表皮干细胞增殖与分化的分子调控研究进展

本文对表皮干细胞增殖与分化的分子调控重要进展进行了综述，提示通过干预整合素家族的作用、Wnt信号转导通路、Notch信号转导通路以及c-Myc和p163基因的表达等途径，可以控制表皮干细胞命运。这些生物技术的实现将给表皮干细胞在基因治疗、组织工程皮肤构建等方面的应用带来十分诱人的前景。     

表皮干细胞

皮肤是人体最大的器官 ,在抵御微生物入侵、紫外线辐射及防止水分的丢失、调节体温上起重要作用 ,同时也是免疫系统的组成部分之一。除了这些生物学功能外 ,皮肤在维持人的外貌上还起十分重要的作用。出生后各种原因所致的皮肤损伤即使愈合也会留下不同程度的损伤 ,目前尚缺乏有效的治疗手段。而实际上皮肤是再生能力较强的组织 ,皮肤外层的表皮终身不断自我更新 ,其基底部的干细胞持续增殖分化以取代外层终末分化细胞 ,从而进行组织结构的更新 ,外层细胞的死亡脱落与基底干细胞的分裂维持一定的平衡 ,这是维持正常的组织结构和细胞内环境稳…     

表皮干细胞与创伤修复

表皮干细胞具有无限增殖和分化的潜能,对维持表皮的自我更新、保持皮肤的正常结构以及对皮肤的创伤修复具有重要意义。表皮干细胞的研究已引起越来越多研究者的关注。本文就目前表皮干细胞的生物学特征、表面标记、分布特征和在创伤修复中的变化等方面的研究进展作一综述。     

人表皮干细胞在烧伤整形外科的研究进展

皮肤是人体最大的组织器官，覆盖于人体的外表，是烧伤整形外科研究的主要内容。在烧伤方面，表皮干细胞（Epidermal stem cell，ESC）拥有无可质疑的潜能，它是皮肤组织特异性干细胞，在维持表皮自我更新、保持皮肤正常的表皮结构与功能方面起着重要作用．目前利用干细胞进行组织重建和转基因研究成为生物医学领域的重要方向，本文就对表皮于细胞的研究进展进行综述。     

在体诱导骨髓间充质干细胞分化为表皮细胞的初步观察

目的：探讨骨髓间充质干细胞（MSCs)分化为表皮细胞的可行性，方法：抽取小型香猪的骨髓，经密度梯度离心分离、纯化间充质干细胞及培养扩增后，应用5－溴脱氧尿嘧啶（5－BardU)标记技术进行细胞标记。将已标记的细胞以注射方式回植到提供骨髓的香猪的皮内及皮下，分别于注射后1，2周取材，常规石蜡包埋，连续切片，行5－BrdU和角蛋白免疫组织化学染色，对比研究。结果：大多数5－BrdU阳性细胞聚集在真皮中的小血管周围。但有少数5－BrdU阳性标记细胞出现在表皮的棘层和颗粒层，并同时表达角蛋白，结论：在皮肤微环境下骨髓间充质干细胞具有分化为表歧细胞的潜能。     

表皮细胞生长因子在体诱导猪骨髓间充质干细胞向皮肤组织分化作用的研究

目的观察表皮细胞生长因子(EGF)在体内是否具有诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向皮肤组织分化的作用,及其在皮肤创面愈合中的作用。方法抽取小型猪骨髓,体外分离、纯化和培养MSCs,并用5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)进行标记。6只小型猪共48个创面,随机分为EGF MSCs治疗组(A组)、MSCs治疗组(B组)、EGF治疗组(C组)和生理盐水对照组(D组)。观察伤后治疗3、7、14、21及84天的创面,并用病理学、免疫组化方法对创面的修复质量进行评估。结果A组的皮肤创面愈合速度明显快于其它治疗组,并且在皮肤愈合的组织病理等级评分上优于B、C和D组。A组表皮层BrdU和CKp双染阳性细胞比B组更为多见。结论EGF具有在体促进猪骨髓间充质干细胞向表皮细胞分化,加快皮肤创面愈合速度和提高愈合质量的作用。     

创面愈合过程中表皮干细胞的分布特征及意义

研究皮肤干细胞在全层皮肤创面愈合过程中的分布特征及其作用。11天龄Wistar幼鼠20只，腹腔内注射BrdU。60天后制备4个面积为2．54cm^2的全层皮肤创面。分别于伤后动态观察各组治疗效果，并以BrdU、β1整合素、角蛋白19(K19)免疫组化法检测表皮干细胞在创面愈合过程中的分布情况。结果显示，EGF组创面愈合率为80％(32/40)，对照组为60％(24/40)。两组创缘表皮棘层或颗粒层出现了散在的BrdU、β1整合素和K19同时染色阳性细胞。上皮化后，这些阳性细胞逐渐减少。提示表皮干细胞能动地参与了创面的修复，创缘表皮干细胞异位的主要功能可能是促进创面再上皮化。     

表皮干细胞及其微环境研究进展

表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)是皮肤组织中的专能干细胞,主要位于表皮基底层及毛囊外根鞘隆突部.表皮干细胞的生长发育、分化增殖受周围微环境的影响.     

表皮干细胞体外分离与培养

探索和建立表皮干细胞体外分离与培养的技术方法。通过酶消化法获得幼鼠表皮 ,并制成单表皮细胞悬液 ,以表皮干细胞培养基 ,即无钙EMEM培养基 (添加 9%FBS ,0 0 5mmol/LCaCl2 ,4ng/mlEGF ,0 5ng/ml硫酸庆大霉素及 5 0 %成纤维细胞条件培养基 )置细胞培养箱内培养。成纤维细胞条件培养基为无钙EMEM培养基(添加 9%FBS、0 0 5mmol/LCaCl2 、0 5 μg/ml硫酸庆大霉素 )培养幼鼠皮肤块 4 8h后所得培养液。将 1×10 6/ml上述培养的角质形成细胞经TGG细胞消化液 37℃下振荡消化后 ,接种至鼠Ⅳ型胶原包被的培养瓶内 ,37℃下静置 10～ 15min,留用快速贴壁细胞继续培养 ,所得细胞分别以能否呈克隆状生长和透射电镜观察其超微结构及β1整合素、K19免疫细胞化学染色进行鉴定。结果显示 ,鼠Ⅳ型胶原包被的培养瓶内快速贴壁细胞经继续培养 ,可见细胞呈克隆状生长。电镜观察其超微结构示非成熟细胞特征 ,β1整合素、K19免疫细胞化学染色阳性。研究表明 ,表皮干细胞可在体外分离与培养 ,本实验方法为较好方法之一。     

表皮干细胞外源性分化调控机制的研究进展

表皮干细胞(epidermal stem cells，ESCs)是皮肤发生、修复、改建的源泉并与上皮源肿瘤的产生、皮肤变应性疾病密切相关。ESCs分化调控机制的研究是ESCs从基础研究走向临床应用的关键。表皮干细胞的外源性调控因素包括：(1)细胞分泌的各种因子；(2)由膜蛋白介导的细胞间相互作用；(3)整合素与细胞外基质等。笔者着重综述ESCs外源性分化调控机制的研究进展。     

表皮干细胞来源、分布及其在创面愈合中的作用

干细胞具有自我更新和高度增殖以及多向分化的潜能。局部特殊的位置或细胞的微环境决定了细胞分化方向的选择。因此，表皮干细胞在生理和病理状况下的分布特点就显得尤为重要。笔者就其一些特征做一综述，为以后的研究奠定基础。     

干细胞移植治疗终末期肾病的实验研究

干细胞相关研究已成为目前生命科学研究的热点之一,而干细胞移植治疗疾病又是其中研究的重点。终末期肾病是各种慢性肾脏病进行性发展的最终结果,只能实施血液透析、腹膜透析和肾移植,前两者称为不完全替代治疗,并发症多、生存质量不高;肾移植为完全替代,然而由于供体短缺、免疫抑制、外科手术并发症[1]以及长期等待肾源[2],都限制了肾移植的开展,因此人们也希望将干细胞移植     

Impact of stem cell source on allogeneic stem cell transplantation outcome in hematological malignancies

BACKGROUND/AIM: Peripheral blood (PB) is used more frequently as a source of stem cells (SCs) for allogeneic transplantation. However, the influence of cell source on the clinical outcome of SC transplantation is not yet well established. The aim of this study was to compare the results of PBSC transplantation (PBSCT) with bone marrow transplantation (BMT) on the basis of engraftment, frequency and severity of immediate (mucositis, acute Graft versus Host Disease--aGvHD) and delayed (chronic GvHD--cGvHD) complications, as well as transplant-related mortality (TRM), transfusion needs, relapses and overall survival (OS). METHODS: We analyzed 158 patients, women/men ratio 64/94 median age 29 (range 9-57), who underwent allogeneic SC transplantation between 1989 and 2009. All included patients had diseases as follows: acute myeloid leukemia (AML)--39, acute lymphoblastic leukemia (ALL) 47, chronic myeloid leukemia (CML)--32, myelodysplastic syndrome (MDS)--10, Hodgkin's lymphoma (HL)- 2, multiple myeloma (MM) 3, granulocytic sarcoma (GrSa) 3, severe aplastic anemia (sAA)--22. The patients underwent transplantations were divided into two groups: BMT group (74 patients) and PBSCT group (84 patients). Each recipient had HLA identical sibling donor. SCs from bone marrow were collected by multiple aspirations of iliac bone and from PB by one "Large Volume Leukapheresis" (after recombinant human granulocyte colony stimulating factor, rHuG-CSF) application (5-12 microg/kgbm, 5 days). Conditioning regimens were applied according to primary disease, GvHD prophylaxis consisted of combination of a cyclosporine A and methotrexate. Results. Engraftment, according to the count of polymorphonuclear and platelets, were significantly (p < 0.001) faster in the PBSCT vs BMT group. The needs for transfusion support were significantly (P < 0.01) higher in the BMT group. Those patients had more frequently oropharingeal mucositis grade 3/4 (33.3% vs 10.0%, p < 0.05). There were no significant differences in the incidence of aGvHD and cGvHD between the two groups. The patients who underwent PBSCT had more frequently extensive cGvHD in comparison with the BMT group (29.1% vs 11.29%, p < 0.05). SC source (SCS) had no significant influence on the TRM (21.62% vs 23.8%, p = 0.64) and the incidence of relapses (21.6% vs 29.7%, p = 0.32). Finally, the patients treated by BMT hd a significantly better OS (logrank 2.33, p < 0.05). Conclusion. SCs harvesting from PB resulted in improved cell yield, faster engraftment, as well as in a decrease of immediate transplantation related complications with a reduced treatment cost. Allogeneic PBSCT were associated with more frequent extensive cGvHD, while the influence of SCS in TRM and relapses was not observed. Finally, the long-term OS was better in the patients treated by BMT. To verify impact of SC source on transplantation (PBSCT vs BMT) overall efficacy, more larger randomized clinical studies are needed.     

创面收集液对表皮干细胞表型的影响

目的 探讨全层创面收集液对表皮干细胞类型的影响。方法 以聚氨酯海绵收集成年Wistar大鼠背部全层创面渗出液；以快速黏附分离法体外分离、培养新生Wistar大鼠的表皮干细胞，待表皮干细胞呈克隆生长时加入创面收集液干预，分别于干预后的0，6，12，18，24，30，36，42，48，54，60，72h采用流式细胞仪及β1整合素、角蛋白19，14，10免疫组化染色进行细胞增殖分化的鉴定。结果表皮干细胞在创面收集液干预后仍可持续保持片状聚集生长的态势，但出现数量较多的角蛋白14阳性染色细胞群落，且随时间延长该阳性细胞群落呈上升趋势；另出现了散在的角蛋白10染色阳性细胞。结论创面收集液可以快速诱导体外培养表皮干细胞进入分化状态，且多表现为短暂扩充细胞表型，在该过程中表皮干细胞数量仍可维持在一定的水平。     

去分化来源表皮干细胞的分离、培养和鉴定

目的 分离培养去分化来源的表皮十细胞(dedifferentiation-derived epidermal stem cells,DDESCs),并进一步观察其表型特征.方法 包皮皮片去除皮下脂肪后,中性蛋白酶消化过夜,分离表皮和真皮.分离的表皮片用Ⅳ型胶原反复粘贴并冲洗去除表皮十细胞后,移植到BALB/c裸鼠背部全层皮肤缺损创面,移植5 d后收集皮片制备单细胞悬液,流式检测CK10、CK19和β1整合素阳性细胞白分数,然后用Ⅳ型胶原粘贴法分离皮片内DDESCs,并采用免疫荧光法和荧光定量PCR法分别检测去分化细胞内CK19、β1整合素、Oct4和Nanog的表达.结果 流式检测结果表明,皮片移植5 d后,CK10阳性细胞减少(P＜0.01),CK19和β1整合素阳性细胞增加(P＜0.01).Ⅳ型胶原粘贴分离DDESCs,结果表明,移植皮片组在10 min内约有4.56%的贴壁细胞出现.细胞的表型分析结果表明,DDESCs内CK19、β1整合素、Oct4和Nanog的表达量类似于原始表皮干细胞(P＞0.05),但明显高于成熟表皮细胞(P＜0.01).结论 DDESCs的表型特征与原始表皮干细胞相类似,提示去分化细胞有可能代替原始表皮干细胞应用于创伤部位的修复和再生.