尿多酸肽对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的研究肿瘤细胞分化诱导剂尿多酸肽（CDA—Ⅱ）对乳腺癌细胞凋亡的影响。方法将CDA—Ⅱ与不同生物学特性的乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231进行体外培养，同时以维甲酸为阳性对照，观察CDA—Ⅱ对乳腺癌细胞生长曲线、细胞凋亡及形态学等方面的影响。结果CDA—Ⅱ可减缓两株乳腺癌细胞的生长和增殖能力，诱导乳腺癌细胞凋亡。结论CDA—Ⅱ可抑制MCF-7和MDA-MB-231两株乳腺癌细胞的生长和增殖能力，诱导乳腺癌细胞凋亡．本研究为CDA-Ⅱ治疗乳腺痛提供了实验依据。     

奥曲肽对人胃癌细胞的凋亡诱导作用

目的 探讨生长抑素对人胃癌细胞的抑制作用及其作用机理。方法 以生长抑素类似物奥曲肽作用于人胃癌细胞株SGC-7901细胞，以人成纤维细胞株HF作为正常细胞对照，以5-FU作为阳性药物对照，通过MTT实验、荧光显微镜观察及流式细胞术分析，得出结论。结果 一定浓度范围内的奥曲肽对SGC-7901细胞产生抑制作用，其抑制作用具有量效关系和饱和性。奥曲肽对SGC-7901细胞的抑制程度接近于5-FU对他的抑制，而对HF细胞无影响。奥曲肽可诱导SGC-7901细胞凋亡。结论 奥曲肽在体外对SGC-7901细胞具有抑制作用，诱导肿瘤细胞凋亡可能是其作用机理之一。     

奥曲肽抑制人肝癌细胞的生长及诱导其凋亡的研究

奥曲肽 (ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ)为人工合成的生长抑素八肽 ,同天然生长抑素十四肽相比 ,具有血浆半衰期长 ,作用更强大、作用时间持久等特点〔1〕。它对肿瘤的抑制作用日益受到人们的重视 ,大量的研究表明 ,奥曲肽不仅能抑制神经内分泌肿瘤的生长 ,对普通的实体性肿瘤如乳癌、胃癌、结直肠癌及胰腺癌也具有抑制作用〔2〕。对原发性肝癌作用的报道尚属罕见。本研究旨在探讨奥曲肽对原发性肝癌有无生长抑制作用 ,能否诱导其发生凋亡 ,以便从凋亡的角度阐明其作用机制。材料与方法1.细胞培养及实验分组 :人肝癌细胞株ＢＥＬ 74 0 2用含高糖的Ｄ…     

早期区域动脉灌注5-氟尿嘧啶、奥曲肽治疗急性出血坏死性胰腺炎

目的为观察区域动脉灌注５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）、奥曲肽对急性出血坏死性胰腺炎的疗效,并对其大体病变严重度评估方法进行评价。方法将健康杂种犬１９只分成４组：对照组、５－ＦＵ组、奥曲肽组、５－ＦＵ＋奥曲肽组,各模型组经胃十二指肠动脉灌注生理盐水、５－ＦＵ、奥曲肽、５－ＦＵ联合奥曲肽进行治疗,按时序各抽血测定血清淀粉酶;动物死亡后即行尸体解剖。结果①各组模型前后血清淀粉酶水平明显上升,３个治疗组可使血清淀粉酶水平下降,其中以５－ＦＵ联合奥曲肽组作用最强;②对照组胰腺大体病变程度最严重,５－ＦＵ联合奥曲肽组最轻,５－ＦＵ组、奥曲肽组介于二者之间,其相互间无明显差异;③病理学检查结果与大体病变评估结果基本相符。结论①区域动脉灌注５－ＦＵ、奥曲肽是早期治疗急性出血坏死性胰腺炎的一种有效方法,联合应用疗效相互累加;②改良的张氏评估法能比较客观、准确地估计和评价实验犬胰腺炎病变严重程度,是一个理想的实验评价指标。     

奥曲肽对人肝癌细胞的抑制及其机制的研究

目的 探讨生长抑素类似物奥曲肽对人肝癌细胞产生抑制作用及其抑制机制。方法 以奥曲肽作用于人肝癌细胞株SMMC-7721细胞，以人成纤维细胞株HF为正常细胞对照，以5-Fu为阳性药物对照。通过噻唑蓝比色实验（MTT实验），细胞增殖生长反应及传代实验和流式细胞术分析，得出结论。结果 在体外，奥曲肽对SMMC-7721细胞产生抑制作用。该抑制作用具有量效关系和饱和性，奥曲肽与5-Fu对SMMC-7721的抑制程度无明显差异。且对HF细胞无影响。结论 奥曲肽对SMMC-7721细胞具有抑制作用。诱导肿瘤细胞凋亡是其作用机制之一。     

奥曲肽对胰腺炎相关性腹水诱导的大鼠肝细胞凋亡的保护作用

目的探讨奥曲肽对胰腺炎相关性腹水(PAAF)诱导的大鼠肝细胞凋亡的保护作用及其相关机制。方法以PAAF诱导的大鼠肝损伤模型(B组)为研究对象,监测4、7h血清肝功能酶学指标(ALT、AST)、总胆红素(TBiL)、淀粉酶(AmYL)及转化生长因子(TGF)β1浓度。同时对胰腺、肝组织进行组织学观察;TUNEL法流式细胞术定量检测肝细胞凋亡情况,以及应用奥曲肽后(C组)对上述指标的变化。对比评估B组与急性坏死性胰腺炎模型(ANP组)胰腺损伤程度。结果B组各血清学指标均比空白对照组(A组)显著升高(P<0.01);C组上述各指标显著下降(P<0.01);ANP组与B组相比,7h时间点AmYL浓度明显升高(P<0.01)。PAAF诱导7h后(20.13±3.84)%的肝细胞发生凋亡,其中(49.04±1.44)%细胞生长停滞在G2/M期。电镜(TEM)下可见典型的晚期凋亡肝细胞;ANP组胰腺损伤程度明显重于B组。结论(1)TGFβ1在肝细胞增殖(G2/M)期诱导其凋亡损伤;(2)奥曲肽通过抑制TGFβ1在肝脏的表达而对PAAF诱导的大鼠肝细胞凋亡具有良好的保护作用;(3)PAAF诱导的大鼠肝损伤模型中的胰腺病变明显轻于ANP时的胰腺病变。     

奥曲肽与胰岛素对人肝癌细胞影响的实验研究

目的：探讨在体外胰岛素能否促进人肝癌细胞增殖,奥曲肽对其诱导的增殖活动有无抑制作用。方法：将奥曲肽与胰岛素直接作用于体外培养的人原发性肝癌细胞株,运用MTT、直接细胞计数及流仪测定等方法观察奥曲肽与胰岛素对肝癌细胞的活细菌数及其比值,细胞总数、细胞周期及增殖指数（PI）的影响。结果：胰岛素（0－5μg/ml)使人肝癌细胞株BEL0－7402的细胞总数、活细胞数及其比值增加;而奥曲肽（0－2μg/ml）则使细胞基础的及胰岛素刺激的细胞总数、活细胞数及其比值下降,5μg/ml的胰岛素增加细胞的PI值而1μg/ml的奥曲肽降低其PI值（P＜0．05）,并产生S期限滞作用。结论：在体外,胰岛素可诱导人肝癌细胞增殖,奥曲肽不仅直接抑制肝癌细胞的增,对胰岛素诱导的肝癌细胞增殖也有抑制作用。     

奥曲肽诱导人结肠癌细胞凋亡与细胞周期的影响及机制

目的:探讨奥曲肽诱导人结肠癌细胞凋亡与细胞周期的影响及机制。方法:奥曲肽、GSK-3β抑制剂Li Cl单独或联合作用于人结肠癌SW480细胞后,用流式细胞术检测SW480细胞的凋亡与细胞周期,以及用DNA凝胶电泳实验进一步验证细胞凋亡;Western blot检测SW480细胞中GSK-3β、p-GSK3-β(Tyr216)及p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达。结果:与未处理的空白对照组SW480比较,奥曲肽处理SW480细胞后,细胞凋亡率与G0/G1细胞明显升高,凝胶电泳出现典型的"梯形"DNA条带,总GSK-3β蛋白与p-GSK3β(Tyr216)表达明显上调,而p-GSK3β(Ser9)蛋白表达明显下降(均P<0.05);Li Cl单独作用对SW480细胞的凋亡与细胞周期无明显影响(均P>0.05),但与奥曲肽联合作用能明显削弱奥曲肽对SW480的促凋亡与细胞周期阻滞作用(均P<0.05)。结论:奥曲肽能有效诱导SW480细胞凋亡与细胞周期阻滞,该作用可能与其上调GSK-3β蛋白的表达,并调节GSK-3β蛋白的磷酸化水平有关。     

奥曲肽对前列腺癌细胞株PC-3的抑制作用及对VEGF表达的影响

目的：探讨奥曲肽（生长抑素类似物）对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3的抑制作用及对其血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响.方法：分别用浓度为0.1、0.3、1.0、3.0 mg/L奥曲肽对体外培养的人前列腺癌PC-3细胞进行处理,24 h、48 h、72 h后采用MTT法检测细胞生长活性,行Hoechst33258染色,用荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学改变;用RT-PCR法测定细胞半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）及VEGF的表达.结果：奥曲肽能以剂量与时间依赖性的方式抑制PC-3细胞的生长,促进其凋亡;0.1、0.3、1.0、3.0 mg/L奥曲肽作用PC-3细胞24 h后的存活率分别为（0.971±0.016）%、（0.853±0.015）%、（0.717±0.031）%、（0.743±0.029）%,作用48 h后的存活率分别为（0.918±0.015）%、（0.835±0.015）%、（0.682±0.018）%、（0.727±0.014）%,作用72 h后的存活率分别为（0.922±0.017）%、（0.841±0.013）%、（0.717±0.017）%、（0.739±0.003）%,差别有统计学意义（P〈0.01）;Caspase-3表达较对照组明显升高;而VEGF则明显降低.结论：奥曲肽能显著抑制PC-3细胞的体外生长,促进其凋亡;VEGF可能是其中的一条途径.     

奥曲肽对人胆管癌QBC939裸鼠种植瘤的抑制作用

目的:探讨奥曲肽(OCT)对人胆管癌QBC939裸鼠种植瘤的作用及其可能的机制。方法:建立人胆管癌QBC939裸鼠种植瘤模型12只,随机均分为实验组和对照组,分别皮下注射OCT[100μg/(kg.d)]和等体积生理盐水,1次/d,连续4周,最后1次给药24 h后处死裸鼠,完整剥除瘤块,测量瘤体体积和重量,计算实验组抑瘤率;采用免疫组织化学方法分别检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在两组瘤组织中的表达情况及计数微血管密度(MVD);应用TUNEL法检测两组瘤组织凋亡情况。结果:实验组的种植瘤体积和重量明显小于对照组[(1934.85±272.88)mm3 vs.(2834.63±521.86)mm3;(1.77±0.23)g vs.(2.44±0.65)g](均P<0.05),实验组抑瘤率为29.20%;实验组瘤组织中HIF-1α的表达量和MVD况均明显少于对照组[(0.2605±0.0406)vs.(0.3284±0.1008);(13.61±1.87)vs.(17.44±2.24)](均P<0.05);实验组瘤组织的凋亡指数(AI)明显大于对照组(P<0.05)。结论:OCT对人胆管癌裸鼠种植瘤生长具有抑制作用,其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管生成有关。     

1,25二羟维生素D3与5-氟尿嘧啶对乳腺癌细胞生长及凋亡的影响

目的研究1，25二羟维生素D3[1，25(OH)2D3]与5-氟尿嘧啶(5-Fu)对人乳腺癌细胞株MCF-7生长及凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长抑制作用，流式细胞术测定细胞周期和凋亡率，免疫组织化学法检测bcl-2蛋白表达。结果1，25(OH)2D3与5-Fu均可抑制MCF-7细胞生长、1，25(OH)2D3阻滞细胞周期于G0／G1期，5-Fu阻滞细胞周期于S期，并可诱导细胞凋亡；当两药联合应用时，上述作用得到显著加强，凋亡率明显上升。两药均可下调bcl-2蛋白表达，当两药联合应用时，bcl-2蛋白几乎不表达。结论1，25(OH)2D3与5-Fu联合应用对乳腺癌细胞具有协同抑制生长和诱导凋亡作用。     

丝裂霉素、5-氟尿嘧啶、三苯氧胺联合应用对人乳腺癌细胞株的作用

目的观察丝裂霉素 (mitomycin ,MMC)、5 氟尿嘧啶 (5 fluorouracil,5 Fu)、三苯氧胺(tamoxifen ,TAM)联合应用对人乳腺癌细胞株MCF 7和MDA MB 4 35S的作用。方法采用MTT法 (四甲基偶氮唑蓝比色法 ,3 (4,5 dimethyl 2 thiazoly) 2 ,5 diphenyl 2H tetrazolium bromide)利用中效原理判断药物联合应用的效应。结果MMC、5 Fu单用及联合应用时 ,随着药物浓度增加其效应也增加 ;TAM与MMC、5 Fu合用时 ,TAM +MMC中效浓度为 1 6 5× 10 -5mmol/L ,TAM +5 Fu中效浓度为 0 0 32 6mmol/L ,对MCF 7细胞作用加强 ,而对MDA MB 4 35S细胞作用不明显 ;MMC与5 Fu高浓度合用时呈协同作用 (CI <1) ,低浓度时呈拮抗作用 (CI >1) ;两药合用时浓度比例变化及给药时间次序对效应影响不大。结论TAM与MMC、5 Fu合用时 ,对MCF 7细胞作用加强 ,而对MDA MB 4 35S细胞作用不明显。     

双位点小干扰RNA靶向抑制表皮生长因子受体促大肠癌细胞凋亡和5-氟尿嘧啶化疗增效的实验研究

目的观察针对单位点与双位点的RNA干扰技术抑制大肠癌LoVo细胞表皮生长因子受体(EGFR)的表达,诱导细胞凋亡以及对5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的差异。方法构建质粒表达载体pU6-EGFR-shRNA-1和pU6-EGFR-shRNA-2,脂质体转染人大肠癌LoVo细胞,G418筛选4周,分5组:1组为LoVo细胞,2组为对照质粒载体HK,3组为pU6-EGFR-shRNA-1,4组为pU6-EGFR-shRNA-2,5组为pU6-EGFR-shRNA-1和pU6-EGFR-shRNA-2各半量。实时荧光定量PCR和Westernblot检测mRNA和蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率,细胞増殖分析试剂CCK-8(CellCountingKit-8)测定5-FU不同浓度和时间对LoVo细胞的抑制率和半数抑制浓度(IC50)。结果正确构建了短发夹状RNA(shRNA)质粒表达载体,成功转染;3、4、5组mRNA表达分别下降了(80·2±3·4)%、(81·3±2·8)%和(90·6±2·8)%,蛋白表达分别下降了(74·1±4·0)%、(73·4±2·3)%和(90·4±3·3)%,凋亡率增加了(10·4±0·5)%、(10·1±0·4)%和(14·2±0·5)%,同时对5-FU的IC50和细胞抑制率作统计学分析,5组,3、4组和1、2组三者之间比较差异有统计学意义,而1组2组间、3组4组间各项比较差异无统计学意义。结论两条shRNA均可有效抑制LoVo细胞EGFR表达,促进细胞凋亡,提高5-FU对癌细胞的杀伤作用,靶向联合位点的RNA干扰技术较单一位点的干扰效果更显著,为大肠癌的基因治疗联合化疗提供了新的思路。     

二十二碳六烯酸联合5氟尿嘧啶对胃癌细胞生长及bcl-2、bcl 2l12和bax表达的影响

目的 评估二十二碳六烯酸(DHA)联合5氟尿嘧啶(5-Fu)对胃癌细胞SGC 7901生长以及bcl-2、bcl 2l12和bax基因表达的影响.方法 采用台盼蓝拒染方法检测两药物单用和联用对细胞活力的影响,用联合系数判断两药合用效果,倒置显微镜下观察细胞生长状况,PI染色流式细胞术检测亚二倍体峰比并拟合细胞周期曲线,Annexin-V/PI双标记方法检测早期细胞凋亡,RT-PCR方法检测bcl-2、bcl 2l12和bax基因的表达.结果 DHA可抑制胃癌SGC 7901细胞生长,且呈剂量和时间依赖性(P<0.05),24 h、48 h的半数抑制浓度分别为67.81 μg/ml、45.76 μg/ml;DHA联合5-FU对细胞生长的抑制具有协同作用(CI<1,P<0.01),倒置显微镜下可见两药联合处理后细胞稀疏;亚二倍体峰比、Annexin-V早期凋亡率示DHA、5-FU均能诱导细胞凋亡且联合用药后细胞凋亡更明显(DHA、5-FU、联合组的亚二倍体峰比分别为5.2%、6.2%、13.9%;早期细胞凋亡率分别为4.00%、5.37%、13.11%);细胞周期曲线在联合组停滞于G0/G1和S期;RT-PCR显示DHA、5-FU可下调bcl-2和bcl 2l12表达,两药联合表达时下调更显著,bax表达则无明显改变.结论 DHA能抑制胃癌SGC 7901细胞增殖,联合5-FU后对细胞生长抑制和周期阻滞具有协同作用,可能通过下调bcl-2和bcl 2l12基因诱导胃癌SGC 7901细胞发生凋亡.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂Trichostatin-A诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂Trichostatin-A(TSA)诱导肿瘤细胞凋亡的机制.方法 显微镜下观察TSA作用24、48 h后,小鼠NIH3T3成纤维细胞、人乳腺癌MCF-7细胞的形态学变化,采用流式细胞学方法(FCM)检测细胞凋亡情况.利用Western blot方法检测细胞周期相关蛋白Rb蛋白和凋亡相关蛋白多聚ADP核糖聚合酶(PARP)降解片段的表达.结果 TSA作用后的NIH3T3细胞,生长变得缓慢,但细胞尚保持生长的活性.MCF-7细胞24、48 h的凋亡率分别为(36.4±1.5)%、(67.0±2.8)%,以48 h最明显.TSA作用24、48、72 h后,两种细胞均出现不同程度的磷酸化Rb蛋白水平下降,MCF-7细胞中PARP发生明显的降解,48 h后降解明显,72 h达到最大程度.结论 TSA可诱导MCF-7细胞凋亡,其机制可能通过改变肿瘤细胞校染色质的空间结构,以及阻滞细胞周期实现的.     

尼美舒利对二甲基苯并蒽诱导的乳腺癌的影响及机制的实验研究

目的探讨选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利(NIM)对二甲基苯并蒽(DMBA)诱导的大鼠乳腺癌的影响及其作用机制。方法将76只大鼠随机分为致癌组(30只)、NIM组(30只)、饮食对照组(8只)及NIM药物对照组(8只),观察乳腺肿瘤诱发率。通过逆转录聚合酶链反应方法、蛋白印迹法测定每组肿瘤组织中COX-2mRNA含量及其蛋白表达水平;放射免疫法测定各组大鼠血浆、肿瘤组织中前列腺素E2(PGE2)含量;TUNEL法、增殖细胞核抗原分别检测凋亡和增殖指数。结果NIM组(40.3%)大鼠乳腺肿瘤发生率明显低于致癌组(69.2%);NIM组COX-2mRNA、蛋白水平较致癌组明显下调[A值:(0.21±0.05)vs.(0.46±0.12),P<0.05;(30.26±8.75)vs.(58.13±10.02),P<0.05],血浆、肿瘤组织中PGE2的含量显著降低[(233±59)pg/mlvs.(452±82)pg/ml,P<0.01;(167±42)pg/mg蛋白vs.(250±67)pg/mg蛋白,P<0.05];NIM组肿瘤细胞的增殖指数与致癌组相比下降[(20±5)vs.(36±5),P<0.01],凋亡指数明显增高[(43±13)vs.(18±7),P<0.01],差异有统计学意义。结论NIM通过下调COX-2的表达,抑制前列腺素的合成,抑制肿瘤细胞的增殖、诱导凋亡,降低DMBA诱发大鼠乳腺癌的发生率。     

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目的　研究直肠癌病人术前直肠粘膜下植入 5 -FU缓释剂后 ,癌组织病理形态学、癌细胞凋亡和增殖的变化。方法　对 2 5例直肠癌拟手术者采用配对设计分为两组 :Ⅰ组 (n =13)为植药组 ,每例术前直肠粘膜下植入 5 -FU缓释剂 5 0 0mg。Ⅱ组 (n =12 )为非植药组 ,采用常规术前准备。两组病人均在术前 (植药前 )及术后立即取肿瘤组织。观察癌组织病理形态和识别凋亡癌细胞、增殖细胞核抗原表达的变化。数据采用SPSS10 1软件进行统计学处理。结果　Ⅰ组中癌组织出现化疗效应的病理形态学改变 ;癌细胞凋亡指数 (AI)化疗后(3 6 2 3± 1 2 35 )较化疗前 (1 2 0 0± 0 398)明显增加 ,P <0 0 5 ;癌细胞的增殖指数 (PI)化疗后 (46 6 2± 7 2 2 )较化疗前 (5 6 85± 6 4 8)明显降低 ,P <0 0 1。而Ⅱ组手术前后病理形态学无变化 ,癌细胞AI、PI无明显改变。全组未发现毒副作用。结论　直肠粘膜下植入 5 -FU缓释剂是直肠癌术前区域性化疗的最佳途径之一 ,可望提高直肠癌根治术后的疗效     

YAP 基因干扰对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨干扰YAP基因的表达对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。 方法：通过逆转录病毒介导的方法,分别用YAP shRNA（实验组）或阴性对照shRNA（对照组）转染MCF-7乳腺癌细胞,用qRT-PCR和Western blot方法检测干扰效率;溴脱氧核苷尿嘧啶（BrdU）结合实验和MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术和DAPI染色检测细胞凋亡情况。 结果：干扰效率检测显示,转染72 h后,实验组MCF-7细胞YAP mRNA表达量明显降低（P<0.05）,同时YAP蛋白表达也明显下调;细胞增殖检测显示,与对照组比较,实验组MCF-7细胞BrdU结合与OD值明显降低（P<0.05）,转染后24、48、72 h增殖抑制率分别为19.1%、38.5%、53.5%;凋亡检测显示,实验组细胞凋亡率与凋亡细胞数较对照组明显增加（均P<0.05）。 结论：干扰YAP基因的表达能有效抑制乳腺癌细胞的增殖并促进凋亡,YAP可能是乳腺癌潜在治疗靶点。     

术前化疗诱导乳腺癌生理凋亡的研究

目的探讨化疗对乳腺癌生理调亡的诱导机制。方法以初发乳腺癌患者为研究对象，24名患者分为2组。化疗组技与5-氟脱氧尿嘧啶（5－DFUR）800mg／天，连续14天，共14例，非化疗组10例，利用末端标记法来检测两组手术前后生理凋亡情况。结果发现经化疗后乳腺癌的生理调亡增加，同化疗前比较有统计学意义（P＜0.05）。结论化学药物可以诱导乳腺癌的生理凋亡，并且对肿瘤治疗的途径做了进一步探讨。