腺病毒介导的p16基因转染对膀胱癌细胞生长影响的研究

目的　探讨复制缺陷型腺病毒介导的 p16基因转染对人膀胱癌细胞生长的影响。 　方法　将 p16重组腺病毒 (Ad p16 )感染p16蛋白表达阴性的人膀胱移行细胞癌T2 4细胞株 ,Ad LacZ、X gal染色法检测重组腺病毒的转染效率 ;Westernblot法检测 p16蛋白的表达 ;MTT法及流式细胞术评估Ad p16对T2 4细胞增殖的影响。　结果　在感染复数 (MOI)为 5 0时 ,重组腺病毒对T2 4细胞的转染率达 97% ;此Ad p16在T2 4细胞中可获高效表达 ;与转染Ad LacZ组及未转染组相比 ,转染Ad p16组T2 4细胞生长受到明显抑制 (P <0 .0 5 ) ,细胞周期分析表明生长抑制主要发生在G1 S节点。　结论　腺病毒载体可有效地将外源 p16基因导入T2 4细胞 ;p16基因重组腺病毒载体转染能抑制T2 4细胞的生长。     

外源性p16基因对食管癌患者癌细胞系的生长抑制作用

目的 观察外源性p16基因质粒导入食管癌患者食管鳞癌细胞系Ec109后的表达及其对Ec109细胞增殖生长状况的影响。方法 根据转染质粒的不同或是否行p16 cDNA质粒转染分为三组,每组分别为5个样本。PcDNA3-P16转染组（P16转染组）：采用脂质体（Lipofectamine）为载体,将PcDNA3-P16表达质粒寻入Ec109细胞;空载体转染组：用PcDNA－3－neo空载体以上述相同方法转染,作空白对照;未转染组：未用PcDNA3－P16质粒转染,作阴性对照。应用Northern斑点杂交、免疫组织化学、免疫荧光检测转化细胞的P16蛋白变化;流式细胞仪分析细胞周期变化,DNA片段化电泳检测细胞凋亡。结果 P16转染组外源性p16基因在Ec109细胞中表达后,细胞生长速度减慢,克隆形成能力下降,瞬时表达时有细胞凋亡发生,稳定表达后细胞存在G1期阻滞;空载体转染组和未转染组均未观察到以上结果。结论 脂质体介导的外源性p16基因转染对Ec109细胞有生长抑制作用,p16基因瞬时表达可诱导细胞凋亡。     

p16基因和地塞米松对人胶质瘤细胞的影响

ｐ16基因是一个多种肿瘤抑制基因 ,也是细胞周期蛋白依赖性激酶 (ＣＤＫ ) 4的抑制因子 ,它参与细胞周期的调控 ,并在人类多种肿瘤中有缺失和突变。在胶质瘤中仅纯合缺失就高达 90 % [1] 。为了研究外源性ｐ16基因对胶质瘤的影响 ,我们采用聚合酶链反应 (ＰＣＲ )、逆转录 ＰＣＲ(ＲＴ ＰＣＲ)和免疫组织化学方法确定了人脑胶质瘤细胞系ＳＨＧ 44 ｐ16基因缺失并将人 ｐ16基因ｃＤＮＡ哺乳动物细胞表达载体转染ＳＨＧ 44 ,观察外源性ｐ16基因对胶质瘤细胞的作用 ,探讨地塞米松对转染 ｐ16基因肿瘤细胞有无更为明显的促分化作用。一、材料和…     

乳腺癌细胞p16基因的研究

目的 探讨Ｐ１６基因在乳腺癌中的突变形式和频率以及有效的检测手段。方法 采用细胞２,反复贴壁法纯化人乳腺癌细胞、经多聚酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析技术。对１４例纯化乳腺癌细胞标本,１４例新鲜未纯化标本和２７例石蜡包埋标本及相应的癌旁乳腺组织标本的这６基因突变进行了对比性研究。结果 纯化的癌细胞组Ｐ１６基因突变率为４２．９％,而新鲜未纯化细胞组、石蜡包埋细胞组及癌旁乳腺细胞组的Ｐ     

腺病毒介导p16基因转染对胃癌细胞作用的研究

目的　观察以腺病毒为载体介导 p16基因转染对胃癌细胞 (MGC80 3)生长的影响。方法　重组腺病毒Ad p16感染胃癌细胞 ,观察胃癌细胞生长情况 ;用Ad p16感染胃癌细胞接种于大鼠体内 ,Ad lacZ为对照组 ,每组大鼠 10只 ,观察大鼠接种的阳性率 ;用重组腺病毒Ad p16作用于胃癌大鼠模型 ,Ad lacZ为对照组 ,每组大鼠 10只 ,观察大鼠肿瘤的生长情况。结果　p16可以抑制胃癌细胞生长 ,促进胃癌细胞的凋亡 ,经Ad p16感染的胃癌细胞肿瘤发生率明显下降 (由 90 %降至 2 0 % )。腺病毒介导 p16基因作用胃癌大鼠模型 2周后肿瘤的重量 ( 2 .2 1± 0 .2 6 )g明显低于对照组 ( 5 .6 4± 0 .5 3)g ,差异有显著性 (P <0 .0 0 1)。应用免疫组织化学检查可见肿块有明显的淋巴细胞侵润。结论　腺病毒介导 p16基因对胃癌细胞有明显的抑制作用。     

原发性膀胱移行细胞癌p16基因缺失突变的研究

目的 探讨ｐ１６基因的原发性膀胱移行细胞癌中的改变。方法 应用多聚酶链（ＰＣＲ）和多聚酶链－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法对３８例膀胱移行细胞癌标本ｐ１６基因的缺失、突变进行分析。结果 原发性膀胱移行细胞癌ｐ１６基因缺失率为１８．４２％，未观察到突变。缺失、突变率明显低于培养的膀胱癌细胞系。结论 肿瘤细胞自原体转入培养环境的适应阶段ｐ１６基因缺失或突变可能有助于肿瘤细胞的增殖，在膀胱肿瘤细胞传代中起有重要作用。     

外源性野生型p53对人膀胱移行细胞癌的生物学影响

目的　探讨膀胱肿瘤的基因治疗途径。方法　利用Lipofectamine将外源性野生型p53基因导入人膀胱移行细胞癌TBC 1细胞中 ,并得到表达 ,检测多项生物学指标。结果　被转染的细胞在体外标准条件下 ,生长抑制率为 56 .52 % ;细胞周期分析显示G0 +G1 细胞比例由 38.60 %增高到 52 .60 % ,凋亡指数 1 0 .1 6 %升高到 47.2 8% (P <0 .0 1 ) ;细胞生长速度减低 ;代表细胞增殖能力AgNORs计数从 6 .1 9下降为 4 .33(P <0 .0 1 ) ;对丝裂霉素和阿霉素的敏感性提高。结论　增加膀胱肿瘤细胞内野生型 p53的基因表达能抑制恶性肿瘤细胞的生长 ,提高肿瘤细胞对化疗药的敏感性。     

p16基因转染对膀胱癌细胞系BIU-87体外生长的抑制作用

为探讨ｐ16基因在膀胱癌发生、发展过程中的作用及其在膀胱癌基因治疗中的应用前景 ,我们将野生型ｐ16基因导入缺失 ｐ16基因的ＢＩＵ 87细胞中 ,观察 ｐ16基因的肿瘤抑制功能。一、材料与方法1.ｐ16基因重组表达载体的构建与鉴定 :质粒 ｐＧＲＥ5 1含全长 0 .96ｋｂ的人 ｐ16ｃＤＮＡ基因片段 ,用ＥｃｏＲＩ和ＸｈｏＩ双酶切 ｐＧＲＥ5 1分离出ｐ16ｃＤＮＡ基因片段 ,将其插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ3( 5 .4ｋｂ)的ＥｃｏＲＩ/ＸｈｏＩ酶切位点间 ,构建成重组质粒 ,命名为 ｐｃＤＮＡ3 ｐ16,酶切、电泳鉴定。2 .ｐ16基因转染ＢＩＵ 87细…     

野生型P16例基因导入对膀胱癌细胞生长抑制和H—ras基因表达 …

目的 观察野生型Ｐ１６基因对膀胱肿瘤细胞恶性表型及Ｈ－ｒａｓ基因表达的影响。方法 构建Ｐ１６基因逆转录病毒表达载体，转染膀胱肿瘤细胞系ＥＪ；应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交交检测外源Ｐ１６基因及Ｈ－ｒａｓ基因表达；流式细胞仪检测细胞周期；双层软琼脂培养检测细胞在体外形成克隆能力。结果 转染Ｐ１６基因后，肿瘤细胞生长速率降低，体外形成克隆的能力下降，细胞被抑制在Ｇ０＋Ｇ１期，细胞内Ｈ－ｒａｓ ｍＲＮＡ表达低     

野生型p53基因导入对膀胱癌细胞生长抑制和H－ras基因表达调控

通过逆转录病毒载体将外源野生型ｐ５３基因导入膀胱癌细胞ＢＩＵ－８７和ＥＪ，使细胞在体外标准培养条件下生长速率降低，丧失裸鼠致瘤性。细胞周期分析显示Ｇ０＋Ｇ１细胞比率明显增高，已证明，ＢＩＵ－８７和ＥＪ细胞都有ｒａｓ基因突变和表达扩增。进一步研究发现，转染的细胞内Ｈ－ｒａｓｍＲＮＡ表达低于非转染细胞。结果提示，增加细胞内野生型ｐ５３基因表达量能抑制突变的ｒａｓ基因表达，从而抑制膀胱癌细胞的恶性增殖。     

逆转录病毒载体介导的HyTK基因在人膀胱癌细胞株EJ中的表达

为探索ＨＳＶ１ＴＫ基因对人膀胱癌的治疗作用，作者用一种与潮霉素磷酸转移酶（ｈｐｔ）基因相融和的Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶ１ＴＫ）基因（简称ＨｙＴＫ基因）作目的基因，用逆转录病毒载体将ＨｙＴＫ基因导入人膀胱癌细胞株ＥＪ细胞中表达。含ＨｙＴＫ基因的逆转录病毒载体ＬＨｙＴＫＮ，经包装细胞ＰＡ３１７包装后，获得重组逆转录病毒；病毒感染人膀胱癌细胞株ＥＪ细胞，经潮霉素Ｂ筛选培养，获得潮霉素Ｂ的抗性克隆；ＰＣＲ扩增证实：病毒感染的ＥＪ细胞中导入了ＨＳＶ１ＴＫ基因，为开展ＨｙＴＫ基因治疗膀胱癌打下了基础。     

逆转录病毒载体介导的人IL－2基因在膀胱肿瘤细胞T_（24）中的表达

报道逆转录病毒载体介导的人白细胞介素－２（ＩＬ－２）ｃＤＮＡ在人源性膀胱肿瘤细胞Ｔ２４中的表述，ＩＬ－２ｃＤＮＡ插入到真核表达载体ｐＤＯＲ－ｎｅｏ中，构建成ＩＬ－２ｃＤＮＡ的表达载体ｐＤＯＲＩＬ－２，磷酸钙沉淀法将其导入Ｔ２４细胞中，经Ｇ４１８选择，转染阳性率约为２０％；原位杂交技术检测ＩＬ－２ｃＤＮＡ可转录ＩＬ－２ｍＲＮＡ，细胞培养上清中ＩＬ－２活性２４小时每１０５细胞为８～３４Ｕ／ｍ１。表明ＩＬ－２基因在Ｔ２４细胞中已表达，为研制膀胱肿瘤转基因瘤苗及开展膀胱肿瘤基因治疗打下了基础。     

逆转录病毒介导HyTK基因治疗膀胱癌的实验研究

目的 了解逆洋病毒介导的潮霉素磷酸转移酶和ＨＳＶ－ＴＫ的融合基因（ＨｙＴＫ）的基因转移移联合更昔洛韦（ＧＣＶ）对膀胱癌细胞的杀伤作用。方法 构建重组质粒ＰＬ（ＨｙＴＫ）ＳＮ,应用非脂质体基因转导系统ＦｕＧＥＮＥ＾ＴＭ６及“乒乓效应”（ｐｉｎｇ－ｐｏｎｇ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ）,获 滴度重组病毒并转染膀胱朱ＥＪ／ＨｙＴＫ的杀伤作用。结果 本文实验逆转录病毒的效率为３５％左右,Ｓｏｕｔｈｅｍ Ｂｌｏｔ、     

抑癌基因P16在膀胱肿瘤中的表达及意义

应用Ｓ－Ｏ５３例膀胱肿瘤中抑癌基因Ｐ１６进行了研究。结果显示：４９例膀胱移行细胞癌Ｐ１６表达的阳性率为４４．９０％，其阳性率在肿瘤的病理分级、临床分期及预后等方面差异有显著性。提示Ｐ１６在抑制膀胱肿瘤的发生、发展中起重要作用。     

体内基因转移建立多药耐药性人膀胱癌裸鼠荷瘤模型

目的 建立人膀胱癌多药耐药性裸鼠荷瘤模型。方法 应用逆转录病毒上清液裸鼠皮下移植瘤内及瘤周注射法转移ｍｄｒ１基因,腹腔注射化疗药物观察肿瘤模型的耐药性,免疫组化检测肿瘤细胞Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ＧＰ）的表达,ＲＴ－ＰＣＲ检测肿瘤内ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ的表达量。结果 携带ｍｄｒ１基因的逆转录病毒上清液注射后肿瘤模型产生多药耐药性,经过滤和离心浓缩的病毒上清液６０％细胞表达Ｐ－ＧＰ,是病毒原液基因转移率的２倍     

p16基因和p21基因表达异常与膀胱癌预后的Meta分析

目的探讨p16基因和p21基因表达异常对膀胱癌预后的影响.方法以“bladder carcinoma”或“bladder neoplasm”、“prognosis”、“p16”/“p21”和“膀胱癌”、“预后”等为检索词,检索Medline、PubMed、中国生物医学文献及中国学术期刊数据库有关p16基因和p21基因表达异常与膀胱癌预后的文献,应用Meta分析Dersimonian-Laird模型对这些文献进行综合定量评价.结果纳入Meta分析的19篇文献累计病例1584例,阳性率40.4%;其中p16基因表达异常12篇,累计病例975例,阳性率37.4%;p21基因异常表达7篇,累计病例609例,阳性率45.4%.p16基因表达异常、p21基因表达异常、p16基因和p21基因表达异常与膀胱癌预后的合并RH值分别为3.70（95%CI 3.42～3.99）、3.01（95%CI 2.81～3.21）和3.18（95%CI 3.01～3.35）.结论p16基因和p21基因表达异常是膀胱癌患者预后不良的生物标记物,有助于膀胱癌的治疗决策.     

膀胱癌中bcl-2和p16基因的表达与预后的关系

目的 探讨ｂｃｌ－２和Ｐ１６基因蛋白在膀胱癌的表达与预后的关系。方法 采用ＳＡＢＣ法对５１例膀胱癌组织和５例正常膀胱粘膜行ｂｃｌ－２和Ｐ１６基因表达的检测。结果 ｂｃｌ－２在膀胱癌的阳性表达率为８０．２％,生存组和死亡组之间比较差异有显著性意义。Ｐ１６在膀胱癌在阳生表达率为５０．９％。５例正常膀胱粘膜均阳性,两者比较有显著性意义。在病理分级、临床分期和预后的总样本率中比较差异有显著性意义;即随病理     

Ganciclovir对转导HyTK基因人膀胱癌EJ细胞DNA含量的影响

目的了解ＨｙＴＫ基因转移联合Ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（ＧＣＶ）对人膀胱癌细胞的杀伤作用。方法采用５７０型粘附式细胞激光定量分析筛选仪测定ＧＣＶ作用下人膀胱癌细胞株ＥＪ细胞、转导ＨｙＴＫ基因的ＥＪ细胞（ＥＪ／ＴＫ）ＤＮＡ含量的变化。结果实验组ＥＪ／ＴＫ细胞ＤＮＡ平均荧光值１５９２０８±１８０７０,明显低于对照组２０４７１７±２２８４１（Ｐ＜０００１）;而ＥＪ细胞ＤＮＡ平均荧光值实验组为２２４６０６±２３４．６６,对照组为２２３２９７±２５２．０８,两组间差异无显著性（Ｐ＞０５）。结论ＧＣＶ作用能明显降低转导ＨｙＴＫ基因ＥＪ细胞（ＥＪ／ＴＫ）的ＤＮＡ含量,提示ＨｙＴＫ基因转移联合ＧＣＶ对膀胱癌细胞有杀伤作用