磁靶纳米化疗药物治疗胆管癌移植瘤的对比研究

目的: 比较纳米磁靶向性药囊与其他化疗药物治疗裸鼠人胆管癌移植瘤的效果并探讨其机制。方法:以在体外培养的人胆管癌细胞QBC939接种裸鼠。20d后将裸鼠随机分为4组（每组8只）：生理盐水对照组（A组），5-FU治疗组（B组），纳米磁靶向性药囊＋内磁化支架治疗组（C组），健择治疗组（D组）。记录各组各时段肿瘤体积变化和抑瘤率，绘制肿瘤生长曲线。于治疗后35d处死裸鼠，取肿瘤组织观察超微结构改变。结果:A,B,C,D组于治疗后35d肿瘤体积分别为（2 256.1±267.1）mm3，(2 096.5±237.9) mm3，（1 392.2±189）mm3，（1 534.9±115）mm3，其中C,D组与A,B组之间的肿瘤体积比较有明显差异（P<0.05）。B,C,D组抑瘤率为7.4%, 39.6%和33%。电境观察C组和D组均有凋亡细胞出现。结论:同等剂量下，纳米磁靶向性药囊治疗效果优于5-FU，但与健择无明显差异。     

生长抑素类似物基因对胰腺癌的治疗作用

目的 利用携带SSTR2基因的重组腺病毒载体Adeno-X-SSTR2转染裸鼠胰腺癌皮下模型，使用SSTR2特异激动剂NC-8-12，观察其在体内实验中是否能取得抑制胰腺癌细胞增殖的效果。方法 构建重组携带SSTR2基因的肿瘤增殖缺陷型腺病毒载体Adeno-X-SSTR2。建立裸鼠胰腺癌皮下模型，分为转染和未转染SSTR2基因的两组，皮下分别给予不同剂量NC-8-12，观察肿瘤体积和重量的变化。结果 在裸鼠皮下模型实验中，NC-8-12对未转染SSTR2基因的胰腺癌细胞无抑制作用（P〉0．05）；在转染了SSTR2基因的胰腺癌细胞中，NC-8—12在每日200μg／kg体重剂量下可以明显抑制肿瘤细胞增殖（P〈0．05）。结论（1）携带SSTR2基因的肿瘤增殖缺陷型腺病毒载体Adenc-X-SSTR2可以高效转染胰腺癌细胞株。（2）一定剂量的NC-8-12（每日200μg/kg体重）对裸鼠体内转染了SSTR2基因的胰腺癌细胞的生长有明显抑制作用。     

5-氟尿嘧啶缓释剂瘤内注射治疗胰腺癌的实验研究和临床研究

目的 观察5-氟尿嘧啶(5-Fu)缓释剂对荷胰腺癌裸鼠肿瘤细胞及胰腺癌患者血清肿瘤标记物和细胞免疫的影响。方法 (1)5-Fu缓释剂的体外释放实验和体外抑瘤实验：测定浸出液药物的浓度，计算释放量；检测其浸出液对人胰腺癌细胞株PC3的抑制作用：(2)将荷胰腺癌细胞株Pc3裸鼠60只，随机分成静脉对照组(A组)、5-Fu静注组(B组)、基质植入组(C组)、大剂量5-Fu缓释剂植入组(D组)和小剂量5-FU缓释利植入组(E组)：治疗前及治疗后l4d测肿瘤大小。治疗2周后观察肿瘤组织学变化：免疫组化法测定bcl-2和Bax的蛋白表达水平；TUNEL法检测凋亡指数(Al)。(3)手术探查不能切除之胰腺癌69例随机分成3组：将5-FU缓释剂瘤内植入治疗组(治疗组)、术后行5-FU静脉化疗组(化疗组)和对照组。分别于术前1d和术后第14天采血，测定各组血清中NK细胞，T细胞亚群和CEA，CA50，CA19-9，CA125，CA242血清肿瘤标记物水平。结果 (1)5mg 5-FU缓释剂第1天释放量最大，为0．85mg，第3天为0．45mg，其后在0．25mg水平维持稳定的缓慢释放；释放时间长达l4d以上。(2)5-Fu缓释剂第1天的浸出液对人胰腺癌细胞株PC-3的抑制率达60．27％，第3天为34．25％，以后稳定在25．00％左右。5-Fu缓释剂瘤内注射治疗组裸鼠移植瘤生长速度减慢，bcl-2基因表达明显低于其他各组，而Bax基因表达明显高于其他各组，肿瘤细胞的Al明显高于其他各组。D组和E组肿瘤组织中炎症反应和血管内膜增厚程度明显高于其他各组。术后治疗组CD4 ／CD8 和NK细胞水平高于化疗组，而血清中E述5种肿瘤标记物低于对照组和化疗组。结论 5-Fu缓释剂能在2周内在体外较稳定地持续释放，对人胰腺癌细胞株PC3有持续抑制作用。该剂瘤内注射可明显抑制荷胰腺癌瘤裸鼠瘤体的生长，其作用机制与药物在肿瘤组织中引起的炎症反应和血管内膜增厚等因素有关；并可能与诱导肿瘤细胞的凋亡有关。该剂植入患者胰腺癌实体内，能明显降低5种血清肿瘤标记物水平，同时对患者的细胞免疫功能影响较小，5-Fu缓释剂可望成为治疗不能切除之胰腺癌的较好的制剂。     

体内转染生长抑素二型受体基因治疗胰腺癌移植瘤

目的观察生长抑素二型受体(SSTR2)基因体内转染对胰腺癌移植瘤的治疗作用。方法将缺乏SSTR2表达的胰腺癌细胞株panc-1种植于裸小鼠背部皮下形成移植瘤模型,动物随机分成3组,每组6只;第Ⅰ组不做处理为空白对照组,第Ⅱ组瘤内注射空载体pCMV-6C-脂质体为治疗对照组,第Ⅲ组瘤内注射pCMV-6C-SSTR2-脂质体为治疗组。观察肿瘤生长速度,最后测量瘤体大小及重量,用免疫组织化学方法和免疫印迹技术(Western blot)检测转染效率,用凋亡原位检测方法(Tunel)检测胰腺癌细胞的凋亡率。结果Ⅲ组SSTR2蛋白表达,肿瘤生长速度显著慢于Ⅰ组、Ⅱ组,肿瘤大小(0.318±0.098)cm3显著小于Ⅰ组(2.058±0.176)cm3、Ⅱ组(2.025±0.163)cm3(t值分别为21.190、22.029,P值均<0.05);重量(0.523±0.090)g也显著小于Ⅰ组(1.412±0.146)g、Ⅱ组(1.365±0.116)g(t值分别为11.602、13.233,P值均<0.05);癌细胞凋亡率(1.47±0.13)%显著高于Ⅰ组(0.56±0.09)%、Ⅱ组(0.57±0.11)%(t值分别为13.265、14.362,P值均<0.05)。Ⅰ、Ⅱ组间差异无统计学意义。结论大多数胰腺癌不表达SSTR2可能是其快速生长的重要原因之一;体内转染SSTR2基因后能显著抑制裸鼠移植瘤的生长,显著增加胰腺癌细胞的凋亡。     

β1整合素反义寡核苷酸对人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用

目的探讨β1整合素反义寡核苷酸（ASODN）对裸鼠人胰腺癌移植瘤生长和基因表达的影响.方法建立裸鼠人胰腺癌皮下移植瘤模型,随机分为3组：对照组（皮下注射脂质体和转染液）、非特异序列（RODN）组（皮下注射RODN、脂质体和转染液）和ASODN组（皮下注射ASODN、脂质体和转染液）.治疗后计算抑瘤率和肿瘤缩小率,检测肿瘤中β1整合素mRNA和蛋白表达.结果RODN组、ASODN组抑瘤率分别为4.75%和72.70%,ASODN组肿瘤缩小10.91%.与其他两组比较,ASODN组裸鼠肿瘤中β1整合素mRNA和蛋白表达水平明显降低.结论靶向β1整合素的反义寡核苷酸对人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤的生长具有一定的抑制作用,可能为胰腺癌治疗提供新的方法.     

联合应用华蟾素与氟尿嘧啶对胃癌细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用

目的 探讨单一华蟾素体外对人胃癌细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用以及与5-氟尿嘧啶（5-FU）联合应用对胃癌细胞的影响.方法 实验分为对照组;华蟾素（cino）组;5-FU组和cino＋5-FU组.利用体外细胞培养、倒置显微镜和荧光显微镜、MTT比色技术及流式细胞仪等方法,观察细胞形态,检测cino和5-FU对人胃癌细胞株BGC823细胞抑制率、细胞凋亡和细胞周期.结果 cino对人胃癌细胞有显著的增殖抑制作用,呈时间剂量依赖性.cino＋5-FU对BGC-823细胞的增殖抑制率显著高于单独使用组（P＜0.05）.定量分析显示cino＋5-FU组的凋亡细胞发生率显著高于cino组和5-FU组（P＜0.05）.cino＋5-FU可使G0/G1期细胞比例降低,S期细胞比例升高,且大多数被阻滞于S期.结论 cino对胃癌BGC-823细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用,与5-FU联用可显著提高后者的化疗效果,且呈时间剂量依赖关系.     

特异性阻断Shh信号通路对胰腺癌细胞系SUIT-2增殖和凋亡的影响

目的： 研究组抑胚胎发育相关信号通路Sonic hedgehog (Shh)对人胰腺癌细胞系SUIT-2增殖和凋亡的影响。方法：用四唑蓝（MTT）比色试验检测Shh信号通路特异性抑制剂cyclopamine对胰腺癌细胞系SUIT-2增殖的抑制作用；流式细胞术检测细胞增殖指数(PI)和凋亡指数(AI)；用裸鼠移植瘤模型检测cyclopamine对移植瘤生长的抑制作用。 结果：cyclopamine对SUIT-2细胞株增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性。cyclopamine作用后使胰腺癌细胞周期阻滞在G0／G1期，细胞凋亡增加；SUIT-2的AI为14.3±0.35， PI为36.1±0.44，对照组分别为1.3±0.24和52.3±0.28（均P<0.05）。在裸鼠移植瘤模型中，cyclopamine同时给药组肿瘤生长明显受到抑制，而延期给药组对肿瘤生长的抑制作用较弱。结论：shh信号分子对胰腺癌细胞的增殖起维持作用；通过特异性阻断该信号通路，可以抑制胰腺癌细胞增殖，并促进细胞凋亡。     

转染SSTR2对胰腺癌细胞的促凋亡作用

目的 通过包含SSTR2基因的重组腺病毒(AdCAG-SSTR2)转染人胰腺癌细胞,观察对胰腺癌细胞肿瘤特性的影响.方法 分别应用空载体、AdCAG-SSTR2转染SSTR2阴性的人胰腺癌细胞株BxPC-3.逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法分析检测SSTR2在细胞中的表达.非转染细胞、转染空载体细胞和转染AdCAG.SSTR2细胞直接计数测定细胞生长速度.采用膜联蛋白Ⅴ/碘化丙锭(Annexin V/PI)标记法检测细胞凋亡.RT-PCR检测PCNA、bax和bcl-xl的表达.结果 AdCAG.SSTR2转染胰腺癌细胞后可以检测到SSTR2 mRNA和蛋白的稳定表达,转染AdCAG-SSTR2后细胞生长受到抑制,与对照组差异有统计学意义(P＜0.01);细胞凋亡率较对照组明显升高(P＜0.01);PCNA的表达无明显变化,是对照组的1.04倍;bax的表达明显升高,是对照组的3.18倍;bcl-xl的表达明显降低,是对照组的0.34倍.结论 SSTR2通过诱导胰腺癌细胞凋亡发挥抗肿瘤增殖的作用,其机制与上调bax的表达,下调bcl-xl的表达有关.     

重组的r-Caspsae-3促凋亡基因体内外治疗胰腺癌的试验研究

目的 观察重组活化的Caspsae-3(r-Caspase-3)促凋亡基因对胰腺癌细胞(PC-Ⅱ)及裸鼠皮下种植瘤的治疗作用。方法 采用先前构建的r-Caspase-3促凋亡基因转染胰腺癌细胞，细胞形态学、DNA电泳、流式细胞学观察胰腺癌细胞凋亡状况；用脂质体-pcDNA3．1( )／r-Caspase-3复合物，治疗人胰腺癌细胞裸鼠种植瘤，观察肿瘤生长速度并计算肿瘤体积大小。结果 DNA电泳、流式细胞学可分别观测到特征性的DNA Ladder和凋亡峰，皮下种植肿瘤治疗后生长速度开始减缓，组织切片HE染色可见散在凋亡细胞；对照组肿瘤生长速度明显快于治疗组。结论 r-Caspase-3具有自催化凋亡诱导活性，以r-Caspase-3为目的基因的基因治疗可能为治疗胰腺癌以及其它恶性肿瘤开辟新的途径。     

辐射促脂质体介导的IGF-1R反义寡核苷酸对胰腺癌细胞抑制的实验研究

用辐射促转染方法，将脂质体(lipfectin)介导的胰岛素样生长因子．1受体反义寡核苷酸(IGF-1 R ASON)导入胰腺癌细胞(PC-3)，以观察体外PC-3细胞的生长抑制及凋亡情况，以及裸鼠移植瘤的体内抗瘤效果，为胰腺癌的基因治疗提供依据。     

经皮选择性肝脏隔离灌注化疗的实验研究

目的探讨经皮选择性肝脏隔离灌注化疗的可行性及隔离效果。方法将12只猪随机分为两组:HAI组6头,进行常规经肝动脉灌注化疗;PSIHP组6头,利用介入放射学方法进行经皮选择性隔离肝脏灌注化疗结合血液灌流。化疗药物选用5-FU。分别检测肝静脉及外周血液中的血药浓度,并对肝组织行病理学检查。结果HAI组右肝静脉血和外周静脉血浓度峰值分别为(4082.530±415.213)mg/L,(1682.230±216.834)mg/L;PSIHP组右肝静脉血、外周静脉血血药浓度峰值分别为(5321.711±517.318)mg/L,(510.834±52.518)mg/L。两组间有显著性差异(P<0.01)。PSIHP组过滤后肝静脉血血药浓度峰值为(1192.063±114.864)mg/L,碳肾率过滤达到(77.6±0.9)%。PSIHP组灌注区域肝脏组织损害程度比HAI组大。结论PSIHP是一种简单有效的肝脏隔离灌注化疗技术,与常规经肝动脉灌注化疗相比,不仅可以增加局部血药浓度,更可以降低外周的血药浓度,降低毒副作用。     

低分子肝素区域动脉灌注治疗重症急性胰腺炎的实验研究

目的:观察低分子肝素(LMWH)区域动脉灌注(LAI)对家兔重症急性胰腺炎(SAP)的疗效及对血浆TNF-α,IL-6,IL-10的影响。方法:24只健康成年家兔随机均分为假手术组,SAP组,SAP+LMWH静脉输注组(IV组),SAP+LMWH LAI组(LAI组)。以5%牛磺胆酸钠胰腺被膜下注射诱导SAP模型,造模30 min后,2个治疗组分别以静脉输注和LAI的方式给予LMWH(300 IU/kg),分别在术后0.5,3,6,12 h检测各组家兔静脉血浆TNF-α,IL-6和IL-10水平,并观察胰腺病理学改变。结果:假手术组术后血浆TNF-α和IL-6水平呈缓慢升高,其余各组血浆TNF-α和IL-6水平均在术后0.5~6 h内明显升高,与假手术组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),随后逐渐降低,其中IV组和LAI组血浆TNF-α和IL-6水平在各时点均低于SAP组(P<0.05或P<0.01),且LAI组两者降低程度大于IV组(P<0.05或P<0.01);假手术组术后IL-10水平在各时点无明显变化,SAP组IL-10水平在术后6 h各时点明显降低,与假手术组比较差异有统计学意义(均P<0.01),IV组和LAI组IL-10水平明显升高,与SAP组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且LAI组升高程度明显大于IV组(P<0.01);除假手术组外,其余各组均为轻重不同的SAP特征性病理表现,以SAP组最重,IV组次之,LAI组最轻。结论:LMWH能降低SAP家兔TNF-α和IL-6的水平,提高IL-10的水平,对SAP具有治疗作用,且LAI优于静脉给药。     

反义HIF-1α基因治疗人肝癌裸鼠移植瘤的实验研究

摘要：目的:探讨反义HIF-1α基因对人肝癌裸鼠皮下移植瘤的影响及其相关机制。方法:使用人原发性肝癌细胞株SMMC-7721建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤动物模型。待肿瘤生长至直径约0.4cm时，将荷瘤裸鼠随机分为3组，分别注射生理盐水、质粒PcDNA3和HIF-1α/PcDNA3B，质粒用脂质体DOTAP介导转染细胞。观察各组动物的肿瘤生长曲线；取肿瘤标本作免疫组织化学检查（SABC法）及蛋白质印迹检查，检测各组肿瘤的VEGF和HIF-1α表达及微血管密度（MVD）和细胞凋亡。结果:HIF-1α/PcDNA3B治疗组各时点的肿瘤体积，以及肿瘤组织中HIF-1α蛋白、MVD，VEGF表达均低于对照组，而细胞凋亡指数高于对照组，差异均有显著性（P＜0.05）。结论:通过阻断癌细胞的缺氧适应途径，反义HIF-1α基因治疗肝癌有抑制肿瘤生长、抑制肿瘤血管生成及诱导细胞凋亡的作用。     

血管生长抑素基因抑制胰腺癌裸鼠移植瘤血管生成的实验研究

目的:探讨人血管生长抑素基因对胰腺癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响。方法:建立人胰腺癌细胞株BXPC-3裸鼠移植瘤模型,应用人血管生长抑素基因质粒转染胰腺癌裸鼠移植瘤,观察移植瘤生长情况。采用免疫组织化学技术检测肿瘤血管内皮生长因子(VEGF)表达情况和微血管密度(MVD)差异,透射电子显微镜观察肿瘤细胞情况。结果:治疗组肿瘤体积明显小于空白对照组和空质粒组(P<0.01),VEGF主要表达在肿瘤细胞的胞质内,治疗组、空白对照组和空质粒组平均灰度分别为179.57±5.22、150.87±3.44和163.40±3.54;阳性单位分别为14.94±2.26、31.26±2.72和29.21±2.95;MVD分别为10.60±74.56、19.33±2.52和18.67±5.29,治疗组与空白对照组和空质粒组比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。电子显微镜下治疗组可见大量肿瘤细胞坏死。结论:人血管生长抑素基因能明显抑制胰腺癌裸鼠移植瘤血管生成,促进肿瘤细胞坏死,进而抑制肿瘤生长。     

甘遂对重症急性胰腺炎大鼠核因子-κB活化的影响

目的：观察重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis ,SAP) 大鼠胰腺核因子κB ( nuclear factor-κB ,NF-κB) 的活性变化及甘遂对其的影响,以探讨甘遂治疗SAP的作用机制。方法：将SD大鼠随机分为假手术组（S组）、重症急性胰腺炎组（SAP组）、甘遂治疗组（K组），每组40只。分别在手术后2，6，12，24h处死大鼠后检测血清淀粉酶水平、胰腺组织核内NF-κB/p65蛋白表达、胰腺组织光镜检查、各组术后72h死亡率。结果： （1）血清淀粉酶：与S组比较，SAP组2，6，12，24h均显著升高（P<0.01）;K组与SAP组比较，除2h外，其余各时间点均有显著降低（P<0.01），但仍高于对照组（P<0.01）;（2）核内NF-κB/p65蛋白表达：S组表达量极弱;SAP组2，6，12h表达均显著高于S组（P<0.01），K组6，12h表达量显著低于SAP组（P<0.01）;（3）光镜观察：S组胰腺组织结构正常，SAP组胰腺组织有出血坏死及炎性细胞浸润， K组胰腺组织损害较SAP组减轻。（4）72h死亡率：S组死亡率为0%;K组为12.5%，两者均明显低于SAP组（62.5%）（P<0.05）。结论：甘遂能有效治疗SAP，其机制可能是通过减轻胰腺组织中NF -κB 活化而发挥治疗作用。     

氟尿嘧啶免疫聚乳酸纳米微粒抗肿瘤效应的研究

目的利用载氟尿嘧啶（5-FU）免疫聚乳酸（PEA）纳米微粒（NPs），观察其对严重联合免疫缺陷病（SCID）鼠人胃癌移植模型的治疗效应。方法超声乳化法合成的载5-FU的抗血管内皮生长因子（VEGF）单克隆抗体纳米微粒，建立SCID鼠人胃癌移植肿瘤模型，观察药物对高表达VEGF胃癌移植肿瘤模型的治疗效应及其不良反应。结果空白对照组、未载药空纳米微粒组、5-FU组（20mg／kg）、抗VEGF单克隆抗体-未载药空纳米微粒组、抗VEGF单克隆抗体组、载5-FU纳米微粒组、5-FU（20mg／kg）加抗VEGF单克隆抗体组及抗VEGF单克隆抗体-载5-FU纳米微粒组（20mg／kg）的抑瘤率分别为0、6．61％、24．26％、27．94％、35．29％、37．50％、39．71％和52．21％，且载5-FU的抗VEGF单克隆抗体纳米微粒组和未载药纳米微粒组的血白细胞数量及肝肾功能与空白对照组相比，差异无统计学意义（P〈0.05）；而含5-FU原药组血白细胞数量较空白对照组和抗VEGF单克隆抗体-载5-FU纳米微粒组下降34．43％和37．38％（P〈0.05）：而肝转氨酶升高93．17％和66．56％。治疗组与对照组癌细胞凋亡指数相比，以抗VEGF单克隆抗体．载5-FU纳米微粒组更为明显，差异有统计学意义（P〈0.05）；含抗VEGF抗体的实验组微血管密度明显低于含5-FU药组和对照组（P〈0.05）。结论载5-FU抗VEGF单克隆抗体纳米微粒可提高5-FU的抑瘤率，并通过抑制肿瘤的血管生成，诱导肿瘤细胞凋亡，增加疗效，有效降低5-FU的骨髓抑制和肝肾功能损害作用．是一种安全的新型药物纳米级靶向制剂。