用间接免疫荧光法和PCR技术重新评价抗CMV—抗体检测的临…

为了正确评价临床常用的检测抗巨细胞病毒抗体的临床意义，用间接免疫荧光法和聚合酶链反应技术检测了５０例急性黄疸型甲型肝炎患儿血白细胞中ＣＭＶ 早期抗原和晚期抗原、血白细胞及尿沉渣ＣＭＶ－ＤＮＡ，阳性率分别为５８％、２２％、６８％、６２％。     

用间接免疫荧光法检测大鼠的抗泰泽氏菌抗体

用大鼠来源的泰泽氏菌芽孢RJ株经口服感染3周龄Wistar系大鼠,获得该菌抗原和抗血清,建立了检测泰泽氏病的免疫荧光法,并证实该法具有特异性。用该法检测不同饲养环境中的大鼠,结果:饲养在隔离器内的SPF级大鼠的抗体阳性率为0(0/28),饲养在开放系统内的普通级大鼠的抗体阳性率为40.9％(36/88),而饲养在同一开放系统内的普通级小鼠的阳性率仅为3％。这种差异是否反映了不同种类动物来源的菌株具有不同的抗原性,尚待进一步研究。     

间接免疫荧光法检验抗ds-DNA抗体方法

ＡＮＡ泛指抗各种核成分抗体 ,无器官和种属特异性 ,血清滴度≥ 1∶80可作为诊断ＳＬＥ标准之一。而ＡＮＡ中的抗ｄｓ-ＤＮＡ抗体具有特征性 ,是诊断ＳＬＥ、监测其活动和判断预后的重要指标。本文报告我室的检测方法如下。1　实验材料① 0 .0 1ｍｏｌ/ＬｐＨ 7.2～ 7.4磷酸盐缓冲液 (ＰＢＳ) ;②0 .1ｍｏｌ/Ｌ磷酸盐缓冲甘油 ;③小白鼠 (昆明种ＫＭ ) ;④ 0 .1Ｎ盐酸 ;⑤ＧＡＨ -ＩｇＧ -ＦＩＴＣ应用液用ＰＢＳ 1∶5 0 0稀释 ;⑥荧光显微镜。2　抗原片制备①取小白鼠直接断颈放血杀死 ,取出肝脏 ,去胆囊。用ＰＢＳ冲去肝表面的血等杂物 ,…     

间接免疫荧光法筛查抗核抗体与特异性抗体检测的临床意义分析

目的探讨间接免疫荧光法（IIF）筛查抗核抗体与特异性自身抗体检测的临床意义和应用。方法收集389例疑似自身免疫病（AID）患者血清,分别采用IIF、免疫斑点法（IDT）和免疫印迹法（IBT）进行检测分析。结果IIF检测阳性率为89．5％,IBT阳性率为85．1％,两者阳性符合率为81．7％。检测结果显示,IBT的灵敏度为91．4％（318／348）,特异度为68．3％（28／41）,误诊率为31．7％（13／41）,漏诊率为8．6％（30／348）。IDT和IBT检测5项的阳性率分别为69．7％和71．5％。结论IIF检测可用于初筛,其滴度的变化可提示疗效;IDT检测五项特异性自身抗体,快捷经济;IBT检测13项特异性自身抗体,可有效减少漏诊。三种方法联合检测可减少误差。     

间接免疫荧光法检测抗核抗体的临床应用

抗核抗体(ANA)是自身免疫病检测的主要项目之一,主要存在于IgG中。临床上用免疫光法检测抗核抗体报道很多,文献提示它是一个很敏感的试验,尤其是系统性红斑狼疮(SLE)阳性率最高。为了观察该方法在热带地区一海南岛的敏感性及临床应用价值,现报道97例阳性患者的临床疾     

用Hela细胞检测Bip抗体间接免疫荧光法的建立

目的 建立抗免疫球蛋白结合蛋白(Bip)抗体检测的间接免疫荧光法(IIF),为探讨其在类风湿关节炎(RA)中的意义做出方法 学准备.方法 以Hela细胞为抗原基质固定于载片上,加入待测稀释血清温育,待抗原抗体特异结合后加入荧光素标记的抗人IgG与待测Bip抗体结合,最后置荧光显微镜下观察Hela细胞胞浆有无特异荧光出现.结果 RA患者血清检测中可见到Hela细胞胞浆中出现特异性荧光,而健康献血员血清检测中未发现Hela细胞胞浆中的特异性荧光,实验所见荧光模式与文献报道相符.结论 以Hela细胞为抗原基质的间接免疫荧光法能够对血清中Bip抗体进行检测.     

抗精子抗体的间接免疫荧光测定

本文探索了间接免疫荧光技术检测抗精子抗体的有关问题。输精管结扎术后抗精子抗体的测定,应选择附睾精子作抗原,其最适保存条件是将精子悬液置于-20℃,或用乙醇固定后保存于4℃冰箱中,乙醇固定不仅可增强精子抗原性的显示,而且对其抗原性具有保护作用。本方法所用的附睾精子抗原不须进行其他处理;用精子抗原免疫异种动物,抗精子抗体产生早,效价高,而免疫同种动物则抗原性极弱;抗精子抗体的特异性免疫荧光类型以顶体特异性荧光染色为主,根据不同稀释倍数的待测血清所显示的荧光强度,可判断血清抗精子抗体的效价。     

抗核抗体间接免疫荧光法检测试剂的比对分析

目的 通过AESKU试剂和欧蒙试剂对164例抗核抗体核型结果的比对分析,评价AESKU试剂间接免疫荧光法抗核抗体检测试剂的性能.方法 从2015年1~12月广东省中医院门诊及住院患者中选取164例样本,分为AID患者组(n=115)和健康对照组(n=49),同时采用AESKU试剂与欧蒙试剂对抗核抗体核型进行双盲、平行检测,不一致结果采用第三方试剂复核.计算两种试剂的阳性符合率、阴性符合率、总符合率、Kappa系数,并进行Kappa一致性检验和配对χ2检验.结果 AESKU试剂与欧蒙试剂的总体阳性符合率为94.78%,阴性符合率为93.88%,总符合率为94.51%;Kappa=0.871,P<0.05,两种试剂的检测结果高度一致,差异无统计学意义(P>0.05).结论 AESKU试剂与欧蒙试剂具有等效性和很高的符合率,操作简便快速、结果清晰易读,适合临床广泛应用.     

线性免疫印迹法在抗核抗体间接免疫荧光法筛查阴性标本中的临床意义

目的探讨采用线性免疫印迹法（LIA）在抗核抗体（ANA）间接免疫荧光法（1IF）筛查阴性标本中进行抗核抗体谱（ANAs）特异性抗体检测的价值和临床意义。方法对461例IIF—ANA阴性临床血清标本采用线性免疫印迹法进行15种ANAs特异性抗体（LIA—ANAs）检测。结果216例自身免疫性疾病（AID）组标本中LIA—ANAs阳性数为100例,占46．30％,高于非AID组（2000％）;AID组LIA—ANAs阳性结果按灰度强度分,LIA（3＋）、LIA（2＋）、LIA（1＋）、LIA（±）的阳性率均高于非AID组。差异均有统计学意义（均P〈0．05）。AID组中ANAs特异性抗体中的抗Ro-52、抗SS—A、抗Sm、抗nRNP／Sm、抗SS—B抗体、抗dsDNA和抗rRNP抗体的阳性率分别为2．31％～18．06％,高于非AID组,差异有统计学意义（P〈0．05）。AID组中ANAs特异性抗体阳性强度LIA（1＋）＋LIA（4-）的阳性率高于LIA（3＋）＋LIA（2＋）的阳性率,差异有统计学意义（P〈0．01）。抗nRNP／Sm、抗Ro-52、抗SS—A和抗SSB抗体在AID组中阳性率的差异无统计学意义（P〉0．05）;系统性红斑狼疮（SLE）与非SLE比较,抗Sm和抗dsDNA抗体阳性率高于各组,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论ANA间接免疫荧光法筛查容易导致AID患者部分具有重要临床意义的ANAs特异性抗体漏检,IIF—ANA的检测不能完全代替LIA—ANAs的检测,对于临床疑似AID的患者,无论IIF—ANA检测结果阴性与否。均需进行ANAs特异性抗体检测。     

酶免疫法和间接免疫荧光法检测抗精子抗体方法的比较

血清抗精子抗体（AsAb）阳性已被列为人类免疫性不育的确定指标之一。在原因不明的不孕症妇女中，约有30％在血清中检测到AsAb-20。目前检测AsAb方法较多，国内多数实验室采用酶联免疫吸附试验（ELISA），部分实验室采用间接免疫荧光法（ⅡF）。为了解不同方法检测AsAb的可比性及符合率，探讨影响AsAb检测准确性的因素。我们用上述两种方法检测94例不孕症患者血清，并将结果进行了比较。     

半套式荧光定量聚合酶链反应检测肾移植前后人巨细胞病毒感染状态

目的：研究肾移植受者手术前后人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）的感染率及ＨＣＭＶＤＮＡ含量变化。方法：采用半套式荧光定量聚合酶链反应（ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒＰＣＲ）方法定量检测术前肾移植受者６１例，术后３２例，用四格表比较手术前、后的感染率，用ｔ检验比较病毒含量。结果：手术前、后肾移植受者ＨＣＭＶ的感染率分别为７７％和８７５％；ＨＣＭＶＤＮＡ平均含量（拷贝数每升）分别是１０７×１０７Ｌ－１和７４１×１０７Ｌ－１，两者之间感染率无显著差异（χ２＝１６５Ｐ＞００５），但病毒平均含量存在极显著差异（ｔ＝６４６Ｐ＜００１）。结论：研究结果显示：①免疫抑制治疗激活了潜伏性ＨＣＭＶ感染，导致术后ＨＣＭＶ含量显著增加；②决定肾移植受者ＨＣＭＶ感染状态的主要是机体本身的免疫力，减少ＨＣＭＶ感染，术后合理使用免疫抑制剂，避免过度抑制可能更重要     

人类巨细胞病毒与肺癌关系初探

目的 :评价人类巨细胞病毒与肺癌的关系。方法 :对 6 0例原发性肺癌和 2 0例肺良性疾病的病理标本采用PCR扩增后电泳判断人类巨细胞病毒DNA的检测率。结果 :肺癌组人类巨细胞病毒DNA的检测率明显高于肺良性疾病组。结论 :人类巨细胞病毒感染与肺癌的发生有关 ,人类巨细胞病毒可能是肺癌发生的病因之一     

用双重PCR检测人巨细胞病毒DNA

选取HCMV IEV基因区为扩增的靶序列,合成两对引物,其中一对巢居于另一对之间。扩增片段分别为721 bP和167bp。单次PCR扩增灵敏度达0.5～1.0fg,双重扩增可提高灵敏度10～100倍。用HSV-1,HSV-2,CoxB组1～6型病毒培养物作模板,无非特异扩增。14例疑为CMV感染患儿尿标本经PCR测定,12例检出HCMV DNA,其中11例病毒分离阳性。PCR快速,可靠,比病毒分离简便易行,对临床HCMV感染的诊断有重要意义。     

单克隆抗体间接免疫荧光试验检测生殖器单纯疱疹病毒感染

目的:评价间接免疫荧光试验 (IFA)在生殖器疱疹(GH)诊断中的应用价值.方法:采用以单纯疱疹病毒(HSV)型共同性单克隆抗体为夹心的IFA方法,检测了120例临床诊断为GH患者皮疹中的HSV,并与病毒培养法进行比较.结果:IFA检测HSV的总阳性率为85.8%,高于病毒培养法的阳性率(70.8%,χ2=12.04,P<0.01).两种方法检测GH患者皮肤水疱内的HSV阳性率分别为93.3%和90.0%,无明显差异(χ2=1.96,P>0.05);而检测糜烂和结痂性皮疹内的HSV时,IFA 的阳性率分别为92.6%和69.4%,均分别高于病毒培养法(75.9%,χ2=5.82,P<0.05;47.2%,χ2=14.17,P<0.01).结论:IFA 法具有简单、快速、敏感性高的优点,适用于检测GH患者皮疹内HSV,有临床实用价值.     

汕头地区健康献血者人巨细胞病毒抗体及DNA检测结果的评价

目的：了解汕头地区健康献血者人巨细胞病毒（HCMV）感染情况,并探索一种比较可靠的检测方法。方法：采用酶联免疫吸附试验检测健康献血者血清（450份）中HCMV-IgM和．IsG抗体,并对12份疑似HCMV感染（HCMV-IgM、HCMV-IgC双阳性）、278份HCMV-IgM阴性而HCMV-IgG73性及10份HCMV-IgM、HCMV-IgG双阴性的血浆样本进行荧光定量PCR（FQ-PCR）检测。并对两种检测方法的结果进行比较分析。结果：汕头地区健康献血者HCMV-IgM、HCMV-IgG阳性率分别为2．7％和93．8％;FQ-PCR对HCMV-DNA的检出率高于HCMV-IgM阳性率（P〈0．05）。结论：汕头地区健康献血者HCMV阳性率与国内其他地区学者所报道相近,FQ-PCR定量检测血清HCMV-DNA的方法能够更灵敏地反映HCMV活动性感染,FQ-PCR对献血者HCMV感染的诊断有重要作用。     

巨细胞病毒宫内感染的初步研究

目的：寻找巨细胞病毒宫内感染产前诊断的途径。方法：应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对２４例妊娠患有巨细胞病毒（ＣＭＶ）活动性感染的产妇，分娩的新生儿脐血抗ＣＭＶ－ＩｇＭ型抗体和羊水及尿液ＣＭＶ－ＤＮＡ进行检测。结果：２４例ＣＭＶ活动性感染孕妇中有１４例发生宫内感染，宫内感染率５８．３％，与对照组比较有高度显著性差异。宫内感染儿羊水ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率７８．６％，显著高于脐血ＣＭＶ－ＩｇＭ阳性率．孕妇尿液排毒状态与宫内感染的发生无明显关系。结论：宜将ＣＭＶ－ＩｇＭ阳性孕妇视为有宫内感染潜在危险的对象；羊水ＰＣＲ－ＣＭＶ检测可望成为产前诊断ＣＭＶ宫内感染的有效手段。     

间接血凝法检测抗Sm抗体和抗RNP抗体

应用间接血凝法测定抗Ｓｍ抗体和抗ＲＮＰ抗体。对不同疾病的检测结果表明，建立的该种方法与免疫电泳法结果无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。对ＳＬＥ病４５例检测抗Ｓｍ抗体阳性率为１００％，抗ＲＮＰ抗体阳性率为９１％，抗Ｓｍ抗体可作为ＳＬＥ的特异性标志抗体，抗ＲＮＰ抗体在ＲＡ、ＰＳＳ、ＤＭ、ＭＣＴＤ病人中检出，其中ＭＣＴＤ病２３例，抗ＲＮＰ抗体阳性率高达９６％。且凝集效价高，可作为此病诊断的重要依据。间接血凝法具有操作简便、快速、敏感、特异性高、便于推广等特点，可代替免疫电泳法。     

实验小鼠弓形虫检测方法的建立和应用

目的 建立小鼠弓形虫抗体检测方法。方法 制备抗原片和可溶性抗原，免疫小鼠制备阳性对照血清，确定了IFA和ELISA检测方法的最适工作条件。根据弓形虫B1基因序列，合成一对寡聚脱氧核糖核苷酸片断，建立PCR检测体系。结果 与IHA法相比较，ELISA、IFA的抗体检出率均显著高于IHA，抗体滴度分析，ELISA抗体滴度高于1FA法。对弓形虫感染鼠不同组织进行PCR检测，可检出特异性扩增条带。结论 建立的IFA和ELISA检测方法具有灵敏度高、重复性好，结果判定明确等优点，是比较有效的监测方法。建立了弓形虫PCR检测体系，经对弓形虫DNA及病鼠各组织的初步检测，证明本PCR体系具有较高的敏感性和特异性。     

人巨细胞病毒对红系祖细胞的影响

【目的】探讨人巨细胞病毒 (HCMV)对红系祖细胞 (CFU E)的分化和增殖的影响 ,并初步探讨其作用机制。【方法】取 15例脐血标本 ,用红系祖细胞单向半固体培养技术 ,观察 3种不同浓度的HCMVAD16 9株对CFU E集落形成的影响 ,用PCR和RT PCR检测集落中的HCMVDNA与latemRNA。【结果】 3个感染组的CFU E均减少 ,与正常对照组比较 ,分别为 11 46 %、2 1 88%、34 45 % (P <0 0 5 ) ,显示CFU E集落数与HCMV感染浓度有关 ,病毒感染浓度越高 ,抑制程度越大。CFU E集落细胞中的HCMVDNA均为阳性 ,而latemRNA为阴性。【结论】HCMVAD16 9株可直接感染红系祖细胞 ,并抑制其分化与增殖 ,该抑制作用可出现于仅有病毒潜伏的细胞。