在人扁桃体细胞中诱生γ干扰素

本文初步研究了用人扁桃体细胞诱生γ干扰素及其影响因素。试验结果显示:细胞浓度在5×10~7/ml时产生的γ干扰素效价最高;PHA、PWM、ConA等T细胞促分裂剂诱生γ干扰素的适宜浓度范围分别为50～400μg/ml,2.5～40μg/ml,5～80μg/ml;诱生时间均以72小时为宜;2-ME对人γ干扰素的产生没有影响。本文还将人扁桃体细胞和外周血白细胞对4种γ干扰素诱生利(PHA、PWM、ConA、SEA)和3种α干扰素诱生剂(NDV、SPA菌体、CP)的反应进行了比较。     

肿瘤及肿瘤化疗病人外周血单个核细胞诱生γ—干扰素的比较

本文用高亲和力、高特异性的人重组γ-干扰素(rhIFN-γ)单克隆抗体A_3,建立的人γ-干扰素的免疫放射量度分析。检测范围为0.10～250U/ml.批内和批间变异系数分别为7.40%和17.3%,回收率为1±0.17,稀释试验符合线性关系(r=0.98),不与IFN-α,IFN-β交叉。用本法检测了29例正常人、34例肿瘤病人和19例肿瘤化疗病人外周血单个核细胞诱生IFN-γ的量。结果表明肿瘤病人和正常人外周血单个核细胞产生IFN-γ的能力无明显差别,化疗病人外周血单个核细胞产生IFN-γ能力显著低于正常人及未化疗的肿瘤病人(P<0.005),这可能是由于化疗杀伤了CD_4~+、CD_(?)~+细胞。     

银屑病外周血T细胞亚群与肿瘤坏死因子的研究

本文以结晶紫染料摄入法,检测52例寻常型银屑病患者内毒素诱导的外周血单个核细胞(PBMCs)产生肿瘤坏死因子(TNF)活性,并用T 细胞表型(T_1、T_4、T_8)单克隆抗体间接免疫荧光法,检测患者外周血T 细胞及其亚群的百分率。结果寻常型银屑病患者外周血TNF 诱生活性(6.13±2.41U/ml)、T_4细胞百分率(46.31±6.31%)及T_4/T_(?)比值(1.54±0.27)均显著低于正常人对照组(P<0.01),而T_(?)细胞百分率(30.33±2.12%)则明显增高(P<0.01)。表明银屑病患者存在细胞免疫功能缺陷;TNF 产生能力低下和T_4/T(?)的比例失调与银屑病的发病密切相关。     

乙肝病毒蛋白对慢性乙型肝炎患者PBMCs功能的影响

目的：乙肝病毒蛋白对不同感染状态慢性乙型肝炎患者的外周血单核细胞（PBMCs）功能的影响。方法：收集乙肝表面抗原（HBeAg）阳性丙氨酸氨基转移酶（ALT）异常者40例（A组）， 乙肝e抗原（HBeAg）阳性ALT持续正常者20例（B组）， HBeAg及 乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）阴性ALT正常者20例（C组），另外选择15例各型肝炎病原学标志检测均为阴性的健康体检者为正常对照组，分离培养外周血单核细胞，加入植物血凝素（PHA）、HBeAg、HBcAg, 培养48 h后，1 500 r/min 离心10 min,收集上清液-20 ℃保存，统一检测IFN-γ、IL-10含量。采用流式细胞仪检测外周血CD8＋CD28＋T细胞亚群。结果：IFN-γ在HBeAg阳性ALT正常组，HBeAg阳性ALT异常组中的含量明显低于正常对照组和HBeAg及 HBV-DNA阴性ALT正常组；IL-10在HBeAg阳性ALT正常组，HBeAg阳性ALT异常组中的含量明显高于正常对照组和HBeAg及 HBV-DNA阴性ALT正常组。CD8＋CD28＋T细胞在HBeAg阳性ALT正常组中明显低于其它各组。结论：HBeAg阳性的患者，Th1型细胞免疫反应明显低下，Th2型细胞免疫反应明显增高，CTL的数量减少。     

结核杆菌全菌裂解物和全脂质抗原对人外周血单个核细胞的作用

目的观察结核杆菌全菌裂解物和全脂质抗原对人外周血单个核细胞(PBMC)活化和增殖的作用。方法健康成人PBMC(1×106/ml)分别加结核杆菌全菌裂解物(10μg/ml)或全脂质(10μg/ml)进行刺激,同时给予重组人白介素-2(rhIL-2,50 U/ml)维持细胞增殖,另外设仅加rhIL-2的对照组,培养至第6、9、12天,收集培养扩增细胞,流式细胞术检测T细胞以及不同亚群的增殖情况和IFN-γ的产生。结果 2组抗原均能刺激PBMC中T细胞的增殖和活化,第9天时反应最为明显,与对照组相比,全菌裂解物组CD8+T细胞比例降低而CD4-CD8-T细胞比例明显增高;全脂质组CD4+T细胞以及CD4+CD8+T细胞比例增高,差异有统计学意义(P0.05)。培养至第12天,对分泌IFN-γ的细胞亚群分析,全菌裂解物组与全脂质CD8+T细胞所占比例均高于其相应的rhIL-2对照组(P0.05);全菌裂解物组CD8-T细胞所占比例低于其相应对照组(P0.05),而全脂质组高于其相应对照组(P0.05)。结论结核杆菌全脂质抗原与全菌裂解物一样,能激活特异性免疫反应,具有潜在的疫苗组分可能性。     

支原体肺炎患儿免疫球蛋白、T淋巴细胞亚群细胞因子检测的临床意义

目的:观察支原体肺炎(MPP)患儿外周血免疫球蛋白、T淋巴细胞亚群以及细胞因子的含量变化,并探讨其在MPP发病机制中的作用。方法:采用流式细胞技术检测43例MPP患儿和30例正常对照组儿童外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+,并用速率散射比浊法检测血清IgG、IgA和IgM含量,采用ELISA检测血清干扰素-γ(IFN-γ)、白介素(IL-2、IL-4和IL-6)水平。结果:MPP患儿外周血CD3+、CD4+T细胞百分率分别为61.45±6.75和33.52±5.81,较正常对照组68.28±7.34和38.71±6.29显著降低(P<0.05),CD8+T细胞和CD4+/CD8+比值较对照组无显著差别(P>0.05);MPP患儿血清免疫球蛋白与正常对照组比较,IgG和IgA均无明显差异,IgM较对照组增高(P<0.05);MPP患儿IFN-γ、IL-4、IL-6血清水平以及IFN-γ/IL-4比值较正常对照组明显增高(P<0.05),而IL-2水平低于正常对照组(P<0.05)。结论:MPP患儿存在免疫功能减低,免疫调节紊乱,辅助性T细胞亚群(Thl/Th2)失衡,并以Thl型细胞介导的免疫反应占相对优势状态。     

癫痫患者IFN-r、T细胞亚群及HLA-DR的检测

本文对28例癫痫患者的外周血单个核细胞(PBMCS)进行培养,测定了诱生的IFN-γ水平,同时检测其中17例的T细胞亚群和HLA-DR抗原,对比其相关性,并与对照组比较.结果表明癫痫患者的IFN-γ诱生能力增强,且与病因、病程、脑电图、类型、药物无关;CD8细胞显著升高,CD4/CD8显著低于对照组;HLA-DR抗原异常表达;IFN-γ与HLA-DR之间呈显著正相关,IFN-γ与CD8细胞之间无相关性,提示癫痫患者体内细胞免疫调节网络失衡,活化的淋巴细胞及其产生高水平的IFN-γ通过多种机制参与癫痫的病理过程,进一步从免疫细胞和免疫分子调节水平探讨了癫痫的免疫学发病机制.     

再生障碍性贫血患者细胞免疫指标的观察

采用酶免疫和放射免疫法分析了再生障碍性贫血(AA)患者外周血T淋巴细胞亚群、血清肿瘤坏死因子(TNF)、γ-干扰素(IFN-γ)和IL-2水平,以及患者外周血单个核细胞体外诱生的上述细胞因子水平。结果表明:患者CD4/CD8细胞比值降低或倒置(P<0.001),血清TNF和IFN-γ水平显著增高(P<0.01),外周血单个核细胞诱生的TNF、IFN-γ和IL-2水平均明显高于正常对照(P<0.01)。提示T淋巴细胞亚群比例失调和TNF、IFN-γ等造血负调控因子的过量分泌可能与AA的发病机制有关。     

Study of TNF

目的和方法探讨溃疡性结肠炎(UC)之肿瘤坏死因子α与T细胞亚群的变化及其相关性,测定25例溃疡性结肠炎患者外周血单个核细胞(PBMC)经培养于体外自发和经LPS诱生的TNFα含量及其外周血T细胞亚群百分率和比值.结果①UC组与对照组自发产生的TNFα含量间无明显差异(P＞0.05).LPS诱生后TNFα含量UC组明显低于对照组(P＜0.05).②UC组与对照组CD3细胞百分率无明显差异(68.86%±4.10%vs70.10%±5.04%,P＞0.05).UC组CD4细胞显著低于对照组(32.72%±6.06%vs41.15%±7.26%,P＜0.01),而其CD8细胞则高于对照组(24.96%±4.02%vs21.88%±4.17%,P＜0.05),使得其CD4/CD8的比值明显低于对照组(P＜0.01).③两组诱生后的TNFα含量与其CD4、CD8、CD4/CD8之间均无相关性.结论UC患者TNFα的诱生能力低下,T细胞亚群数量及比值异常,TNFα诱生水平与T细胞亚群的变化间无相关性.     

干扰素-γ对乳腺癌细胞HLA-Ⅰ分子表达的影响

目的 研究干扰素-γ（IFN-γ）对乳腺癌细胞表面HLA-Ⅰ类分子表达的影响,并探讨其在乳腺癌治疗中的免疫作用机制。方法 培养乳腺癌SKBR3细胞株,根据IFN-γ浓度将其分为25 U/ml、50 U/ml、100 U/ml组,未加药组为空白对照组。通过实时荧光定量PCR和流式细胞术实验检测经不同浓度IFN-γ作用后的乳腺癌SKBR3细胞内HLA-Ⅰ mRNA的含量,以及表面的HLA-Ⅰ类抗原的表达。结果 实时荧光定量PCR结果显示,空白对照组、25 U/ml、50 U/ml、100 U/ml组HLA-Ⅰ mRNA的表达量分别为（1.00±0.00）、（2.26±0.54）、（3.89±0.81）、（5.94±0.97）,三个浓度组均较空白对照组表达量高（P＜0.05）;流式细胞术结果显示,空白对照组、25 U/ml、50 U/ml、100 U/ml组细胞表面HLA-Ⅰ蛋白表达量为（14.87±2.80）、（44.33±3.36）、（48.80±2.63）、（56.77±1.93）,三个浓度组均高于对照组（P＜0.05）。结论 IFN-γ上调乳腺癌细胞HLA-Ⅰ类抗原的表达有利于抗乳腺癌作用。     

刀豆蛋白A对帕金森患者外周血单个核细胞分泌IL-10和IFN-γ的作用

目的:观察帕金森病(PD)病人外周血单个核细胞(PBMC)经刀豆蛋白A(Co-nA)诱导培养后分泌白介素-10(IL-10)和干扰素-γ(IFN-γ)的能力。方法:23例PD患者分为早中期组(12例)和晚期组(11例),24例健康人群作为对照组,分离各组外周血单个核细胞,并用ConA诱导刺激。采用ELISA分别检测各组培养上清液中IL-10和IFN-γ含量。结果:对照组和早中期组PD患者经ConA诱导培养的PBMC分泌IL-10水平显著高于普通培养(P<0.05);晚期组分泌IL-10水平明显低于对照组和早中期组(P<0.01)。各组PD患者PBMC分泌IFN-γ水平ConA培养比普通培养都有升高,早中期组最高(P<0.01);PD早中期组ConA培养的PBMC分泌IFN-γ水平显著高于对照组和晚期组(P<0.01)。结论:刀豆蛋白对PD患者PBMC分泌IL-10和IFN-γ有促进作用;免疫机制在PD发病和发展中起着重要的作用。     

冬虫夏草提取液对实验性病毒性心肌炎小鼠免疫功能的影响

目的了解早期应用冬虫夏草提取液(CSAE)治疗对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌病变、血清IFN-γ水平及脾脏T细胞亚群的影响。方法100只成年雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组(CG)、感染组(IG)和CSAE治疗组(CTG)。IG及CTG小鼠腹腔感染柯萨奇病毒B3(CVB3),于感染CVB3后第7天和第14天,计算小鼠的生存率,然后并分批处死,观察心肌组织的病理变化及用ELISA法检测血清IFN-γ的水平。用流式细胞术分析脾脏中CD3 、CD4 、CD8 T细胞的百分率。结果与CG组相比较,IG小鼠血清IFN-γ的水平及脾脏中各T细胞亚群的百分率均降低;而CD4 /CD8 T细胞的比例升高。CTG小鼠的心肌炎症坏死较轻,感染病毒后14d的存活率为85%,显著高于IG的55%(P<0.05)。血清IFN-γ的水平及脾脏中CD3 、CD8 T细胞的百分率显著高于IG组。CTG小鼠脾脏中各T细胞亚群的百分率及CD4 /CD8 T细胞的比例与CG组无显著差异。结论CSAE可诱导VMC小鼠IFN-γ产生并调节细胞免疫功能,对VMC有一定的治疗作用。     

心肌梗死患者急性期外周血Th1/Th2和自然杀伤细胞表达变化观察

目的:观察心肌梗死患者急性期外周血Th1/Th2和自然杀伤细胞表达变化。方法:连续选择近期住院的急性心肌梗死患者(AMI组,21例),入选对象均接受了外周血白介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)、自然杀伤细胞(NK)浓度及IFN-γ/IL-4比值检测,并与同期住院稳定心绞痛患者(SAP组,25例)以及健康体检者(对照组,20例)比较。结果:AMI组血清IFN-γ浓度及IFN-γ/IL-4比值均明显高于AP组和对照组,而血清IL-4和NK细胞浓度则显著低于后两者(P<0.01)。结论:AMI患者存在明确的外周血辅助性T细胞异常表达,且以Th1优势状态为主。     

低剂量Con A预刺激抑制足剂量Con A诱导的肝炎发生

目的:探讨低剂量刀豆蛋白A(ConA)预刺激对后续足剂量ConA诱导的小鼠肝炎的抑制作用。方法:足剂量ConA(15μg/g体重)静脉注射小鼠以诱导ConA肝炎模型。低剂量ConA预刺激组,在诱导ConA肝炎模型前12小时静脉注射低剂量ConA(3μg/g体重);PBS预处理对照组,在诱导ConA肝炎模型前12小时静脉注射PBS。观察两组血清转氨酶(ALT/AST)及肝脏病理变化,同时用流式细胞仪检测肝脏淋巴细胞亚群的比例及绝对数目变化。结果:与PBS预处理相比,低剂量ConA预刺激导致血清转氨酶(ALT/AST)水平显著降低(ALT由3433±788U/L降低到334±68U/L,AST由1358±297U/L降低到167±33U/L),肝脏病理切片显示由ConA引起的肝脏损伤明显减轻,同时伴随着肝脏内CD3+T淋巴细胞比例及绝对数目减少,并且其活化受到明显抑制。结论:低剂量ConA预刺激可以使小鼠抵抗后续的足剂量ConA诱导的肝脏损伤。这种现象与肝脏回流的T淋巴细胞减少及活化程度有关,其细胞与分子机制正在进一步探讨之中。     

90岁以上长寿老人T淋巴细胞及其亚群正常值探讨(ANAE染色法)

本文用ANAE染色法对55名90岁以上长寿老人做了外周血T细胞及其亚群分析,以三个不同年龄组为对照,探讨了长寿老人T细胞及其亚群的正常值与意义。结果表明:长寿组T细胞总数、T_μ、T_γ细胞的均值分别为:54.33±9.98%、44.46±9.42%和9.87±4.38%;绝对值依次为678个/mm~3,552个/mm~3和128个/mm~3。男女之间无明显差异。随着年龄的增长T细胞总数、T_μ细胞逐渐下降,但老年前期以后,二者下降不明显或略有升高,但T_γ亚群升高的幅度较大。笔者认为,T_γ亚群的较大幅度增长可能与长寿老人的免疫功能下降有关。也可能是衰老的一个标志。     

卡介苗联合Poly I:C接种对新生期小鼠脾脏T细胞的影响

目的 研究卡介苗(BCG)联合Poly I:C新生期接种对小鼠脾脏T细胞功能亚群发育的影响.方法 新生清洁级BALB/c小鼠32只,分4组:对照组、BCG组、Poly I:C组、BCG和Poly I:C联合接种组,新生期接种4周后取脾细胞用流式细胞仪检测CD3+ CD8+ IFN-γ+、CD3+ CD8- IFN-γ+、CD3+ CD8+ IL-4+ 、CD3+ CD8- IL-4+、CIM+ Foxp3+ T细胞的比例,其分别代表Tc1、TH1、Tc2、TH2和调节性T细胞(Treg)亚群.结果 BCG组、Poly I:C组、BCG和Poly I:C联合接种组TH1、Tc1细胞比例明显高于对照组(P＜0.05或P＜0.01),3个接种组间比较差异无统计学意义;Tc2、TH2和Treg比例各组间比较差异没有统计学意义;3个接种组TH1/TH2和总IFN-γ/IL-4比值明显高于对照组(P＜0.05或P＜0.01),联合接种组TH1/TH2比值高于BCG组(P＜0.05),Tc1/Tc2比值各组间差异没有统计学意义;CD4+ Foxp3+ T细胞比例各组间比较差异没有统计学意义.结论 新生期BCG和Poly I:C接种均能促进TH1、Tc1细胞亚群的发育,提高TH1/TH2比值,其联合接种在TH1/TH2水平可能具有一定的协同作用,但不能影响CD4+ Foxp3+ Treg细胞的比例.     

黄芪糖蛋白对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的免疫调节作用

目的探讨黄芪糖蛋白(HQGP)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的治疗效果及可能机制。方法用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)诱导C57BL/6雌性小鼠建立EAE模型。分为黄芪糖蛋白治疗组和EAE对照组,隔天记录小鼠临床评分和体质量变化。HE染色和免疫荧光技术检测脊髓组织炎细胞浸润;MTT法检测细胞活性;Griess法检测一氧化氮(NO)释放;ELISA测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)分泌,γ干扰素(IFN-γ)释放;流式细胞术检测CD4+T细胞亚群变化。结果 HQGP处理可减轻EAE症状,抑制中枢神经系统炎细胞浸润。抑制脾淋巴单核细胞活性、NO和TNF-α、IL-6分泌,促进IFN-γ的分泌。增加CD4+CD25+、CD4+IL-10+、CD4+IFN-γ+T细胞亚群的比例。结论 HQGP通过调节T细胞亚群比例,抑制炎症细胞因子释放,减轻EAE炎症反应。     

外周血干细胞采集物来源的巨细胞病毒特异性T细胞的体外培养和扩增

目的建立巨细胞病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞(CMV CTL)体外扩增的方法。方法用1μg/mL全长巨细胞病毒pp65(CMV pp65)多肽体外多轮刺激由粒细胞-集落刺激因子(G-CSF)动员的外周血干细胞采集物中分离的单个核细胞(PBMC),同时加入白细胞介素2(IL-2)、 IL-15、 IL-21扩增20 d。在培养第7天,加入丝裂霉素处理的负载CMV pp65抗原肽的自体PBMC,第10天补充经γ射线辐照处理并负载CMV pp65抗原肽的PBMC和CD3(OKT3);对照组为未加入抗原肽进行扩增的PBMC组。采用多色流式细胞术分别对扩增前、扩增后的T淋巴细胞表型及细胞内肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)的分泌水平进行分析, ELISA检测供者血清中CMV IgM/IgG抗体滴度水平。结果培养后可以收集得到(165.26±6.14)×10~6个细胞,其中CD3~+ T细胞占89.21%, CD8~+ T细胞占CD3~+ T细胞的(43.54±28.03)%, CD4~+ T细胞占CD3~+ T细胞(34.23±26.18)%。获得的CD3~+ T细胞以效应记忆性T细胞(T_(EM))为主,且扩增培养后的CD8~+和CD4~+ T_(EM)比例较培养前显著增高。另外,培养后干细胞样记忆性T细胞(T_(SCM))和组织原位记忆T细胞(T_(RM))的比例均较培养前显著增加。在功能实验中,培养后得到的IFN-γ~+的分泌型CMV特异性CD8~+ T细胞群比例较扩增前明显增加, TNF-α~+ CMV特异性CD8~+ T细胞比例呈增长趋势;能够分别分泌IFN-γ和TNF-α的CMV特异性CD4~+ T细胞群比例与培养前无明显变化。此外,供者体内CMV IgG水平与供者年龄呈现正相关,且在该培养体系下, IFN-γ~+和TNF-α~+ CMV特异性T细胞扩增比例与供者年龄呈负相关。结论本研究成功建立了在体外有效的培养和扩增CMV CTL的方法。     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对HBV宫内感染婴儿的免疫调节作用

目的 观察粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对HBV宫内感染免疫失败婴儿的免疫调节作用.方法 宫内感染婴儿分为治疗组和对照组(均为20例),都给予乙肝疫苗10μg免疫用量,同一部位三角肌注射(疫苗注射时间按0、1、6方案),乙肝免疫球蛋白200IU臀部肌肉注射,20天1次,共3次.治疗组注射乙肝疫苗3天后,同一部位皮内注射GM-CSF 10μg/Kg.1岁时抽外周静脉血检测T淋巴细胞亚群的水平、血清干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的水平.结果 (1)治疗组CD4+T细胞百分数及CD4 +/CD8+比值高于对照组(t=11.67,P＜0.05;t=13.06,P＜0.05),CD8+百分数低于对照组(t=6.25,P＜0.05),两组比较差异均有显著意义.(2)患者外周血IFN-γ水平治疗组高于对照组(t=13.92,P＜0.05);IL-4水平与对照组相比,差异无统计学意义(t=1.30,P＞0.05).结论 GM-CSF可提高HBV宫内HBV感染免疫失败婴儿CD4 +/CD8+比值,并且调节Th1/Th2细胞因子比例平衡.     

活动性结核病患者外周血单个核细胞中结核分枝杆菌抗原特异性多能CD4+和CD8+T淋巴细胞的特征研究

目的 研究活动性结核病患者外周血单个核细胞中结核分枝杆菌抗原特异性多能T淋巴细胞细胞因子的分泌特征.方法 利用γ干扰素释放试验和多色流式细胞术分析了13例活动性结核病患者、11例肺部感染性/肿瘤疾病患者以及14例健康对照者外周血中结核分枝杆菌抗原特异性(ESAT-6和CFP-10)CD4+Th1和CD8+Tc淋巴细胞表达细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的情况.结果 与肺部感染性/肿瘤疾病组和健康对照组相比:(1)活动性结核病组具有较低比例的分泌TNF-α+的CD4+Th1细胞、较高比例的分泌IFN-γ+和IFN-γ+TNF-α+IL-2+的CD4+Th1细胞;(2)活动性结核病组具有较高比例的分泌IFN-γ+TNF-α+IL-2+的CD8+Tc细胞.结论 实验结果提示活动性结核病患者中表达IFN-γ+TNF-α+IL-2+的多能CD4+Th1及CD8+Tc细胞,可能在区别活动性结核病与肺部感染性/肿瘤疾病方面具有一定的临床参考价值.