替米沙坦诱导大鼠肝细胞自噬促进肝脏胆固醇代谢的机制研究

目的探讨替米沙坦诱导大鼠肝细胞自噬对肝脏胆固醇代谢的影响及作用机制。方法将肝脏原代细胞分为正常对照组(Con)、替米沙坦1μmol/L组(Tel 1组)、替米沙坦3μmol/L组(Tel 3组)、替米沙坦10μmol/L组(Tel 10组)、替米沙坦10μmol/L联合PPARγ抑制剂GW 9662组(Tel+G组)。Tel 1、Tel 3、Tel 10组分别按1、3、10μmol/L浓度加入替米沙坦,Tel+G组加入10μmol/L替米沙坦及PPARγ抑制剂GW9662,培养24 h。检测肝细胞胆固醇浓度,Western blot法检测微管相关蛋白轻链3(LC3)、自噬蛋白区域(Beclin-1)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、雷帕霉素靶分子(mTOR)表达水平。结果 Tel 3、Tel 10组胆固醇水平低于Con、Tel 1组(P<0.05)。Tel 1、Tel 3、Tel 10组LC3Ⅱ/Ⅰ比值、Beclin-1蛋白水平依次升高(P<0.05)。与Con、Tel 1组比较,Tel 3、Tel 10组p-AMPK/AMPK蛋白比值升高(P<0.05),p-mTOR/mTOR蛋白比值降低(P<0.05)。与Tel 10组比较,Tel+G组胆固醇水平、p-mTOR/mTOR蛋白比值升高(P<0.05),LC3II/I比值、p-AMPK/AMPK蛋白水平降低(P<0.05)。结论替米沙坦可通过诱导大鼠肝细胞自噬影响肝脏细胞胆固醇代谢,其机制可能与激活AMPK/mTOR途径和上调PPARγ有关。     

替米沙坦对OLETF大鼠皮下和内脏脂肪组织PPARγ表达的影响

目的 探讨替米沙坦对高脂饲养的OLETF大鼠皮下、内脏脂肪组织中过氧化物酶体增殖物活化受体(PPAR)γ1、PPARγ2基因表达的调控作用及其部位差异性.方法 4周龄雄性OLETF大鼠30只,性别、周龄匹配的正常非糖尿病LETO大鼠12只作为对照,OLETF大鼠从8周龄开始给予高脂喂养,22周龄时,口服葡萄糖耐量试验(OGTT)未发生临床糖尿病或糖耐量减低.之后将这些糖尿病前期OLETF大鼠按照随机数字表法分为替米沙坦干预组(O-T组,5 mg· kg-1 ·d-1,n=10)、吡格列酮干预组(O-P组,10 mg·kg-1·d-1,n=8)和无干预对照组(O-C组,生理盐水,n=10),LETO大鼠为对照组(n=12).48周龄时,复查OGTT,计算稳态模型评估-胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).ELISA法测定血清PPARγ的水平,实时PCR检测皮下和睾周脂肪组织中PPARγ1和PPARγ2的基因表达,并测定各组脂肪细胞的面积.结果 与O-C组相比,O-T组皮下脂肪中PPARγ2的表达明显升高(P＜0.01),且O-T组与O-P组之间差异无统计学意义.O-T组内脏脂肪组织中PPARγ1和PPARγ2的表达也明显上调(P＜0.01),HOMA-IR与内脏脂肪组织中PPARγ2的mRNA表达水平呈负相关(ρ=-0.369,P=0.021).与O-C组相比,O-T组脂肪细胞面积减少56％(P＜0.01).结论替米沙坦可部分激活PPARγ,上调皮下及内脏脂肪组织中PPARγ1和PPARγ2的表达,减小脂肪细胞面积,增加胰岛素敏感性.     

非诺贝特对高脂大鼠肝脏PPAR-α基因表达及血清LPL活性的影响

将30只高脂模型大鼠随机分为高脂组、非诺贝特低剂量组(低剂量组)和非诺贝特高剂量组(高剂量组),后两组分别采用非诺贝特100 mg/kg,35 mg/kg灌胃1次/d,高脂组以生理盐水灌胃.4周后,测定各组血脂(TC、TG、LDL-C和HDL-C)及脂蛋白脂肪酶(LPL)活性;并采用RT-PCR法检测各组肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR-α)表达情况.结果:与正常值相比,高脂组血清TG、TC和LDL-C明显升高(P＜0.01);HDL-C明显降低(P＜0.01),非诺贝特高、低剂量组TC、TC和LDL-C均明显低于高脂组(P＜0.05或P＜0.01);而高剂量组HDL-C明显高于高脂组(P＜0.05),TG低于低剂量组(P＜0.05).高、低剂量组的血清LPL活性和肝PPAR-α/β.actin灰度比值明显高于高脂组(P＜0.01);高剂量组高于低剂量组(P＜0.01).认为非诺贝特可使血清LPL活性增加,并上调肝脏PPAR-α基因表达,且与剂量相关联,此可能为其降脂作用的机理.     

替米沙坦保护胰岛β细胞功能的研究进展

替米沙坦作为血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARBs),兼具有部分过氧化物酶体增殖物活化受体γ (PPARγ)激动剂的作用.研究提示,除降压作用外,其还有一定的改善胰岛素抵抗的作用.近年发现,替米沙坦也能够保护胰岛β细胞功能.其机制主要与阻断肾素-血管紧张素系统(RAS)和激活PPARγ有关.     

替米沙坦减轻高糖引起的人血管内皮细胞损伤

目的 探讨替米沙坦对高糖环境下人血管内皮细胞的保护作用及相关的机制.方法 替米沙坦及不同浓度葡萄糖(5、30 mmol/L)分别作用于培养的脐带静脉内皮细胞(HUVEC)0、12、24、36、48 h,比色法测定细胞培养上清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平;收集培养24 h的内皮细胞,蛋白质免疫印迹法(Western-blot)检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)蛋白表达量.结果 在高糖处理的细胞条件培养上清中MDA含量升高[干预前:(1 2±0 06)mmol/mL vs干预后:(1 6±0 1)mmol/mL, P<0 05],而SOD活性降低[干预前:(22 9±1 4 )nU/mL vs干预后:(19 4±1 0)nU/mL, P<0 05],同时细胞PPAR-γ蛋白表达量降低(P<0 05);而替米沙坦(1×10-6 mol/L)减轻上述不良变化,降低内皮细胞MDA 含量、增强SOD[MDA:(1 4±0 1)mmol/mL,SOD:(20 7±0 3)nU/mL],以及促进PPAR-γ蛋白质含量增加(P<0 05).结论 替米沙坦可抑制高糖诱导的内皮细胞活性氧产生,增强抗氧化酶活性,维持高糖状态下细胞氧化平衡,促进PPAR-γ蛋白分泌,提示替米沙坦对高糖状态下的内皮细胞具有保护作用,其作用机制可能与调节内皮细胞氧化平衡和激动PPAR-γ有关.     

替米沙坦对肝纤维化大鼠肝组织病理学变化的影响

目的观察替米沙坦对四氯化碳（CCl4）诱导的大鼠实验性肝纤维化模型肝组织病理学变化的影响。方法 SD大鼠40只被随机分成正常对照组（12只）、模型组（12只）和替米沙坦防治组（16只）。在制备大鼠肝纤维化动物模型成功后,取肝、脾,常规进行组织病理学检查。结果模型组大鼠平均肝指数为4.85±0.42（P〈0.05）,正常对照组为2.92±0.41,而药物干预组为3.09±0.36;模型组大鼠肝炎症活动度平均计分为18.6±2.1（P〈0.05）,正常对照组为0.0±0.0,替米沙坦干预组为8.6±1.9;模型组大鼠肝纤维化计分平均为14.5±1.6,正常对照组为0.33±0.49,替米沙坦干预组为7.7±1.7（P〈0.01）。结论替米沙坦可改善实验性纤维化大鼠肝组织病理学损伤。     

替米沙坦减轻高糖引起的人血管内皮细胞损伤

目的探讨替米沙坦对高糖环境下人血管内皮细胞的保护作用及相关的机制。方法替米沙坦及不同浓度葡萄糖(5、30 mmol/L)分别作用于培养的脐带静脉内皮细胞(HUVEC)0、12、24、36、48 h,比色法测定细胞培养上清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平;收集培养24 h 的内皮细胞,蛋白质免疫印迹法(Western-blot)检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)蛋白表达量。结果在高糖处理的细胞条件培养上清中 MDA 含量升高[干预前:(1.2±0.06)mmol/mL vs 干预后:(1.6±0.1)mmol/mL,P<0.05],而 SOD活性降低[干预前:(22.9±1.4)nU/mL vs 干预后:(19.4±1.0)nU/mL,P<0.05],同时细胞 PPAR-γ蛋白表达量降低(P<0.05);而替米沙坦(1×10~(-6)mol/L)减轻上述不良变化,降低内皮细胞 MDA 含量、增强 SOD[MDA:(1.4±0.1)mmol/mL,SOD:(20.7±0.3)nU/mL],以及促进 PPAR-γ蛋白质含量增加(P<0.05)。结论替米沙坦可抑制高糖诱导的内皮细胞活...     

NO-1886对过氧化体增殖物激活型受体、脂蛋白脂肪酶和肿瘤坏死因子α基因表达的影响

为了探讨脂蛋白脂肪酶活化剂NO-1886对高脂高糖饮食喂养贵州小香猪过氧化物体增殖物激活型受体、脂蛋白脂肪酶及肿瘤坏死因子α表达的影响，选择雄性贵州小香猪15头，随机分为3组。正常对照组喂普通饲料；高脂高糖组喂高脂高蔗糖饲料；治疗组喂高脂高蔗糖饲料4个月后加1％NO-1886冶疗。8个月后处死动物，采用Trizol提取组织总RNA，逆转录聚合酶链反应检测过氧化体增殖物激活型受体、脂蛋白脂肪酶及肿瘤坏死因子nmRNA的表达。结果发现，正常对照组肌肉组织和肝脏过氧化体增殖物激活型受体α的表达较低。高脂高糖组肌肉组织和肝脏过氧化体增殖物激活型受体α的表达增强，NO-1886使高脂高糖喂养增强肌肉组织和肝脏过氧化体增殖物激活型受体α表达的作用减弱；在脂肪组织，治疗组脂蛋白脂肪酶的表达水平最高，分别比正常对照组和高脂高糖组高27％和20％；NO-1886抑制高脂高糖喂养小香猪脂肪组织肿瘤坏死因子α的表达。结果提示，NO-1886能促进小香猪脂肪组织脂蛋白脂肪酶的表达，显著抑制脂肪组织肿瘤坏死因子α基因表达，高调脂肪组织过氧化体增殖物激活型受体γ，减弱肝脏和肌肉过氧化体增殖物激活型受体α的表达，是NO-1886有效降低血浆游离脂肪酸和肿瘤坏死因子α水平可能的机制。     

越鞠丸对非酒精性脂肪肝病大鼠肝脏PPARα表达的影响

目的 观察越鞠丸对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝脏过氧化物酶体增殖物活化受体α(PPARα)表达的影响.方法 采用喂饲高脂饲料的方法复制NAFLD大鼠模型,实验分组为正常对照组、模型组、东宝肝泰对照组和越鞠丸高、低剂量组.提取肝脏总RNA,运用半定量RT-PCR方法观察各组大鼠肝脏PPARα mRNA的表达情况,同时测定各组大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)和肝组织匀浆TC、TG的含量,并做病理切片.结果 模型组大鼠PPARα mRNA的含量明显降低,血脂和肝脏脂质含量明显升高,肝脏呈明显脂肪变性,经药物治疗后,各治疗组大鼠肝脏PPARα mRNA表达明显增强,血脂和肝脏脂质含量显著降低,肝脂变程度明显减轻.结论 越鞠丸能增强NAFLD大鼠肝脏PPARα mRNA的表达,可能是其治疗NAFLD的分子机制之一.     

替米沙坦对肝纤维化大鼠肝组织TGFβ1、PDGF和PPAR-γ表达的影响

目的研究替米沙坦抗肝纤维化的分子生物学机制.方法将40只SD大鼠随机分成正常组（12只）、模型组（12只）和替米沙坦干预组（16只）.在制备四氯化碳（CCl4）肝纤维化动物模型成功后,用免疫组化法测定肝组织转化生长因子β1（TGF-β1）、过氧化物酶体增生物活化受体-γ（PPAR-γ）及血小板源生长因子（PDGF）表达.结果替米沙坦干预组大鼠肝组织TGF-β1平均标记指数（PI）为0.284±0.068,正常对照组为0.076±0.033,均显著低于模型对照组（0.739±0.065,P〈0.01）;替米沙坦干预组大鼠PDGF PI为0.259±0.050,正常对照组为0.039±0.023,均显著低于模型对照组（0.511±0.107,P〈0.01）;替米沙坦干预组PPAR-γ平均PI为0.326±0.068,正常对照组为0.115±0.021,均显著高于模型对照组（0.038±0.018,P〈0.01）.结论替米沙坦通过活化实验性肝纤维化大鼠肝组织PPAR-γ,抑制肝脏细胞因子表达,达到抗肝纤维化作用.     

幽门螺杆菌对人肝细胞系HepG2原癌基因c-fos表达的影响

目的　探讨H .pylori对HepG2c-fos基因表达的影响。 方法　将H .pylori与HepG2共同培养 1、3、6、12和2 4h ,采用RT -PCR和Westernblot方法检测不同作用时相细胞的c -fosmRNA和蛋白表达。结果　cgA+ H .pylori作用HepG2后c -fos呈短暂一过性表达升高 ,c -fosmRNA、蛋白质在H .pylori感染后 1h开始增加 ,6h达高峰 ,表达水平分别为对照组的 2 .5倍和 1.6倍 (P <0 .0 1)。 12h开始下降 ,2 4h基本恢复到刺激前水平。而cgA-H .pylori及空肠弯曲菌与HepG2细胞共培养后 ,未见该基因的表达升高。结论　cag+ A H .pylori可诱导HepG2c -fos基因表达升高 ,其在肝癌发生中的作用有待进一步研究。     

胰岛素抵抗肝细胞多药耐药基因1的表达

目的体外观察诱导发生胰岛素抵抗（IR）肝细胞中多药耐药基因1（mdr1）的表达。方法采用高浓度胰岛素诱导肝源性细胞HepG2建立IR细胞模型（HepG2/IR细胞）,GOD-POD微量化法测定葡萄糖消耗量,RT-PCR检测HepG2/IR细胞mdr1和胰岛素受体（InsR）基因mRNA的表达,流式细胞术检测P糖蛋白（P-gp）和InsR蛋白水平。结果HepG2/IR细胞葡萄糖消耗量降低10%～45%,InsR基因mRNA表达显著下调,受体表达量降低50.2%～82.9%;mdr1表达显著增强,mRNA转录增高0.7～2.1倍,P-gp表达阳性细胞增加0.6～1.7倍,表达强度增高。结论IR肝细胞mdr1和P-gp的表达显著增强。     

消瘤汤含药血清对人肝癌细胞HepG2凋亡相关因子表达的影响

[目的]观察消瘤汤含药血清对人肝癌细胞HepG2凋亡相关因子表达的影响,进一步证实该方对肿瘤细胞的抑制作用,并初步探讨其诱导肝癌细胞凋亡的作用机制。[方法]给予昆明种小鼠中药煎剂灌胃3d后,制备消瘤汤鼠含药血清,将其作用于HepG2细胞,用四氮唑盐法（MTT法）检测含药血清对HepG2细胞增殖的抑制作用,通过流式细胞技术测定肿瘤细胞的凋亡情况,应用免疫组化法检测半胱氨酸蛋白酸3（Caspase-3）、B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）蛋白表达水平。[结果]消瘤汤鼠含药血清作用于HepG2细胞72h后,对肿瘤细胞生长有明显抑制作用。流式细胞仪检测可见含药血清组在细胞G1／G0期前出现明显的凋亡峰,即“亚二倍体峰”。凋亡率为22．3％,明显高于对照组的1．05％（P〈0．05）。免疫组化结果表明Caspase-3在含药血清干预后,表达明显增加,而Bcl-2在含药血清干预后,表达明显降低。[结论]消瘤汤可能通过激活Caspase-3及抑制Bcl-2的活性,从而诱导肝癌细胞凋亡,有效地抑制肝癌细胞生长,达到抗肿瘤的作用。     

EGCG联合不同剂量放疗对人肝癌细胞系HepG2中hTERT表达的影响

目的:研究相同剂量表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)联合不同剂量放疗对HepG2中hTERT基因表达的影响, 探讨EGCG成为放疗增敏剂的作用.方法:用MTT比色法检测EGCG对HepG2细胞增殖的影响, 用荧光显微镜检测EGCG诱导HepG2的细胞凋亡, 从而找到合适的EGCG(25μmol/L)剂量用于观察其放射效果的实验; 采用实时荧光定量PCR检测不同剂量放疗(0、2、4、6 Gy)联合EGCG和不联合EGCG治疗后, HepG2中hTERT基因的表达. 放疗用直线加速器6MVX线.结果:EGCG具有抑制HepG2细胞增殖并诱导HepG2细胞凋亡的作用. 同时, 不同剂量放疗联合EGCG和不联合EGCG治疗后HepG2中hTERT基因的表达比较, 空白组无显著差异; 2Gy组、4 Gy组、6 Gy组均有显著差异(hTERT基因表达的扩增倍数: 0.477±0.025 vs 0.973±0.024; 1.110±0.083 vs 1.382±0.051; 1.174±0.128 vs 1.452±0.109, P <0.01或0.05), 并以2 Gy组最为显著.结论:EGCG具有抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡的作用; EGCG联合不同剂量放疗可能下调HepG2中hTERT基因水平, 从而抑制端粒酶活性, 以放射剂量为2 Gy时显著, 因此,EGCG有可能成为放疗增敏剂.     

外源HCV核心基因表达载体在HepG2中蛋白表达的亚细胞定位

目的研究HCV全长（天然）核心蛋白（C蛋白）和成熟C蛋白在HepG2细胞内的亚细胞定位，为进一步研究C蛋白与宿主细胞蛋白因子相互作用提供实验依据。方法设计HCV全长和成熟核心基因引物，以pBRTM／HCV1-3011为真核表达载体为模版行PCR；将PCR扩增产物酶切纯化后定向插入pEGFP-C1的BeglⅡ和EcoRⅠ位点，得到能表达全长HCV核心蛋白（C191aa．）和成熟核心蛋白（C173aa．）的真核表达载体pEGFP-C1-C191、pEGFP-C1-C173；将扩增pEGFP-C1-C191、pEGFP-C1-C173质粒转染到HepG2细胞中，28h、5d在荧光显微镜下观察两种C蛋白的亚细胞定位。5d后再用免疫细胞化学法观察两种C蛋白在HepG2细胞中着色现象。结果HCV核心基因PCR产物和构建的pEGFP-C1-C191、pEGFP-C1-C173经扩增测序证实。pEGDP-C1-C191转染HepG2细胞28h后融合荧光全长C蛋白C191主要出现在核膜和胞质中，少部分出现在胞核及其膜中；而pEGDP-C1-C173转染HepG2细胞28h后主要定位在核中和核膜上。但pEGDP-C1-C191转染HepG2细胞5d后，其表达的融合荧光蛋白主要出现在核内和核膜上，少量在胞质中；而成熟C蛋白C173则仍然在胞核内及核膜上。pEGDP-C1-C转染HepG2细胞5d后进行免疫细胞化学显示，C191蛋白和C173蛋白主要在核中、核膜着色，胞质有少量着色。结论HCV全长C蛋白的亚细胞定位是一动态过程，先出现在胞质中和核膜上，最后定位在核中和核膜上；成熟C蛋白主要定位在核中和核膜上。这种现象为解释瞬时转染HCV不同长度C基因对p53／p21通路作用出现相反结果奠定基础。     

The effect of training and diet on lipoprotein cholesterol, tissue lipoprotein lipase and hepatic triglyceride lipase in rats

Treadmill training for 1 hr/day for 10 wk did not significantly affect chylomicron, very low density, low density, or high density lipoprotein cholesterol in rats fed either a high carbohydrate (glucose) or high fat (coconut oil) diet. Lipoprotein lipase activity of heart, adipose tissue, and skeletal muscle fibers was also unaffected by training. Carbohydrate feeding, however, when compared to fat feeding significantly lowered all lipoprotein cholesterol values as well as heart and fast-oxidative-glycolytic muscle fiber lipase activity and, conversely, significantly elevated hepatic triglyceride lipase activity. Thus, in the rat, an alteration in the serum lipid profile did not occur as a result of training, but dietary differences did independently influence serum lipid levels and tissue enzyme activity. It is suggested that human studies need to control for the possible independent influence of dietary differences when investigating the effects of training on lipoprotein metabolism.     

Growth-hormone-induced changes in postheparin plasma lipoprotein lipase and hepatic triglyceride lipase activities

A comparison of treated and untreated patients with growth hormone deficiency revealed that administration of growth hormone reduced lipoprotein lipase and hepatic lipase activities, total cholesterol, and high-density lipoprotein cholesterol concentrations. The possible significance of these results is discussed.     

Decreased activities of lipoprotein lipase and hepatic triglyceride lipase in patients with gout

Postheparin plasma lipoprotein lipase (LPL) and hepatic triglyceride lipase (HTGL) activities were measured in 30 male primary gout patients as well as in control subjects. The activities of these lipolytic enzymes were significantly decreased in the patients as compared with the controls (gout v control; LPL, 5.4 +/- 0.4 v 7.9 +/- 0.9 U; HTGL, 14.6 +/- 2.0 v 17.9 +/- 3.4 U) when matched with serum triglyceride concentration. Further, LPL activity was negatively correlated with serum- and very-low-density lipoprotein (VLDL)-triglyceride in gout patients, while that of HTGL was negatively correlated with low-density lipoprotein (LDL)-triglyceride in both gout patients and control subjects. These results suggest that decreased activities of LPL and HTGL may contribute, in part, to the increased concentrations of serum-, VLDL-, and LDL-triglyceride seen in gout patients, leading to a higher risk for coronary atherosclerotic diseases in gout.     

Effect of amiodarone on serum lipids, lipoprotein lipase, and hepatic triglyceride lipase

We have determined the effects of chronic amiodarone treatment on lipid metabolism and compared them with those of hypothyroidism in the rat. Serum triglyceride was lower in both amiodarone-treated and hypothyroid rats; total cholesterol was higher in hypothyroid rats, and serum high density lipoprotein cholesterol remained unchanged. Amiodarone increased adipose tissue lipoprotein lipase activity. Hepatic triglyceride lipase activity was decreased in both hypothyroid and amiodarone-treated groups. The effects of amiodarone on serum triglyceride and adipose tissue lipoprotein lipase were reversed by concomitant administration of T3. The activity of hepatic triglyceride lipase, however, was not increased. Our findings indicate that amiodarone causes marked changes in lipid metabolism which are similar to those found in hypothyroidism.