ERK1／2抑制剂PD98059对大肠癌细胞侵袭和转移的影响

目的观察细胞外信号调节蛋白激酶（ERK1／2）抑制剂PD98059对大肠癌细胞侵袭和转移的影响,探讨其可能机制。方法PD98059不同浓度（0、10、20、40μmo1／L）干预大肠癌细胞24h。用Boyden小室检测其体外运动和侵袭能力,Western blot法检测ERK1／2磷酸化蛋白和ERK1／2蛋白表达情况。结果随着PD98059剂量增大,大肠癌细胞穿膜数逐渐减少（P〈0．05）,磷酸化ERK1／2蛋白水平逐渐降低（P〈0．05）,ERK1／2蛋白水平无明显变化（P〉0．05）。结论PD98059能抑制大肠癌细胞的运动和侵袭力;其机制与PD98059抑制磷酸化ERK1／2有关。     

细胞外信号调节激酶1/2途径参与甲状旁腺素1-34诱导的心肌细胞肥大

目的 观察丝裂素活化蛋白激酶的上游激酶1(MAPKK,MEK1)抑制剂PD98059对大鼠甲状旁腺素1-34(rPTH1-34)诱导的心室肌细胞肥大的影响及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)表达的变化,分析MEK/ERK途径的可能作用. 方法 体外培养新生大鼠心室肌细胞,10-7mol/LrPTH1-34诱导建立心肌细胞肥大模型,在模型中加入2×10-5mol/L PD98059,Motic Images Advanced 3.0软件测定细胞直径、3H-亮氨酸掺入实验检测细胞蛋白合成速率、RT-PCR半定量测定心房利钠肽mRNA、Western blot方法观察ERK1/2、磷酸化ERK1/2蛋白表达的变化. 结果 与正常组相比,10-7mol/L rPTH1-34孵育24 h可使体外培养的心肌细胞直径增加13.6 μm、细胞蛋白合成速率增加898 cpm/well,使心房利钠肽mRNA表达增加73.9%,p-ERK1/2蛋白表达增加15%(P＜0.05).与PTH组相比,预先给予PD98059可使细胞直径减少7.1 μm,细胞蛋白合成速率减少644 cpm/well,心房利钠肽mRNA表达下降52.2%,磷酸化ERK1/2蛋白表达减少18%(P＜0.05).单独使用PD98059对正常心肌细胞没有影响(P＞0.05). 结论 PD98059通过抑制ERK1/2、磷酸化ERK1/2的表达阻断了心肌细胞肥大反应,MEK/ERK1/2途径的活化参与了rPTH1-34的致肥大作用.     

大鼠心肌钙敏感受体蛋白的表达及其与心肌细胞凋亡的关系

目的观察大鼠心肌组织和心肌细胞钙敏感受体（CaSR）蛋白表达与心肌细胞凋亡及相关信号传导途径的关系。方法Western blot检测心肌CaSR蛋白和ERK1／2、BCl2及Caspase3的表达。免疫荧光和流式细胞仪观察细胞凋亡。结果心肌组织和心肌细胞表面可检测到CaSR蛋白的表达。CaSR激动剂氯化钆（GdCl3）能促进心肌细胞凋亡,并使ERK1／2的磷酸化增加、BCl2表达及Caspase3活化。加入酪氨酸蛋白激酶阻断剂PD98059后,心肌细胞凋亡率增加,ERK1／2磷酸化降低,BCl2表达消失,Caspase3活化增强。结论CaSR蛋白在心肌细胞膜表面表达,其激活通过Caspase3活化,促进心肌细胞凋亡。同时亦可激活酪氨酸蛋白激酶途径。     

肿瘤转移抑制基因KAI1诱导的自噬通过下调Caspase-3活化抑制凋亡

目的 观察KAI1基因诱导的自噬在人胰腺癌MiaPaCa-2细胞中调节凋亡的分子途径.方法 实验分为用细胞外调节蛋白激酶( ERK)的磷酸化阻断剂PD98059预处理组、Caspase-3的活化阻断剂VAD-FMK预处理组和未用PD98059、VAD-FMK预处理组3大组;每大组再分3小组进行不同处理,感染腺病毒空载体AD5-null对照组、感染人KAI1基因的重组腺病毒载体AD5-KAI1组和用自噬阻断剂3 MA预处理阻断自噬后再感染AD5-KAI1组.通过膜朕蛋白V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡,流式细胞术评价Caspase-3活化水平,Western印迹检测ERK磷酸化水平和PARP蛋白的裂解情况.结果 感染AD5-KAI1后癌细胞表达KAI1蛋白的同时绿色荧光蛋白(GFP) LC3绿色颗粒增加,Caspase-3活化、PARP-1裂解、ERK磷酸化和凋亡均明显增多.自噬阻断剂3-MA预处理后,凋亡率由(63.0±7.9)％升至(88.0±4.5)％,Caspase-3活化由(34.0±2.8)％升至(44.2±4.0)％,同时PARP-1裂解更多.Caspase-3阻断剂VAI-FMK预处理可完全抑制3-MA预处理导致的促凋亡作用.ERK磷酸化抑制剂PD98059不能抑制3 MA预处理导致的促凋亡作用.结论 KAI1诱导的自噬通过抑制细胞中Caspase-3活化和PARP裂解而不是通过抑制ERK磷酸化来拮抗KAI1诱导的凋亡.     

17β-雌二醇抑制碱性成纤维细胞生长因子诱导的血管外膜成纤维细胞增殖

目的探讨17β-雌二醇(E2)对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的血管外膜成纤维细胞(VAF)增殖的影响。方法将培养的血管外膜成纤维细胞分4组:对照组,单纯bFGF组,单纯E2组,bFGF+E2组。用3H-Tdr掺入反映细胞DNA合成3、H-Proline掺入反映细胞的胶原合成状况;用Western Breeze检测血管外膜成纤维细胞中细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)的蛋白表达及活性。结果bFGF使血管外膜成纤维细胞DNA合成增加18~23倍、胶原合成增加17~21倍、细胞数目增加18~22倍,E2可使bFGF的这些促血管外膜成纤维细胞增殖效应降低约50%。bFGF使VAF中ERK蛋白表达量增加350%,使ERK磷酸化蛋白表达量增加120%,E2使bFGF诱导的VAF中ERK蛋白表达量下降44%,ERK磷酸化蛋白表达量下降22%;E2使bFGF诱导的VAF中MKP-1的蛋白表达量增加154%。结论E2可抑制bFGF诱导的VAF增殖,其抑制VAF增殖与抑制VAF中ERK蛋白表达,降低ERK活性,促进MKP-1表达有关。     

人白细胞介素10对血管紧张素II诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

目的　观察重组人白介素 10 (rhIL 10 )对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖及对 p4 4 /p4 2丝裂素活化蛋白激酶的影响。　 方法　体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,采用MTS/PES(methoxyphenyl tetrazoliumsalt/phenazineethosulfate)法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。利用 p4 4 /p4 2磷酸化抗丝裂素活化蛋白激酶抗体的蛋白免疫印迹法测定丝裂素活化蛋白激酶蛋白的表达 ;对照组为未用AngⅡ刺激的血管平滑肌细胞。　 结果　AngⅡ对大鼠血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用 (1 311± 0 2 0 1对 0 781± 0 2 36 ,P <0 0 5 )。rhIL 10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响 (0 783± 0 170对 0 781± 0 2 36 ,P >0 0 5 )。在AngⅡ刺激下 ,1、10、10 0ng/ml的rhIL 10均可抑制血管平滑肌细胞的生长 (分别为 0 984± 0 172、 0 932±0 134、0 784± 0 0 97对 1 311± 0 2 0 1,P <0 0 5 )。AngⅡ对p4 4 /p4 2丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达有显著的增强作用 (5 12± 78对 10 0 ,P <0 0 1) ,此作用可被rhIL 10抑制 (5 12± 78对 32 9± 5 9,P <0 0 1)。　结论　rhIL 10可抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖及 p4 4 /p4 2丝裂素活化蛋白激酶蛋白的表达。     

心房颤动心房组织内细胞外信号调节激酶和血管紧张素转化酶表达的研究

目的　探讨心房颤动 (房颤 )心房组织内细胞外信号调节激酶 (ERK1、ERK2 )和血管紧张素转换酶 (ACE)表达的变化。方法　 5 2例风湿性心脏病患者 ,在心脏外科手术时取右心耳组织 ,采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术测定ERK的mRNA表达量 ,免疫印迹 (Westernblotting)测定磷酸化ERK1、ERK2 ,ERK激活激酶 (MEK1、2 )和ACE蛋白水平 ,免疫组织化学技术观察磷酸化ERK1、ERK2在心房组织中的分布。结果　持续性房颤组 (19例 )ERK2 mRNA表达量以及磷酸化ERK1、ERK2 、ACE和MEK1、2 量较窦性心律组 (2 1例 )均明显增加 [ERK2 mRNA :(76 1± 19 7)U与 (30 9± 2 4 0 )U ,P <0 0 5 ;ERK1:(2 4 8± 5 4 ) %与 (10 0± 2 1) % ,P <0 0 1;ERK2 :(30 2± 4 9) %与 (10 0± 2 2 ) % ,P <0 0 1;ACE :(2 98± 4 5 ) %与 (10 0± 2 4 ) % ,P <0 0 1;MEK1、2 :(16 9± 2 1) %与 (10 0± 8) % ,P <0 0 5 ];持续性房颤组和阵发性房颤组 (12例 )之间各指标均无明显差别 ;免疫组织化学显示增加的ERK1、ERK2 均分布在心房间质细胞。结论　研究提示心房间质细胞内激活的磷酸化ERK1、ERK2 表达的增加可能有赖于心房组织ACE表达的增加 ,这可能是房颤时心房纤维化的分子机制之一。     

活化蛋白C对重症急性胰腺炎大鼠丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路对重症急性胰腺炎（SAP）继发严重并发症起早期关键介导作用，相应抑制剂可改善SAP的病情。活化蛋白C（APC）具有改善SAP病情的作用，其具体机制尚未阐明。目的：观察APC对SAP大鼠MAPK信号通路中主要激酶的影响以及后续炎症介质的变化，为临床用药提供理论依据。方法：Sprague．DawleY大鼠诱导SAP模型后即刻静脉注射APC10μg/kg或50μg/kg。以基因芯片检测胰腺组织MAPK信号通路相关基因。以实时定量聚合酶链反应（real-timePCR）和蛋白质印迹法检测胰腺组织该通路中p38MAPK、c-Jun氨基端激酶/应激活化蛋白激酶（JNK/SAPK）、细胞外信号调节激酶（ERK）1/2mRNA、蛋白和磷酸化蛋白水平的表达，同时检测肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-1β蛋白的表达。结果：与APC治疗组和正常对照组相比，SAP组胰腺组织p38MAPK和JNK2mRNA呈高表达。与SAP组相比，50Ixg/kgAPC治疗组p38MAPK、JNK/SAPK蛋白/磷酸化蛋白表达水平显著降低，ERK1/2蛋白/磷酸化蛋白表达水平显著升高，TNF-α和蛋白表达水平显著降低（P均〈0．05）。APC治疗组p38MAPK、磷酸化ERK1/2和TNF-α蛋白表达水平呈剂量依赖性（P均〈0．05）。结论：APC可抑制SAP大鼠胰腺组织MAPK信号通路内p38MAPK和JNK/SAPK的表达和活化，进而抑制TNF-α和IL-1β的释放，同时上调ERK1/2的表达和活化．从而减轻胰腺组织损伤。     

肾炎宁对LPS诱导人肾小球系膜细胞增殖及细胞外信号调节蛋白激酶的影响

目的 探讨肾炎宁对人肾小球系膜细胞(HMC)细胞增殖及细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,ERK)的影响.方法 应用细胞培养技术,进行HMC培养,采取血清药理学方法,制备肾炎宁药物血清,利用脂多糖(LPS)为刺激因子,应用四唑盐(MTT)比色法和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞的增殖和磷酸化ERK1/2的表达.结果 肾炎宁可显著抑制HMC增殖,抑制率在12、24和48 h分别为16.0%、15.4%、18.2%,LPS组磷酸化ERK1/2的含量与空白组比较明显升高(P<0.05);中药组与空白组比较,磷酸化ERK1/2含量明显降低(P<0.05);LPS+肾炎宁组与LPS组比较,磷酸化ERK1/2表达明显降低 (P<0.05).结论 肾炎宁具有抑制正常培养条件及LPS刺激条件下磷酸化ERK1/2,从而发挥对肾小球硬化的治疗作用.     

过氧化体增殖物激活型受体γ和δ在高密度脂蛋白介导细胞胆固醇流出中的作用

为探讨过氧化体增殖物激活型受体γ和δ在高密度脂蛋白介导的细胞胆固醇流出中的作用。取新鲜抗凝血浆 ,用超速离心机进行密度梯度离心 ,收集密度为 1 .0 6 3～ 1 .2 1 0组分。U937细胞用 5 0～ 4 0 0nmol L反义过氧化体增殖物激活型受体γ和δ预处理细胞 1 2h。培养U937细胞与 0 .2 8mCi L [3H] 胆固醇乙醇液共孵育 2 4h ,15 0 0r min离心 1 0min ,收集细胞 ,PBS漂洗 2次 ,RPMI 1 6 4 0重悬细胞 ,加HDL继续培养 0～ 4 8h。液体闪烁计数仪测细胞相对放射活性。Westernblot检测过氧化体增殖物激活型受体γ和δ蛋白表达水平。不同浓度HDL处理后细胞胆固醇流出具有明显差异 ,呈剂量 -效应关系。用 1 0 0nmol L反义过氧化体增殖物激活型受体γ处理 2 4h后 ,HDL介导的细胞胆固醇流出减少 (4 5 78± 2 0 6 ) ,与对照组 (4 0 2 4± 385 )比较差别有显著性。过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂ciglitizone预处理后 ,HDL介导的细胞胆固醇流出增加 ,用 0、2 5、5 0、1 0 0、2 0 0 μmol Lciglitizone处理的放射活性分别为 4 371± 2 4 3、386 9± 2 1 2、346 9± 2 0 9、31 5 6± 31 5和 30 2 0± 2 96。反义过氧化体增殖物激活型受体δ处理后 ,HDL介导的细胞胆固醇流出略有增加 ,处理浓度达 4 0 0nmol L时的放射活     

IGFBP-2对U251细胞增殖和ERK1／2磷酸化及核转移的影响

目的探讨外源性胰岛素样生长因子结合蛋白2（IGFBP-2）对人胶质母细胞瘤细胞株U251细胞增殖的影响及可能通过的信号转导通路。方法MTT比色法检测IGFBP-2对U251细胞增殖的影响;Westernblot检测IGFBP-2对细胞外信号调节蛋白激酶（ERKI／2）磷酸化的影响;免疫荧光染色观察IGFBP-2对磷酸化ERK1／2细胞内转位的影响。结果各浓度外源性IGFBP-2（125、250、500ng／m1）均促进U251细胞增殖（P〈0．01）;在U251细胞中500ng／mlIGFBP-2作用5min磷酸化ERK1／2增加近1倍（P〈0．05）,作用30rain磷酸化ERK1／2增加2倍以上（P〈0．05）;500ng／mlIGFBP-2作用30min磷酸化ERK1／2发生核转移（P〈0．01）。结论IGFBP-2可能通过ERK信号通路促进U251细胞增殖。     

沥水调脂胶囊对轻度修饰低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞丝裂原活化蛋白激酶信号转导的影响

轻度修饰低密度脂蛋白 ;　血管平滑肌细胞[摘　要 ]　为了探讨健脾祛痰化瘀方———沥水调脂胶囊对轻度修饰低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞丝裂原活化蛋白激酶信号转导的影响 ,采用血清药理学通法制备含药血清 ,以甲醇除蛋白预处理 ;以Cu2 + 氧化制备轻度修饰低密度脂蛋白 ;用磷酸化抗体以WesternBlot方法分析c junN端激酶 1、细胞外信号调节激酶 1和 2的磷酸化。结果发现 ,2 0 %含药血清可明显降低 0 .5h和 1h轻度修饰低密度脂蛋白诱导的c junN端激酶 1磷酸化 (P <0 .0 5 ) ,而对细胞外信号调节激酶 1和 2无明显影响。结果提示 ,降低c junN端激酶 应激活化蛋白激酶信号可能是沥水调脂胶囊抑制血管平滑肌细胞增殖的机制之一。     

糖基化终产物对U937巨噬细胞高密度脂蛋白受体蛋白表达的影响

目的　研究诱导分化及糖基化终产物 (AGEs)对人单核 /巨噬细胞 (U937细胞 )高密度脂蛋白受体 (SR BI)蛋白表达的影响 ,探讨AGEs和巨噬细胞SR BI在动脉粥样硬化中的作用。方法　U937细胞经PMA诱导分化 ,并将不同浓度或同一浓度AGEs与诱导分化 48h后的U937细胞共同孵育 ,用免疫细胞化学法和Western印迹法检测SR BI蛋白的表达。结果　诱导分化后U937细胞SR BI表达在 2 4、48h逐渐升高 ,72h下降 ;1 0 0、2 0 0和 40 0 μg/mlAGEs刺激后细胞表面SR BI蛋白表达量分别是BSA组的 1 44、2 38和 2 77倍 (P <0 0 5) ;40 0 μg/ml的AGEs作用 6、1 2、2 4、48h后 ,U937巨噬细胞SR BI蛋白表达量分别为 0h的 1 38、2 49、3 76和 4 2 5倍 (P <0 0 5)。结论　AGEs可增加U937巨噬细胞SR BI蛋白表达且呈浓度和时间依赖性。     

抑制脂筏对肝细胞生长因子受体介导的信号跨膜转导作用的影响

目的 探讨脂筏在肝细胞生长因子受体介导的信号跨膜转导中的作用.方法 采用甲基-β-环糊精(MβCD)处理HepG2细胞,以干扰脂筏的形成,然后加入人工重组肝细胞生长因子以活化其受体.采用Western blot技术及计算机扫描定量分析分别检测MβCD处理组和对照组细胞磷脂酶Cγ1(PLCγ1)/二脂酰甘油/蛋白激酶C信号通路、磷脂酰肌醇-3-激酶/磷脂酰肌醇依赖的蛋白激酶/蛋白激酶B信号通路和有丝分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号通路活性的变化.结果 (1)用MβCD处理细胞后,细胞PLCγ1磷酸化程度降低,为对照组的65%(P=0.022);胞浆中PLCγ1含量增加,为对照组的1.75倍(P=0.017);膜结合的PLCγ1减少,为对照组的70%(P=0.037).(2)用MβCD处理细胞后,胞浆中蛋白激酶B含量减少,为对照组的62%(P=0.028),同时膜结合的蛋白激酶B磷酸化程度降低,为对照组的86%(P=0.041).用MβCD处理细胞同时可抑制磷脂酰肌醇依赖的蛋白激酶由胞浆向质膜的转移及活化.(3)MβCD处理对MAPK信号通路,包括细胞外信号调节蛋白激酶/MAPK信号通路、p38/MAPK信号通路和C-Jun N末端蛋白激酶/MAPK信号通路均无显著的影响.结论 抑制脂筏形成可下调肝细胞生长因子/c-Met对PLCγ1/二脂酰甘油/蛋白激酶C信号通路和磷脂酰肌醇-3-激酶/磷脂酰肌醇依赖的蛋白激酶/蛋白激酶B信号通路的活化.     

乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒对MEK蛋白信号转导影响的研究

丝裂原活化蛋白激酶 (mitogen activatedproteinki nase ,MAPK)是生物体内重要的信号转导系统之一 ,参与介导生长、发育、分裂、分化、死亡以及细胞间的功能同步等多种细胞过程。在哺乳动物细胞中已发现和克隆了ERK、JNK/SAPK、p38/RK、ERK5 /BMKl四个MAPK亚族。这些MAPK能被多种炎性刺激因素所激活 ,并对炎症的发生、发展起重要调控作用。主要对细胞从整个G1期过度到S期起决定性作用 ,具有双重特异性的MAP激酶的激酶 (MEKl和MEK2 )磷酸化和激活后 ,可以激活细胞外信号调节激酶 (ERK) 1和ERK2。激活的ERK可使磷酸化许多…     

MAPK／ERK1／2信号转导途径与记忆关系

MAPK／ERK1／2（mitogen—activated protein kinase）信号转导途径是一条可被多种细胞外刺激因素广泛激活的有丝分裂原活化蛋白激酶通路,介导了细胞的增殖、分化和死亡多种病理生理过程。是一条关键的细胞信号转导途径,还和认知学习记忆密切相关,本文综述了MAPK／ERK1／2信号转导途径与学习、记忆的关系。     

整合素与钙通道协同调节人肾小管上皮细胞转分化过程及其机制

目的 用转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人肾小管上皮细胞（HK-2）转分化,探讨转分化过程中可能的细胞信号转导机制。方法 25ml TGF-β1（5ng／ml）刺激HK-2,用特异性细胞外信号调节激酶（ERK）抑制剂PD98059（25μmol／L）和（或）钙通道拮抗剂Nifedipine（10μmol／L）处理;于不同时间段分别用免疫荧光、S-P法和免疫印迹法检测黏着斑激酶（FAK）、整合素β1（β1-Integrin）。结果 相比空白组TGF-β1成功诱导HK-2转分化;TGF-β1刺激15min后FAK-Tyr397磷酸化增强,60min达顶峰。相比TGF-β1对照组,PD98059使FAK-Tyr397的磷酸化减弱（P〈0．05）,而Nifedipine无明显抑制作用（P〉0．05）,两者协同作用明显（P〈0．01）;PD98059使FAK蛋白表达呈时间依赖性减弱（P〈0．05）,PD98059及Nifedipine均呈时间依赖性抑制β1-Integrin表达（P〈0．05）。二者协同作用明显（P〈0．01）。结论 TGF-β1与Integrin信号通路之间通过ERK／FAK相互作用;钙通道参与调节FAK活化及FAK与β1-Integrin的表达。     

细胞外调节蛋白激酶与端粒酶对肝癌细胞SMMC-7721凋亡的调控作用

目的研究3种化疗药物抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖、促进细胞凋亡过程中端粒酶活性及细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化蛋白表达水平的变化,探讨端粒酶与ERK在肝癌细胞凋亡过程中的调节作用及相互之间的关系. 方法用MTT法、流式细胞术检测法、端粒重复序列扩增法(TRAP法)、生物发光分析法及western blot检测法. 结果 3种化疗药物使肝癌细胞增殖受抑并诱发凋亡(细胞凋亡率分别为21.12%、28.83%、12.30%)的同时,端粒酶活性也有不同程度减低(抑制率分别为0.28%±0.08%,0.25%±0.16%,0.24%±0.11%);处于活化状态的磷酸化ERK1/2蛋白表达水平下降. 结论 ERK通路可能是化疗药物下调端粒酶活性,进而促进细胞凋亡的机制之一.     

细胞色素P450表氧化酶通过PI3K/AKT及ERK/MAPK途径抗内皮细胞凋亡的机制

目的:研究细胞色素P450表氧化酶对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导内皮细胞抗凋亡的机制。方法:在原代培养的牛主动脉内皮细胞(BAECs)中,分别转染细胞色素P450表氧化酶基因rAAV-F87V2周,证实其在内皮细胞中高效表达。用TNF-α(10ng/ml)和放线菌素D(ActD)(5ng/ml)诱导凋亡,流式细胞计数观察其凋亡变化,用Western blot法检测蛋白激酶B(AKT)及细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)的磷酸化水平,用流式细胞计数的方法观察空白组及转染F87V组加入AKT抑制剂、LY294002、芹菜素及PD98059后的细胞凋亡比例。结果:与对照组比较,转染细胞色素P450表氧化酶基因后BAECs能高效表达P450表氧化酶基因F87V(P<0.05);流式计数凋亡细胞数,转染表氧化酶较对照组明显减少(P<0.05);转染CYP P450表氧化酶后,AKT及ERK的磷酸化增加;磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和MKK的抑制剂后转染F87V组较对照组凋亡细胞比例明显减少(P<0.05)。结论:细胞色素P450表氧化酶基因rAAV-F87V能通过MAPK(ERK1/2)与PI3K/AKT途径发挥抗凋亡作用。     

ERK1/2通路对Genistein与5-FU诱导的人肝癌细胞周期阻滞的影响

目的:探讨染料木黄酮(Genistein,Gen)与5氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)诱导人肝癌M H C C97-L细胞周期阻滞与细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinasesERK)1/2信号通路的关系.方法:MTS法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测总ERK1/2和磷酸化ERK1/2蛋白表达.结果:Gen与5-FU单用及联用均能抑制肝癌MHCC97-L细胞增殖;Gen诱导细胞S期阻滞少量抑制ERK1/2磷酸化,ERK1/2抑制剂可促进Gen对MHCC97-L细胞的生长抑制作用,而对S期阻滞无明显影响;5-FU单用和二者联用组均阻滞S期细胞,并显著激活ERK1/2磷酸化ERK1/2抑制剂可促进两组药物对MHCC97-L细胞的生长抑制和诱导S期阻滞作用.结论:Gen与5-FU单用及联用均可通过阻滞细胞周期来发挥抗肝癌细胞增殖的作用;抑制ERK1/2通路可抵抗Gen诱导的肝癌细胞S期阻滞,而促进5-FU单用和二者联用组诱导肝癌细胞S期阻滞.