免疫球蛋白和T细胞受体基因重组

表面免疫球蛋白,在B细胞表面的抗原乏体分子是由两个重链和两个轻链以两个双流链共价联结而成。每一个链由一个恒区(对于特殊类型的所有的链都是相同的),和一个变区(从一个链到另一个链都是有变化的)所组成。免疫球蛋白Ig的轻链和重链通过特殊的基因座被编码于不同染色体上。70年代中期,Tonegawa及其同事进行了广泛的研究,正明(Ig)重链(H)和轻链(L)基因的胚系图形     

T细胞淋巴瘤T细胞受体γ链基因重排的检测

目的 探讨T细胞淋巴瘤T细胞受体γ链基因重排的情况。方法 用免疫组化标记筛选30例T细胞淋巴瘤、2例高度可疑为T细胞淋巴瘤和10例淋巴结反应性增生，采用聚合酶链式反应扩增方法检测T细胞受体7链基因重排。结果 30例T细胞淋巴瘤中27例和2例高度可疑为T细胞淋巴瘤均出现T细胞受体γ链基因重排．10例淋巴结反应性增生均无T细胞受体γ链基因重排。结论 T细胞淋巴瘤病变中存在T细胞单克隆增生，支持肿瘤单克隆起源学说；T细胞受体γ链基因重排检测是区分T细胞淋巴瘤和淋巴结反应性增生的有效方法，且对T细胞淋巴瘤疑难病例的诊断有帮助。     

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因对人胶质母细胞瘤细胞的杀伤效应研究

目的　研究单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV1 TK)基因转染并联合抗病毒药更昔洛韦 (Ganciclovir ,GCV)对人胶质母细胞瘤细胞的杀伤效应。方法　采用基因工程技术构建带HSV1-TK基因的逆转录病毒重组体pLX SN TK ,采用脂质体介导入PA317包装细胞 ,建立重组逆转录病毒载体分泌细胞株PA317 TK ;用该细胞上清液转导人胶质母细胞瘤细胞 ,用不同浓度GCV作用人胶质母细胞瘤细胞SW0 38 C2 TK和野生型SW0 38 C2 ,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测 72h后细胞存活率 ,并求出半杀伤浓度。结果　重组逆转录病毒载体pLXSN TK能有效地将TK基因导入SW0 38-C2细胞内 ,并使其获得对GCV的敏感性 ;体外细胞毒实验 :在 2 0 μmol LGCV存在的情况下 ,野生型细胞无明显改变 ,而实验组细胞明显死亡 ,半杀伤浓度IC50 为 0 8μmol L ,与SW0 38 C2相比 ,对GCV的敏感性提高了 6 0 0倍 ,旁杀效果也较明显。结论　SW0 38 C2转染TK基因后 ,能有效地被GCV杀灭。显示了其潜在的临床应用价值     

T细胞受体基因转导及应用的研究进展

近年来研究发现,针对特异性抗原的过继性免疫治疗对于包括肿瘤在内的很多疾病是一种很有潜力的治疗方法。T细胞识别抗原的特异性主要由T细胞受体（TCR）决定的,TCR基因转导为肿瘤的过继免疫治疗提供了新途径。通过转导某些疾病相关抗原反应性T细胞克隆的TCR基因,使人外周血淋巴细胞具有针对其相关抗原的靶向性,在疾病治疗方面取得了一定的成效。     

淋巴瘤T细胞受体δ基因重排的研究

本文应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）方法对１７例淋巴瘤患者骨髓细胞Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）Ｖδ１－Ｊδ１基因重排进行了检测。１１例Ｔ细胞淋巴瘤中５例发生ＴＣＲＶδ１－Ｊδ１基因重排，６例Ｂ细胞淋巴瘤和１０例正常骨髓细胞无ＴＣＲＶδ１－Ｊδ１基因重排。研究表明：ＴＣＲＶδ１－Ｊδ１基因重排显示细胞系列的特异性，是Ｔ细胞恶性肿瘤的克隆标志。     

系统性红斑狼疮患者外周血γδT细胞受体V区基因取用的初步研究

目的 探讨系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者外周血中γδＴ细胞受体（ＴＣＲ）Ｖ区基因限制性取用。方法 应用ＰＣＲ特异性扩增、Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ及ＤＩＧ杂交等方法检测在ＳＬＥ患者的正常人外周血中ＴＣＲγ链、δ链Ｖ区基因的表达。结果 与正常对照相比,发现ＳＬＥ患者在Ｖγ基因、Ｖδ基因均表现出限制性取用在７例ＳＬＥ患者中均未检测到ＶγⅡ、Ｖδ４、Ｖδ６。结论 提示ＳＬＥ患者ＴＣＲγδ链基因组的变可能造成     

构建单纯疱疹病毒Ⅱ型胸苷激酶基因真核表达载体

从单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV－Ⅱ）Sav株感染的Hep-2细胞培养液和细胞裂解液中提取HSV－Ⅱ基因组DNSA，以此为模板，用PCR方法获取胸苷激酶（TK）基因，将获取的DNA片段克隆入真核表达载体pcDNA3中，筛选阳性克隆测序，结果表明：本研究获取的HSV－Ⅱ－TK基因全部编码区为1128bp，编码376个氨基酸，结果表明：本研究扩增出HSV－ⅡTK基因的全部编码区序列，并成功构建真核表达载体pcDNA3／TK.     

老年人急性白血病T细胞受体VγI-Jγ基因重排分析

OBJECTIVE: To obtain insight into the molecular mechanism of acute leukemia in elderly patients in relation to the clinical features of the disease. METHODS: DNA specimens were obtained from 34 elderly patients with acute nonlymphoblastic leukemia (ANLL), 9 elderly patients with acute lymphoblastic leukemia (ALL) and 10 healthy blood donors. Polymerase chain reaction (PCR) coupled with single-strand conformation polymorphism (SSCP) was performed to detect T cell receptor (TCR) V gamma I-J gamma gene rearrangement. RESULTS: In the 34 elderly ANLL patients, 47.1% (16/34) were found with TCRV gamma I-J gamma gene rearrangement, showing a higher rate of the rearrangement than in younger ANLL patients (P<0.025). TCRV gamma I-J gamma gene rearrangement was identified in 7 (77.8%) of the 9 elderly patients with ALL, and 3 of the identified cases had oligoclonal/ subclonal rearrangement, suggesting a higher rate of oligoclonal/subclonal rearrangement in elderly ALL patients than in younger ALL patients (P<0.01). None of the blood donors was found with TCRV gamma I-J gamma gene rearrangement. The complete remission rate was lower in the elderly ANLL patient with TCRV gamma I-J gamma gene rearrangement than in those without (P<0.05). CONCLUSION: The detection of TCRV gamma I-J gamma gene rearrangement can be of value in assessing the therapeutic effect and making prognostic prediction in elderly patients with acute leukemia.     

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因在肝癌基因治疗实验中的初步应用

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因在肝癌基因治疗实验中的初步应用戈凯郑仲承冯学胜孙兰英汤钊猷刘新垣自１９９２年８月以来，美国利用逆转录病毒载体将ＨＳＶ－ＴＫ基因直接导入治疗恶性脑瘤，治疗了１０例患者，其中６例仍然存活［１］，显示ＨＳＶ－ＴＫ基因治疗肿瘤可能有临...     

KG1a细胞体外诱导人外周血T细胞杀伤活性和TCR VβT细胞增殖的研究

【摘　要】　目的　了解急性髓系白血病KG1a细胞体外诱导人外周血T细胞的特异性细胞毒作用和T细胞受体(TCR) Vβ谱系表达和克隆性情况。方法　分别以Jurkat和Raji细胞作为阳性和阴性对照,建立TCR Vβ谱基因扫描技术,并用其检测5例健康个体T细胞克隆表型。采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养方法,以照射后的KG1a细胞作为刺激原体外诱导外周血单个核细胞增殖,应用LDH释放法检测不同效靶比时诱导前后T细胞杀伤KG1a细胞的活性,同时利用基因扫描技术分析诱导后TCR Vβ亚家族的克隆性增殖特点。结果　基因扫描显示5例健康人全部TCR Vβ谱型均呈高斯(钟型)分布,各亚家族表达频率接近,但呈现不同的多态性和长度分布。KG1a细胞可以诱导出呈单克隆、寡克隆或寡克隆趋势生长的亚家族T细胞,并具有特异性识别和杀伤KG1a细胞的功能。结论　KG1a细胞在体外可诱导T细胞呈克隆性增殖,此优势增殖的克隆性T细胞具有特异性细胞毒作用,对KG1a细胞具有选择性杀伤作用。     

WT1多肽特异性T细胞受体基因转导正常T细胞的抗肺癌效应

目的通过基因转导技术获得WT1多肽特异性TCR基因转导的正常外周CD8+ T细胞,检测其对肺癌细胞的杀伤活性,探
讨TCR基因转导用于过继性细胞治疗肺癌的可行性及安全性。方法通过克隆HLA-A*2402限制性WT1特异性细胞毒性T细
胞（CTL）之TCR基因,经构建逆转录病毒载体后转导WT1-TCR基因至正常外周CD8+ T细胞;所获得的CD8+ T细胞对靶细胞
的杀伤效应经标准51Cr 释放试验测定。结果WT1-TCR 基因转导后的正常外周CD8+ T 细胞显示出对WT1 多肽负载的
HLA-A*2402+LCL细胞的特异性杀伤作用,同时TCR基因改造后的CD8+ T细胞可特异性杀伤HLA-A*2402及WT1表达阳性
的肺癌细胞株而不对HLA-A*2402表达阳性的正常细胞产生杀伤作用。结论这些数据论证了WT1-TCR基因转导正常外周T
细胞具有与亲代CTL一致的特异性杀伤特性,提示该方法用于过继性细胞免疫疗法治疗肺癌具有可行性。
     

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因表达对人肝癌细胞的生长抑制

使用转导有单纯疱疹Ｉ型病毒胸苷激酶（ＨＳＶ１－ＴＫ）基因的人肝癌ＳＭＭＣ７７２１细胞株建立了裸鼠移植瘤模型，并进行了在体和体外试验性无不环鸟苷（ＡＣＶ）治疗。结果发现基因转导后的肝癌细胞表现出对ＡＣＶ的敏感性，肝癌细胞生长抑制与ＡＣＶ的剂量有关；用药组裸鼠除平均瘤重明显低于对照组外，不凶细胞核分型指数降低，伴有细胞变性和坏死。结果表明：ＨＳＶ１－ＴＫ基因经逆转录病毒转导后，用ＡＣＶ诱导表达明显抑制     

免疫球蛋白重链T细胞受体γ基因重排在急性淋巴细胞白血病中的表达

目的：探讨初诊急性淋巴细胞白血病（ALL）患者免疫球蛋白重链（IgH）、T细胞受体γ（TCRγ）基因重排情况。方法：应用多聚酶链反应（PCR）检测19例初发ALL患者骨髓IgH、TCRγ基因重排。结果：19例标本中10例发生单一IgH基因重排，5例发生单-TCRγ基因重排，2例同时出现IgH/TCRγ基因重排。结论：ALL患者IgH基因重排几率高于TCRγ基因重排，且存在着交叉重排现象。     

APL细胞诱导脐血TCR Vα和Vβ亚家族T细胞增殖和细胞毒性研究

目的 了解急性早幼粒细胞性白血病(APL)细胞体外诱导脐血T细胞的TCR Vα和Vβ亚家族克隆性增殖及针对APL细胞特异性杀伤情况.方法 采用混合淋巴细胞和肿瘤细胞培养(MLTC)方法,利用APL细胞体外诱导脐血T细胞增殖,用RT-PCR和基因扫描分析MLTC后T细胞的29个TCR Vα亚家族基因和24个TCR Vβ亚家族基因的互补决定区(CDR3),了解各亚家族的T细胞克隆性增殖特点,并应用LDH法分析诱导增殖的T细胞针对APL细胞特异性杀伤作用.结果 经APL细胞刺激后增殖的脐血T细胞表达部分Vα和Vβ谱系基因,并在Vα10、Vβ5和Vβ15出现有克隆增殖趋势,诱导后T细胞对APL细胞的杀伤性均高于未诱导组的T细胞.结论 APL细胞体外诱导脐血T细胞出现抗原相关的TCR Vα和Vβ亚家族优势利用和克隆性增殖;诱导后的T细胞对APL细胞具有特异性细胞毒性作用.