无胶筛分毛细管电泳分离相差单个碱基的脱氧寡核苷酸方法初探

目的：建立和优化分离不同碱基数目硫代脱氧寡核苷酸的有效方法。方法：用去离子水溶解硫代脱氧寡核苷酸样品并采用核酸蛋白分析仪定量。在无胶筛分毛细管电泳分离分析之前超声波和高速离心脱气。无胶筛分毛细管电泳以线性大分子ssDNA 100-R Gel作为分离介质。为得到最佳效果，对毛细管温度、分离电压、进样方式和进样时间进行了优化。结果：灵敏度、迁移时间和重现性的最佳实验条件为：毛细管温度25℃，电动进样10kV10s，DAD检测器波长为255nm，18kV恒压分离模式。在此条件下，成功分离了依次相差一个碱基的21种脱氧寡核苷酸[pd(A)40-60]。结论：建立并优化了一种简单快速分离相差单个碱基的脱氧寡核苷酸的毛细管电泳方法。     

叶酸偶联金纳米棒在兔VX-2肝癌的摄取状况研究

目的建立兔肝癌模型,观察实验动物对叶酸（ FA ）偶联二氧化硅包覆的金纳米棒（GNRs@SiO2-FA）的摄取状况,检测GNRs@SiO2-FA对肝癌细胞的靶向性。方法 CT引导下穿刺接种法建立兔VX-2肝癌模型27只,行CT、超声检查观察肿瘤生长情况。2周后将实验动物随机分成空白对照组（注入生理盐水）、门静脉注射GNRs@SiO2-FA组和瘤内注射GNRs@SiO2-FA组,术后24、48、72 h每组各处死实验兔3只,取其肿瘤组织和各主要脏器并作冷冻切片,应用激光共聚焦显微镜观察实验动物对GNRs@SiO2-FA的摄取情况。结果成功构建兔VX-2肝癌模型,CT、超声检查显示肿瘤血供较丰富。共聚焦显微镜观察到实验动物摄入GNRs@SiO2-FA 24 h内即可特异性地与肿瘤细胞结合进入肿瘤细胞,并聚集在肿瘤细胞胞质内。结论 GNRs@SiO2-FA可在实验动物体内高度靶向性作用于肝癌细胞,在肿瘤靶向定位热疗和125I粒子介入治疗方面具有重要的应用前景。     

聚乙二醇和核酸适配体AS1411修饰的金纳米粒子对人宫颈癌HeLa细胞放射敏感性的影响

目的 研究聚乙二醇(PEG)和核酸适配体AS1411修饰的金纳米粒子(AuNPs)对人宫颈癌HeLa细胞辐射敏感性的影响。方法 用PEG和PEG-AS1411分别修饰经柠檬酸钠还原法制备的AuNPs,制备纳米粒子AuNPs@PEG和AuNPs@PEG-AS1411。分别用CCK-8法和克隆形成法检测纳米粒子的细胞毒性。用电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)检测HeLa细胞对纳米粒子的吸收量。用克隆形成法检测纳米粒子联合X射线照射对HeLa细胞存活率的影响。结果 CCK-8实验结果显示,AuNPs@PEG和AuNPs@PEG-AS1411对HeLa细胞的毒性很小(P>0.05),而克隆形成实验结果则显示,10 d后HeLa细胞的存活率明显降低(t=4.38~11.60,P<0.05)。用AS1411修饰AuNPs,可以增加细胞对AuNPs的吸收。AuNPs@PEG和AuNPs@PEG-AS1411对HeLa细胞均具有辐射增敏作用(F=7.90、48.23,P<0.05),Au浓度为10 mg/ L时,其增敏比分别为1.12和1.20。结论 AuNPs@PEG和AuNPs@PEG-AS1411对HeLa细胞的急性细胞毒性较小,但具有长期毒性。用AS1411修饰PEG化的AuNPs,可以增强AuNPs的放射增敏作用。     

纳米金新型基因芯片检测系统结合限制性酶切非PCR法同时检测多种病原性微生物的研究

目的 研究将纳米金新型基因芯片检测系统与限制性酶切非PCR法结合以实现同时对多种病原性微生物进行检测的方法.方法 以幽门螺杆菌、肺炎支原体、沙眼衣原体、白色念珠菌、解脲脲原体、EB病毒作为检测目标,选择Hha Ⅰ内切酶作为工具酶.对所有待检样本核酸进行Hha Ⅰ酶切,对酶切产物进行同聚A加尾处理,并结合纳米金新型芯片检测系统,分别与特异性探针及通用探针进行两次杂交以完成对目标微生物的检测.通过对168份临床样品的检测,考察新构建芯片的检测结果与荧光定量PCR检测结果的符合率;对构建芯片的稳定性及检测灵敏度进行测试.结果 新构建的基于限制性酶切非PCR法的纳米金芯片技术实现了对选定目标的检测.对168份临床样品的检测结果显示,该芯片检测与荧光定量PCR检测的结果有150例完全相符,符合率为89.2%;进一步芯片检测性能实验结果表明,该芯片检测稳定性为100%,检测敏感性为50pmol/L.结论 本研究构建的基于限制性酶切非PCR法的纳米金芯片技术可以同时实现对细菌、真菌、支原体、衣原体及病毒等微生物的检测.适用性广且对大幅度提高检测通量有积极意义.     

金纳米颗粒修饰及其对肝癌细胞生长和辐射损伤的影响

目的：用巯基-聚乙二醇（SH-PEG）对金纳米颗粒（AuNPs）进行化学修饰（PEG-AuNPs）并分析其对肝癌细胞存活率和辐射对肝癌细胞作用的影响。方法制备的AuNPs用SH-PEG进行化学修饰,用透射电子显微镜观测PEG-AuNPs的大小及肝癌细胞对其的摄取,应用Cell Titer-Glo发光法和克隆形成实验分别分析PEG-AuNPs对肝癌细胞的生长抑制作用和辐射对肝癌细胞作用的影响。结果制备的PEG-AuNPs的尺寸分别为14．4 nm和30．5 nm。30．5 nm PEG-AuNPs更容易被肝癌细胞摄取,表现出明显地抑制肝癌细胞生长的作用和提高辐射对肝癌细胞的杀伤作用。结论 AuNPs经过SH-PEG化学修饰,30．5 nm PEG-AuNPs对肝癌细胞的生长抑制作用和提高辐射杀伤肝癌细胞的作用强于14．4 nm PEG-AuNPs。     

金纳米棒联合125I粒子诱导肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

目的探讨叶酸偶联二氧化硅包覆的金纳米棒(GNRs@Si O2-FA)联合125I粒子诱导肝癌Hep G2细胞凋亡及其可能的机制,为临床提高肝癌125I粒子组织间植入疗效提供理论依据。方法将体外培养的肝癌Hep G2细胞随机分成空白对照组,单纯金纳米棒组,单纯125I粒子照射组及金纳米棒联合125I粒子照射组,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,PT-PCR检测bax m RNA、bcl-2 m RNA表达水平,免疫细胞化学检测凋亡相关基因bax、bcl-2表达水平及肿瘤细胞核增殖性抗原Ki67表达情况。结果流式细胞仪检测4组肝癌Hep G2细胞凋亡率,单纯金纳米棒组、单纯125I粒子照射组较空白对照组均有升高(P<0.05);联合组较单纯金纳米棒组和单纯125I粒子照射组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。联合组bax m RNA表达明显高于单纯金纳米棒组与单纯125I粒子照射组,bcl-2 m RNA表达明显低于单纯金纳米棒组与单纯125I粒子照射组。肝癌Hep G2细胞bax表达于胞质,bcl-2表达于胞质和胞膜,Ki67表达于胞核,均表现为棕黄色细颗粒状沉淀。4组肝癌Hep G2细胞凋亡相关基因bax、bcl-2及增殖核抗原Ki67蛋白表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.05);联合组较单纯金纳米棒组和单纯125I粒子照射组Bax蛋白阳性表达率明显升高,Bcl-2、Ki67蛋白阳性表达率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论金纳米棒与125I粒子联合应用能更有效增加肝癌细胞凋亡率,其机制可能是通过增加Bax蛋白的表达,抑制Bcl-2蛋白的表达来实现。     

叶酸偶联金纳米棒靶向探针制备及体外肝癌细胞对其摄取状况的研究

目的 探讨叶酸偶联的二氧化硅包覆的金纳米棒(GNRs@SiO2-FA)探针制备方法和其光学性质,检测探针靶向性,并观察其进入细胞过程.方法 采用种子生长法制备出金纳米棒,以SiO2作为壳材,制备出GNRs@SiO2,最后偶联叶酸得到GNRs@SiO2-FA.(1)利用透射电镜、紫外光谱对制备出的GNRs@SiO2-FA探针进行检测.(2)取对数生长期肝癌HepG2细胞随机分为2组,分别加入金元素浓度为40.0×10-6、20.0×10-6、10.0×10-6、5.0×10-6、2.5 ×10-6的GNRs@SiO2-FA和GNRs溶液,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法测得吸光度值(A值),以此判断其细胞毒性.(3)将细胞随机分为2组,分别加入相同金元素浓度的GNRs@SiO2-FA和GNRs@SiO2溶液,然后孵育2、4、8、16、24 h时,应用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)监测GNRs@SiO2-FA细胞摄入的靶向性.(4)用透射电镜观察GNRs@SiO2-FA进入细胞过程.所得数据用(-x)±s表示,单因素方差分析进行两两组间比较,P ＜0.05为差异有统计学意义.结果 紫外图谱证实成功制备GNRs@SiO2-FA.对2组金浓度相同细胞的A值进行方差分析比较,差异均有统计学意义,金元素浓度从高到低(40.0×10-6、20.0×10-6、10.0×10-6、5.0×10-6、2.5×10-6),2组比较F值分别为191.876、265.419、77.987、52.061、18.745,P值均＜0.01.ICP-MS监测结果显示,GNRs@SiO2组细胞在孵育2、4、8、16、24 h时细胞固体金元素含量分别为(256.7±3.3)、(602.8±2.4)、(1067.1±3.6)、(1998.5±4.3)、(2078.5±1.3) mg/kg,GNRs@SiO2-FA组分别为(693.1 ±2.0)、(1432.0±2.6)、(2331.3±3.5)、(2484.5 ±5.0)、(2589.7±2.1)mg/kg,组间两两比较差异有统计学意义(F值分别为3278.070、34287.199、85434.870、18333.454、42412.973,P值均＜0.01),证明叶酸偶联的探针具有很强的靶向性.透射电镜观察到,GNRs@SiO2-FA与细胞共同培养1h后,细胞质内见少量纳米探针;4 ～24 h,细胞质内见大量探针,但细胞核内未见.结论 制备出的GNRs@SiO2-FA探针具有很好的生物安全性和靶向性.     

99Tc m标记lncRNA HOTAIR反义寡核苷酸探针的制备及其对人脑胶质瘤U87细胞活性的影响

目的:制备新型的靶向长链非编码RNA （lncRNA）同源异型盒基因转录的反义基因间RNA (HOTAIR）的反义寡核苷酸（ASON）探针 99Tc m-HYNIC-ASON (HYNIC为联肼尼克酰胺）,探讨其对人脑胶质瘤U87细胞增殖和迁移能力的影响。 方法:设计并通过化学修饰合成...     

基于普朗尼克双配体修饰的载药纳米靶向聚合物胶束制备工艺的筛选及靶向性评价

目的 优选载多柔比星(阿霉素,DOX)纳米靶向聚合物胶束的制备工艺,并对其体外释放行为和体外靶向性进行考察.方法 以琥珀酰亚胺法合成靶向聚合物材料,以包封率、载药量和总评归一化值为评价指标,利用星点设计-响应面法优化薄膜水化法设计考察投药量、有机溶剂体积、水化体积对纳米胶束制备的影响,并优选处方.以与羟基磷灰石(HA)和离体骨片共同孵育考察骨靶向性;以乳腺癌细胞(MDA-MB-231)为模型做体外细胞摄取考察肿瘤细胞靶向性.结果 成功合成靶向聚合物材料P123-ALN和P123-DP-8,优选纳米胶束最佳制备工艺为:DOX投药量5.48 mg,有机溶剂体积7.28 ml,水化体积8.58 ml.根据筛选出的最佳制备工艺,确定混合载体材料的比例为4∶1时,制备的双配体修饰的纳米靶向聚合物胶束P123-ALN/P123-DP-8@DOX符合纳米制剂的制备要求,包封率为76.97％,载药量3.70％,粒径122.97 nm,ζ电位-12.60 mV,缓释和体外靶向性良好.结论 用最优处方制备的纳米靶向聚合物胶束可为后续骨靶向给药奠定基础.     

一种仿生修饰分子rFN/CAD的设计、制备及初步应用

目的制备一种具有黏附和成骨双重功能的仿生分子,为种子细胞在支架材料界面的高效黏附和靶向分化提供新途径。方法筛选纤维连接蛋白和钙黏附蛋白前体分子,通过分子模拟、基因克隆、蛋白表达纯化等技术设计并进行制备。通过离心促黏附实验和成骨诱导分化实验检测其体外活性。结果成功获得长1954bp的FNⅢ7-10/CAD11 EC1-2重组基因和由641个氨基酸组成的融合蛋白。体外功能研究发现聚苯乙烯表面的融合蛋白涂层可显著提高人骨髓间质干细胞的黏附和成骨分化能力。结论 rFN/CAD具有促黏附和促成骨的双重生物活性,可作为一种理想的仿生修饰分子用于生物界面的构建。     

核酸适体和胶体金检测皮质醇含量的方法与应用

目的通过指数富集配体系统进化（SELEX）技术获得皮质醇特异性核酸适体,应用核酸适体和胶体金建立一种灵敏的定量检测皮质醇含量的方法。方法采用柠檬酸钠还原法和硼氢化钠还原法制备胶体金,用核酸适体、胶体金聚集显色法检测皮质醇含量。结果相比20nm胶体金,采用5nm和13nm胶体金颗粒具有较好的灵敏度、重复性和线性范围,5nm胶体金颗粒用于皮质醇的检测的线性范围为10．1～320μmol／L,标准曲线相关系数r为0．9993,其重复性较好,标准差小于平均值10％。结论本实验建立了一种高灵敏性的能特异性地检测皮质醇标准品含量的方法。     

逆转录PCR－生物素探针杂交法鉴定戊型肝炎病毒

建立了生物素标记探针技术，以便用于戊型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＥｖｉｒｕｓ，ＨＥＶ）的诊断及与肠道病毒的鉴别。用Ａ５４９细胞培养ＨＥＶ８７Ａ株，收集上清，浓缩沉淀，酚／氯仿抽提ＲＮＡ，ＲＴ－ＰＣＫ扩增ｃＣＮＡ，将其直接点于硝酸纤维素膜或扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分离后，转移到硝酸纤维素膜上，制备待检样品。以光敏生物素标记ＨＥＶＥＴ１．１４１８６ｐ探针，对硝酸纤维素膜进行点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交。结果表明，制备的ＨＥＶ探针，特别是合成的寡核苷酸ＨＥＶ探针和肠道病毒探针，能够分别特异地与８７Ａ株病毒和肠道病毒Ｅｃｈｏ－１３型病毒的核酸杂交。该方法特异性强，较单独用ＰＣＲ扩增、经琼脂糖凝胶电泳敏感性高，特异性强，且结果能长期保存，可用于戊型肝炎的临床诊断。     

Migration and chemical modification of silicone in women with breast prostheses

Studies using magnetic resonance spectroscopy in human volunteers to evaluate their livers in vivo and to analyze their blood in vitro suggest that there are measurable amounts of silicon compounds in the blood of some women with implants and that there is migration of silicone to other organs such as the liver.     

Design, development and characterization of multi-functionalized gold nanoparticles for biodetection and targeted boron delivery in BNCT applications

The aim of this study is to optimize targeted boron delivery to cancer cells and its tracking down to the cellular level. To this end, we describe the design and synthesis of novel nanovectors that double as targeted boron delivery agents and fluorescent imaging probes. Gold nanoparticles were coated with multilayers of polyelectrolytes functionalized with the fluorescent dye (FITC), boronophenylalanine and folic acid. In vitro confocal fluorescence microscopy demonstrated significant uptake of the nanoparticles in cancer cells that are known to overexpress folate receptors.     

Schiff碱稀土金属配合物对辐射导致肿瘤细胞DNA损伤及？…

的　Schiff碱具有抗瘤抑菌活性 ,其抗癌作用与其对肿瘤细胞DNA的破坏有关。方法　利用脉冲电场凝胶电泳 (PFGE)的方法 ,观察了某种Schiff碱稀土金属化合物对肿瘤细胞DNA双链断裂及修复的影响。结果　该化合物能够增加辐射导致的DNA双链断裂的生成 ,并抑制其修复。结论　Schiff碱稀土金属配合物能提高肿瘤细胞对辐射的敏感性 ,为开发放化疗修饰剂提供了新的研究方向     

Schiff碱稀土金属配合物对辐射导致肿瘤细胞DNA损伤及修复的影响

目的 Schiff碱具有抗瘤抑菌活性, 其抗癌作用与其对肿瘤细胞DNA的破坏有关。方法 利用脉冲电场凝胶电泳(PFGE)的方法, 观察了某种Schiff碱稀土金属化合物对肿瘤细胞DNA双链断裂及修复的影响。结果 该化合物能够增加辐射导致的DNA双链断裂的生成, 并抑制其修复。结论 Schiff碱稀土金属配合物能提高肿瘤细胞对辐射的敏感性, 为开发放化疗修饰剂提供了新的研究方向。     

Comparison of two contrast materials with different iodine concentrations in enhancing the density of the the aorta, portal vein and liver at multi-detector row CT: a randomized study

This work investigates differences in contrast enhancement of the aorta, portal vein and liver by two different concentrations of contrast materials using an automatic bolus tracking technique. Seventy patients were assigned randomly into one of two groups. Contrast materials with iodine concentrations of 300 and 370 mg/ml were administered to patients in groups A and B, respectively. The total iodine load (600 mg/kg) and injection time (30 s) were identical. Differences in the increase of the Hounsfield unit of the aorta, portal vein and liver between the two groups were examined by t-test. There were no significant differences between the two groups in any of the contrast enhancements of the aorta, portal vein and liver parenchyma at all phases, except for enhancement of the portal vein at the late arterial phase. Females showed better contrast enhancement of the aorta and portal vein than males. With the same iodine dose and injection time, the concentration of contrast materials did not seem to influence the efficacy of contrast enhancement of the aorta, portal vein and liver, except for the portal vein at the late arterial phase. Planning of protocols for contrast media injection may be made irrespective of the iodine concentrations.