三七总皂苷诱导U937细胞凋亡及对Caspase-3表达的影响

目的观察三七总皂苷（PNS）对人急性单核细胞白血病细胞系U937细胞的增殖、凋亡及Caspase-3表达的影响。方法用不同浓度PNS作用于U937细胞,采用MTT法检测细胞增殖活性,用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western-blot法检测Caspase-3蛋白表达。结果 PNS抑制U943细胞生长并呈时间和剂量依赖性;分别予100、200、400、800mg/L处理U937细胞48h,细胞凋亡率分别为（5.93±0.15）%、（7.43±0.70）%、（12.3±0.38）%和（20.4±0.91）%,对照组细胞凋亡率为（1.73±1.50）%（P〈0.01）,并诱导细胞G1期阻滞;Western-blot结果显示,PNS使Caspase-3蛋白表达上调。结论 PNS能抑制U937细胞增殖,并可能通过上调Caspase-3蛋白表达诱导细胞凋亡。     

酒精性肝病大鼠Kupffer细胞CD14蛋白的表达及其在肝损害中的作用

目的:观察大鼠酒精性肝病时细胞()蛋白和基因的表达及其在肝损害中的作用。KupfferKCsCD14方法:随机将大鼠分为乙醇喂养组(剂量～)和葡萄糖对照组。周和周活杀分离,用流式细胞仪()测定细Wistar 512g/kg/24h48KCsFCM胞膜上蛋白的表达,同时用逆转录多聚酶联反应()测定中的表达;用酶联免疫法()CD14RT-PCRKCsCD14 mRNAELISA测定血浆中TNF-α和-浓度变化;测定血浆内毒素及血浆中转氨酶()水平变化,并观察肝脏形态学改变。IL6ALT结果: 乙醇组大鼠周时膜上已明显表达蛋白和　,周时其表达进一步增强,显著高于对照组4KCsCD14CD14mRNA8(P。乙醇<0.05)组周和周时血浆48TNF-α浓度、-浓度及内毒素浓度均明显高于对照组IL6 (P。乙醇组肝组织发生显著的病理变化,对<0.05)照组肝组织无明显病理变化。结论:乙醇能诱导大鼠肝脏膜蛋白和的表达显著增强,血浆中细胞因子KCsCD14CD14 mRNA-TNFα和-浓度增加,引起肝脏形态改变和功能损害。IL6     

C/EBPε增强U937细胞中PI3Kγ基因的表达

目的 研究过量表达转录因子CCAAT-增强子结合蛋白ε(CCAAT／enhancerbinding proteins，C／EBPε)对磷脂酰肌醇-3激酶γ(phosphoinositide 3-kinase，PI3Kγ)基因的影响。方法 将C／EBPε基因的真核表达载体pcDNA3．1-C／EBPε电穿孔转染U937细胞，G418筛选出稳定转染的混合细胞克隆后，用RT-PCR与Western blot的方法，分别检测转染细胞与对照细胞中C／EBPε与PI3Kγ基因的表达水平。结果 过量表达转录因子C／EBPε后，可以显著提高U937细胞中PI3Kγ基因的表达水平。结论 核内转录因子C／EBPε可能参与了PI3Kγ基因的转录调控。     

β淀粉样蛋白诱导大鼠小胶质细胞脂多糖受体CD14和肿瘤坏死因子-αmRNA的表达

目的：研究不同浓度的p淀粉样蛋白（Aβ1-42）诱导大鼠小胶质细胞脂多糖受体CD14和肿瘤坏死因子-αLmRNA表达的变化。方法：小胶质细胞株复苏培养后分为2组：Aβ1-42组和抗CD14加Aβ1-42组。抗CD14加Aβ1-42组使用抗CD14抗体拮抗CD14的表达，再分别用不同浓度的Aβ1-42（0、62．5nmol／L、125nmol／L、250nmol／L）进行干预，2组均在Aβ1-42干预2h后用RT—PCR法检测CD14及TNF—αmRNA表达的量。结果：不同浓度的Aβ1-42干预小胶质细胞2h后，62．5nmol／L与0nmol／L Aβ1-42组CD14mRNA的表达相比较，差异无统计学意义。当Aβ1-42浓度为125nmol／L和250nmol／L时，CD14mRNA的表达逐渐增加（P〈0．05）。使用CD14抗体后，抗CD14加Aβ1-42组中CD14mRNA的表达与Aβ1-42组比降低（P〈0．05）。Aβ1-42组TNF-αmRNA的表达随Aβ1-42的浓度增加而增加（P〈0．05），与Aβ1-42组相比，抗CD14加Aβ1-42组中TNF-αmRNA的表达在Aβ1-42浓度为125nmol／L开始明显受到抑制（P〈0．05）。结论：Aβ1-42诱导的小胶质细胞可通过脂多糖受体CD14使TNF-αmRNA的表达增加，且与Aβ1-42的作用浓度呈正相关。     

血清药漏芦对ox-LDL诱导U937细胞形成泡沫细胞过程中PPARγ表达的影响

目的观察血清药漏芦对ox-LDL诱导U937细胞形成泡沫细胞过程中PPARγ表达的影响.方法用ox-LDL与U937细胞孵育造成泡沫细胞模型,采用免疫组织化学染色方法观察PPARγ的表达情况.结果光镜下,正常对照组细胞内无明显棕染颗粒,模型组棕色颗粒粗大,见于胞膜和胞浆中;用药组棕色颗粒色浅,且数量明显少于模型组.结论血清药漏芦能抑制ox-LDL诱导U937细胞形成泡沫细胞过程中PPARγ的表达.     

3种胶质瘤细胞株(U87、U251及T98G)体外趋化组织细胞淋巴瘤细胞(U937)的实验研究

目的 观察胶质瘤细胞株U87(人脑星形胶质母细胞瘤细胞)、U251(人神经胶质细胞瘤细胞)及T98G(人胶质母细胞瘤细胞)对U937(组织细胞淋巴瘤细胞)的趋化活性.方法 体外传代培养U87、U251、T98G及U937细胞,应用Transwell法观察3种胶质瘤细胞株(U87、U251及T98G)对U937细胞的趋化活性.结果 Transwell小室下孔细胞离心浓缩后白血球计数板计数;3种胶质瘤细胞株对于U937细胞趋化活性明显高于正常对照组(P＜0.05);U87对于U937细胞趋化活性明显高于U251及T98G (P＜0.05);U251及T98G对于U937细胞趋化活性差异无统计学意义(P＞0.05).结论 3种胶质瘤细胞株(U87、U251及T98G)可促进U937细胞的趋化迁移,U87趋化活性更为明显.     

血清1，25-（OH）2VitD3与钙磷水平在COPD中的临床意义

目的：观察慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者血清1,25-（OH）2VitD3与钙磷水平变化及其与肺功能、体重指数（BMI）的相关性,探讨其与病情严重程度及预后的关系。方法：随机选取COPD患者、健康对照者各30例,分别测定COPD急性加重期、稳定期及对照组的血清1,25-（OH）2VitD3与钙磷水平,并测定肺功能（FEV1、FEV1／FVC）及BMI等指标。结果：COPD患者急性加重期、稳定期血清1,25-（OH）2VitD3及钙磷水平较对照组明显降低,其中各组血清1,25-（OH）2VitD3、钙水平差别有统计学意义（P〈0．01）,而血清磷水平于急性加重期和稳定期、急性加重期和对照组比较差别有统计学意义（P〈0．01）;急性加重期和对照组中,血清1,25-（OH）2VitD3水平与BMI、肺功能指标成正相关,血清钙水平与BMI成正相关。结论：COPD患者不论急性加重期还是稳定期血清1,25-（OH）2VitD3与钙磷水平均较对照组明显降低,并和病情严重程度相关,影响预后,对临床治疗有一定指导意义。     

1，25-二羟维生素D3联合塞莱昔布对胃癌细胞株SGC-7901凋亡的影响

目的本研究探讨1,25-二羟维生素D3（1 alpha,25-dihydroxy vitamin D3,VitD3）联合塞莱昔布（CELE）对胃癌细胞株SGC-7901凋亡诱导作用及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨其联合应用是否具有协同抗胃癌作用,并初步探讨ViD3与CELE联合应用抗胃癌的可能作用机制,为临床制定合理的联合化疔方案,寻求最佳治疗效果提供理论依据。方法体外培养胃癌细胞SGC-7901至指数生长期,加入一定浓度的CELE、VitD3及CELE和VitD3,作用48h后,采用吖啶橙染色观察细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达变化,分析两种药物对胃癌细胞SGC-7901的增殖、凋亡及相关基因表达的影响。结果吖啶橙染色观察细胞凋亡从形态学上证实了VitD3和CELE对胃癌细胞的诱导凋亡作用,且两药联合增强诱导凋亡作用;VitD3、CELE及二者联合应用均显著抑制SGC-7901细胞Bcl-2蛋白的表达、促进Bax蛋白的表达（P〈0．05）,联合用药组与单一用药组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论VitD3和CELE可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,其凋亡机制之一可能为通过抑制Bcl-2、并促进Bax的表达,从而改善Bcl-2／Bax的平衡实现的。两者联合应用对胃癌细胞SGC-7901诱导凋亡具有协同作用。     

1,25-(OH)2VitD3对食管癌细胞分化相关基因NDRG1表达的影响

目的了解1，25-（OH）2VitD3对食管癌细胞分化相关基因NDRG1表达的影响。方法采用1,25-（OH）2VitD3作用于人食管癌EC9706细胞，应用免疫组化和RT—PCR方法分别检测1,25-（OH）2VitD3作用不同时间后NDRG1基因的表达。结果1，25-（OH）2-VitD3作用24h～5d NDRG1基因蛋白和mRNA均显著高于对照组水平（P〈0．05）。结论1,25-（OH）2 VitD3可上调EC9706细胞分化相关基因NDRG1表达，促使其分化。     

日本血吸虫14-3-3蛋白epsilon亚型基因扩增及表达载体的构建

目的　扩增日本血吸虫 1 4 3 3蛋白epsilon亚型编码基因并构建其表达载体 ,以研究其在血吸虫信号转导以及免疫预防和诊断方面的作用。方法　以日本血吸虫成虫总RNA为模板逆转录合成cDNA链 ,设计合成引物 ,用PCR法扩增 1 4 3 3蛋白epsilon亚型基因编码序列 ,将其克隆入pGEM T载体 ,双酶切和以质粒为模板的PCR鉴定后 ,将基因片段亚克隆入表达载体pBK CMV ,转染大肠杆菌BL2 1 ,经双酶切后鉴定。结果　RT PCR扩增出一条约 753bp的特异性条带 ,TA克隆重组质粒的双酶切和以质粒为模板的PCR均获得了一条与RT PCR扩增出大小相同条带 ,pBK Sj1 4 3 3表达载体经双酶切后也同样获得了一条约 753bp的特异性条带。 结论　在体外成功的扩增了日本血吸虫 1 4 3 3蛋白epsilon亚型编码基因并构建了 pBK Sj1 4 3 3表达载体 ,为进一步的免疫预防和免疫诊断研究提供了条件。     

半胱氨酸蛋白酶-3/-9在大肠埃希菌诱导的人巨噬细胞系U937细胞凋亡中的作用

目的探讨大肠埃希菌(E.coli)感染时人巨噬细胞系U937细胞凋亡与半胱氨酸蛋白酶-3/-9(caspase-3/-9)的关系。方法以流式细胞仪检测为指标,研究E.coli感染对U937细胞凋亡的诱导作用。ELISA方法检测caspase-3/-9蛋白酶活性。结果当U937细胞∶E.coli为1∶20时,E.coli感染U937细胞0,10,20,30,60,90min时细胞凋亡百分率分别为(3.02±0.78)%,(6.67±1.34)%,(10.56±1.02)%,(33.92±2.66)%,(46.98±3.12)%和(69.02±4.69)%,呈时间依赖性。感染30,60,90min时,细胞凋亡率与对照组相比明显增高(P<0.01)。caspase-3/-9蛋白酶活性随着培养时间延长也逐渐增高,与细胞凋亡程度基本一致。caspase-3/-9蛋白酶的抑制剂Z-DEVD-FMK和Z-LEHD-FMK能够抑制E.coli诱导的U937细胞凋亡。结论人巨噬细胞系U937细胞在E.coli感染过程中存在凋亡,caspase-3/-9参与了该凋亡过程并发挥了重要的作用。     

14-3-3蛋白调节1-细胞期小鼠受精卵有丝分裂

 [摘要]目的：研究14-3-3蛋白在1-细胞期小鼠受精卵有丝分裂中的作用。方法：RT-PCR技术鉴定小鼠受精卵14-3-3蛋白亚型。采用显微注射方法将14-3-3siRNA注射入小鼠受精卵G1期,观察受精卵的卵裂率、形态学变化及MPF活性。结果：小鼠受精卵中的14-3-3蛋白亚型是14-3-3ε。小鼠受精卵注射pSUPER-14-3-3εsiRNA后,与对照组相比,卵裂率下降,有丝分裂延迟,有更多的受精卵发生形态异常,MPF活性最高值显著下降。结论：14-3-3蛋白在调节小鼠受精卵有丝分裂中发挥重要作用。     

干扰CD44v3的表达对肺腺癌A549细胞侵袭行为的影响

目的研究肺腺癌细胞A549的侵袭能力和黏附分子CD44v3的关系。方法用pRNAT-H1.1/Neo(6.1 kb)质粒构建一个能够稳定转录短发卡RNA(shRNA)并干扰CD44v3分子表达的表达载体,将其转染A549细胞,用荧光免疫细胞化学法和Western blot检测A549细胞CD44v3表达的变化。用Boyden室和人工基底膜构建癌细胞的体外侵袭模型,计数并比较各实验组穿过人工基底膜的细胞数。结果肺腺癌细胞A549表达CD44v3分子,分子量为130 kD(1 kD=0.992 1 ku)。转染干扰质粒表达载体能够使A549细胞的CD44v3表达降低46%。癌细胞的离体侵袭模型中发现干扰组癌细胞侵袭能力为(4.00±1.22),空载对照组为(13.20±4.92),前者的癌细胞侵袭能力较后者下降70%(P<0.01)。抗CD44v3单克隆抗体(阳性对照组)也可降低A549细胞的侵袭能力,干扰组和阳性对照组比较,两者差异无显著性意义(P>0.05)。结论肺腺癌细胞A549表达CD44v3分子,用RNAi技术可降低其表达。CD44v3表达降低的A549细胞侵袭能力受到抑制。     

抗Sj14-3-3特异性IgY的制备及其诊断日本血吸虫病循环抗原的价值

目的制备抗重组日本血吸虫信号转导蛋白14-3-3(Sj14-3-3)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),建立双抗体夹心ELISA诊断体系(IgY-ELISA),探讨用于日本血吸虫病的诊断价值。方法利用Sj14-3-3制备并纯化卵黄抗体IgY和兔多克隆IgG抗体;以IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体建立双抗体夹心ELISA诊断方法,检测72例急性血吸虫病患者、128例慢性血吸虫病患者、132例正常人、42例肺吸虫患者、60例华支睾吸虫患者和46例钩虫感染者血清。探讨基于IgY的循环抗原检测的应用价值。结果成功制备并鉴定了抗Sj14-3-3特异性IgY和IgG抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测体系;检测急性血吸虫病患者和慢性血吸虫病患者血清的阳性率分别为73.6%和48.4%,正常人血清的阴性率为94.7%;与肺吸虫患者、华支睾吸虫患者、钩虫感染者血清的交叉反应分别为7.1%、6.7%、6.5%。结论建立了基于IgY的双抗体夹心ELISA检测体系,用于日本血吸虫病患者血清的检测具有较高的敏感性和特异性,可用于日本血吸虫病的辅助诊断。     

CD3单抗联合EBV建立人B淋巴母细胞株的方法研究

目的采用国产的CD3单克隆抗体代替环胞菌素A,建立人淋巴母细胞株(LCL)。方法采静脉血用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞,分别应用CD3单克隆抗体以及环胞菌素A作为免疫抑制剂,对比LCL建株情况。结果CD3单抗组经过4周的培养CD3 细胞由培养前的59.65%减低到52.78%,而环胞菌素A组升高至61.15%(P>0.05);对CD19 细胞的促进作用由培养前的5.39%提高到12.70%,而环胞菌素A为8.47%,两者的差异有显著性意义(P<0.01)。结论CD3单克隆抗体与环胞菌素A同样能够促进B淋巴样细胞株生成,防止体外B细胞的退化。