Fas表达水平与抗Fas治疗生物学效应的关系

目的　研究细胞表面Ｆａｓ 表达水平与抗Ｆａｓ 治疗生物学效应之间的关系。　方法　将低表达Ｆａｓ 的膀胱癌细胞系ＥＪ细胞通过脂质体介导的方法转染Ｆａｓ 基因,并用流式细胞直接免疫荧光术检测Ｆａｓ 的表达;采用鼠抗人Ｆａｓ 单克隆抗体ＤＸ２ ＩｇＧ１κ诱导转染Ｆａｓ 基因的和未转染Ｆａｓ 的ＥＪ细胞的细胞凋亡作用,并用碘化丙啶染色流式细胞术检测。　结果　转染Ｆａｓ 基因后的ＥＪ细胞Ｆａｓ分子表达明显增加,Ｆａｓ 分子表达率从２６ ．１１ ％ 增加到６８．６９％ ;鼠抗人Ｆａｓ 单克隆抗体ＤＸ２ ＩｇＧ１κ诱导的转Ｆａｓ 基因的ＥＪ细胞凋亡数明显增多,达６６ ．３％ ,而未转基因的ＥＪ细胞凋亡较少,仅７ ．４％ 。　结论　人类恶性肿瘤细胞系对Ｆａｓ 抗体触发凋亡信号的敏感性主要依赖于细胞表面Ｆａｓ 的表达水平。     

野生型P16例基因导入对膀胱癌细胞生长抑制和H—ras基因表达 …

目的 观察野生型Ｐ１６基因对膀胱肿瘤细胞恶性表型及Ｈ－ｒａｓ基因表达的影响。方法 构建Ｐ１６基因逆转录病毒表达载体，转染膀胱肿瘤细胞系ＥＪ；应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交交检测外源Ｐ１６基因及Ｈ－ｒａｓ基因表达；流式细胞仪检测细胞周期；双层软琼脂培养检测细胞在体外形成克隆能力。结果 转染Ｐ１６基因后，肿瘤细胞生长速率降低，体外形成克隆的能力下降，细胞被抑制在Ｇ０＋Ｇ１期，细胞内Ｈ－ｒａｓ ｍＲＮＡ表达低     

抑癌基因P16与癌基因P21在膀胱肿瘤中的表达及意义

目的：探讨癌基因Ｐ２１和抑癌基因Ｐ１６的表达与膀胱癌生物学行为之间的关系。方法：采用免疫组织化学Ｓ－Ｐ法对４０例膀胱移行细胞癌癌基因Ｐ２１和抑癌基因Ｐ１６进行检测。结果：Ｐ２１和Ｐ１６阳性表达率为６７．５％和５２．５％;Ｐ２１阳性表达率与膀胱移行细胞癌的病理分级和临床分期呈正相关,而Ｐ１６阳性表达率与膀胱移行细胞癌的病理分级和临床分期呈负相关。结论：Ｐ２１、Ｐ１６基因蛋白的表达与膀胱肿瘤组织病理分     

RNA激活上调PTEN基因表达对膀胱癌细胞增殖和凋亡影响的研究

目的 探讨通过RNA激活(RNAa)技术上调PTEN基因的表达对人膀胱癌BIU-87细胞增殖和凋亡的影响。方法 设计靶向抑癌基因PTEN启动子DNA序列互补的双链RNA分子(ds PTEN),转染入BIU-87细胞中,采用RT-PCR法及Western Blot检测PTEN基因m RNA及蛋白质的表达变化,MTT法检测BIU-87细胞增殖速度,流式细胞仪检测PTEN细胞凋亡率。结果 ds PTEN转染BIU-87细胞后能显著上调PTEN基因的m RNA和蛋白的表达,与空白对照组、阴性对照组相比,经ds PTEN作用的BIU-87膀胱癌细胞增殖受到明显抑制,凋亡率较对照组明显升高(P<0.05)。结论RNAa技术能有效激活PTEN基因,使其表达上调并抑制膀胱癌BIU-87细胞增殖,诱导细胞凋亡,为膀胱癌的基因治疗提供了新的依据和方法。     

膀胱癌与P16基因缺失关系的探讨

探讨膀胱癌的发生与Ｐ１６基因缺失的关系。方法：采用双重ＰＣＲ法对３１例膀胱癌组织中Ｐ１６基因进行检测。结果：３１例膀胱癌组织中有７例存在Ｐ１６基因缺失,缺失率为２２．６％。结论：Ｐ１６基因缺失与某些膀胱癌的发生存在一定的联系。     

膀胱肿瘤抗药机制的实验研究

应用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导的基因转移技术，将人ＭＤＲ１－ｃＤＮＡ导入ＥＪ膀胱癌细胞，经６０、１２０和２４０μｇ／Ｌ秋水仙素的逐级筛选，挑出两个耐药的克隆细胞系，分别培养在２４０μｇ／Ｌ或４８０μｇ／Ｌ秋水仙素的培养基中，命名为ＥＪ－Ｒ２４０或ＥＪ－Ｒ４８０。对照组ＥＪ膀胱癌细胞在６０μｇ／Ｌ秋水仙素的培养基中不能生存。Ｓｏｕｔｈｅｎ、ＲＮＡ斑点杂交分析和免疫组化分析显示，人ＭＤＲ＿１－ｃＤＮＡ已整合在转染细胞的基因组中，并有相应的ｍＲＮＡ和蛋白产物Ｐ－糖蛋白的表达。药敏试验结果显示ＥＪ－Ｒ２４０和ＥＪ－Ｒ４８０对秋水仙素的耐受性分别是对照组的７３．６和８４．２倍。资料表明，ＭＤＲ＿１基因及其产物Ｐ－糖蛋白的过度表达可赋予转染细胞的抗药表型。因此，本研究不仅从基因水平上证实ＭＤＲ＿１基因及Ｐ－糖蛋白的异常表达可能是膀胱癌耐药性产生的一个重要途径或机制，同时也为研究ＭＤＲ＿１基因介导的多项耐药以及寻找有效的逆转途径提供了一个理想的实验模型。     

野生型P53和C-Ha-ras基因在顺铂诱导膀胱癌细胞凋亡中的表达及意义

应用荧光原位杂交技术观察顺铂诱导膀胱癌细胞株ＢＩＵ８７体外细胞凋亡过程中野生型Ｐ５３和ＣＨａｒａｓ基因的表达，探讨抗癌药物诱导膀胱癌细胞凋亡过程中抗癌基因和癌基因的作用。结果显示：顺铂能够明显地诱导膀胱癌细胞凋亡，具有一定范围内的作用时间和药物浓度的依赖性。随凋亡细胞数上升，野生型Ｐ５３表达增强，而ＣＨａｒａｓ基因表达下降，提示膀胱癌细胞凋亡可能是顺铂的杀瘤效应途径之一。Ｐ５３和ＣＨａｒａｓ基因均参与了细胞凋亡的调控过程，野生型Ｐ５３基因可能是通过下调ＣＨａｒａｓ基因的表达而发挥其抑制细胞增殖活性，促进凋亡的发生。     

Adp27KIP1基因的过度表达对人膀胱癌细胞系EJ的抑制作用

目的　探讨ｐ２７ＫＩＰ１ 的过度表达对人膀胱癌细胞系ＥＪ的影响。　方法　构建含人ｐ２７ＫＩＰ１ 基因的重组缺陷腺病毒,并感染ＥＪ细胞,７２ 小时后检测ｐ２７ＫＩＰ１ 蛋白的表达、生长曲线、克隆形成率和细胞周期分布。　结果　转基因后,ＥＪ细胞过度表达ｐ２７ＫＩＰ１ 蛋白,增殖明显受阻,细胞停滞于Ｇ１ 期。　结论　ｐ２７ＫＩＰ１ 的过度表达可明显抑制ＥＪ细胞的增殖,提示ｐ２７ＫＩＰ１ 基因在人膀胱癌的发生中起重要作用,用重组腺病毒转ｐ２７ＫＩＰ１ 基因可成为潜在的膀胱癌治疗方法。     

转人白细胞介素2基因人膀胱癌细胞株的建立及体外生物学特性

探讨转基因膀胱癌瘤苗的可行性。采用逆转录病毒载体Ｚｉｐ／ｈＩＬ－２将ｈＩＬ－２基因导入人膀胱癌细胞系ＥＪ细胞中，在体外建立了具有分泌ｈＩＬ－２活性的细胞株ＥＪ／ＩＬ－２。经ＰＣＲ－ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ检测证实ｈＩＬ－２基因已整合到ＥＪ／ＩＬ－２基因组中。流式细胞仪行细胞ＤＮＡ周期分析表明ｈＩＬ－２基因的导入及表达对ＥＪ细胞的增殖无影响。免疫荧光检测发现ｈＩＬ－２基因的导入及表达不能促进ＥＪ细胞表面ＨＬＡ抗原的表达。放射线灭活后ＥＪ／ＩＬ－２细胞丧失增殖能力，但仍能维持一定水平的ｈＩＬ－２分泌活性达２周左右。从而为制备灭活的转基因瘤苗提供了初步经验。     

膀胱癌中bcl-2和p16基因的表达与预后的关系

目的 探讨ｂｃｌ－２和Ｐ１６基因蛋白在膀胱癌的表达与预后的关系。方法 采用ＳＡＢＣ法对５１例膀胱癌组织和５例正常膀胱粘膜行ｂｃｌ－２和Ｐ１６基因表达的检测。结果 ｂｃｌ－２在膀胱癌的阳性表达率为８０．２％,生存组和死亡组之间比较差异有显著性意义。Ｐ１６在膀胱癌在阳生表达率为５０．９％。５例正常膀胱粘膜均阳性,两者比较有显著性意义。在病理分级、临床分期和预后的总样本率中比较差异有显著性意义;即随病理     

Introduction of wild-type p53 gene downregulates the expression of H-ras gene and suppresses the growth of bladder cancer cells

Retroviral vectors were used to introduce the wild-type p53 gene into human bladder cancer cell lines BIU-87 and EJ, which express endogenous wt-p53 gene and have a mutation in H-ras gene. The expression of the exogenous wt-p53 gene in cells suppresses the growth of the bladder cancer cells in standard culture and in soft agar and blocks the cell cycle progression in G1. The BIU-87 and EJ cells developed tumors with average volumes of 6.53 cm³ and 6.61 cm³ in nude mice in 9 weeks after inoculation, while the cells transduced with wt-p53 gene failed to form tumors. The expression of H-ras gene in bladder cancer cells was reduced at mRNA level. These results suggest that the overexpression of the wt-p53 gene suppresses the expression of mutant H-ras gene and inhibits the tumor cell growth in vivo and in vitro.     

p16重组腺病毒联合顺铂或三氧化二砷对人膀胱癌EJ细胞作用的实验研究

目的　探讨 p16重组腺病毒 (Ad p16 )与顺铂 (CDDP)或三氧化二砷 (As2 O3 )联合应用对人膀胱癌EJ细胞体内外生长的抑制效应及机制。　方法　将Ad p16与CDDP或As2 O3 联合应用 ,通过细胞生长抑制实验 ,克隆形成实验 ,细胞周期分析 ,免疫组织化学分析 ,以及裸鼠皮下移植瘤模型 ,观察其对人膀胱癌EJ细胞的作用及机制。　结果　与单独应用相比 ,Ad p16与低剂量的CDDP或As2 O3 联合应用可明显抑制EJ细胞的体外生长 ,诱导EJ细胞凋亡 ,明显阻滞EJ细胞G1期 ;裸鼠体内肿瘤发生时间延迟 ,4周后肿瘤体积与单独应用时相比差别有显著性意义 (P <0 .0 5 )。　结论　Ad p16与CDDP或As2 O3 联合应用 ,有可能进一步提高膀胱癌的治疗效果     

外源性p16基因对食管癌患者癌细胞系的生长抑制作用

目的 观察外源性p16基因质粒导入食管癌患者食管鳞癌细胞系Ec109后的表达及其对Ec109细胞增殖生长状况的影响。方法 根据转染质粒的不同或是否行p16 cDNA质粒转染分为三组,每组分别为5个样本。PcDNA3-P16转染组（P16转染组）：采用脂质体（Lipofectamine）为载体,将PcDNA3-P16表达质粒寻入Ec109细胞;空载体转染组：用PcDNA－3－neo空载体以上述相同方法转染,作空白对照;未转染组：未用PcDNA3－P16质粒转染,作阴性对照。应用Northern斑点杂交、免疫组织化学、免疫荧光检测转化细胞的P16蛋白变化;流式细胞仪分析细胞周期变化,DNA片段化电泳检测细胞凋亡。结果 P16转染组外源性p16基因在Ec109细胞中表达后,细胞生长速度减慢,克隆形成能力下降,瞬时表达时有细胞凋亡发生,稳定表达后细胞存在G1期阻滞;空载体转染组和未转染组均未观察到以上结果。结论 脂质体介导的外源性p16基因转染对Ec109细胞有生长抑制作用,p16基因瞬时表达可诱导细胞凋亡。     

雄激素和雌激素受体与食管癌的关系

目的 通过测定食管癌组织中雄激素受体（AR）和雌激素受体（ER）的含量,探讨食管癌生物学行为与AR和ER的关系。方法 应用放射配体结合分析法定量测定31例食管癌患者癌组织中AR和ER的含量,并与正常食管黏膜组织作对照。结果 与正常食管组织比较,食管癌组织中存在较多的AR和ER,其含量与患者性别、分化程度、浸润程度、有无淋巴结转移有关（P＜0．05）,而与患者年龄、肿瘤的部位无明显关系（P＞0．05）。结论 AR和ER含量与食管癌生物学行为关系密切,可能为食管癌的防治提供新的方法,并作为评价食管癌患者预后的新指标。     

反义增殖细胞核抗原cDNA对人膀胱癌裸鼠异体移植瘤生长的抑制作用

目的　探讨增殖细胞核抗原 (PCNA)反义cDNA对人膀胱癌裸鼠移植瘤模型生长的影响。　方法　脂质体介导反义PCNA真核表达载体转染人膀胱癌EJ细胞后 ,接种到裸鼠皮下组织 ,观察体内致瘤及生长情况 ;免疫组化检测瘤体PCNA蛋白表达 ,RT PCR分析瘤体PCNA、wt p5 3、c myc基因mRNA水平 ;并进行瘤体病理学评估。 　结果　反义PCNAcDNA导入后 ,EJ细胞体内致瘤活性降低 ,同对照组比较瘤体体积缩小 5 4 .2 3% (P <0 .0 5 ) ,重量减轻 4 2 .5 4 % (P <0 .0 1) ,瘤组织PCNA蛋白及mRNA水平分别减少 6 1.6 2 % (P <0 .0 1)和 72 .13% (P <0 .0 1) ,c myc基因表达下调4 7.34% (P <0 .0 1) ,wt p5 3表达活性无显著性改变 (P >0 .0 5 ) ,瘤体病理学特征改善。 　结论　转导反义PCNAcDNA能有效逆转肿瘤的恶性表型 ,是膀胱癌基因治疗的合理策略之一     

稳定高表达Uroplakin Ⅱ基因人膀胱癌细胞株的建立及其意义

目的　建立稳定高表达UroplakinII(UPII)基因的人膀胱癌细胞株。方法　采用分子克隆技术构建含全长UPII结构基因的真核表达载体 ,进行酶切鉴定、核酸序列分析 ,并将其在阳离子脂质体Lipofectamine 2 0 0 0的介导下转染UPII基因缺陷型膀胱移行细胞癌 (TCC)细胞株EJ ,经G418筛选获得抗性亚克隆细胞株 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、Westernblotting方法对亚克隆细胞株进行UPII基因表达鉴定。结果　所获UPII基因真核表达载体pcDNA3 UPII转染EJ细胞后 ,通过G418持续压力筛选 4周获得亚克隆细胞株EJ/UPII ;RT PCR、Westernblotting均未检测到EJ细胞的UPII基因表达 ,而EJ/UPII细胞中UPIImRNA和蛋白表达水平显著增高 (P <0 .0 1)。结论　通过基因转染方法建立了稳定高表达UPII基因的膀胱TCC细胞株 ,为进一步探讨UPII基因在膀胱TCC生物学行为中的作用及其靶向生物治疗策略奠定了基础。     

p16基因转染对人胰腺癌细胞系生长抑制作用的研究

目的　探讨p16基因对人胰腺癌细胞系JF30 5的生长抑制作用。　方法　用脂质体介导法将外源野生型p16基因转染不表达p16的人胰腺癌细胞系JF30 5 ,对转染后细胞DNA、RNA和蛋白进行分析并观察其生物学特性变化。　结果　外源野生型p16基因已整合入细胞并获稳定表达 ,表达有外源p16基因的细胞生长速度及集落形成率均有部分抑制。细胞周期分析可见G1期增加 ,S期下降。电镜观察超微结构出现生长抑制特征。　结论　p16基因可作为胰腺癌基因治疗目的基因之一。     

p53重组腺病毒联合顺铂或三氧化二砷对人膀胱癌EJ细胞的作用

目的：探讨p53重组腺病毒（Ad-p53）与顺铂（CDDP）或三氧化二砷（As2O3）联合应用提高膀胱癌疗效的可能性及其机制。方法：将Ad-p53[100感染强度（MOI）]与CDDP（0．5mg/L)或As2O3(2.0μmol/L）联合应用，通过细胞生长抑制实验、克隆形成实验、细胞周期分析、免疫组织化学分析以及裸鼠皮下移植瘤模型，观察其对膀胱癌EJ细胞的作用及机制。结果：与单独应用相比，Ad-p53与低剂量的CDDP或As2O3联合可明显抑制EJ细胞体外生长，诱导EJ细胞凋亡，EJ细胞G2／M期阻滞更明显；裸鼠体内肿瘤发生时间延迟，4周后肿瘤体积与单独应用时相比，差异有显著性（P＜0．05）。结论：基因治疗与化疗联合应用，可进一步提高膀胱癌的疗效。     

靶向沉默Notch1基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨沉默Notch1基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响. 方法 将靶向Notch1的siRNA真核表达载体psiRNA Notch1-1转染膀胱癌细胞株T24和BIU-87,噻唑盐法、流式细胞术检测沉默Notch1后膀胱癌细胞生长、细胞周期和凋亡情况.RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后Notch1基因mRNA和蛋白表达的变化. 结果 转染后72 h,T24和BIU-87细胞G0/G1期细胞比例明显增加,分别为(80.13±2.69)%和(69.44±2.41)%,与T24对照组(23.89±1.32)%和BIU-87对照组(24.63±1.68)%比较差异有统计学意义(P值均<0.05).转染后72 h,T24和BIU-87细胞凋亡率分别为(13.75±1.23)%和(8.72±1.01)%,与T24对照组(1.28±0.14)%和BIU-87对照组(1.01±0.27)%比较差异均有统计学意义(P值均<0.05).转染后24 h细胞生长明显受到抑制,该抑制作用持续到转染后96 h.转染后72 h,T24和BIU-87细胞中Notch1基因mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05). 结论 Notch1在膀胱癌细胞株中可能起致癌作用.沉默Notch1基因能够抑制膀胱癌细胞的增殖.     

热疗联合特异性沉默趋化因子受体4对骨肉瘤增殖和侵袭的影响

目的观察热疗联合特异性siRNA沉默趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)对骨肉瘤增殖和侵袭的影响。方法培养人骨肉瘤细胞株MG 63至对数生长期,接种于6孔板中,分为三组,空白组细胞不进行任何处理常规培养,control siRNA组以control siRNA转染细胞,CXCR4 siRNA组以CXCR4 siRNA转染细胞,采用Western blot检测各组CXCR4的表达变化,评估CXCR4 siRNA转染效能。细胞及体内实验设置control siRNA组(对照组)、热疗联合CXCR4 siRNA组(联合组)、CXCR4 siRNA组(沉默组)和热疗组,以CXCR4 siRNA转染沉默组和联合组的细胞,control siRNA转染对照组细胞,热疗组和联合组进行热疗处理。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT qPCR)和Western blot检测各组细胞CXCR4的表达变化。CCK 8法和Transwell侵袭实验检测转染后MG 63细胞的增殖能力和侵袭能力变化。流式细胞技术检测转染后MG 63细胞的周期变化。体外裸鼠成瘤实验和肿瘤生长曲线观察转染后MG 63细胞增殖和裸鼠骨肉瘤生长情况。结果CXCR4 siRNA可以有效沉默MG 63细胞中CXCR4蛋白的表达。热疗联合CXCR4 siRNA有效沉默MG 63细胞中CXCR4的表达并能抑制MG 63细胞增殖和侵袭,阻滞细胞周期于G0/G1期(P均<0.05)。体内实验结果显示,从第14天起,联合组裸鼠骨肉瘤体积逐渐小于对照组、沉默组和热疗组,差异有统计学意义(P均<0.05)。联合组的瘤重也低于对照组、沉默组和热疗组,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论热疗联合特异性沉默CXCR4抑制骨肉瘤的增殖和侵袭,可作为一个有效的骨肉瘤基因治疗新方法。