犬骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化的实验研究

目的:研究犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)在体外诱导分化为成骨细胞的方法和活性检测。方法:抽取犬骨髓3 mL,使用成骨条件培养液,贴壁法体外培养,将培养的第2、3代细胞进行透射电镜、流式细胞仪、生长曲线、碱性磷酸酶、Von Kossa和免疫组化等检测。结果:第2代细胞碱性磷酸酶染色呈阳性表达;第3代细胞Von Kossa染色、骨桥素、骨涎蛋白和骨钙蛋白呈阳性表达;第3代细胞透射电镜显示高尔基体和线粒体丰富;流式细胞仪检测显示第3代处于S期的细胞比例较第2代增加。结论:犬骨髓基质细胞在体外能定向诱导分化为成骨细胞。     

大鼠脂肪干细胞体外定向诱导分化为成骨细胞的研究

目的：研究脂肪组织来源干细胞（adipose tissue-derived stem cells，ADSCs）在体外分离培养、诱导分化为成骨细胞的能力，探讨其作为骨组织工程种子细胞的可行性。方法：从SD大鼠腹股沟脂肪垫分离出脂肪组织，通过Ⅰ型胶原酶消化法获取原代ADSCs，适时传代。逐日倒置显微镜下观察细胞形态及增殖特征。第3代细胞用成骨诱导培养基向成骨细胞诱导分化，并进行碱性磷酸酶染色、VonKossa染色及免疫细胞化学染色鉴定成骨细胞特性。结果：从大鼠脂肪组织中分离培养出ADSCs，体外形态类似成纤维细胞，增殖迅速。在地塞米松、抗坏血酸、β-甘油磷酸钠及1，25-（OH）2 VitD，诱导下，ADSCs表现出成骨细胞特性：ALP活性显著增高，Von Kossa染色出现钙化结节，OC、Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色阳性。结论：ADSCs易于分离培养，体外扩增迅速，经矿化诱导后可分化为成骨细胞，可作为骨组织工程的种子细胞。     

Balb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞向成骨细胞诱导分化的体外研究

目的：探讨矿化液体外诱导外胚间充质细胞向成骨细胞分化的过程。方法：取妊娠12．5d胎鼠第三代下颌突外胚间充质细胞，培养于含10mmol／L β-甘油磷酸钠、100μg/mL维生素C、10nmol／L地塞米松、150mL／L胎牛血清的DMEM中。相差显微镜下观察细胞的形态变化，免疫组化鉴定细胞性质，碱性磷酸酶染色及活性检测，矿化结节Von Kossa染色。结果：培养14d，细胞形态发生明显变化，呈多边形、立方形，抗I型胶原染色阳性。碱性磷酸酶活性增高，碱性磷酸酶染色阳性，矿化结节形成。结论：矿化液可诱导外胚间充质细胞向成骨细胞分化。     

LIM矿化蛋白1在成骨分化前后人牙囊细胞中的表达

目的：研究人牙囊细胞成骨分化前后LIM矿化蛋白-1的表达。探讨LIM矿化蛋白-1在牙囊细胞向牙周组织分化过程中的作用。方法：组织块加酶消化法分离培养人牙囊细胞,实验组培养液中加入矿化诱导剂,对照组不加矿化诱导剂。培养4周后,免疫细胞化学检测骨涎蛋白的表达;Von Kossa染色检测矿化结节的形成。矿化诱导前后,采用RT-PCR技术检测LIM矿化蛋白-1。结果：培养4周,实验组矿化结节形成,骨涎蛋白免疫细胞化学呈阳性表达, Von Kossa染色阳性;对照组未形成矿化结节,骨涎蛋白表达弱阳性,Von Kossa染色阴性。 RT-PCR结果显示LIM矿化蛋白-1在实验组强阳性表达,对照组弱表达。结论：LIM矿化蛋白-1与胚胎期人牙囊细胞的体外矿化过程相关,提示LIM矿化蛋白-1可能在胚胎期牙囊细胞的分化、矿化中发挥一定作用。     

BMP受体在大鼠骨髓间充质细胞成骨中的作用

目的:研究骨形成蛋白受体(BMP-R)在大鼠骨髓间充质细胞(BMSCs)成骨中的作用机制。方法:分离大鼠BMSCs,将原代细胞分为4组,分别应用普通培养基(CM)、成骨诱导培养基(OM)、骨形成蛋白-2(BMP-2)和OM+BMP-2诱导培养基培养。应用碱性磷酸酶(ALPase)活性和钙结节染色(Von Kossa法)检测成骨分化程度,RT-PCR检测骨形成蛋白受体(BMP-R)的表达情况。采用SPSS16.0软件包对数据进行单因素方差分析。结果:OM可诱导BMSCs成骨分化,表现出高碱性磷酸酶活性和基质矿化能力。BMP-2可提高OM诱导BMSCs成骨分化的能力;OM在早期即可诱导BMP-RⅠA和BMP-RⅡ的表达,而BMP-2诱导BMP-R较迟。结论:BMP-2可提高OM诱导BM-SCs分化成骨的能力,BMP-R在BMSCs分化成骨中起重要作用。     

瘦素对人牙髓干细胞增殖及分化的影响

目的 探讨瘦素(leptin)对体外培养的牙髓干细胞增殖、分化的影响.方法 体外培养牙髓干细胞,采用MTT法及流式细胞技术检测不同浓度瘦素对牙髓干细胞增殖作用的影响,通过碱性磷酸酶、Yon Kossa染色及矿化相关蛋白(DSP、OCN)的免疫组化染色来检测瘦素对牙髓干细胞分化的影响.结果 瘦素对牙髓干细胞增殖没有显著作用,但是对牙髓干细胞的ALP活性呈浓度依赖性促进.Von Kossa染色可见矿化结节形成,DSP及OCN表达阳性.结论 瘦素可促进牙髓干细胞向成牙本质细胞分化.     

富血小板血浆PRP的体外骨诱导作用研究

目的 :探讨在体外培养中富血小板血浆 (Platelet -RichPlasma ,PRP)对骨髓基质细胞诱导成骨的影响。方法 :从自体静脉血中提取PRP ,配制成条件培养液 ,并作用于培养状态的骨髓基质细胞 ,染色检测细胞碱性磷酸酶表达情况 ,钙化结节形成率 ,放免法测定培养液中骨钙素的含量。结果 :骨髓基质细胞经诱导培养后 ,碱性磷酸酶、骨钙素表达明显增加。结论 :体外培养时 ,PRP可促进骨髓基质细胞的成骨分化。     

外周血作为骨组织工程种子细胞来源的初步研究

目的：研究外周血作为骨组织工程种子细胞来源的可能性。方法：密度离心法分离兔外周血单个核细胞,冲洗收集长骨内骨髓,将两者在体外进行培养。检测两种来源细胞的表面分子标志物及成脂、成骨能力差异。结果：骨髓原代培养细胞集落形成早,细胞形态均一。传代后CD29阳性,CD34阴性;成脂诱导时脂滴出现早且多;成骨诱导时碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原表达早,矿化结节数量多且体积大。外周血原代培养细胞集落形成晚,形态不一,种类多。传代后CD29阳性,CD34弱阳性;成脂诱导时脂滴出现晚且少;成骨诱导时碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原表达较晚,有散在的矿化结节和管样结构形成。结论：外周血内含有间充质干细胞、内皮祖细胞等多种干细胞,可以作为血管化组织工程骨的种子细胞来源,但需要进一步优化培养方法。     

体外培养的大鼠骨髓基质细胞的生物学特性

目的：研究体外培养的大鼠骨髓基质细胞的生物学特性及基成骨细胞表型特征。方法：分离大鼠四肢长骨髓基质细胞,常规和矿化培养液培养,测定细胞生长曲线,碱性成纤细胞生长因子（bFGF）、重组人骨形成蛋白－2（rhBMP-2)及矿化培养液对骨髓基质细胞性磷酸酶（ALP）活性的影响,观察矿化结节的形成。结果：大鼠骨髓基质细胞群体倍增时间（DT）为66．1h;在矿化液培养条件下细胞DT为50．3h。bFGF和rhBMP－2均不同程度增加骨髓基质细胞碱性磷酸酶的活性。矿化液有较明显的增加骨髓基质细胞碱性磷酸酶活性的作用,用茜素红染色法显示较多的深红色矿化结节。常规培养条件下大鼠骨髓基质细胞生长虽呈现密集单层,没有矿化结节形成。结论：大鼠骨髓基质细胞在体外可以稳定传代培养,在矿化培养液诱导培养条件下可以向成骨细胞分化,bFGF和rhBMP－2有助于骨髓基质细胞表现成骨细胞表型特征,提示骨髓基质细胞在骨移植研究领域有重要的应用价值。     

应用人恒牙牙髓干细胞与明胶支架构建组织工程骨的研究

目的构建由人恒牙牙髓干细胞和三维明胶支架组成的组织工程骨,并验证其成骨效果。方法从正畸治疗减数拔除的恒前磨牙牙髓组织中应用酶消化法获得牙髓细胞,单抗Stro-1标记、免疫磁珠阳性分选系统分选获得牙髓干细胞。第3代细胞被分别接种到6孔板或三维明胶支架上进行成骨向诱导培养,诱导14天后支架组移植入裸鼠背部皮下。应用ALP染色、Von Kossa染色验证牙髓干细胞的体外成骨能力;应用X线、HE染色和免疫组化验证组织工程骨的体内成骨效果。结果牙髓干细胞体外成骨向诱导后7、14天ALP染色呈阳性;14、21天Von Kossa染色形成矿化结节。在体内组织工程骨成骨明显,X线显示实验侧支架内有团块状高密度阻射影;HE染色显示大量的骨组织形成;免疫组化显示骨结构区域骨桥蛋白、骨涎蛋白和骨钙素阳性表达。结论人恒牙牙髓干细胞和明胶支架构建形成了组织工程骨。     

柠檬精油对牙周致病菌抑制作用及其安全性初步研究

目的:探讨柠檬精油对牙周致病菌的体外抗菌活性及对细胞增殖的影响。方法:采用微量液体稀释法测定柠檬精油对Pg、Fn、Aa、Pi的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)及最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC);以较低浓度的MIC为标准稀释LEO作为实验组,采用MTT法测定柠檬精油对HUVECs的毒性作用,明确抑菌浓度下LEO的安全性。结果:柠檬精油对牙周主要致病菌均有抑菌作用,Pg、Fn、Aa、Pi的MIC分别是9.0 g/L、4.5 g/L、4.5 g/L、9.0 g/L,Aa、Fn的 MBC是9.0 g/L,Pg、Pi的MBC未测得。1/2MIC、1/20MIC浓度的LEO能够抑制人脐静脉内皮细胞的生长,而低于1/200MIC浓度的LEO则对人脐静脉内皮细胞的生长没有影响,其中1/200MIC浓度的LEO作用明显优于0.02%的CHX。结论:体外环境中,柠檬精油对牙周致病菌Pg、Fn、Aa、Pi具有抗菌活性,低浓度应用对机体相对安全。     

Oral cancer: molecular technologies for risk assessment and diagnosis

Purpose: The effective biomarkers related to diagnosis, metastasis, drug resistance and irradiation sensitivity of oral cancers will help the pathologist and oncologist to determine the molecular taxonomy diagnosis and design the individualization treatment for the patients with oral cancers.     

Computer-assisted planning for maxillofacial prosthodontic rehabilitation

Computerized tomography (CT) planning and the use of CT derived surgical templates for implant placement have shown promise for restoring function within months after surgical reconstruction of acquired post-oncologic defects.     

Stimulated whole saliva components in children with Down syndrome

The authors report on the components of stimulated whole saliva from children with Down syndrome—including pH, flow rate, sialic acid and protein concentrations, and amylase and peroxidase activity. Saliva samples were collected from 35 children aged 6–10 years. Of the participants, 17 had Down syndrome and 18 did not. To stimulate saliva production, the children chewed a piece of parafilm for 10 minutes before the sample was collected. Soon after collecting the saliva sample, the authors measured pH using a portable pH-meter. Sialic acid levels were determined with a thiobarbituric acid assay. Protein content was determined with Folin's phenol reagent. Amylase was assayed and the authors measured the maltose produced by the breakdown of starch and peroxidase using ortho-dianisidine.
No statistically significant difference was observed in levels of sialic acid (free and total) between the two groups. Protein concentration was about 36% higher in the group with Down syndrome. However, the salivary flow rate, pH, and amylase and peroxidase activities were lower among the children with Down syndrome.     

Effect of Pingyangmycin on human venous malformation endothelial cells

Purpose: Venous malformations are common vascular anomalies with a propensity of the head and neck. Intralesional injection of Pingyangmycin (PYM, bleomycin A5 hydrochloride) is a widely used sclerotherapy method for the treatment of venous malformation.     

替牙期骨性Ⅲ类错牙合患者颞下颌关节特征的锥形束CT研究

目的:采用锥形束CT(CBCT)研究替牙期骨性Ⅲ类错牙合患者颞下颌关节的影像学特征,探讨Ⅲ类功能状态下,颞下颌关节的生长、改建机制。方法:从就诊于昆明医科大学附属口腔医院正畸科的患者中选取符合纳入标准的替牙期骨性Ⅲ类错牙合患者及骨性Ⅰ类错牙合患者各20名,使用NNT viewer 5.3图像处理软件进行三维重建及线距和角度的测量,并进行统计学分析。结果:替牙期骨性Ⅲ类错牙合患者组和替牙期骨性Ⅰ类错牙合患者组对比结果为:矢状面双侧关节前间隙偏小、双侧关节上间隙偏小、双侧关节结节斜度偏小;冠状面双侧关节内间隙偏小,双侧关节上间隙偏小,双侧关节外间隙偏小,右侧髁状突角度偏小;横截面右侧髁状突前后径偏小。结论:替牙期骨性Ⅲ类错牙合患者颞下颌关节发育不充分,呈现髁状突,关节窝深度,关节结节斜度;冠状面关节内、外间隙均较小的特征。骨性Ⅲ类错牙合患者髁状突在关节窝中处于前置近关节窝顶位置。骨性Ⅲ类错牙合患者颞下颌关节影像学特征与其功能状态相适应。     

牙髓再生的研究现状

目前,根管治疗术在临床上已得到了广泛的应用并成功的保存了患牙,但其仍有许多术后并发症。随着组织工程技术在口腔领域的应用,构建一种组织工程化牙髓进行牙髓-牙本质复合体的再生治疗成为可能。近年来国内外已有很多关于牙髓再生的研究,并且已经取得了一定成果。本文将对目前国内外牙髓再生的研究进展现状作一综述。     

Ghlorhexidine as a root canal medicament for treating inflammatory lesions in the periodontal space

Abstract— The purpose of the present study was to investigate the therapeutic effect of intra-canal application of chlorhexidine on inflammatory root resorption. Dental pulps from monkey incisors were infected and resealed prior to extraction of the teeth. Root dentin was mechanically exposed and the teeth were replanted under aseptic conditions. After 4 weeks, the experimental teeth were dressed with chlorhexidine gel and resealed. Animals were sacrificed 4 weeks later, and their jaws prepared for histologic examination. Results showed that both marginal and apical periodontal inflammation and resorption were reduced in the chlorhexidine-treated teeth. It was concluded that the use of intra-canal chlorhexidine may be a useful adjunct in the treatment of inflammatory root resorption, but further human trials need to be undertaken before its clinical use can be recommended.     

小鼠牙髓干细胞同种异体移植后体内免疫反应初探

目的:初步探究小鼠牙髓干细胞同种异体移植后的全身免疫反应。方法:牙髓干细胞分离获得自C57BL/6 小鼠牙髓组织,培养至第3 代,与纳米羟基磷灰石(n-HA)复合培养形成复合物,扫描电镜观察其生长黏附情况。40只4周龄的C57BL/6 小鼠随机分成两组。实验组将复合物移植入上背部皮下,对照组将纳米羟基磷灰石植入上背部皮下,术后均使用外科方法严密缝合创口。两组动物术后均观察4周、6周处死,分离脾脏,制成脾淋巴细胞悬液,流式细胞仪测定CD4⁺、CD8⁺的值。结果:牙髓干细胞在体外与纳米羟基磷灰石结合良好;免疫组化染色实验组4周、6周均可见牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)阳性表达;实验组与对照组相比,术后4周、6周CD4⁺/CD8⁺值均无明显差异。结论:牙髓干细胞同种异体移植后,尚不能够引起机体的免疫排斥反应,其在体内仍具有低免疫原性,有望成为组织工程同种异体种子细胞来源。