诊断超声对大鼠卵巢细胞凋亡的影响

目的探讨诊断超声对大鼠卵巢细胞凋亡状况的影响.方法健康SD雌性大鼠30只,鼠龄出生后80～85 d,体重(230±5)g,随机分为5组,应用Siemens Sonoline Prima超声诊断仪,探头频率 7.5 MHz,超声输出功率 3.9 mW,空间峰值时间平均声强(ISPTA)为13 mW/cm2,对SD大鼠卵巢持续辐照3 0 min,分别于辐照后12 h(Ⅰ组)、24 h(Ⅱ组)、48 h(Ⅲ组)取材;超声输出功率 2.0 mW,ISPTA为7 mW/cm2,对SD大鼠卵巢持续辐照30 min,辐照后24 h取材(Ⅳ组).对照组为空照组.进行常规石蜡包埋,切片,TUNEL技术检测上述各组凋亡细胞,光学显微镜进行形态学观察,透射电子显微镜观察超微结构.结果对照组和各辐照组大鼠卵巢组织细胞凋亡率差异有显著性意义(P <0.01),12 h细胞凋亡率增加,24 h增加最多,48 h细胞凋亡率下降.光学显微镜和透射电子显微镜观察到细胞凋亡的形态学改变染色质致密,固缩聚集于细胞核核膜,呈境界分明的块状或新月形小体,细胞核裂解.结论诊断超声辐照大鼠卵巢可诱导细胞凋亡增加,但存在一定的可复性,且细胞凋亡率与超声输出功率呈正相关.     

诊断超声对大鼠输卵管组织细胞凋亡的影响

目的：检测诊断超声对大鼠输卵管组织细胞凋亡状况的影响，探讨诊断超声的安全性。方法：应用超声诊断仪，采用不同超声输出功率，对SD大鼠输卵管持续辐照30min。结果：对照组和各照射组大鼠输卵管组织细胞凋亡率有显著差异（P＜0．01），12h细胞凋亡率增加，24h增加最多，48h细胞凋亡率下降。光学显著镜观察到细胞凋亡的形态学改变：染色质致密固缩聚集于细胞核核膜，细胞核裂解。结论：诊断超声辐照大鼠输卵管可诱导细胞凋亡增加，但存在一定的可复性，且细胞凋亡率与超声输出功率呈正相关。     

超声诱导K562细胞凋亡机制的研究

目的本实验探讨超声体外诱导K562细胞凋亡的影响及其机制。 方法频率为1．8MHz的超声波辐照正常外周血单核细胞和体外培养的K562细胞，辐照后用光学显微镜观察凋亡细胞形态学改变、流式细胞仪检测原位末端脱氧核苷酸转移酶（TUNEL）和p53、bcl-2、caspase-3、Fas、FasL蛋白表达水平。 结果电压为10mV超声辐照细胞10min后12h和24h，光学显微镜下可见凋亡小体形成等典型形态学改变，K562细胞凋亡率及p53、caspase-3、Fas、FasL蛋白表达水平分别显著高于对照组（P〈0．001）；而bcl-2蛋白表达水平明显低于对照组（P〈0．001）。 结论超声可以诱导K562细胞凋亡，其机制可能与p53、caspase-3、Fas、FasL蛋白表达增高及bcl-2蛋白表达降低有关。     

米非司酮对人宫颈癌Hela细胞体外作用的研究

目的 观察米非司酮对人宫颈癌Hela细胞体外生长的影响。方法 选用生长良好的人宫颈癌Hels细胞株进行体外培养，不同浓度的米非司酮作用72h后，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定米非司酮对细胞生长的抑制作用；应用光学显微镜、透射电子显微镜观察药物作用后细胞的形态学改变。终末脱氧核苷酸末端转移酶介导缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡情况，计数凋亡细胞，计算凋亡率。结果 米非司酮浓度分别为5、10、20、40μmol／L时作用72h，细胞生长受到不同程度的抑制，抑制率分别为36．74％、49．62％、61．96％、71．34％，明显高于对照组（P〈0．01）；同时出现明显的凋亡现象，光学显微镜、透射电子显微镜下均可观察到细胞凋亡的形态学改变，TUNEL法证实了凋亡率分别为28．67％、39．00％、54．33％、64．33％，明显高于对照组（P〈0．01），各浓度间凋亡率比较差异亦有显著性（P〈0．01）。结论 米非司酮显著抑制人宫颈癌Hels细胞的生长，并具有诱导细胞凋亡的作用，随着药物浓度的增加，效应明显增强。     

低频超声辐照联合微泡对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的观察低频超声辐照联合微泡对体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响。方法联合不同浓度的SonoVue(0、0.5×106、1.0×106、1.5×106、2.0×106/mL),使用42.6kHz超声分别辐照大鼠主动脉平滑肌细胞10s、20s、30s,空白对照组不作任何处理。台盼蓝染色分析辐照后即刻细胞存活率,流氏细胞仪观察辐照后24h细胞凋亡率。结果细胞的死亡和凋亡与微泡浓度及辐照时间相关。当超声波在微泡浓度达到或超过0.5×106/mL,联合辐照30s,以及微泡浓度达到2.0×106/mL,联合辐照10s、20s时,细胞大量死亡。在超声辐照10s时,辐照后24h细胞凋亡率随微泡浓度的增加而增加,但在微泡浓度低于1.0×106/mL时,细胞即刻存活率并无显著减少。在超声辐照20s时,细胞即刻存活率随微泡浓度的增加而减少,辐照后24h细胞凋亡率在微泡浓度为0.5×106/mL、1.0×106/mL、1.5×106/mL时差异无统计学意义。结论在一定空化强度范围内,低频超声辐照后24h细胞凋亡率随强度增加而增加,但超过一定程度,则无法增加细胞凋亡率,只会导致细胞死亡。低频超声辐照联合微泡的空化作用可在短时间内诱导体外培养的大鼠血管平滑肌细胞凋亡。     

超声诱导培养大鼠血管平滑肌细胞凋亡的研究

目的　研究不同剂量超声对培养大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)凋亡的影响 ,为超声治疗的临床应用提供实验依据。方法　不同剂量、频率为 650 k Hz的超声波辐照体外培养的大鼠血管平滑肌细胞。照射后 2 4h,用原位末端脱氧核苷酸转移标记 (TUNEL )技术检测凋亡细胞 ,用免疫组织化学方法检测 B细胞淋巴瘤 -2伴 Bax蛋白表达。结果　 1.0 W/ cm2及 0 .5W/ cm2超声辐照细胞 5min,2 4h后细胞凋亡率明显及 Bax蛋白表达率分别显著高于对照组 (P<0 .0 5)。结论　声强为 0 .5W/ cm2 及 1.0 W/ cm2 超声辐照大鼠血管平滑肌细胞 5min,能诱导其凋亡的发生及 Bax蛋白表达率的提高     

神经生长因子对新生的大鼠小脑皮质神经细胞凋亡的影响

目的:探讨神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)对小脑皮质神经元凋亡的影响,为临床治疗小脑变性疾病的提供新的措施。方法:实验于2001-12/2003-03在锦州医学院科技楼实验室完成。以原代培养的新生SD乳鼠小脑皮质细胞建立谷氨酸诱导的神经细胞凋亡模型。通过流式细胞术检测神经细胞凋亡率;利用光学显微镜技术观察细胞凋亡的形态学改变。结果:谷氨酸(500μmol/L)作用5min可诱导小脑神经细胞凋亡。应用流式细胞仪检测发现受损细胞在G1峰前出现一个G1亚峰,凋亡细胞所占比例为50.2%及45.7%,通过荧光染色观察发现模型组细胞核出现染色体聚集,凋亡小体形成等形态学变化。流式细胞仪检测结果显示模型组与正常对照组亦有明显差异,光学和荧光显微镜观察发现受损细胞的形态学变化也得到明显改善。结论:外源性NGF能够减轻大鼠小脑皮质神经细胞凋亡。     

神经生长因子对新生的大鼠小脑皮质神经细胞凋亡的影响

目的：探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对小脑皮质神经元凋亡的影响，为临床治疗小脑变性疾病的提供新的措施。方法：实验于2001-12／2003-03在锦州医学院科技楼实验室完成。以原代培养的新生SD乳鼠小脑皮质细胞建立谷氨酸诱导的神经细胞凋亡模型。通过流式细胞术检测神经细胞凋亡率；利用光学显微镜技术观察细胞凋亡的形态学改变。结果：谷氨酸(500μmol／L)作用5min可诱导小脑神经细胞凋亡。应用流式细胞仪检测发现受损细胞在G1峰前出现一个G1亚峰，凋亡细胞所占比例为50．2％及45．7％，通过荧光染色观察发现模型组细胞核出现染色体聚集，凋亡小体形成等形态学变化。流式细胞仪检测结果显示模型组与正常对照组亦有明显差异，光学和荧光显微镜观察发现受损细胞的形态学变化也得到明显改善。结论：外源性NGF能够减轻大鼠小脑皮质神经细胞凋亡。     

经阴道彩色多普勒超声辐照对人早孕绒毛细胞凋亡的影响

目的探讨诊断用经阴道彩色多普勒超声(TVCD)辐照人早孕孕囊一定时间后对人绒毛细胞凋亡率的影响,以期为TVCD在产科的安全应用提供支持依据。方法采用流式细胞仪检测经不同辐照时间及辐照后不同时间取材的绒毛细胞进行凋亡率的分析。结果对照组偶见散在的早期凋亡细胞,早期凋亡率极低;照射各组绒毛细胞的早期凋亡率随着辐照时间的延长而增高;但随着时间的推移(72h后),绒毛细胞早期凋亡率下降至正常范围。结论TVCD辐照人早孕绒毛尽管能造成早孕绒毛细胞凋亡,凋亡率随着辐照时间的延长而增高,但这种早孕绒毛细胞凋亡在一定超声辐照范围内可以恢复到正常范围。     

不同辐照模式低频超声对前列腺癌DUl45细胞的影响

目的探讨不同辐照模式低频超声对前列腺癌DUl45细胞的影响。方法对体外培养的人前列腺癌DUl45细胞悬液进行不同模式的低频超声辐照：第A组为对照组,第B组为脉冲波辐照模式,第C组为连续波辐照模式。辐照后即刻用荧光显微镜检测FD500染色阳性率反映细胞膜通透性改变情况;辐照后24h用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果与对照组相比,两种模式的超声波处理组FD500染色阳性率均增加;与连续波模式相比,脉冲波模式FD500染色阳性率增加明显,差异有统计学意义（P〈O．01）。脉冲波模式轻微抑制细胞增殖,连续波能明显抑制细胞增殖（P〈0．05）。与对照组相比,两种模式的超声波处理组DUl45细胞凋亡率均增加;与脉冲波模式相比,连续波模式DUl45细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论不同辐照模式低频超声能够影响前列腺癌DUl45细胞的生物学行为。应用于基因转染或载药目的时,选择脉冲波模式增加细胞膜通透性;应用于治疗目的时,选择连续波模式能够抑制肿瘤生长。     

诊断超声与细胞凋亡

目的 探讨诊断超声与细胞凋亡的关系。方法 应用ＨＰ８５００彩色多普勒超声诊断仪,持续照射４２只大鼠幼仔睾丸３０ｍｉｎ,依据照射后取标本时间不同,随机分为７组;对照组为空白照射组,Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ,Ⅵ组分别为照射后即赢利ｈ,１２ｈ,２４ｈ,４８ｈ,９６ｈ取材组。     

光动力作用诱导人鼻咽癌细胞凋亡超微细胞形态改变

目的 探讨光动力疗法（PDT）对人鼻咽癌细胞株HHNE1调亡的作用。方法 采用从光导纤维输出的氦氖激光，功率150mW，波长632.8nm，能量密度10J/cm^2，照射含癌光啉光敏剂的鼻咽癌细胞，分别在PDT后3，6，12，24，36和48h后，光镜和电镜观察凋亡细胞的形态学改变，并计数细胞凋亡率（%）。结果 人鼻咽癌细胞株HNE1经PDT24h后出现细胞凋亡的典型形态学改变，12h后出现早期凋亡细胞的形态特征，光镜和电镜下可见细胞大小不一，细胞质浓缩，核固缩，染色质边集，进而细胞裂解和凋亡小体形成。细胞凋亡率分别为0%，1%，6%，71%，86%和95%。细胞超微结构改变的严重程度依PDT后时间的增加而逐渐递增。结论 PDT对HNE1细胞具有明显杀伤效应，并诱导其发生调亡。     

丙戊酸钠诱导骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1凋亡的实验研究

为了探讨丙戊酸钠（sodium valproate,VPA）对骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1的生长抑制及诱导凋亡作用,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测VPA对细胞生长的抑制作用;采用光学显微镜和电子显微镜观察VPA作用后细胞形态的变化;应用流式细胞术（FCM）检测不同浓度VPA作用后细胞凋亡的比例和细胞周期分布的变化。结果显示：VPA对MUTZ-1细胞的生长抑制作用呈现时间和剂量依赖性;经4mmol/LVPA处理MUTZ-1细胞72小时后,细胞呈现典型的凋亡形态特征,光学显微镜下可见凋亡细胞胞体固缩、核固缩、核碎裂及凋亡小体;透射电子显微镜下可见凋亡细胞核染色质边集、胞浆浓缩、密度增加,胞浆内大小不规则的染色质团块;流式细胞术结果表明,细胞凋亡率随着VPA浓度的增加而逐步增高,G0/G1期细胞比例随着VPA浓度的增加而逐渐增多,S期细胞比例逐渐减低,细胞被阻滞在G0/G1期。结论：VPA通过G0/G1期阻滞诱导MUTZ-1细胞凋亡,从而抑制MUTZ-1细胞增殖。     

葛根素对去卵巢大鼠心肌超微结构的影响

目的探讨葛根素对去卵巢大鼠心肌的影响,以期为临床研究更年期心脏疾病提供形态学依据。方法雌性健康SD大鼠32只,分为假手术组、动物模型组、雌激素组和葛根素组。光镜下观看心肌组织学变化,透射电镜下观察心肌超微结构的变化。结果去卵巢后,大鼠心肌细胞核周隙不规则扩张,染色质浓集成块;线粒体嵴融合、消失、排列紊乱、卷曲呈髓鞘样变化,嵴间隙扩张、明显空泡化;闰盘间隙不规则增宽。雌激素、葛根素使上述病变减轻。结论葛根素对去卵巢大鼠心脏有保护作用。     

蓝光诱导视网膜光感受器变性大鼠模型的实验研究

目的：建立蓝光诱导视网膜光感受器变性大鼠模型,评价其稳定性及可重复性。方法：选用成年雄性SD大鼠,予缝线开睑,1%阿托品扩瞳,经24h暗适应后,放入光照箱中接受24h强度为2 500Lux的宽谱蓝光照射。在光照后的1d、3d、7d、14d应用光镜、TUNEL染色、透射电镜观察实验大鼠视网膜组织结构的改变及细胞凋亡情况;应用闪光ERG评价视网膜功能。结果：光照后视网膜光感受器的内外节破坏,外核层排列紊乱,核质固缩,核层逐渐变薄,14d时减少达60.09%;光照后1d,外核层出现大量TUNEL（＋）细胞,经透射电镜证实光感受器的死亡方式为凋亡;光照后14d,视网膜功能显著下降,0dB光照强度不能诱导出Photic-ERG波形。结论：2 500Lux蓝光照射能够诱导视网膜光感受器发生典型的以凋亡为特征的变性过程,具有较好的稳定性和可重复性。     

超声联合载卡莫司汀脂质微泡诱导大鼠C6细胞凋亡

目的 探讨低频超声介导载卡莫司汀脂质微泡诱导大鼠神经胶质瘤C6细胞凋亡的机制.方法 采用MTT法检测各实验组不同时间点的细胞抑制率,确定实验参数;流式细胞仪分析C6细胞的凋亡率及细胞周期;透射及扫描电镜观察C6细胞超微结构的变化.结果 超声+10%载卡莫司汀微泡组在6 h时段细胞抑制率、细胞凋亡率均最高,与其他实验组及对照组相比差异均有显著统计学意义(P<0.01).超声破坏载药微泡使增殖期(S期)细胞比例减少,电镜观察超声联合载药微泡可使C6细胞出现凋亡.结论 低频超声介导载卡莫司汀脂质超声微泡能诱导C6细胞凋亡,可能成为胶质瘤治疗的一种新方法.     

奥沙利铂诱导人骨髓瘤细胞RPMI8226凋亡机制的实验研究

本研究探讨奥沙利铂对人骨髓瘤细胞RPMI8226的增殖抑制作用及其分子机制。将奥沙利铂作用于骨髓瘤细胞,用MTT法检测细胞增殖抑制率,光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态及超微结构变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布,半定量RT—PCR检测Bcl-2、caspase-8及caspase-3mRNA表达量的变化,Western blot检测Bcl-2蛋白表达量变化。结果表明,奥沙利铂可抑制RPMI8226细胞增殖,抑制率呈时间（r=0．979）和浓度（r=0．949）依赖性增强;24h后在光学显微镜下可见奥沙利铂组细胞数量减少,排列紊乱,细胞形态变得不规则,体积变小,细胞碎片增多,可见凋亡细胞;48h电子显微镜下可见细胞典型凋亡改变,凋亡小体形成。流式细胞术检测结果显示,奥沙利铂组RPMI8226细胞凋亡率明显增高（P〈0．05）;奥沙利铂作用24h后,骨髓瘤细胞被阻滞于S期（P〈0．05）;而作用48h后G0／G1期细胞所占比例明显增高（P〈0．05）;奥沙利铂作用48h,细胞既l-2mRNA与Bcl-2蛋白表达量未见明显变化,caspase-8及caspase-3mRNA表达量增加（P〈0．05）。结论：奥沙利铂可诱导RPMI8226细胞凋亡,其机制可能与其将细胞阻滞于S期,上调caspase-8、caspase-3mRNA表达有关;奥沙利铂诱导RPMI8226细胞凋亡可能不通过调节bcl-2基因表达实现。     

The glomerulus in experimental renal disease in rats as observed by light and electron microscopy

Nephrotoxic serum disease in rats has been studied by light and electron microscopy from 1 hour to 10 weeks after production of the disease. By light microscopy leucocytic infiltration of the glomerular capillary was observed between the 3rd and 6th hour. At 6 hours an increase in colloidal iron-positive material was observed coating the extraluminal surface of the capillaries. Also at this time swelling of the endothelial cells becomes prominent. By 72 hours, thickening of the basement membrane was observed. Glomerular capillary thrombi were observed in approximately half the tissue examined in the first 2 weeks of disease. 50 per cent of the animals showed severe chronic lesions, exudation into the capsular space, crescent formation, and obliteration of glomeruli. At 1 hour electron microscopic pictures showed that osmophilic material may line the foot processes of the epithelial cells and obliterate all but narrow channels of the space between the feet. By 6 hours thickening of the basement membrane was prominent. This change persisted throughout 10 weeks of observation. The tissue from animals which had severe chronic alterations by light microscopy revealed changes which could not be interpreted at this time.     

低频低功率超声联合微泡对DU145细胞及PC3细胞早期凋亡的影响

目的比较低频低功率超声联合微泡造影剂对人前列腺癌DU145细胞与PC3细胞早期凋亡率的不同影响。方法使用低频低功率超声连续波辐照人前列腺癌DU145细胞和PC3细胞悬液60 s,实验中两种细胞系各分为4组:空白对照组(A组)、单纯微泡组(B组)、单纯超声组(C组)和超声联合微泡组(D组),辐照后细胞继续培养24 h,流式细胞仪检测细胞早期凋亡情况,透射电镜观察细胞形态改变。结果两种细胞D组的早期细胞凋亡率明显高于其余各组(P﹤0.01),C组亦均高于A组(P﹤0.05),A、B组之间差异无统计学意义;两种细胞经相同处理后,C、D组PC3细胞的早期细胞凋亡率均高于DU145细胞(P﹤0.01)。透射电镜下两种细胞D组可见癌细胞体积变小变圆,空泡增多,有明显的凋亡小体形成,PC3细胞内还可见大量的自噬体出现。结论低频低功率超声联合微泡造影剂能明显诱导人前列腺癌细胞的早期凋亡,且对PC3细胞早期细胞凋亡作用强于DU145细胞。     

实验性大鼠视网膜光损伤的发生机制

目的研究视网膜光损伤与视细胞凋亡的相互关系,以探讨视网膜光损伤的发生发展机制.方法所有SD大鼠经循环光环境适应7 d,实验前暗适应36 h,分别于光照3,6,9,12,15和18 h,灌流固定,摘除眼球.光镜标本在常规脱水、透明、石蜡包埋切片后,行苏木精-伊红(HE)、TUNEL法染色,光镜观察;电镜标本在树脂包埋、超薄切片、醋酸-柠檬酸铅双重染色后,透射电镜观察;应用CIAS-1 000图像分析系统定量检测外核层面积和视细胞凋亡指数,所得数据作统计学分析.结果可见视网膜出现光损伤和视细胞凋亡现象,随着光照时间的延长,视网膜光损伤逐渐加重,视细胞凋亡逐渐增多.在外核层,透射电镜观察见核染色质浓集,而无炎性反应.外核层面积和视细胞凋亡指数作相关性分析有显著意义.结论视细胞凋亡是视网膜光损伤的重要机制;光损伤启动了视细胞凋亡的发生,外核层细胞核的丢失是视细胞凋亡的结果;视网膜光损伤与视细胞凋亡有着密不可分的联系.