雌性小鼠颌下腺 NGF mRNA 的原位杂交检测

应用地高辛标记的人β神经生长因子ＤＮＡ探针原位杂交组化技术，研究雌性ＩＣＲ小鼠颌下腺的神经生长因子（ＮＧＦ）基因表达。颌下腺经４％多聚甲醛固定，常规冰冻切片，并以同种雄性小鼠颌下腺作阳性对照。实验结果显示，雌性小鼠颌下腺的ＮＧＦｍＲＮＡ分布与雄性小鼠相同，主要存在于纹状管和颗粒曲管上皮细胞中，但杂交信号明显弱于雄性小鼠；在原位杂交反应阳性的纹状管或颗粒曲管上皮细胞之间常可见到几个阴性细胞，阳性管道的密度亦显著低于雄性小鼠。研究表明，小鼠颌下腺ＮＧＦ基因的表达受到雄激素的调节，这种调节作用可能发生于转录水平。ＮＧＦ基因转录少，纹状管或颗粒曲管部分上皮细胞ＮＧＦ基因不开放以及颗粒曲管不发达是雌性小鼠颌下腺ＮＧＦ含量明显低于雄性小鼠的主要原因。     

神经生长因子cDNA探针的制备及应用

人重组βＮＧＦ／ｐＵＣ１９，经ＨｉｎｄⅢ／ＢａｍＨⅠ双酶切后，获βＮＧＦ ＤＮＡ片段。用随机引物标记法进行Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记，在小鼠颌下腺原位杂交检测ＮＧＦｍＲＮＡ显示出很高的特异性，该探针的制备为ＮＧＦ在神经及非神经系统的研究提供新的方法。     

实验性铅中毒对小鼠颌下腺神经生长因子的影响

目的：观察实验性铅中毒对小鼠颌下腺神经生长因子（ＮＧＦ）的影响。方法：小鼠以０．５％醋酸铅染毒８周，采用原子吸收分光光度法测定其血铅和颌下腺铅含量。采用免疫组化法，观察铅染毒染毒对小鼠颌下腺ＮＧＦ免疫阳性复合物分布的影响。结果：与对照组相比，实验性铅中毒小鼠体重下降，血铅和颌下腺铅含量显著升高。免疫组化结果显示，铅染毒小鼠颌下腺ＮＧＦ免疫阳性反应明显弱于正常小鼠。结论：铅可减少颌下腺ＮＧＦ的生成。     

应用原位杂交技术检测人胃癌组织中生长抑素mRNA

应用地高辛（ＤＩＧ）标记的生长抑素（ＳＯＭ）反义ＲＮＡ探针，对正常和胃癌组织进行原位杂交，研究ＳＯＭ ｍＲＮＡ的表达与胃癌发生、发展的关系。结果显示：在正常胃窦粘膜，杂交阳性细胞很少，散在分布于粘膜的中下部。胃癌组织中杂交阳性细胞显著增多（Ｐ〈０．０５）。进展期（Ⅲ￣Ⅳ期）胃癌杂交阳性细胞明显多于早期（Ⅰ、Ⅱ期）胃癌（Ｐ〈０．０５）。结果揭示：ＳＯＭ ｍＲＮＡ转录和表达的改变参与胃癌发生发展的内分     

应用地高辛标记的cRNA探针原位杂交法检测大鼠下丘脑生长抑素mRNA

用成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，经４％多聚甲醛灌注固定，取下丘脑组织，行再固定２４ｈ，常规石蜡包埋和切片，用地高辛标记的ｃＲＮＡ探针进行原位杂交，结果显示在弓状核及其邻近区域见到阳性神经元，阳性信号为蓝色颗粒，胞质、核膜及核仁呈阳性。阴性对照均无阳性反应出现。本实验证实，用石蜡切片进行原位杂交组织化学研究，能检测下丘脑生长抑素神经元基因表达产物ｍＲＮＡ，方法稳定，重复性好，便于普通实验室开展工作。     

外周血白细胞原位杂交技术的改良

检测组织细胞内信息分子mRNA表达的原位杂交实验常常得不到稳定的结果,使该技术在疾病诊断和医学研究中的应用受到限制.我们通过调整和优化原位杂交流程的一些关键步骤,研究成功了一种简便、稳定、实用的检测外周血白细胞信息分子mRNA表达的原位杂交实验方法,下面作一扼要介绍.     

应用原位杂交技术检测鼻咽癌p16 mRNA基因表达研究

目的:研究p16 mRNA在鼻咽癌组织中的表达情况，探讨p16 mRNA与鼻咽癌生物学行为的关系。方法:应用生物素标记RNA探计的原位杂交技术，对20例散发性鼻咽癌(NPC)患者及3个NPC家系中NPC患者的组织标本进行mRNA检测，探讨p16 mRNA的异常表达在NPC的发生发展中的作用，以20例鼻咽炎患者的鼻咽部组织做为对照。结果:20例NPC标本原位杂交阳性8例，p16 mRNA阳性表达为40％(8／20)，3个高发家系的NPC标本无阳性表达，20例对照(鼻咽炎患者的标本)全部有p16 mRNA阳性表达。结论:p16 mRNA在鼻咽癌组织中呈低表达，提示p16基因作为一种重要的抑癌基因，它的突变或缺失可能与鼻咽癌的发生发展及恶性行为起一定的作用。     

雌性老年大鼠红核NGF及其相关受体的增龄性变化

目的研究雌性SD大鼠运动功能及红核NGF及其相关受体表达的增龄性变化。方法选用22月龄（老年组）和3月龄（青年组）SD大鼠,应用网屏握持试验、抓握牵引试验和平衡木试验检测大鼠运动功能;应用West-ern Blot检测红核mNGF、TrkA、Pro-NGF、p75NTR、sortilin的表达。结果老年组大鼠运动功能明显差于青年组大鼠,其前肢力量及平衡感觉明显衰退。与青年组大鼠相比,老年组大鼠红核Pro-NGF、p75NTR、sortilin表达上升,mNGF、TrkA表达下降。结论雌性老年大鼠的衰老伴随着其运动功能及红核mNGF、TrkA表达下降,红核中NGF信号途径的变化和老年大鼠运动功能的衰退相关。     

应用荧光原位杂交检测HBV基因在转基因小鼠染色体上的整合

目的应用荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization,FISH）,检测本研究中心制备的乙型肝炎病毒（HBV）转基因小鼠目的基因的整合位点。方法采用荧光原位杂交技术,以正常小鼠染色体标本为对照,通过荧光标记的探针与转基因小鼠染色体标本进行杂交,对比分析同一中期分裂相的G显带和FISH结果。结果转基因小鼠染色体检测到一对明显的荧光信号,推测其在14号同源染色体上,而对照组无信号。结论外源HBV基因以单位点形式稳定地整合到转基因小鼠的染色体上。     

大鼠胰腺促性腺激素释放激素受体mRNA的原位杂交

目的 研究大鼠胰腺促性腺激素释放激素（GnRH)受体mRNA的存在及细胞定位。方法 采用原位杂交组织化学法。结果 胰脏的外分泌部腺上皮细胞、胰导管上皮细胞及内分泌部胰岛细胞内可检测到较强的GnRH受体mRNA杂交信号,杂交阳性信号物质均分布在胞质内,胞核呈阴性。结论 大鼠胰脏内、外分泌部均能合成GnRH受体。GnRH也是一种消化激素,它由胰脏自身合成,又作用于胰脏,可能参与胰脏内、外分泌功能的调节。     

原位杂交染色法检测SMAD4mRNA、P73mRNA在肝外胆管癌中的表达及临床意义

目的 通过检测SMAD4mRNA、P73mRNA在肝外胆管癌中表达。研究它们在肝外胆管癌发生、发展过程中的表达特点及相互关系、作用机制及其临床价值。方法 应用石蜡包块切片组织原位杂交染色法检测42例肝外胆管癌中SMAD4mRNA、P73mRNA的表达，并以同期20例慢性胆管炎作对照。结果 ①SMAD4mRNA阳性表达率为61．90％(26／42)。显著低于其相应良性对照组(为100％)；P73mRNA表达率为54．76％(23／42)。显著高于相应良性对照组(为0％)。②SMAD4mRNA、P73mRNA的表达与其临床病理分期及预后显著相关(P＜0．05)；SMAD4mRNA的表达与组织学分级及是否发生周围神经、血管、淋巴管浸润转移显著相关(P＜0．05)。③SMAD4mRNA、P73mRNA的表达两者呈负相关。结论 SMAD4mRNA、P73mRNA在肝外胆管癌中的表达反映了肝外胆管癌生物学特性。为预后判断提供参考指标。并为探索肝外胆管癌早期诊断和干预性基因治疗提供实验依据。     

铅中毒对小鼠颌下腺神经生长因子基因表达的影响

目的 :探讨铅中毒对小鼠颌下腺的毒性作用及对神经生长因子基因 (NGF m RNA)表达的影响。方法 :采用小鼠实验性铅中毒模型 ,通过光镜与电镜观察颌下腺的病理组织学变化。应用地高辛标记的人 NGF DNA探针 ,采用原位杂交的方法 ,定量分析铅对小鼠颌下腺 NGF m RNA表达的影响。结果 :实验性铅中毒小鼠体重下降 ,血铅浓度升高 ,颌下腺铅含量增加。光镜和电镜结果呈现铅中毒小鼠颌下腺腺叶萎缩 ,纤维增生 ,腺间质血管扩张 ,腺间隙增加。粗面内质网扩张 ,线粒体肿胀。图像分析结果表明 ,铅中毒小鼠颌下腺纹状管和颗粒曲管直径减少。原位杂交的结果显示 ,铅中毒小鼠颌下腺颗粒曲管和纹状管的杂交信号显著减弱 ,颌下腺组织中 NGF m RNA表达减少。结论 :铅对小鼠颌下腺具有毒性作用 ,影响颌下腺 NGF的基因表达     

小鼠颌下腺神经生长因子的制备和活性鉴定

制备具有生物活性的ＮＧＦ。方法以小鼠颌下腺为原料，采用ＦＰＬＣ分离神经生长因子，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳检测ＮＧＦ的分子质量和纯度，采用脊髓和脊根神经培养方法检测ＮＧＦ的生物活性。     

原位杂交法检测视网膜色素上皮细胞炎前因子mRNA的表达

目的　观察视网膜色素上皮细胞 ( RPE)在炎性介质刺激下炎前因子 m RNA的表达 .方法　培养的人 RPE经IL - 1β ( 10μg· L- 1 )和脂多糖 ( 1m g· L- 1 )的刺激后 ,用生物素标记的寡核苷酸探针进行原位杂交 ,检测 RPE炎前因子IL - 1β,IL - 6,IL - 8和 TNF-α m RNA表达 .杂交结果使用图像分析法进行比较 .结果　原位杂交显示 RPE细胞质中均呈现浓淡不一的淡蓝色着色 ,胞核不着色 .其中 IL - 6m RNA在脂多糖刺激下染色较浅 ,增加脂多糖的剂量不能提高其表达 .图像分析显示在 IL - 1β ( 10μg· L- 1 )和脂多糖 ( 1m g· L- 1 )刺激下 ,RPE表达 IL - 6m RNA的吸光度分别为 10 8± 18和3 5± 14 ,二者之间有显著性差异 ( P<0 .0 1) .结论　在 IL - 1β和脂多糖刺激下 ,人 RPE可以表达炎前因子 IL - 1β,IL - 6,IL - 8和 TNF-α的 m RNA .     

原位杂交法检测胃癌组织中IL-6及其受体mRNA的表达

胃癌是最常见的癌肿之一,应用原位杂交技术检测胃癌组织中IL—6及其受体mRNA的表达情况,具有灵敏度高、特异性强的特点,而且较直观地在组织原位和转录水平对标本中IL—6及其受体进行研究,这使得形态学观察与功能学检测相结合,更能反映胃粘膜不同病变细胞分泌IL—6及其受体的情况。     

神经生长因子在小鼠颌下腺表达的免疫组化观察

采用免疫组织细胞化学(SABC)方法,观察神经生长因子(NGF)在正常雄性小鼠颌下腺的分布。结果发现染色颗粒位于颌下腺颗粒纡曲导管和纹状导管细胞,呈棕色。提出NGF在颌下腺的分布与其作用有待深入研究。 ‘     

micro-CT法观测雌性小鼠股骨骨参数的分析

目的 利用小动物CT（micro-CT）收集正常雌性BALB/c-nu/nu小鼠与BALB/c小鼠股骨的影像学数据.方法 BALB/c-nu/nu小鼠与BALB/c小鼠各15只,雌性,10～12周龄,取股骨后用micro-CT进行扫描,将得到的数据进行系统分析.结果 成功收集了正常雌性BALB/c-nu/nu小鼠与BALB/c小鼠股骨的CT影像学数据.通过数据分析,发现两者在皮质骨相对骨体积上具有显著差异,在骨小梁相对骨体积、骨表面积与组织体积比值和骨密度也有显著差异.结论 micro-CT可以对雌性小鼠股骨的各项参数进行定量分析.     

原位杂交法检测不同发育阶段小鼠睾丸中TERT mRNA的表达

本实验应用原位杂交方法检测出生后10 d～90 d雄性小鼠睾丸中TERT mRNA表达及定位.原位杂交方法(In situ hybridization)结果显示:①10 d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮中尚无TERT mRNA阳性表达;②20 d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮可见TERT mRNA阳性表达,阳性表达位于初级精母细胞;③30 d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮也可见TERT mRNA阳性表达,初级精母细胞表现强阳性表达;④60 d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮可见明显TERT mRNA阳性表达,阳性表达位于初级精母细胞及精子细胞;⑤90 d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮有较强烈的TERT mRNA阳性表达,阳性表达位于初级精母细胞.此结果提示我们:端粒酶在精子发生过程中存在动态变化,端粒酶的表达与精子发生存在密切关系.     

用核酸原位杂交技术观察细粒棘球绦虫66kDa抗原mRNA在虫体上的细胞定位

目的：用核酸原位杂交技术观察细粒棘球绦虫66kDa抗原mRNA在虫体上的细胞定位以及在虫体发育的不同时期mRNA含量的变化。方法：以66kDa抗原的cDNA克隆EgA31为模板制备RNA探针，与细粒棘球绦虫原头蚴、育囊和成虫虫体进行原位杂交实验。结果：原位杂交实验显示EgA31 mRNA主要位于原头蚴和成虫的皮层下某种细胞中，并在棘球蚴育囊的生发层中也存在这种细胞。在原头蚴向成虫的发育过程中虫体吸盘处细胞内EgA31 mRNA含量显著增加。结论：含EgA31 mRNA的细胞很可能是皮层细胞；EgA31蛋白可能参与吸盘上肌纤维的收缩作用并与虫体的免疫逃避功能有关。     

用原位杂交技术检测血单个核细胞白细胞介素2mRNA

用地高辛素（ＤＩＧ）标记人白细胞介素２（ＩＬ－２）ｍＲＮＡ的ｃＤＮＡ探针，在外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）涂片上进行原位杂交，并用鼠抗人ＩＬ－２单克隆抗体检测ＩＬ－２分泌细胞。结果显示，终末期肾衰（ＥＳＲＤ）接受血液透析（ＨＤ）治疗患者的ＩＬ－２ｍＲＮＡ及ＩＬ－２阳性单个核细胞数与正常对照组、原发性肾小球疾病（简称肾病）组和ＥＳＲＤ未接受透析治疗组相似，但是，ＨＤ后ＩＬ－２基因表达显著增加（Ｐ＜０．０５）。