寡核苷酸适配子在核医学中的应用

寡核苷酸适配子（aptamer，ataptable oligomer）是用指数富集配基的系统进化（SELEX）技术，通过体外筛选、扩增和富集获得能和小分子物质、多肽、蛋白质、细胞器、核酸及细胞和组织等靶物质高亲和、高特异结合的修饰寡核苷酸。适配子（aptamer）来源于拉丁语“aptus”一词，意为“使适合”。     

金纳米棒作为新型CT对比剂的体外CT成像探索

目的 探讨金纳米棒作为新型CT对比剂的体外CT成像参数。方法 采用金种子和生长液的方法制备金纳米棒。将聚乙二醇修饰的金纳米棒及非离子型碘对比剂（优维显370）分别制成8种浓度梯度（0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0 mg/mL）的溶液。将不同浓度的金纳米棒溶液在空气中及水浴中、不同管电压（80~140 kV）、不同毫安秒（50~400 mAs）等条件下进行体外CT扫描成像,观察其显影效果并测量不同浓度金纳米棒与碘对比剂的CT值。结果 ① 不同浓度的金纳米棒溶液,水中扫描的CT值最接近真实值,而空气中CT值偏低;②管电压越低,金纳米棒溶液的CT值越高,当溶液浓度为2.0 mg/mL时,不同管电压下的信噪比差异均较明显;③图像质量与毫安秒呈正相关,但当毫安秒≥300 mAs时,图像质量不再有显著变化。④当扫描参数为80 kV、300 mAs时,随着浓度的增加,金纳米棒与碘对比剂的CT值也升高,并呈高度正相关关系（r=0.990、0.994,均P < 0.05）,但二者的CT值差异越来越大,金纳米棒较碘对比剂有更高的对比度。结论 金纳米棒具有比现有CT对比剂更优的显影特征,体外CT在80 kV、300 mAs以及水浴扫描条件下有助于获得优良的显影图像。     

SELEX法筛选炭疽芽孢杆菌适配子的研究

目的：利用SELEX（system evolution of ligands by exponential enrichment)体外筛选,找能与炭疽芽孢杆菌芽孢特异结合的寡核苷酸适配子（aptamer),方法：体外合成长度为78个核苷酸的随机DNA库,通过SELEX技术,以炭疽牙直菌疫苗株A．16R的芽孢为靶标进行15轮的筛选,利用生物素－亲和素显色系统判断寡核苷酸与牙孢的结合活性,结果：随着筛选轮数的增加,PCR扩增电泳条带渐单纯,寡核苷酸与芽孢结合后显色,D值提高9倍以上,D值随适配子结合量的增加而递增,结论：已初步筛选到与炭疽芽孢具有亲和力的适配子。     

病理类型特异的卵巢癌组织适配子的鉴定

目的鉴定经组织切片消减SELEX筛选获得的4条候选适配子对不同类型卵巢癌组织的识别特性。方法公司合成、荧光素修饰候选适配子,利用免疫荧光实验对筛选获得的适配子候选序列进行鉴定。结果免疫荧光实验证明,适配子OC-10-19和OC-10-36能够特异识别卵巢浆液性乳头状囊腺癌,且OC-10-36还能够对早期的不典型增生进行识别,另2条适配子OC-10-10和OC-10-37仅识别个别的卵巢浆液性囊腺癌。结论成功筛选获得识别不同类型卵巢癌组织的特异适配子,为适配子用于不同病理类型标志物的鉴定、临床辅助诊断等提供了理论基础。     

不同尺寸、形貌金纳米粒子小鼠体内急性毒性研究

目的 考察不同尺寸、不同形貌的金纳米粒子的急性毒性.方法 采用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEC)对系列不同尺度、不同形貌的金纳米粒子进行修饰,通过测定zeta电位及表面等离子共振谱对修饰后纳米粒子的电性质及在生理盐水中的稳定性进行考察,最后将4种修饰后的金纳米材料通过腹腔注射入小鼠体内并在24h后进行血常规及急性时相反应蛋白检查.结果 PEG修饰后的金纳米颗粒能够在生理盐水环境中稳定存在.血常规结果表明,50 nm粒径的棒状金纳米粒子会引起白细胞数量的明显下降,50 nm粒径的球形金纳米粒子则引起血小板数量的减少,而粒径为10 nm及90nm的球形金纳米粒子组血常规指标无明显变化.而且,4种纳米粒子均不会引起小鼠体内急性时相反应蛋白的明显升高.结论 对于金纳米粒子来说,产生急性毒性与否似乎与其尺度之间并不存在所谓的线性依赖关系,而50 nm可能是生物体产生急性毒性的敏感尺度.     

集超声成像与光热治疗为一体的纳米级液态氟碳聚乳酸超声微囊的实验研究

目的以聚乳酸羟基乳酸(PLGA)为成膜材料,内载液态氟碳化合物(PFOB),外包裹金纳米壳层,构建金纳米壳液态氟碳聚乳酸纳米微囊,并进行其体外实验研究。方法运用单乳化水包油(O/W)溶剂挥发法制备包裹PFOB的纳米级PLGA粒子;以柠檬酸钠为还原剂,硼氢化钠为氧化剂制备金纳米粒子;使用静电吸附自组装法制备金纳米粒子聚乳酸微胶囊;最后采用表面原位引晶法制备金纳米壳聚乳酸微胶囊。结果金纳米粒子聚乳酸微胶囊粒子平均粒径为(268±80)nm,呈球形,分散性好;体外超声成像实验显示,金纳米壳聚乳酸微胶囊呈细腻均匀的点状密集高回声;细胞毒性试验显示材料无明显生物毒性,且体外溶液和细胞光热效果良好。结论成功制备集癌症成像与治疗为一体的金纳米壳液态氟碳聚乳酸微胶囊,具有良好的体外显像和光热治疗效果。     

金纳米棒联合125I粒子诱导肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

目的探讨叶酸偶联二氧化硅包覆的金纳米棒(GNRs@Si O2-FA)联合125I粒子诱导肝癌Hep G2细胞凋亡及其可能的机制,为临床提高肝癌125I粒子组织间植入疗效提供理论依据。方法将体外培养的肝癌Hep G2细胞随机分成空白对照组,单纯金纳米棒组,单纯125I粒子照射组及金纳米棒联合125I粒子照射组,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,PT-PCR检测bax m RNA、bcl-2 m RNA表达水平,免疫细胞化学检测凋亡相关基因bax、bcl-2表达水平及肿瘤细胞核增殖性抗原Ki67表达情况。结果流式细胞仪检测4组肝癌Hep G2细胞凋亡率,单纯金纳米棒组、单纯125I粒子照射组较空白对照组均有升高(P<0.05);联合组较单纯金纳米棒组和单纯125I粒子照射组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。联合组bax m RNA表达明显高于单纯金纳米棒组与单纯125I粒子照射组,bcl-2 m RNA表达明显低于单纯金纳米棒组与单纯125I粒子照射组。肝癌Hep G2细胞bax表达于胞质,bcl-2表达于胞质和胞膜,Ki67表达于胞核,均表现为棕黄色细颗粒状沉淀。4组肝癌Hep G2细胞凋亡相关基因bax、bcl-2及增殖核抗原Ki67蛋白表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.05);联合组较单纯金纳米棒组和单纯125I粒子照射组Bax蛋白阳性表达率明显升高,Bcl-2、Ki67蛋白阳性表达率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论金纳米棒与125I粒子联合应用能更有效增加肝癌细胞凋亡率,其机制可能是通过增加Bax蛋白的表达,抑制Bcl-2蛋白的表达来实现。     

甘氨双唑钠修饰纳米金对肺腺癌细胞A549的放射增敏研究

目的 探讨甘氨双唑钠修饰纳米金制备及放射增敏效果。方法 把甘氨双唑钠修饰到已连接聚乙二醇的纳米金上,纳米金粒径18 nm。利用扫描电镜观察肺腺癌(A549)细胞吞噬甘氨双唑钠-纳米金的现象。将培养的肺腺癌细胞分为甘氨双唑钠组、纳米金组、甘氨双唑钠-纳米金组、对照组(不加药组)。用四甲基偶氮唑盐比色法和克隆形成实验对肺腺癌(A549)细胞进行放射增敏的研究。结果 甘氨双唑钠-纳米金能进入细胞质和细胞核;浓度为0.003 mg/ml纳米金和甘氨双唑钠-纳米金没有明显的细胞毒性;甘氨双唑钠-纳米金组相对于甘氨双唑钠组、纳米金组、对照组,D₀、D_q出现了下调;接受2、4、6和8 Gy剂量照射后,甘氨双唑钠-纳米金组肺腺癌细胞的存活率与其他3组相比,均明显下降(F=4.8、14.5、5.7、7.6,P<0.05)。结论 甘氨双唑钠修饰的纳米金能增加肺腺癌细胞的辐射敏感性。     

Sanger测序法确证硫代修饰反义脱氧寡核苷酸的序列

目的：建立一种简便、可靠的硫代修饰反义脱氧寡核苷酸序列确证方法，为反义药物的质量控制及新药研究与开发奠定基础。方法：选择含有待测反义脱氧寡核苷酸序列在内的一段靶基因为模板，以待测序的硫代修饰反义脱氧寡核苷酸作为下游引物，同时在其上游设计一条引物，进行PCR扩增，使待测序的反义序列以修饰形式掺入到PCR扩增产物中；以上述掺入反义序列的PCR扩增产物为模板，利用Sanger双脱氧链终止测序法对其进行自动序列分析。结果：该方法可对不同长度硫代修饰的反义序列进行测定，并且可有效地检测出合成过程中产生的突变和缺失序列，与质谱法相比，仪器和试剂更普及，方法易于掌握且测序成本低，用样量少。结论：该方法可用于硫代修饰反义脱氧寡核苷酸药物的序列确证。     

单甲氧基聚乙二醇-醛修饰超氧化物歧化酶的研究

目的考察使用单甲氧基聚乙二醇．醛修饰超氧化物歧化酶的可行性。方法单甲氧基聚乙二醇一醛在弱酸性环境下（pH5-3）修饰超氧化物歧化酶生成schiff碱,再于同样环境下使用氰基硼氢化钠还原schiff碱生成稳定的仲胺结构,利用SDS—PAGE电泳对反应产物进行分子量鉴定。结果单甲氧基聚乙二醇．醛可以成功修饰超氧化物歧化酶,耦联条件温和。结论含醛基的化合物可以有效修饰蛋白质的氨基,建立了单甲氧基聚乙二醇．醛修饰超氧化物歧化酶的工艺。     

核酸适体和胶体金检测皮质醇含量的方法与应用

目的通过指数富集配体系统进化（SELEX）技术获得皮质醇特异性核酸适体,应用核酸适体和胶体金建立一种灵敏的定量检测皮质醇含量的方法。方法采用柠檬酸钠还原法和硼氢化钠还原法制备胶体金,用核酸适体、胶体金聚集显色法检测皮质醇含量。结果相比20nm胶体金,采用5nm和13nm胶体金颗粒具有较好的灵敏度、重复性和线性范围,5nm胶体金颗粒用于皮质醇的检测的线性范围为10．1～320μmol／L,标准曲线相关系数r为0．9993,其重复性较好,标准差小于平均值10％。结论本实验建立了一种高灵敏性的能特异性地检测皮质醇标准品含量的方法。     

Anti-MUC1 aptamers: radiolabelling with Tc and biodistribution in MCF-7 tumour-bearing mice

IntroductionAptamers previously selected against the protein core (AptA) or the tumour glycosylated (AptB) MUC1 glycoprotein have been conjugated to MAG2 and labelled with ^99mTc, for the potential use as radiopharmaceuticals for diagnostic imaging of breast cancer.MethodsThe conjugation was achieved in high yield using standard peptide coupling reactions between an amino modification on the aptamer and the activated carboxylic group on the ligands. The retention of the affinity of the MAG2 modified AptA for the MUC1 protein core was confirmed using a fluorescent intercalator displacement binding assay. The labelled aptamers were separated from free ^99mTc using ultrafiltration and monitored by high-performance liquid chromatography at all stages, to ensure that only radiolabelled aptamers were produced. The biodistribution properties of the two aptamer-radionuclide conjugates were analysed in MCF-7 tumour bearing mice and compared.ResultsEfficient and convenient labelling of the two aptamers with ^99mTc was achieved as the last step of the synthesis (post-conjugation labelling). Both the aptamer-chelator conjugates had strong ^99mTc binding properties and the resulting complexes were stable in vivo, both in terms of nuclease degradation and leaking of the metal. The radiolabelled aptamers showed a high renal clearance and a high uptake in the intestine.ConclusionsAptA and AptB have been successfully conjugated in high yield to the ligand MAG2 and labelled with ^99mTc. The radiolabelled aptamers showed different tumour uptake and clearance, but will require further development prior to diagnostic use.     

A paralleling technique modification to determine the bone crest level around dental implants

The aim of this report is two-fold. First it analyses the precision of a modification of the parallel technique that can be used in those cases with anatomical limitations. Second, it checks the influence of the reference points' definition of objects to be measured by using both the original and the modified radiographic techniques. 2 intraoral radiographs were taken of 28 implants with 2 different methods: a standard paralleling technique and a modified technique that used a smaller film and a silicone spacer to ensure parallelism. Measurements of peri-implant bone levels and implant width were made in triplicate on digitized film radiographs. The results of the peri-implant bone levels were that with the parallel method the mean was 0.44 mm and the precision was 0.43 mm, and with the modified method the mean was 0.73 mm and the precision was 0.66 mm. In addition to the correct localization of the point of reference in this study, the precision with the parallel method was 0.08 mm and with the modified method was 0.13 mm. Although it was greater with the gold standard technique than with the modified technique, precision was very high for both methods and accurate enough for clinical use.     

炭疽芽孢杆菌芽孢适配子的结构与亲和性分析

为了对炭疽芽孢杆菌疫苗株A．16R芽孢的适配子进行亲和性分析,体外构建了78个碱基的随机DNA库,以炭疽芽孢杆菌疫苗株A．16R芽孢为靶标,用SELEX技术进行了15轮的筛,针室的适配子库进行克隆,测序,用Macaw2.05和DNAsisv2.5软件对每一适配子的保守序列和二级结构进行分析,并用生物素－链酶亲和素－辣根酶系统检测,根据OD值的高低判定亲和力的大小,对每一适配子进行亲和力测定。结果表明,适配子的亲和力高低不一,OD值最高为1．2,最低为0．25,二级结构分析结果显示,茎环和茎等二级结构可是适配子与芽孢结合的基础;其一级结构提示有AGGGG,CCCCG,GGCTT、ACACT等保守序,上述分类与OD值的高低分布基本吻合。     

Noninvasive in vivo spectroscopic nanorod-contrast photoacoustic mapping of sentinel lymph nodes

Sentinel lymph node (SLN) biopsy has increasingly become important in axillary staging of breast cancer patients since SLN biopsy alleviates the postoperative complications of previously practiced axillary lymph node dissections. Nevertheless, the procedures of SLN biopsy using blue dye and radioactive substance are still intraoperative, and the latter methods are also ionizing. In this pilot study, we have proposed noninvasive in vivo spectroscopic photoacoustic (PA) SLN mapping using gold nanorods as lymph node tracers in a rat model. Gold nanorods have biocompatibility, high optical absorption, and easily tuned surface plasmon resonance peak wavelength.     

反义显像技术的研究进展

反义显像是利用放射性核素标记的反义寡核苷酸 ,通过体内核酸杂交而显示目的基因表达的一种显像方法 ,具有设计简便、合成简易、安全性高、免疫原性低等特点。成功的反义显像要求反义寡核苷酸易被细胞摄取、耐核酸酶、杂交稳定、标记简单。脂质体、受体等介导的反义 RNA转移 ,反义寡核苷酸的化学修饰以及标记方法的改进将大大加快反义显像的临床应用。