高迁移率族蛋白及其TOLL 样受体4在系统性红斑狼疮肾脏损害中的作用

目的：探讨高迁移率族蛋白1（HMGB1）及其受体TOLL样受体（TLR）-4在系统性红斑狼疮肾脏损害中的作用。方法：ELISA检测12例健康对照组、16例系统性红斑狼疮无肾脏损害（Systemic lupus erythematosus,SLE）和18例合并肾脏损害的系统性红斑狼疮患者（Lupus nephritis,LN）血清中HMGB1表达情况;流式细胞术检测外周血CD3/TLR-4和CD14/TLR-4表达情况;分离外周血单个核细胞,RT-PCR检测HMGB1mRNA的表达变化。结果：血清中HMGB1蛋白在LN组明显高于SLE组和健康对照组,而SLE组和健康对照组之间差异无统计学意义;LN组患者HMGB1mRNA相对表达量均高于对照组和SLE组患者;流式细胞术显示CD14＋的单核细胞表面HMGB1受体TLR4在LN组表达最高（P〈0.05）,且与尿蛋白呈正相关（P〈0.01）,而CD3＋的淋巴细胞表面HMGB1受体TLR4表达率在各组间无显著性差异（P〉0.05）。结论：狼疮性肾炎患者PBMC能主动合成、分泌HMGB1,使患者血清中表达水平明显升高;HMGB1可能部分通过TLR4激活PBMC,介导炎症反应,从而引起肾脏损害。     

HMGB1在系统性红斑狼疮肾损害中的作用

目的 研究高迁移率族蛋白1(high mobility group protein box 1,HMGB1)在系统性红斑狼疮肾损害中的作用.方法 ELISA检测12例健康对照、16例系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)无肾脏损害和14例合并肾脏损害的系统性红斑狼疮患者(lupus nephritis,LN)血清中HMGB1的表达情况.将体外培养的人系膜细胞分为正常对照组和HMGB1刺激组,于培养6、12、24 h后收集细胞,免疫细胞化学检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达变化;免疫细胞化学和流式细胞术检测Toll样受体2(TLR2)、NF-κB 065蛋白的表达变化.结果 血清中HMGB1蛋白在LN组明显高于SLE组和健康对照组,且血清中HMGB1水平与LN患者的蛋白尿呈显著正相关;人重组HMGB1能够促进系膜细胞增殖;与正常对照组相比,HMGB1刺激组中TLR2、NF-κB p65蛋白表达增强;TLR2蛋白与NF-κB p65蛋白表达呈显著正相关(r=0.658,P=0.000);NF-κB p65蛋白表达与PCNA阳性表达率呈显著正相关(r=0.536,P=0.007).结论 HMGB1是狼疮性肾炎发病中的重要的细胞因子之一,可能部分通过与其受体蛋白TLR2结合激活NF-κB促进系膜细胞增生,从而引起肾脏损害.     

高迁移率族蛋白-1对增生性瘢痕成纤维细胞的调控作用

目的 探讨高迁移率族蛋白-1（HMGB1）对增生性瘢痕成纤维细胞（HSFbs）的调控作用.方法 增生性瘢痕组织取自中山大学附属第一医院烧伤科行瘢痕整复术的患者,组织块法培养HSFbs.通过细胞增殖、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、迁移和胶原网收缩实验检测不同浓度（0～200 ng/mL） HMGB1对HSFbs的影响.结果 1.56、3.13、6.25、12.50、25.00 ng/mL HMGB1呈剂量依赖方式刺激HSFbs的增殖,HMGB1对HSFbs Toll样受体4（TLR4）、α-滑肌肌动蛋白（α-SMA）、非肌肉肌球蛋白Ⅱ（NMMⅡ）mRNA的表达有促进作用而对基质金属蛋白酶1-α （MMP1-α）无,HMGB1对HSFbs迁移及收缩有促进作用但可被TLR4阻断剂抑制.结论 HMGB1可能通过TLR4调控HSFbs而在增生性瘢痕的形成过程中起作用.     

高迁移率族蛋白A1与2型糖尿病

高迁移率族蛋白A1(high mobility group protein A1,HMGA1)作为基因激活的特定辅助因子,其本身并没有转录作用,而是通过DNA -蛋白质促进基因转录的稳定性这一机制来激活启动子.HMGA1可通过影响胰岛素受体及胰岛素样生长因子1受体的表达及其信号转导,导致胰岛素的分泌减少及脂肪细胞的分化...     

高迁移率族蛋白B1在脂多糖致幼年大鼠脑损伤中的表达

目的 探讨高迁移率族蛋白B1(high mobility gnmp box 1,HMGB1)在脂多糖(LPS)致幼年大鼠脑损伤中的表达变化.方法 SD大鼠随机分为对照组(NS组,n=80),颈外动脉注射生理盐水;脂多糖组(LPS组,n=80),颈外动脉注射LPS,于注射药物后6、12、24、48、72 h处死,甲酰胺法测脑组织伊文思蓝(EB)含量;免疫组织化学技术检测脑组织HMGBI、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达;RT-PCR技术检测HMGB1 mRNA的表达变化.结果 LPS组脑组织的EB含量、NSE、GFAP蛋白表达均为6 h开始增加,24 h达高峰;HMGB1蛋白及HMGB1 mRNA于6 h开始增加,24 h达高峰,与EB含量、NSE、GFAP蛋白含量呈正相关.各时间点与NS组比较,差异显著.结论 HMGB1可能作为晚期炎症因子参与LPS致脑损伤的发生发展过程.     

高迁移率族蛋白B1在肿瘤中的双重作用

高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)是广泛存在于真核细胞核染色质中的一种非组蛋白,在机体炎症性疾病、自身免疫病以及癌症中发挥重要作用。在肿瘤的发生发展中,不同亚细胞定位的HMGB1发挥不同的功能。一方面,HMGB1能够促进肿瘤细胞的生长、增殖、侵袭和转移,介导免疫逃逸与免...     

高迁移率族蛋白1在类风湿性关节炎发生中的作用

高迁移率族蛋白1（HMGB1）是一种非组蛋白核蛋白,是一个具有双重功能的警报素,其免疫活性取决于细胞定位。在细胞内,HMGB1结合DNA调节转录;在细胞外,HMGB1具有和TNF相似的细胞因子活性。HMGB1参与许多免疫介导疾病的发病过程包括类风湿性关节炎（RA）。因而,研究炎症性关节炎新的发病机制可以提供新的治疗靶点。     

HMGB1及TLR4与Ⅱ型糖尿病及肥胖症的相关性研究

目的：检测高迁移率族蛋白B1（HMGB1）及Toll样受体-4（TLR4）在Ⅱ型糖尿病（T2DM）和肥胖症（OB）患者体内的表达水平,分析HMGB1及TLR4与T2DM和OB的相关性。方法：选取2017年1月至8月内分泌科住院的患者以及同期健康体检中心体检人员共80例为研究对象,根据T2DM诊断标准和口服葡萄糖耐量试验(OGTT)判断标准以及OB诊断标准,将研究对象分为T2DM-OB组、T2DM-非肥胖(NOB)组、正常糖耐量(NGT)-OB组、NGT-NOB组,共4组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组血清中HMGB1的浓度,同时运用实时定量聚合酶链反应（qPCR）技术检测外周血单个核细胞TLR4 mRNA的表达水平,利用日立 7600-020全自动生化分析仪检测相关生化指标浓度,所有数据运用统计学方法分析。结果：T2DM-OB组HMGB1浓度高于T2DM-NOB组(P<0.05);NGT-OB组HMGB1浓度高于NGT-NOB组（P<0.05）;T2DM-OB组HMGB1浓度明显高于NGT-OB组（P<0.001）;T2DM-NOB组HMGB1浓度明显高于NGT-NOB组（P<0.001）。T2DM-OB组TLR4表达水平明显高于T2DM-NOB组（P<0.001）;NGT-OB组TLR4表达水平明显高于NGT-NOB组（P<0.001）;T2DM-OB组TLR4表达水平明显高于NGT-OB组（P<0.001）;T2DM-NOB组TLR4表达水平明显高于NGT-NOB组（P<0.001）。相关性分析结果显示,HMGB1和TLR4、TG、FPG、体重指数(BMI)均呈正相关（P值均<0.001）;HMGB1和HDL呈负相关（P<0.05）。通过回归分析显示,FPG和TG两指标对HMGB1有预测作用（P<0.05）。 结论：T2DM及OB体内HMGB1、TLR4的表达水平明显增高,并且HMGB1水平与糖脂代谢紊乱存在相关性,HMGB1与TLR4结合后通过相应的途径参与T2DM及OB的病理生理发展过程。     

TLR4介导氧化型低密度脂蛋白致动脉粥样硬化作用的研究

目的探讨氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，ox-LDL）的致动脉粥样硬化作用与Toll样受体4（Toll-like receptor 4，TLR4）表达的相关性。方法构建针对TLR4的小干扰RNA（small interference RNA，siRNA）表达载体，转染人单核细胞株U937，于转染前后用不同浓度的ox-LDL刺激，用流式细胞术和实时荧光定量PCR法检测TLR4蛋白和mRNA表达变化，同时用ELISA测定NF-κB活性改变以及细胞上清液中动脉粥样硬化相关细胞因子MCP-1和IL-8的浓度变化。结果ox-LDL刺激可导致单核细胞TLR4表达上调，同时NF-κB p65活性增强，MCP-1和IL-8在细胞上清液中的浓度显著高于对照组（P〈0．05），并且呈剂量依赖性；利用siRNA表达载体使TLR4表达抑制后，相同剂量的ox-LDL刺激，NF-κB p65相对活性以及MCP-1和IL-8的分泌显著低于TLR4未抑制组（P〈0．05）。结论ox-LDL的致动脉粥样硬化作用至少部分是由TLR4介导的；调节TLR4的表达，可以减弱ox-LDL刺激引起的包括NF-κB活化以及MCP-1和IL-8分泌等致动脉粥样硬化效应。     

HMGB1-TLR4信号轴在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及机制研究

为探究高迁移率族蛋白 1-Toll 样受体4(high mobility group box 1-Toll-like receptor 4,HMGB1-TLR4)信号轴在大鼠心肌缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)中的作用及可能机制,按随机数字表法将25只雄性SD大鼠分为对照...     

The novel inflammatory cytokine high mobility group box protein 1 (HMGB1) is expressed by human term placenta

High mobility group box protein 1 (HMGB1) was previously considered a strict nuclear protein, but lately data are accumulating on its extranuclear functions. In addition to its potent proinflammatory capacities, HMGB1 has a prominent role in a number of processes of specific interest for the placenta. Our overall aim was to investigate the expression of HMGB1 in human term placenta and elucidate a potential difference in HMGB1 expression comparing vaginal deliveries with elective Caesarean sections. In addition, placentas from normal pregnancies were compared with placentas from pregnancies complicated by pre-eclampsia. Twenty-five placentas, 12 from normal term pregnancies and 13 from pregnancies complicated by pre-eclampsia were analysed with immunohistochemistry for HMGB1 and its putative receptors; receptor for advanced glycation end-products (RAGE), Toll-like receptor 2 (TLR2) and TLR4. We present the novel finding that in addition to a strong nuclear HMGB1 expression in almost all cells in investigated placentas, an individual variation of cytoplasmic HMGB1 expression was detected in the syncytiotrophoblast covering the peripheral chorionic villi, by cells in the decidua and in amnion. Production of HMGB1 was confirmed by in situ hybridization. Although labour can be described as a controlled inflammatory-like process no differences in HMGB1 expression could be observed comparing active labour and elective Caesarean sections. However, a tendency towards a higher expression of cytoplasmic HMGB1 in the decidua from women with pre-eclampsia was demonstrated. The abundant expression of the receptors RAGE, TLR2 and TLR4 implicates a local capability to respond to HMGB1, although the precise role in the placenta remains to be elucidated.     

Toll样受体7及I型干扰素通路在系统性红斑狼疮中的作用研究

探讨Toll样受体7(TLR7)及I型干扰素(IFN-α)通路在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。采用实时荧光定量PCR方法检测42例SLE患者和34例正常人外周血TLR7mRNA以及4个干扰素调节基因mRNA的表达水平,同时观察TLR7mRNA的表达量与SLE疾病活动相关指标和干扰素积分(IFN score)的关系。结果,SLE患者外周血TLR7mRNA的表达水平显著增高;TLR7mRNA的表达水平与SLEDAI积分、肾脏损伤指数、抗双链DNA(dsDNA)抗体、抗RNA相关抗体水平及干扰素积分呈正相关;与补体C3、C4、白细胞数呈负相关。TLR7—IFN-α通路可能参与了SLE的病理过程。     

冠心病患者高迁移率族蛋白B1水平变化的临床研究

目的:探讨冠心病(CHD)患者血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平变化及其临床意义。方法:CHD患者158例,分为急性冠脉综合征组(ACS组,87例)和稳定型心绞痛组(SA组,71例),选择30例年龄和性别匹配的健康体检者作为对照组,采用ELISA检测各组人群血清HMGB1水平,并同时检测超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、白细胞计数(WBC)和血脂水平。结果:CHD患者血清HMGB1和hs-CRP水平较对照组明显增高(6.47±1.39ng/ml vs 2.19±0.43ng/ml,P<0.01;3.42±0.87g/ml vs 1.15±0.22g/ml,P<0.01)。ACS组患者血清HMGB1水平显著高于SA组(8.52±2.08ng/ml vs 5.38±1.26ng/ml,P<0.01)。ACS组患者血清hs-CRP水平较SA组和对照组也明显升高。CHD患者血清HMGB1水平与hs-CRP水平呈显著正相关(r=0.685,P<0.01)。结论:血清HMGB1水平的变化在CHD的发病过程中有重要意义,可作为CHD的监测指标之一。     

HMGB1在类风湿性关节炎发病中的作用及其机制

高迁移率族蛋白1（HMGB1）是一种普遍存在于真核细胞中的染色体蛋白。早期研究证实,HMGB1可作为DNA结合蛋白参与维持DNA构象和核小体结构的稳定：也可作为一种非特异性的转录因子参与基因表达的调控。近期研究发现,HMGB1可于细胞外分泌释放,参与细胞的分化、迁移和再生,并可介导多种炎性和自身免疫性疾病的发病。特别在类风湿性关节炎（RA）患者及实验性关节炎动物关节局部HMGB1的表达明显上调,深入研究揭示这些异常表达的HMGB1可通过多种分子机制在关节炎发病的多个环节中发挥作用,以介导慢性炎症的持续和局部组织的侵蚀破坏,通过阻断和抑制HMGB1的作用可明显减轻和改善关节炎的症状。这为阐明RA的发病机制提供了新的思路,并为RA的治疗提供了新的靶点。     

Ulinastatin Preconditioning Attenuates Inflammatory Reaction of Hepatic Ischemia Reperfusion Injury in Rats via High Mobility Group Box 1(HMGB1) Inhibition

Objective It has been found that ulinastatin (UTI) can attenuate hepatic injury in a rat model of ischemia reperfusion (IR), but the specific mechanism is unclear. This study aims to investigate possible pathomechanism of ulinastatin in reducing the inflammatory response after hepatic IR.Methods A male sprague-dawley(SD) rat model of hepatic ischemia reperfusion injury was used. The rats were randomly divided into 4 groups on average, which were 0.9% saline and IR group as control, ulinastatin preconditioning (UPC) group, UPC+rHMGB1 (recombinant HMGB1) group and UPC +anti-HMGB1 group. Serum aminotransferases, TNF-α, IL-1 and Myeloperoxidase (MPO) levels were measured. Histopathology examination and apoptotic cell detection and the different expression of HMGB1 protein were also assessed.Results Serum levels of aminotransferases, cytokines and hepatic MPO in UPC and UPC+anti-HMGB1 groups were significantly lower than those in control group (p<0.05). Decreased histologic damage and apoptosis were also seen in these two groups (p<0.05).Conclusions HMGB1 expressions in UPC and UPC+anti-HMGB1 groups were significantly lower than those in the two control groups (p<0.05), pretreatment with ulinastatin attenuated liver IR injury by reducing HMGB1 expression through its anti-inflammatory effects.     

HMGB1促进类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞表达基质金属蛋白酶-13

目的:探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)能否激活类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞(RASF)表达基质金属蛋白酶-13(MMP-13)。方法:HMGB1与RASF共孵育后,采用流式细胞术、实时RT-PCR、ELISA分别检测细胞周期和MMP-13的基因表达量以及蛋白表达水平。结果:1μg/ml HMGB1刺激滑膜成纤维细胞3小时,MMP-13 mRNA的表达明显增加;HMGB1刺激滑膜成纤维细胞48小时后MMP-13蛋白分泌增高,并且滑膜成纤维细胞增殖周期速度加快。结论:HMGB1可以激活滑膜成纤维细胞,使其增殖周期速度加快,MMP-13表达增加,提示HMGB1通过作用于滑膜成纤维细胞表达MMP-13加强关节结构破坏。     

HTLV-1 Tax 蛋白对T细胞中HMGB1调控的影响

目的探讨人T淋巴细胞白血病1型病毒（human T-cell leukemia virus 1,HTLV-1）Tax蛋白对人高迁移率族蛋白1（ high mobility group box 1,HMGB1）基因转录调控的影响。方法提取TaxN和TaxP细胞总RNA和蛋白质,通过real-time PCR和Western blot分析HMGB1 mRNA和蛋白质的表达情况;利用脂质体介导方法,将6个含有不同长度HMGB1调控序列的pGL3-HMGB1-luc瞬时转染至TaxN 和 TaxP 细胞,观察 HMGB1基因在不同 T 细胞中的转录活性;pCMV-Tax 与 pGL3-HMGB1-luc瞬时共转染至Jurkat细胞,观察Tax蛋白对HMGB1基因的转录调控影响;染色体免疫共沉淀（ ChIP）找寻Tax蛋白影响HMGB1基因转录调控的区段。结果 TaxP细胞中HMGB1 mRNA和蛋白质表达水平高于TaxN细胞。 TaxN和TaxP细胞中HMGB1调控趋势基本相似,均表现出3号质粒（pHLuc3,含有-504～＋83 HMGB1区段）的相对荧光素酶活性（HMGB1/neo）最高,但是6号质粒（含有-1163～＋83 HMGB1区段）却表现出 TaxP 细胞 HMGB1的转录活性明显高于 TaxN 细胞。pCMV-Tax与pGL3-HMGB1-Luc报告基因共转染到Jurkat细胞也显示,6号质粒（pHLuc6）中Tax促进HMGB1基因的转录。 ChIP分析证实了Tax蛋白可能富集在HMGB1的-1163～-1043区段。结论-504～-383可能是HMGB1基因转录激活的关键启动子区,Tax蛋白可能富集在HMGB1的-1163～-1043区段促进HMGB1基因转录。     

右侧颈交感干离断对大鼠心肌梗死后炎症反应的抑制作用及对HMGB1/TLR4/NF-κB通路的影响

目的:观察右侧颈交感干离断(TCST)对大鼠心肌梗死后炎症反应的抑制作用及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达和TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法:结扎左冠状动脉前降支制备急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)模型,将造模成功的大鼠随机分为心肌梗死(MI)组和心肌梗死+右侧颈交感干离断(MI+TCST)组,MI+TCST组在左冠状动脉前降支结扎后立即离断右侧颈交感神经干。MI组和MI+TCST组分别按模型制备及干预后1、3、7、14和28 d分为5个亚组,另设假手术(sham)组,只穿线不结扎,每组8只。建模后4周,超声心动图检测大鼠心脏功能,然后处死大鼠,取心脏计算心脏肥厚指数,并取梗死周围心肌组织采用HE染色观察心肌病理形态改变。Real-time PCR法检测不同时点梗死边缘区HMGB1、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的m RNA表达。Western blot分析MI后不同时点梗死边缘区HMGB1和TLR4蛋白的表达变化,并进一步分析右侧TCST对HMGB1和TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达的影响。结果:与MI组比较,MI+TCST组左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短分数(LVFS)显著升高(P0.05),左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室收缩末期内径(LVESd)和心脏肥厚指数显著降低(P0.05),梗死边缘区各时点HMGB1、TNF-α和IL-6的m RNA表达水平显著降低(P0.05)。Western blot检测结果显示,与sham组比较,HMGB1蛋白的表达在MI后3 d开始升高,并于7 d达到高峰,之后逐渐下降,28 d时仍明显高于假手术组(P0.05);TLR4蛋白的表达变化与HMGB1一致。进一步研究发现右侧TCST可显著降低心肌组织HMGB1和TLR4/NF-κB信号通路蛋白的表达(P0.05)。结论:右侧颈交感干离断可改善MI后心室重构,发挥保护心功能的作用,其机制可能与其抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路,减轻炎症反应有关。