小剂量白细胞介素-18对胶原诱导性关节炎作用的研究

目的 研究小剂量白细胞介素(IL)-18对早晚期Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)的作用.方法 重组小鼠IL-18(0.2 μg/小鼠)每日1次腹腔注射发病前或发病晚期的CIA小鼠,连用5 d,用关节炎评分评估关节炎病情的进展,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定CIA小鼠髌骨及邻近滑膜组织的细胞因子表达水平;用组织学染色评价膝关节的软骨和骨破坏.结果 小剂量IL-18早期免疫干预CIA小鼠,不能降低CIA小鼠关节炎发病率,无法延缓CIA小鼠膝关节病理学进展;滑膜和软骨附近的Th1型细胞因子和Th2型细胞因子与对照组相比差异无统计学意义.小剂量IL-18晚期免疫干预CIA小鼠,加剧了病理学进展,免疫第43天,治疗组关节炎评分(0.33±0.11)显著高于对照组(0.25±0.09)(P<0.05);髌骨及邻近滑膜组织的细胞因子IL-10与IL-18结合蛋白(IL-18BP)与对照组相比显著降低(P<0.05).结论 IL-18对早期Ⅱ型胶原诱导的关节炎没有疗效.IL-18晚期免疫干预CIA小鼠,恶化了关节炎病情,其机制可能为IL-18抑制了IL-10和IL-18BP的表达.     

小剂量白细胞介素-18联合白细胞介素-10在早期Ⅱ型胶原诱导性关节炎中的作用研究

目的 研究不同细胞因子微环境下,白细胞介素(IL)-18对早期Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)的作用.方法 CIA小鼠,发病前给予每只重组小鼠腹腔注射IL-18(0.2 μg/d)/IL-10(0.1 μg/d),IL-18(0.2 μg/d)IL-4(0.1 μg/d),IL-18(0.2 μg/d)IL-12(0.1 μg/d),连用5 d,用关节炎评分评估关节炎病情的进展,用反转录聚合酶链反虚(RT-PCR)测定CIA小鼠髌骨及邻近滑膜组织的细胞因子表达水平;用组织学染色评价膝关节的软骨和骨破坏.采用Wilcoxon rank检验. 结果 IL-18/IL-4组关节炎评分轻度降低.IL-18/IL-10联合治疗有效抑制了C1A小鼠的关节炎症反应,免疫第38天治疗组关节炎评分(0.12±0.20)显著低于对照组(0.29±0.19,P<0.05),阻止了滑膜部位的炎细胞浸润,防止了软骨的破坏.滑膜和其附近软骨的Th1型细胞因子[IL-18(0.22±0.06),IL-12(0.14±0.05)]与炎症性细胞因子[IL-6(0.22±0.11)]水平与对照组相比显著降低(P<0.05),Th2型细胞因子[IL-10(6.35±0.12),IL-4(3.57±0.13)]水平与对照组相比明显升高(P<05). IL-18R(0.40±0.15)水平明显降低(P<0.05).T-bet水平降低,转录因子(GATA)-3水平(5.7l±0.11)显著升高(P<0.05).结论 IL-18/IL-10免疫干预尚未发病的CIA小鼠,可以抑制Th1型免疫反应,使免疫反应向Th2逆转,其机制可能为下调了IL-18/IL-18R水平,诱导了转录因子GATA-3的表达.     

白细胞介素-17在胶原诱导性关节炎大鼠血清水平及滑膜组织表达

目的探讨胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠不同时期血清白细胞介素（IL）-17水平及在滑膜组织的表达。方法用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测造模组和正常对照组不同时期血清IL—17水平，用免疫组织化学过氧化物酶标记的链霉卵白素（S—P）法检测两组晚期关节滑膜组织IL—17表达。结果对照组和造模组均有一定水平IL—17表达，同期成模组较对照组和造模失败组明显升高（P〈0．01），成模组IL—17在早期就开始升高，到中晚期达到较高浓度，中晚期与早前相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。晚期成模组滑膜组织表达IL-17阳性率亦高于对照组和造模失败组（P〈0．01）。对不同时期血清IL—17水平与关节病理破坏程度进行直线相关性分析呈正相关（早期P〈0．01；中期P〈0．01；晚期P〈0．05）。结论IL—17在CIA大鼠滑膜组织及不同时期血清中高表达，与关节滑膜的病理破坏程度有关，可作为判断类风湿关节炎（RA）预后的重要指标。     

白细胞介素-33的测定及其与早期类风湿关节炎相关性的研究

目的 通过检测早期类风湿关节炎(RA)患者血清中的白细胞介素(IL)-33水平,分析其与早期RA之间的相关性.方法 收集病程<1年的早期RA患者100例,骨关节炎(OA)患者40例以及健康对照者70名.采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清中的IL-33水平,并分析血清IL-33水平与RA各临床和实验室指标的相关性.计量资料的比较采用Kruskal-Wallis检验和(或)Mann-Whitney U检验,计数资料比较采用X2检验,相关性分析采用Spearman相关分析.结果 RA患者血清IL-33水平为(282±871)pg/ml,显著高于健康对照组[(7±38)pg/ml,P(0.01)和OA患者[(8±35)pg/ml,P<0.01].血清IL-33水平与类风湿因子(RF)、隐性类风湿因子IgG(HRF-IgG)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、抗突变型瓜氨酸化波形蛋白(MCV)抗体呈正相关(r分别为:0.312,0.277,0.213,0.302,P<0.01或P<0.05). IL-33阳性组患者的RF阳性率、HRF-IgG阳性率、抗CCP抗体阳性率、抗MCV抗体阳性率(86%、31%、86%、94%)较IL-33阴性组患者(54%、11%、42%、72%)显著升高(P均<0.05). 结论 IL-33在RA患者血清中显著升高,并与多种自身抗体(包括RF、抗CCP抗体、抗MCV抗体和HRF-IgG)显著相关,可能是RA预后不良的因素之一.     

白细胞介素-18和类风湿关节炎

近年研究发现类风湿关节炎 (ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ,ＲＡ)是一种Ｔｈ1相关的自身免疫性疾病 ,而白细胞介素 18(ｉｎ ｔｅｒｌｅｕｋｉｎ 18,ＩＬ 18)具有介导Ｔｈ1免疫反应、促进单核因子产生等多种生物学活性。1　ＩＬ 18的发现和命名1989年Ｎａｋａｍｕｒａ首次发现经脂多糖 (ＬＰＳ)诱导的小鼠脾细胞的血清能诱导干扰素 γ (ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ γ ,ＩＦＮ γ) ,但又只能与ＩＬ 12发挥共刺激作用[1] 。日本学者Ｏｋａｍｕｒａ等[2 ] 在脓毒性休克的小鼠肝脏中提取出该因子 ,因其具诱导Ｔｈ1细胞产生ＩＦＮ γ的活性…     

血清白细胞介素-33与类风湿关节炎合并肺间质病变相关性研究

目的 分析类风湿关节炎(RA)合并肺间质病变(ILD)患者血清白细胞介素(IL)-33及其受体人基质裂解素2(ST2)的表达情况及与肺功能等实验室指标的相关性,为其早期诊断提供依据.方法 收集2012年3月至2013年3月在我科初诊为RA患者245例,分为RA-ILD组58例与单纯RA组187例,观察各组肺功能等相关实验室指标,另收集我院体检中心健康体检者60名为健康对照组.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定以上各组的血清IL-33及ST2浓度水平.组间比较采用两样本t检验;多组间比较采用多个样本均数比较的方差分析;IL-33浓度及相关变量间比较采用Pearson相关分析.结果 RA患者ILD发生率为23.7％(58/245).与健康对照组[(85±38) pg/ml]相比,RA[(433±42) pg/ml]及RA-ILD [(746±43) pg/ml]患者中血清IL-33水平显著增高,差异有统计学意义(P＜0.01);且与RA组患者相比,RA-ILD组患者血清IL-33及ST2水平升高更为明显(P＜0.01).RA-ILD组患者肺活量占预计值百分比(VC％)、用力肺活量占预计值百分比(FVC％)、最大呼气中段流量占预计值百分比(MMF％)和一氧化碳弥散量(DLCO)多项肺功能指标均较RA组患者明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).IL-33浓度与各实验室指标相关性比较:IL-33浓度与类风湿因子呈正相关(r=0.82,P＜0.01),且与抗环瓜氨酸多肽抗体(ACPA)滴度呈正相关(r=0.55,P＜0.01),而其与DLCO呈负相关(r=-0.80,P＜0.01).结论 IL-33参与RA的发病过程,且可能与RA-ILD的发病相关.     

白细胞介素17与类风湿关节炎

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种慢性进行性的自身免疫性疾病。以关节滑膜炎及对称性、破坏性的关节病变为主要特征。RA的发病在我国约为0.3％～0.45％，全世界约为0.5％～1.O％。其病因及发病机制仍不清楚，研究发现细胞因子在RA发病机制起重要作用。近来肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白细胞介素-l（interleukin-1，     

类风湿关节炎患者白细胞介素-6与皮质醇节律的研究

目的：研究类风湿关节炎（RA）患者血清白细胞介素（IL）－6、皮质醇节律及其临床意义。方法：36例RA患者分别为8：00，12：00，16：00，20：00，0：00，4：00用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测其血清IL－6水平，用放射免疫法（RIA）测定皮质醇。结果：36例RA患者皮质醇分泌有明显节律，但与正常对照组相比，其峰值提前，出现于凌晨4点，血清IL－6水平高于对照组（P＜0．01），也存在昼夜节律，IL－6峰值出现在皮质醇峰值之前，经治疗病情稳定后，RA患者血清IL－6水平恢复或接近正常，IL－6与皮质醇节律紊乱得以纠正，相关性分析显示，RA患者血清IL－6水平与血沉（ESR）（P＜0．01，r=0.66)，C反应蛋白（CRP）（P＜0．01，r＝0.71)皮质醇（P＜0．05，r=0.58)呈正相关，结论：RA患者血清IL－6增高，IL－6与皮质醇存在昼夜节律紊乱，这些变化在RA的发病机制中可能具有重要意义。     

类风湿关节炎血清白细胞介素17检测的临床意义

目的 检测类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血清白细胞介素(IL)-17的水平,探讨其在RA临床中的意义.方法 收集2007年1月至12月大连医科大学附属第二医院门诊及住院RA患者84例,采用免疫酶联吸附(ELISA)方法检测血清IL-17水平;同时检测血清C-反应蛋白(C reactive protein,CRP)、葡萄糖-6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isomerase,GPI)、类风湿因子(rheumatoid factor,RF)、抗环瓜氨酸多肽(anti-cyclic citrolli-natad peptide,anti-CCP)抗体、IL-1β和肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-a,TNF-a)水平;并分析IL-17与RA临床炎症指标和实验室指标的相关性.结果 活动期RA患者血清IL-17为(113.8+21.7)ng/L,高于非活动期RA患者[(76.3+11.9)ng/L]和正常对照组[(62.6+8.6)ng/L],差异有统计学意义(均P<0.05).RA患者血清IL-17水平分别与CRP和RF呈正相关,与IL-1β和TNF-a也有正相关关系(均P<0.05),但与自身抗原GPI和抗CCP抗体无相关性(P均>0.05);RA组血清IL-17水平与临床活动指标也有相关性.结论 RA患者血清IL-17表达增高,并与病情活动有关.     

类风湿关节炎患者血清白细胞介素-33水平与疾病进程的相关性

目的通过检测类风湿关节炎(RA)患者血清中白细胞介素(IL)-33水平,分析血清IL-33水平与RA的临床及实验室指标之间的相关性,验证IL-33参与RA的发病过程,探讨IL-33对于RA的临床意义。方法采用ELISA方法测定70例RA患者和30例健康对照者血清IL-33水平。结果 RA组血清IL-33水平为(231±335)pg/ml,高于健康对照组(6±23)pg/ml,P<0.01。高疾病活动度组血清IL-33水平为(351±391)pg/ml,高于中低疾病活动度组(145±266)pg/ml,P<0.05。RA患者血清IL-33水平与类风湿因子(RF)及抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体呈正相关(P<0.01)。结论 IL-33参与了RA的发病过程,IL-33的升高可能提示RA预后不良。     

腺相关病毒介导的人护骨素对炎症性关节破坏的保护作用

目的 探讨携带人护骨素(hOPG)的重组腺相关病毒(rAAV-hOPG)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠关节破坏的影响.方法 经牛Ⅱ型胶原诱导建立大鼠关节炎模型,随机分成3组:CIA空白对照组,增强绿色荧光蛋白(EGFP)阴性对照组,OPG治疗组,同时设立健康对照组,共4组,每组10只,于首次免疫后第25天开始,分别予磷酸盐缓冲液(PBS)、PBS、rAAV-EGFP、rAAV-hOPG双膝关节腔内注射50μl/侧.比较4组大鼠掌跖厚度、关节炎指数、病理评分、放射学评分、骨破坏因子及炎症因子蛋白表达情况.结果 冰冻切片证实AAV能有效转导关节滑膜组织.酶联免疫吸附试验(ELISA)法测得OPG蛋白的表达水平升高93%(P＜0.05),基质金属蛋白酶(MMP)-3蛋白表达下降35%(P＜0.05),而白细胞介素(IL)-1β造模组间比较差异无统计学意义.放射学骨破坏Larsen评分下降30%.结论 rAAV-hOPG能有效转导关节组织,表达OPC蛋白,显著减轻炎性关节炎的骨质破坏,可能对关节软骨有一定保护作用,对关节炎症无明显影响.     

羟基喜树碱与甲氨蝶呤治疗胶原诱导性关节炎模型大鼠的比较研究

目的 探讨羟基喜树碱(HCPT)在胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的治疗作用及临床治疗类风湿关节炎(RA)的潜在价值.方法 ①建立CIA大鼠模型:随机分为健康对照组、模型组、甲氨蝶呤(MTX)治疗组、低剂量HCPT治疗组、高剂量HCPT治疗组;②观察不同时间点大鼠一般情况、关节肿胀度;③测量造模15周后大鼠关节滑膜病理改变及原位末端标记技术(TUNEL)染色滑膜细胞凋亡率;④测定血清肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β浓度.结果 HCPT、MTX治疗组与模型组比较,各治疗组均可改善模型鼠一般情况、缓解关节炎指数及足肿胀度、减少炎性细胞浸润、滑膜细胞增生及减轻关节内软骨和骨破坏、提高滑膜细胞凋亡率、降低血清TNF-α、IL-1β浓度,差异有统计学意义(P<0.05),各治疗组间无统计学意义(P>0.05).结论 HCPT在临床治疗RA方面具有潜在价值.     

(一)一表没食子儿茶素没食子酸酯对胶原诱导性关节炎小鼠免疫调节机制研究

目的 采用鸡Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠模型,观察(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的治疗作用,并探讨其作用机制.方法 给予CIA小鼠EGCG治疗,以磷酸盐缓冲液(PBS)作为阴性对照,观察各组小鼠发病情况.通过对CIA小鼠关节评分和关节病灶病理学检测[苏木素-伊红(HE)染色] 判断EGCG的疗效;通过,3H-胸腺嘧啶核苷(TdR)掺入实验、流式细胞术及Western-blot方法阐明EGCG的免疫学作用机制.结果 ①EGCG能够改善CIA的关节评分、减少病变关节组织炎性细胞浸润;② EGCG能抑制CIA小鼠C Ⅱ反应性脾细胞的增殖[EGCG组每分钟脉冲数(cpm)值3366±199;PBS组cpm值5342+112,P<0.05]和细胞因子白细胞介素(IL)-17的分泌(EGCG组IL-17阳性细胞数占CD4+T细胞0.41%;PBS组占4.05%);③EGCG能提高CIA小鼠淋巴结细胞中IKB的表达,降低磷酸化IKB蛋白水平的表达.结论 EGCG能显著减轻CIA严重程度.EGCG通过抑制CIA小鼠C Ⅱ反应性脾细胞的增殖和炎症因子IL-17的分泌;以及通过抑制CⅡ反应性淋巴结细胞中IKB的磷酸化,增强IKB的表达从而抑制核因子(NF)-κB的活性来治疗CIA.     

比较磁共振成像和病理对大鼠Ⅱ型胶原诱导性关节炎早期关节病变的诊断价值

目的 建立Ⅱ型胶原诱导性大鼠关节炎模型(CIA),结合病理改变研究磁共振成像(MRI)检测对早期类风湿关节炎的诊断价值.方法 用牛Ⅱ型胶原和不完全弗氏佐剂联合皮内注射免疫Wistsr大鼠,制作关节炎模型;免疫后不同时期分别采用普通X线摄片、1.5T磁共振仪进行双踝关节平扫加增强扫描以及病理组织学等方法 进行大鼠踝关节病理学特征分析.结果 CIA实验组大鼠免疫14 d后,其关节指数(AI)显著增加,28 d AI增加达到最高(3.6±1.0),抗Ⅱ型胶原抗体水平较对照组明显高(P<0.001).根据病理学分析CIA成模率为93.3%.MRI平扫加增强显示有12只出现异常征象,敏感性85.7%,特异性100%,与病理诊断呈正相关(r=0.5345,P<0.05).X线有4只出现关节软组织肿胀,MRI较X线检出率高(P=0.008).结论 MRI对早期关节滑膜炎、滑膜增生、血管翳等病理学的诊断生成方面有明显优势.     

血管内皮生长因子在Ⅱ型胶原诱导的关节炎小鼠关节组织中的表达

目的 研究血管生成因子－血管内皮生长因子（VEGF）在Ⅱ型胶原诱导的关节炎（CIA）形成期的表达及功能。方法 于DBA／1J小鼠皮下注射Ⅱ型胶原制作关节炎模型并进行关节指数评价。用酶联免疫吸附法（ELISA）及免疫组织化学技术,检测关节组织内VEGF和vWF含量,以及通过RT－PCR,Southern blotting技术检测VEGF mRNA表达。结果 VEGF与vWF呈平行变化关系,均在关节炎发生后第4天达到最高,并与血管新生程度、关节炎严重程度呈正相关。VEGF mRNA在关节组织内表达形式为279、304bp。结论 VEGF在关节炎形成早期起着重要作用,影响着实验诱导关节炎血管新生及进展。     

胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织Annexin-1的表达

目的探讨胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜组织膜联蛋白-1 (Annexin-1)的表达及意义。方法采用Western blot法检测模型组及正常组大鼠在不同时间点滑膜组织Annexin-1的表达,运用ImageTool 3．0灰度扫描软件对结果进行半定量分析。结果正常组及模型组皆表达Annexin-1。模型组Annexin-l表达在25、35和45d水平递减,45d与25d相比,差异有统计学意义(P＜0．05)。45d Annexin-1表达明显低于正常组(P＜0．05)。结论CIA大鼠滑膜组织Annexin-1表达下调。     

HLA-DRβ1特异性非T细胞结合肽对胶原性关节炎的抑制作用

目的 研究HLA－DRβ1特异性非T细胞结合肽对胶原性关节炎的抑制作用，探索类风湿关节新的免疫治疗方法。方法 以丙氨酸及甘氨酸替换Ⅱ型胶原（CⅡ）263－272多肽中与T细胞受体结合的氨基酸，利用HLA－DRβ1转基因抗原呈递细胞及CⅡ特异性T细胞组成的激活体系，从这些CⅡ263－272修饰肽中筛选非T细胞结合肽。牛CⅡ＋完全福氏佐剂诱导大鼠胶原性关节炎（CIA）动物模型，应用不同剂量（10，500，100μg ）的非T细胞结合肽268A皮下注射进行为期16d的治疗，观察大鼠关节肿胀的变化情况。酶联免疫吸附法（ELISA）检测外周血CⅡ抗体和肿瘤坏死因子了（TNF)-α浓度，HE染色检测CIA病理变化。结果 7条CⅡ263－272修饰肽中以丙氨酸替换第267，268，269，270位残基的4条肽（267A，268A，269A及270A）和用丙氨酸和甘氨酸连续替换268，269，270位残基的1条肽（Sub268-270)对T2细胞激活能力显著低于的型肽（P＜0．01）。利用268A多肽对CIA进行治疗的结果发现，3个治疗组CIA缓解率显著高于对照组（P＜0．05或P＜0．01）；3个治疗组的关节炎评分显著低于对照组（P＜0．05或P＜0．01）。3个治疗组TNF-α浓度及CⅡ抗体浓度均显著低于对照组（P＜0．05或P＜0．01）。结论 HLA－DRβ1特异性的CⅡ263－272修饰型非T细胞结合肽为T细胞低反应性，并可以抑制大鼠胶原性关节炎，并可能成为类风湿关节炎的新的免疫治疗方法。     

蛋白质微阵列对胶原诱导性关节炎大鼠血清细胞因子表达谱的初步研究

目的研究胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠不同时期血清蛋白表达谱,寻找与疾病发生和炎症相关的特异表达蛋白,初步探讨类风湿关节炎(RA)的发病机制。方法以含有19个细胞因子的抗体芯片分别检测CIA大鼠发病高峰期和后期及正常大鼠的血清蛋白表达谱,并以酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定血清肿瘤坏死因子(TNF)-α表达,验证微阵列检测结果。结果CIA高峰期和后期持续显著上调的细胞因子有10个,高峰期特异高表达细胞因子有1个。微阵列结果没有显示显著下调的细胞因子。结论CIA疾病不同时期细胞因子表达谱不同,筛选出的特异表达蛋白不仅为进一步研究RA的病理机制提供线索,也为疾病的早期诊断提供分子标志。