胎牛血清对人胚胎神经干细胞分化的影响

目的：探索胎牛血清对人神经干细胞（NSCs）的影响。方法：采用细胞培养、免疫组化、流式细胞仪检测的方法，观察了不同浓度胎牛血清对人NSC分化的影响。结果：胎牛血清促进人NSC分化为神经系统的主要的3种细胞（神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞），且培养基中胎牛血清浓度为15％时，人NSC分化为星形胶质细胞的数量占80％－90％。结论：胎牛血清影响人NSC分化为神经元和神经胶质细胞的比例，并与胎牛血清的浓度有一定的关系。     

异种血清对猪血管内皮细胞适应模型的影响

目的:观察胎牛血清对PAEC适应模型的影响。方法:以猪自体血清原代培养PAEC并传代,接种于96孔板后分别以5%正常人血清(NHS组)、胎牛血清(FCS组)和补体灭活的胎牛血清(FCS+C组)诱导6d,加入25%正常人血清,以MTT比色法检测细胞的存活率,并以免疫组化的方法观察各组HO-1的表达情况。结果:NHS组和FCS+C组细胞存活率均升高,同对照组相比差异显著,两组间亦有差异,HO-1表达均增加。FCS组与对照组无差异。结论:质量不佳的胎牛血清或补体灭活不充分的胎牛血清会干扰PAEC适应模型的诱导。     

重组热休克蛋白72对体外培养大鼠肝细胞脂肪变性的影响

目的探讨重组热休克蛋白72（HSP72）对体外50％胎牛血清培养的大鼠肝细胞脂肪变性及肝细胞损伤的影响。方法sD大鼠肝细胞分4组培养。①对照组：DMEM培养液（不含血清）与多粘菌素B;②实验组1：对照组培养液中加50％胎牛血清;③实验组2：对照组培养液中加50％胎牛血清与重组HSP72;④实验组3：对照组培养液中加重组HSP72。动态检测各组肝细胞内甘油三酯（TG）含量、脂肪变性率及悬液中ALT、AST含量。SPSS11．5软件统计分析实验结果。结果对照组肝细胞内TG含量及悬液中AIJT、AST含量无显著变化（均P〉0．05）,肝细胞脂肪变性率为0。实验组1、2肝细胞脂肪变性明显,肝细胞内TG及悬液中ALT、AST含量较对照组均显著升高（均P〈0．01）,且与其它组比较实验组2变化更为显著（P〈0．01）;实验组3肝细胞内TG无明显变化（P〉0．05）,肝细胞脂肪变性率为0,但悬液中A¨、AST含量却较对照组有显著升高（均P〈0．01）。结论重组HSP72能导致肝细胞损伤,但不能诱导肝细胞脂肪变性;重组HSP72能加重50％胎牛血清所诱导的肝细胞脂肪变性及肝细胞损伤。     

不同血清对LPS和PDGF-BB诱导的大鼠肝星状细胞增殖和活化的影响

目的 探讨血清种属、浓度和是否灭活对脂多糖(LPS)和血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)诱导大鼠肝星状细胞HSC-T6增殖和活化的影响。方法 分别用0、5、10、30、60、100%的胎牛血清、大鼠灭活血清和大鼠未灭活血清培养HSC-T6细胞作为空白组,在各组空白组中分别加入LPS(5μg/mL和10μg/mL)和PDGF-BB(10 ng/mL和20 ng/mL)作为模型组。用CCK-8法测定细胞增殖率;用免疫荧光法测定胶原III(Collagen III)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β(TGF-β)和基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)的表达;用ELISA法测定细胞上清肝纤维化指标Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)和III型前胶原(PCⅢ)的含量。结果 LPS和PDGF-BB都能不同程度的诱导HSC-T6增殖和活化,且有浓度依赖性,浓度越高增殖和活化作用越强;同一个血清浓度下胎牛血清组细胞增殖作用高于大鼠血清组,30%血清以下浓度组增殖作用强于高浓度血清组,大鼠灭活血清组增殖作用强于大鼠未灭活血清组;胎牛血清组CollagenⅢ...     

实验小鼠豚鼠弓形虫抗体ELISA试剂盒的研制及应用

本文研究了快速、特异性强、敏感性好的弓形虫抗体ELISA诊断试剂盒。IHA、IFAT和ELISA平行检测3份阳性血清和30份阴性血清，符合率均为100％。IHA和ELISA检测61份小鼠和84份豚鼠血清，结果表明ELISA法敏感于IHA。用本ELISA诊断试剂共检测了319份血清，小鼠阳性率为0．67％．豚鼠为2.22％．说明弓形虫在实验小鼠、豚鼠中感染率报低。     

恒河猴EB病毒有关抗体的检查

我们应用间接免疫荧光技术检查50例正常恒河猴血清的EB病毒壳抗原(EB-VCA)抗体。待检血清经56℃30分灭活,置-20℃备用.阳性对照用鼻咽癌病人血清。阴性对照用献血员血清。检测时,血清样品用PBS从1:5起倍比稀释. 将检测用的B95-8细胞株(系产生EB-VCA的传代细胞株,医科院肿瘤所提供)培养于含20％牛血     

幽门螺杆菌菌种保存的实验研究

本文报道了幽门螺杆菌在２种培养基和４种温度下保存效果的实验研究．１０株被试菌株经改良Ｓｋｉｒｒｏｗ琼脂平板培养２４～４８ｈ，刮取菌苔于含１０％小牛血清、Ｎ％甘油布氏肉汤，在─７０℃条件下能存活１２个月，用同样方法在─４ｏ℃下多数菌株只能存活半个月．将菌苔置于特殊半固体培养基于３５℃传代培养保存，１年存活率为６０％，但在３个月内形态较典型．对存活菌株进行细菌形态，菌落特征和生化特性试验证明保存前后其生物学性状完全一致．     

血凝素含量测定方法及其意义

材料：①参比抗原：WHO提供的三型抗原参比品（标准品）B型：B／Shangdong／7／97，甲1型：A／Caledonia／20／99．甲3型：A／Panama／2007／99；②测定抗原：通过鸡胚培养流感病毒并进行纯化的三型流感疫苗原液及纯化液；③阳性血清：由WHO提供免疫羊抗血清Anti-B／Shangdong／7／97，Anti-A／Caledonia．／20／99，Anti-A／Panama／2007／99；④阴性血清：10日鸡胚收获尿囊液，免疫健康羊，1个月后采集血清。经56℃灭活30分钟，2℃～8℃保存备用；⑤抗原阴性对照：将10日鸡胚收获尿囊液，用提纯流感病毒同一工艺纯化而得。蛋白含量：28μg/mL。     

不同血清微环境培养的施万细胞增殖状况比较

目的 将不同浓度大鼠血清、10％胎牛血清培养以及无血清培养的大鼠原代施万细胞的增殖状况进行比较,探讨适合施万细胞生长的血清微环境.方法 将所培养的原代施万细胞分成5％大鼠血清组、10％大鼠血清组、15％大鼠血清组、20％大鼠血清组、10％胎牛血清组、无血清组,另设不含细胞的空白对照组.采用CCK-8细胞增殖试剂,分别于培养后24、48、72、96、120h对各组的细胞增殖情况进行测定.结果 5％大鼠血清组的细胞在96h内的生长状况与10％胎牛血清组相比无显着差异.结论 在96h内,5％的大鼠血清浓度最适合该细胞生长.     

不同类型血清对大鼠脂肪干细胞分离培养的影响

目的研究不同血清培养基对脂肪干细胞分离培养的影响.方法用4种不同类型的血清培养基分离培养大鼠脂肪干细胞,免疫荧光法检测培养细胞CD34、CD90、CD133、Flk-1表面标志;成骨诱导液诱导分化,于14 d进行碱性磷酸酶和钙染色检验各细胞成骨分化特性.结果（1）新生牛血清组可见贴壁单个核细胞形态单一,呈梭形生长,无重叠现象;胎牛血清组均可见大量多角细胞呈巢状生长,形成铺路石样形态,间或有梭形细胞存在;（2）新生牛血清组梭形贴壁细胞免疫荧光检测可见CD90为阳性,CD34、CD133、Flk-1染色均为阴性;胎牛血清组多角形细胞CD34、Flk-1均为阳性,CD133组部分为阳性,CD90为阴性;（3）新生牛血清组贴壁细胞多数呈碱性磷酸酶阳性;胎牛血清组细胞多角状细胞死亡,形成空白区,梭形细胞呈碱性磷酸酶阳性;（4）新生牛血清组均可见大量红色钙结节影;胎牛血清组细胞多角状细胞死亡,形成空白区,梭形细胞红色钙结节影.结论（1）新生牛血清培养脂肪干细胞可以得到较纯的细胞;（2）胎牛血清组培养含有大量的血管内皮细胞.     

蛋白质芯片制作条件的优化

目的 探讨以醛基化玻片为固相载体制备蛋白质芯片的条件。方法 蛋白质用含40％甘油的PBS稀释后点加在醛基化玻片上，室温干燥1h。4℃冰箱保存，经封闭剂封闭，PBS漂洗后，依次加入抗体，反应结果用扫描仪进行扫读。结果 以醛基化玻片为固相载体时预点10～15个点后点样均一性较好；点样后4℃冰箱保存24～48h再进行漂洗和封闭处理，所得结果的荧光测量值较高；3％BSA为封闭剂时所得图像的荧光背景值最低；点样量影响荧光信号的强度。结论 以醛基化玻片为固相载体制备蛋白质芯片时要预点15～20个点后再正式点样，点样后应4℃保存24～48h再进行漂洗和3％BSA封闭处理。     

蛋白质芯片制作条件的优化

目的 探讨以醛基化玻片为固相载体制备蛋白质芯片的条件。方法 蛋白质用含40%甘油的PBS稀释后点加在醛基化玻片上,室温干燥1 h,4℃冰箱保存,经封闭剂封闭,PBS漂洗后,依次加入抗体,反应结果用扫描仪进行扫读。结果 以醛基化玻片为固相载体时预点10~15个点后点样均一性较好;点样后4℃冰箱保存24~48 h再进行漂洗和封闭处理,所得结果的荧光测量值较高;3% BSA为封闭剂时所得图像的荧光背景值最低;点样量影响荧光信号的强度。结论 以醛基化玻片为固相载体制备蛋白质芯片时要预点15~20个点后再正式点样,点样后应4℃保存24~48 h再进行漂洗和3% BSA封闭处理。     

稀释曲线法评价TgAb对Tg测定的干扰

目的 探讨稀释曲线法评价分化型甲状腺癌(DTC)患者内源性甲状腺球蛋白抗体(TgAb)对甲状腺球蛋白(Tg)测定的干扰。 方法 用血清稀释液、6例DTC患者可测浓度的TgAb血清(TgAb 20~25 IU/mL、Tg<0.1 μg/L)、5例DTC患者不可测浓度TgAb血清(TgAb<10 IU/mL、Tg<0.1 μg/L)分别稀释另外6例DTC患者的Tg血清(TgAb<10 IU/mL、Tg>10 μg/L),三明治夹心法(IMA)测定各稀释管Tg值。以各稀释管Tg理论值为横坐标、实测值为纵坐标,绘制稀释曲线图。 结果 血清稀释液稀释DTC患者Tg血清,稀释曲线呈直线。6例可测浓度TgAb血清分别稀释6例DTC患者Tg血清,获得36条稀释曲线,其中12条呈直线,24条不呈直线;同一可测浓度TgAb血清稀释不同患者Tg血清,仅部分呈直线;不同患者TgAb血清稀释同一患者Tg血清,仅部分呈直线。5例不可测浓度TgAb血清稀释3例患者Tg血清,只完成稀释曲线11条,仅4条呈直线,7条不呈直线。 结论 同一患者的TgAb稀释多例患者的Tg血清,部分有干扰。不可测浓度TgAb也可能干扰其他患者的Tg测定。稀释曲线法仅可间接评价DTC患者自身TgAb是否干扰Tg测定。     

SPA-ELISA检测棕果蝠血清冠状病毒抗体的研究

目的 建立一种敏感、简便的检测蝙蝠血清冠状病毒抗体的方法.方法 利用葡萄球菌A蛋白(SPA)能够与某些哺乳动物IgG抗体Fc段非特异性结合的特点,对市售人冠状病毒抗体ELISA试剂盒进行改造,建立SPA-ELISA法,使其适用于蝙蝠血清冠状病毒抗体的检测,并对采集到的55份棕果蝠血清冠状病毒抗体进行检测.结果 用SPA-ELISA方法对人冠状病毒试剂盒中阳性与阴性对照、SARS病人恢复期血清、空白对照的检测都得到理想的结果,并从55份棕果蝠血清中检测出2例阳性,阳性率为3.64％(2/55),中和试验进一步证实了结果的真实性.结论 所建立的方式适用于检测棕果蝠血清冠状病毒抗体.     

H-1细小病毒抗体ELISA检测方法的建立与应用

目的建立H-1细小病毒抗体的ELISA检测方法,并进行初步应用。方法采用大鼠神经胶质瘤细胞C6培养大鼠H-1细小病毒,制备包被抗原,采用纯化后抗原建立该病毒的ELISA检测方法;将建立的方法与国外同类试剂盒进行比对,考察该方法的特异性和灵敏度。同时,应用该方法对35份大鼠血清进行检测。结果所建立的方法可检测出稀释1280倍的阳性血清;与犬细小病毒、小鼠微小病毒和猪细小病毒阳性血清均无交叉反应;与大鼠细小KRV病毒有交叉反应;对35份大鼠血清进行检测,结果均为阴性,与国外同类试剂盒结果一致。结论所建立的H-1细小病毒ELISA检测方法具有良好的种属特异性和灵敏度,可用于大鼠血清中H-1细小病毒抗体检测。     

子宫内膜异位症患者血清环氧化酶-1含量测定及临床意义

目的探讨子宫内膜异位症（内异症）患者血清环氧化酶-1（COX-1）水平的变化及其临床意义。方法采用双抗夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定68例内异症患者（其中,Ⅰ-Ⅱ期10例、Ⅲ-Ⅳ期58例）及56例对照组血清COX-1以及4例内异症复发患者COX-1水平的变化。结果内异症组血清COX-1的水平高于对照组,差异有显著性（P〈0.05）。其中,内异症Ⅲ、Ⅳ期与对照组相比,差异有显著性（P〈0.05）和极显著性（P〈0.01）;内异症患者血清COX-1水平于手术治疗前后比较,差异有极显著性（P〈0.01）。结论COX-1在内异症的发生发展中起重要作用,血清COX-1可望成为内异症诊断和手术治疗监测更有价值的免疫学指标。     

三种方法在不同状态低值血清HIV Ag/Ab筛查中的效果评价

目的通过对HIV Ag/Ab不同状态低值血清的筛查,评价化学发光法(CLIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和斑点金免疫层析试验(DICA)的筛查效果。方法对18份HIV抗体确诊试验阳性血清样本分别用正常血清、脂血血清、溶血血清和黄疸血清进行1∶2、1∶4、1∶8和1∶16稀释,采用CLIA、ELISA和DICA对稀释后血清进行HIV Ag/Ab复孔检测。结果 CLIA检测脂血组、溶血组和黄疸组HIV Ag/Ab分别为(1.38+2.26)、(1.46+2.27)、和(1.53+2.34)S/CO,均高于正常组的(1.42+2.29)S/CO(P均0.01)。脂血、溶血和黄疸对CLIA方法的干扰率分别为(4.71+8.15)%、(5.86+6.77)%和(10.44+8.72)%,黄疸组高于脂血组和溶血组(P均0.01);ELISA检测溶血组和黄疸组HIV抗体分别为(11.63+22.12)和(9.76+16.86)S/CO,均高于正常组的(8.90+16.97)S/CO(P0.01)。溶血和黄疸对ELISA干扰率分别为(28.08+23.80)和(10.10+32.45)%,均高于脂血组的(-4.00+15.18)%(P均0.01);ELISA检测正常组、脂血组、溶血组和黄疸组HIV抗体低值血清的阳性率分别为94.44%、93.06%、94.44%和100.00%,均高于CLIA法的63.89%、66.67%、66.67%和70.83%以及DICA法(P均0.01)。结论脂血、溶血和和黄疸能干扰CLIA和ELISA检测HIV Ag/Ab的效果,因此在检测该类样本出现低值阳性结果时,应重新采血并建议随访。     

干、湿化学检测系统测定肾功能高值标本时稀释液的选择与评价

目的系统评价不同稀释液对干化学、湿化学检测系统测定肾功3项高值标本的影响,确定理想的稀释液。方法收集接近各系统肾功能3项检测上限的新鲜血清,分别用蒸馏水(DH2O)、生理盐水(NS)、7%小牛血清(7%BSA)、混合血清进行倍比稀释(最高稀释倍数为1∶32),在美国强生Vitros 350干化学分析仪和日本日立7600全自动生化分析仪上分别测定,然后进行偏差分析和线性评价。结果在湿化学检测系统上,尿素用NS、BSA、混合血清稀释,偏差分析均符合要求。肌酐、尿酸用DH2O、BSA、混合血清均符合要求。在干化学检测系统上,尿素、尿酸用DH2O和混合血清稀释均符合要求,肌酐除了BSA外各稀释液均符合要求。根据分析测量范围评价(AMR),在湿化学检测系统中,尿素、肌酐、尿酸用4种稀释液稀释后均符合要求;在干化学检测系统中,尿素只有DH2O和混合血清稀释后符合要求,肌酐只有NS和混合血清稀释后符合要求,尿酸用4种稀释液稀释后均符合要求。结论混合血清是最理想的稀释液。     

两种HIV抗体诊断试剂盒检测早期感染的比较

目的比较两种HIV抗体诊断试剂盒检测HIV早期感染的性能。方法采用两种试剂盒对血液样本进行检测,并对其中5份HIV抗体阳性血浆样品进行稀释,然后用ELISA检测。对检测结果呈阳性反应的稀释样品分别用两种HIV抗体确证试剂盒进行检测以测试其灵敏度,比较两种试剂盒检测结果及灵敏度。结果两种方法共检出91份阳性,确证68份阳性标本,其余23份确证为阴性。北京万泰试剂盒和英科新创试剂盒检测假阳性率分别为13．92％和15．00％,两种试剂盒假阳性率相似（P〉0．05）;2份质控品英科新创试剂出现漏检;其中有2套系列稀释样品英科新创已显示为阴性,北京万泰仍能检出阳性,且稀释8倍时北京万泰试剂仍检出阳性。结论北京万泰诊断试剂盒与英科新创诊断试剂盒相比,可以更灵敏地检测出HIV抗体。