的调控胚胎发育、细胞分化的转录因子家族。研究证实,肿瘤中存在DLX基因表达紊乱,并且与肿瘤进展相关。妇科恶性肿瘤中,DLX表达失调控涉及上皮细胞间质化、促肿瘤血管生成、影响细胞凋亡等许多机制。DLX基因的多途径调控,为探索肿瘤的诊治提供了新思路。     

增殖与转移相关基因在妊娠滋养细胞疾病中的表达

nm23-H１基因的突变或低表达与肿瘤的转移浸润有关，Ki-67基因增殖指数是反映肿瘤增殖活性的重要指标。我们采用免疫组化技术检测了上述两种基因蛋白产物在妊娠滋养细胞疾病(GTD)中的表达，旨在探讨它们在此类疾病发生发展中的作用，为诊断、治疗及判断预后提供理论依据。1 材料与方法11 材料来源 收集河北医科大学第二医院病理科1983年11月至1998年6月妊娠滋养细胞疾病患者手术切除及清宫组织的存档组织蜡块50份，包括20份葡萄胎、15份侵蚀性葡萄胎、15份绒癌。每个蜡块均经4μm厚连续切片4张，2张做免疫组化，1张做常规HE染色，1张备…     

胰岛素样生长因子在产科领域中的作用

胰岛素样生长因子(IGrs)是一类妊娠必需的促进细胞增殖和分化的单肽，并与某些病理妊娠有关。妊娠高血压综合征(妊高征)患者血清IGF-Ⅱ含量减少，胎盘IGFs结合蛋白(IGFBP)-1表达增强。绒癌Bewo30细胞Ⅰ型IGFs受体(IGFR Ⅰ)表达增强，绒癌JEG-3细胞Ⅱ型IGFs受体(IGFR Ⅱ)表达减少。胎儿生长受限(FGR)孕妇血清、脐血清IGF-Ⅱ含量减少，胎儿血清IGF-Ⅱ含量减少。     

小分子干扰RNA对绒毛膜癌细胞人类白细胞抗原G 基因表达的影响

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)对绒毛膜癌(绒癌)细胞中人类白细胞抗原G(HLA-G) 基因表达的影响,了解HLA-G基因在绒癌发生、发展中的作用.方法设计并合成HLA-G siRNA,分为两组.实验组以不同浓度(分别为1.0、 2.5、 5.0 μg/L,下同)的HLA-G siRNA转染HLA-G基因高表达的绒癌细胞系JEG-3细胞,对照组以等量阴性对照siRNA转染JEG-3细胞.实时荧光定量RT-PCR技术检测转染后JEG-3细胞中HLA-G mRNA的表达,HLA-G mRNA的表达以PCR循环数阈值(Ct值)表示;蛋白印迹法测定JEG-3细胞中HLA-G蛋白的表达;显微镜观察并计数转染后存活的JEG-3细胞数.结果 HLA-G siRNA转染JEG-3细胞后,明显下调JEG-3细胞中HLA-G mRNA及蛋白的表达水平.实验组不同浓度的HLA-G siRNA转染后,JEG-3细胞的Ct值[分别为(20.67±0.02)、(21.37±0.03)、(21.43±0.02)个循环数],分别与对照组[分别为(20.33±0.01)、(20.37±0.02)、(20.40±0.03)个循环数]比较,差异有统计学意义(P<0.05).上述浓度转染后,实验组JEG-3细胞的HLA-G蛋白表达水平[分别为0.42±0.03、0.37±0.02、0.12±0.04],分别与对照组[分别为1.69±0.23、1.62±0.31、1.36±0.22]比较,差异有统计学意义(P<0.01).实验组JEG-3细胞生长较对照组明显受到抑制(P<0.05).结论 HLA-G siRNA可以下调HLA-G mRNA及蛋白的表达水平,抑制细胞生长,表明HLA-G基因在绒癌的发生、发展中具有重要作用.     

绒癌耐药细胞系的建立及获得性耐药机制的研究

目的采用目前治疗绒癌最常用的药物诱导建立绒癌的耐药细胞系,比较不同药物引起耐药机制的差异.方法采用浓度梯度递增法和间歇诱导法,分别用5-FU,MTX,VP-16诱导绒癌细胞系JEG-3,建立相应耐药细胞系,采用MTT法测定耐药细胞系对5-FU、MTX、KSM、VP-16和Taxol的耐药指数,用RT-PCR测定亲本细胞及各耐药细胞系耐药相关基因如肺耐药蛋白(LRP)、多药耐药相关蛋白(MRP)、谷胱甘肽转移酶(GST-π)、二氢叶酸还原酶(DHFR)和多药耐药基因(MDR-1)的mRNA表达,比较各种细胞生长曲线,细胞群体倍增时间.结果JEG-3细胞系在诱导耐药细胞前即有LRP、MRP、GST-π、DHFR的共表达,诱导耐药后上述各基因的表达无明显变化.诱导耐药前JEG-3细胞无MDR1的表达,用VP-16、5-FU间歇诱导的方法诱导形成的耐药细胞系有MDR-1表达,且耐药指数增加.结论JEG-3耐药细胞系耐药性的产生与MRP、LRP、GST-π、DHFR表达的关系不密切,而与MDR1的表达有关.     

活性氧介导P62蛋白激活参与甲氨蝶呤耐药绒癌发病机制研究

目的 探讨甲氨蝶呤（MTX）耐药绒癌的发生机制。方法 2012年5月至2013年1月于北京协和医院以人绒毛膜上皮癌JEG-3细胞及本课题组前期构建的MTX耐药绒癌JEG-3/MTXR细胞为研究对象,采用免疫印迹、RT-PCR法检测MTX处理后细胞内P62的变化。流式细胞仪检测MTX诱导后JEG-3/MTXR细胞内活性氧(ROS)变化,采用ROS清除剂MnTmPyP检测MTX作用后JEG-3/MTXR细胞内P62蛋白水平的变化。RNA干扰法沉默P62基因免疫印迹法和流式细胞仪检测MTX诱导后JEG-3/MTXR耐药细胞内PARP蛋白的表达和凋亡率的变化。结果 MTX可诱导耐药绒癌 P62蛋白和mRNA表达水平呈时间依赖性上调。MTX可诱导耐药绒癌ROS表达水平升高,MnTmPyP降低P62蛋白的表达。P62-siRNA可促进JEG-3/MTXR细胞内MTX诱导的凋亡反应蛋白PARP的切割和激活,流式细胞仪检测RNA干扰联合药物组细胞凋亡率（14.4±1.02）%,高于单纯药物应用组（9.1±1.34）%,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 ROS介导P62蛋白激活参与MTX耐药绒癌发生机制,为耐药绒癌临床靶向治疗提供新思路。     

层粘蛋白及受体在正常妊娠及妊娠滋养细胞疾病中的表达

目的探讨层粘蛋白(LN)及其受体(LN-R)在正常妊娠及妊娠滋养细胞疾病中的表达及其与恶性滋养细胞肿瘤侵袭的关系。方法收集1991年1月至2003年12月温州医学院附属一院正常妊娠、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎及绒毛膜癌(绒癌)石蜡包埋组织,应用免疫组织化学SP方法检测各组中LN、LN-R的表达情况。结果LN、LN-R在正常妊娠、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎及绒癌中的表达差异有非常显著性意义(P<0·01)。LN、LN-R在侵蚀性葡萄胎及绒癌中的表达与正常妊娠、葡萄胎比较差异有非常显著性意义(P<0·01)。结论LN、LN-R在妊娠滋养细胞疾病中的表达异常与恶性滋养细胞的高侵袭力密切相关。     

绒癌耐药细胞系的建立及获得性耐药机制的研究

目的 :采用目前治疗绒癌最常用的药物诱导建立绒癌的耐药细胞系 ,比较不同药物引起耐药机制的差异。方法 :采用浓度梯度递增法和间歇诱导法 ,分别用 5 FU ,MTX ,VP 16诱导绒癌细胞系JEG 3,建立相应耐药细胞系 ,采用MTT法测定耐药细胞系对5 FU、MTX、KSM、VP 16和Taxol的耐药指数 ,用RT PCR测定亲本细胞及各耐药细胞系耐药相关基因如肺耐药蛋白 (LRP)、多药耐药相关蛋白 (MRP)、谷胱甘肽转移酶 (GST π)、二氢叶酸还原酶 (DHFR)和多药耐药基因 (MDR 1)的mRNA表达 ,比较各种细胞生长曲线 ,细胞群体倍增时间。结果 :JEG 3细胞系在诱导耐药细胞前即有LRP、MRP、GST π、DHFR的共表达 ,诱导耐药后上述各基因的表达无明显变化。诱导耐药前JEG 3细胞无MDR1的表达 ,用VP 16、5 FU间歇诱导的方法诱导形成的耐药细胞系有MDR 1表达 ,且耐药指数增加。结论 :JEG 3耐药细胞系耐药性的产生与MRP、LRP、GST π、DHFR表达的关系不密切 ,而与MDR1的表达有关。     

绒癌细胞系中Fas/FasL的表达及免疫逃逸机制探讨

目的观察Fas/FasL系统在绒毛膜癌(绒癌)细胞系(JEG-3、BeWo)和T细胞系(Jurkat)中的表达,探讨Jurkat细胞凋亡的机制及Fas/FasL系统与人绒癌细胞免疫逃逸及反杀伤作用的关系。方法 RT-PCR检测绒癌细胞系JEG-3、BeWo与Jurkat细胞中Fas/FasL mRNA表达,免疫印迹实验检测3个细胞系中Fas/FasL的蛋白表达情况,台盼蓝拒染实验检测Jurkat细胞成活率,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与Jurkat细胞相比,在mRNA水平和蛋白水平,绒癌细胞中Fas表达低下,而FasL表达升高。绒癌细胞与Jurkat细胞共培养可诱导Jurkat细胞存活率下降,诱导凋亡(P0.05),随共培养时间延长Jurkat细胞凋亡率升高(P0.05)。结论绒癌细胞能抵抗Fas/FasL系统介导的凋亡,高表达的FasL可反击杀伤Fas+T细胞,低表达的Fas可以逃避T细胞的免疫杀伤。     

内质网应激激活与依托泊甙和放线菌素D耐药绒癌相关性研究

目的探讨内质网应激激活与拓扑异构酶Ⅱα介导的依托泊甙(etoposide,VP16)和放线菌素D(actinomy-cin-D,Act-D)耐药绒癌的关系。方法采用间断诱导法诱导人绒癌细胞系JEG-3,分别建立绒癌ActD耐药细胞系JEG-3/ActDB1和VP16耐药细胞系JEG-3/VPC1。细胞计数法(cell counting kit-8,CCK-8)观察敏感细胞和耐药细胞的生长增殖规律和耐药指数;流式细胞仪检测细胞周期比例和染色体倍性变化;荧光定量PCR技术分别检测两种不同药物诱导的JEG-3耐药株中拓扑异构酶Ⅱα(TopoⅡα)和内质网应激(ERS)各个通路相关的基因mR-NA的表达水平。结果 (1)成功建立了绒癌耐药细胞系JEG-3/ActDB1和JEG-3/VPC1。其耐药指数分别为50.64±10.68和65.87±3.19。耐药株生长速度均较亲本细胞减慢,三者的染色体倍性差异无统计学意义。(2)在两种不同的耐药株中,TopoⅡα的表达水平均明显低于亲本细胞,而与ERS各个通路相关基因均有不同程度的激活。结论成功建立了针对ActD和VP16耐药的绒癌细胞系JEG-3/ActDB1和JEG-3...     

膜联蛋白A4与妇科肿瘤关系的研究进展

膜联蛋白A4(Anxa4)是膜联蛋白超家族中的重要成员之一,介导细胞凋亡、分化,参与肿瘤的增殖、侵袭和转移、血管发生和化疗耐药等。近年多项研究表明Anxa4在不同类型的卵巢癌及子宫内膜癌等肿瘤中差异表达:相对于化疗敏感的卵巢浆液性癌,化疗抗拒(chemoresistant)的卵巢透明细胞癌高表达Anxa4,恶性程度较高的子宫内膜浆液性癌相对于子宫内膜样腺癌则高表达Anxa4,但相对于母系卵巢浆液性腺癌细胞系,铂类抗拒的子细胞系低表达Anxa4,Anxa4高表达与宫颈癌细胞系He La细胞抗拒化疗药物所诱导的凋亡有关。而Anxa4与上述肿瘤化疗敏感性相关的分子机制涉及钙离子信号等通路调节、化疗药物转运等相关的"非基因转录效应",还有与核因子κB(NF-κB)信号通路相关的"基因转录效应"。就Anxa4与妇科肿瘤间的关系进行综述,探寻分子靶向Anxa4治疗肿瘤的研究依据。     

绒毛膜癌细胞的融合与侵袭和转移能力变化关系的研究

目的:观察人绒毛膜癌(绒癌)细胞系中BeWo细胞株在福斯考林(forskolin)诱导融合前后细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及上皮钙黏蛋白(E-cad)的表达变化,以探讨绒癌细胞融合与其浸润和转移能力变化的关系。方法:用BeWo细胞株进行培养传代,以100mmol/L浓度的forskolin作用于BeWo细胞,用逆转录聚合酶链(RT-PCR)方法检测细胞中人类内源性逆转录病毒基因编码的膜糖蛋白(Syncytin mRNA)表达量的变化;免疫印迹技术(Western blot)方法检测细胞中表达MMP-2及E-cad蛋白表达量的变化。结果:以BeWo细胞作为靶细胞,根据RT-PCR和Western blot方法中条带的形状和亮暗程度可知Syncytin基因和E-cad及MMP-2蛋白的表达呈时间依赖性,随着forskolin作用时间的增加,Syncytin基因及E-cad蛋白的表达逐渐增加,而MMP-2蛋白表达量逐渐减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:Syncytin高表达与融合后绒癌细胞的浸润转移能力的改变可能有一定关系,Syncytin的检测有望成为滋养细胞肿瘤患者判定预后的有价值的指标...     

乌司他丁通过调节uPA表达对绒癌细胞体外侵袭能力的影响

目的:探讨尿胰蛋白酶抑制剂(UTI)乌司他丁(Ulinastatin)对绒癌细胞侵袭力的影响及其作用机制。方法:Matrigel体外侵袭实验比较绒癌细胞JEG-3和JAR的体外侵袭能力及不同浓度乌司他丁对JEG-3细胞体外侵袭能力的影响,半定量RT-PCR法检测两种细胞内uPA mRNA表达及不同浓度乌司他丁对JEG-3细胞中uPA mRNA表达的影响。结果:JEG-3细胞体外侵袭能力(201±21)明显强于JAR细胞(106±18),两者差异有统计学意义(P0.001);细胞内uPA mRNA表达JEG-3(0.3835±0.01255)明显高于JAR(0.1057±0.01664),两者差异有统计学意义(P0.01);在本实验的浓度范围内,乌司他丁浓度达100U/ml及以上时,各组JEG-3细胞中uPA mRNA表达水平、穿膜细胞数与对照组相比,差异均有统计学意义(P0.05),不同浓度组间差异亦有统计学意义(P0.05),uPA mRNA表达水平、穿膜细胞数与药物浓度之间呈负相关(r=-0.862,P0.05;r=-0.885,P0.05);细胞侵袭力与细胞中uPA mRNA表达水平呈正相关(r=0.996,P0.05)。结论:uPA可能是与绒癌侵袭转移相关的基因,UTI可通过下调uPAmRNA表达抑制绒癌JEG-3细胞的体外侵袭转移。     

livin及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白在子宫颈鳞癌组织中的表达及意义

livin基因是Kasof和Gomes[1]发现的凋亡抑制蛋白家族(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)的新成员,在恶性黑色素瘤及肾细胞癌中高表达.最新研究表明,livin基因在食管癌、喉鳞状细胞癌及骨肉瘤等的发生、发展中发挥重要的作用[2-4].半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)是凋亡相关蛋白酶家族成员之一,它参与了细胞凋亡过程中的形态学与生化指标的改变,被认为是引发细胞凋亡的重要执行者.Nachmias等[5]认为,IAPs,主要通过与特异性的caspases结合,抑制caspases的活性,从而阻断细胞凋亡.本研究采用免疫组化法检测livin、caspase-3蛋白的表达,探讨其在宫颈鳞癌发生、发展中的作用.