重组人血管内皮抑制素对小鼠移植瘤及正常组织中血管相关因子影响的比较

  目的  观察重组人血管内皮抑制素(rh-endostatin, 商品名: 恩度, endostar)的抗肿瘤及抗血管生成效应, 比较其对移植瘤、心肌及肾脏组织中神经型一氧化氮合成酶(neuron NOS, nNOS)、内皮型一氧化氮合成酶(endothelial NOS, eNOS)mRNA、血管生成因子表达和微血管密度及结构的影响, 探讨其对心血管系统不良反应的原因。   方法  将36只小鼠随机分为空白对照组(不接种瘤块, 注射生理盐水)、药物对照组(不接种瘤块, 注射恩度)、模型组(接种瘤块, 注射生理盐水)和实验组(接种瘤块, 注射恩度), 每日1次, 处理28天。实验前、后称量小鼠体重, 测量移植瘤体积; Real-time PCR法检测各组小鼠移植瘤、心脏及肾脏组织中nNOS、eNOSmRNA的表达量, 免疫组化法检测小鼠移植瘤及肾脏组织中基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9、缺氧诱导因子HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况, CD34标记血管内皮细胞计数微血管密度(MVD); 以CD34与Masson双色染色法观察微血管结构的变化。   结果  1) 实验组移植瘤体积增长(75.60 mm3)小于模型组(131.89mm3), 差异有统计学意义(P=0.030);各组小鼠体重变化无显著性差异(P=0.609)。2)药物对照组及实验组小鼠肾脏组织中nNOS及eNOSmRNA表达量均下调(P < 0.05), 心肌组织中nNOSmRNA表达下调(P < 0.05)、eNOSmRNA却未见明显变化; 各组小鼠移植瘤组织中nNOS及eNOSmRNA表达的差异均无统计学意义。3)移植瘤组织中MMP-9和VEGF蛋白的表达显著降低, MMP-2、HIF-1α及各组小鼠肾脏组织MMP-2、MMP-9、HIF-1α、VEGF表达无明显变化; 移植瘤组织的MVD显著降低, 胶原覆盖血管的比例升高, 而肾脏组织中MVD和结构几乎无变化。   结论  重组人血管内皮抑制素可下调移植瘤组织中MMP-9和VEGF蛋白的表达、降低MVD, 抑制移植瘤的生长, 并可使移植瘤血管趋向成熟, 但不能降低肾脏组织中血管生成相关因子的表达、亦不能改变肾脏组织的MVD及微血管结构; 其可下调心脏及肾脏组织NOSmRNA的表达, 可能为应用中导致血压变化的原因之一。      

重组人血管内皮抑制素抑制内皮细胞血管生成的实验研究

目的:观察国产重组人血管内皮抑制素(Endostar,恩度)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的抗血管生成作用,并对其机制进行初步探讨.方法:采用MTS/PMS系统测定不同浓度恩度对HUVECs和人肝癌细胞株HepG2的生长抑制作用;流式细胞术检测恩度在相同时间内诱导HUVECs和HepG2细胞早期凋亡和晚期凋亡情况;通过迁移/侵袭实验、体外管腔形成实验和鸡胚尿囊膜(CAM)实验观察恩度对HUVECs迁移/侵袭和体内外管腔形成及功能的影响.结果:不同浓度的恩度持续作用72h,对HUVECs具有抑制增殖,且在50～200ng/ml的剂量范围内呈现浓度依赖关系;而对HepG2细胞未见明显作用.药物处理方式的不同,恩度对HUVECs诱导凋亡和迁移/侵袭作用差异显著;对HepG2细胞的迁移/侵袭未见明显影响.高剂量的恩度对HUVECs体外管腔形成和鸡胚尿囊膜的血管发生及成熟具有显著影响.结论:重组人血管内皮抑制素(恩度)能够有效地抑制血管内皮细胞形成复杂的管腔,并显著影响血管的成熟;对人肝癌细胞系HepG2生长及迁移/侵袭未见明显影响.     

重组人血管内皮抑制素相关性眼底出血1例

患者男性，53岁，于2007年5月30日行“左肾根治切除术”，术中见肾脏与周围粘连明显，肾蒂下方肿大淋巴结侵入腰大肌，无法切除。术后病理：（左）肾盂鳞状细胞癌，中分化，伴出血、坏死。肿瘤大小4cm×4cm×3cm，侵犯肾盂周围脂肪及肾实质。肾门淋巴结1／1转移。术后结合分期检查诊断为：左肾盂鳞状细胞癌Ⅳ期（pT4N1M0）侵犯左腰大肌及椎骨。术后恢复良好。2007年6月19日行左腰大肌局部放疗15MVX DT 60Gy／30f，6周完成，消化道反应Ⅱ度。     

重组人血管内皮抑制素联合放射治疗对lewis肺癌小鼠的作用

背景与目的放疗敏感性与组织中氧含量关系密切,单用重组人血管内皮抑素(rh-endostatin,YH-16,恩度)可能通过血管正常化作用使组织中氧含量增加,这与放疗的敏感性密切相关。本研究将重组人血管内皮抑素与放射治疗联合对lewis肺癌小鼠的肿瘤生长及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法制作lewis肺癌细胞种植肿瘤的动物模型,小鼠随机分为四组:A组为空白对照组,B组为重组人血管内皮抑素组,C组为放疗组,D组为联合组。分别给予相应处理后绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率,用免疫组化(SP法)测定VEGF的表达及微血管密度。结果经过相应的处理后,各处理组较A组移植瘤的生长速度明显减慢。且各组瘤质量明显低于A组(P<0.05),D组较其它三组降低得更加明显(P<0.05),VEGF的表达及微血管密度与A组相比也有不同程度的降低(P<0.05),其中D组下降最为明显。结论重组人血管内皮抑素和放疗联用对lewis肺癌小鼠有明显肿瘤抑制作用,其机制可能是下调VEGF的表达、抑制新生血管的生成。     

重组人血管内皮抑制素治疗恶性肿瘤的研究进展

重组人血管内皮抑制素(恩度)是一种广谱的抗血管生成分子靶向药物,主要循证证据为联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC).近年来,重组人血管内皮抑制素用于治疗多种恶性肿瘤的研究逐渐增多,并取得了较好的疗效.此外,有关重组人血管内皮抑制素联合治疗手段、给药途径、给药方法的研究逐渐开展,有利于其合理应用.     

重组人血管内皮抑制素临床应用进展

重组人血管内皮抑制素具有抗血管生成作用,副作用小。与化疗联合或单药治疗晚期恶性肿瘤,可提高疗效,改善生活质量,延长生存时间。在临床具有一定的应用前景。     

重组人血管内皮抑制素对肝癌H22腹水瘤小鼠腹水的抑制作用

目的探讨血管内皮抑制素腹腔内给药对H22小鼠腹水瘤生长及腹水的抑制作用。方法取110只昆明小鼠腹腔内接种H22细胞（2x106细胞／只）,建立小鼠腹水瘤模型,接种后随机分为5组：模型对照组（0．9％NS）;低剂量血管内皮抑制素组（4mg／kg）;中剂量血管内皮抑制素组（8mg／kg）;高剂量血管内皮抑制素组（12mg／kg）;阳性对照组（顺铂0．6mg／kg）。接种24h后连续10d给予各药物腹腔内注射,停药24h后处死各组小鼠,测量腹水量并取腹水行相关检测;解剖小鼠,观察腹腔脏器及肺脏的转移情况;通过Evan蓝的吸光度值反映小鼠的腹膜渗透性;观察各组小鼠的生存时间。结果与模型对照组相比,中、高剂量血管内皮抑制素组可显著抑制荷H22腹水瘤小鼠腹水的生成,并减少腹腔内及肺脏转移,延长生存时间。结论血管内皮抑制素腹腔内用药治疗荷H22腹水瘤小鼠腹水具有显著的抑制作用。     

重组人血管内皮抑制素对淋巴管内皮细胞骨架及淋巴管生成的影响

目的：研究重组人血管内皮抑制素（Ｅｎｄｏｓｔａｒ,恩度）对淋巴管内皮细胞的作用及淋巴管生成的影响。方法：磁珠分选小儿包皮真皮淋巴管内皮细胞进行培养,并在光镜下观察和采用细胞特异性标记物检测。设立对照组和恩度实验组,应用免疫荧光法和体外三维培养法来判定恩度对淋巴管内皮细胞有无抑制作用。结果：恩度实验组淋巴管内皮细胞骨架中微丝排列极性减弱或消失,微管无明显改变。恩度实验组淋巴管内皮细胞体外形成管状分支数量及管状结构形成能力较对照组明显下降（Ｐ＜０.０５）。结论：重组人血管内皮抑制素（恩度）对淋巴管内皮细胞的细胞骨架和体外成管能力有明显的抑制作用。     

重组人血管内皮抑制素对小鼠Lewis肺癌肿瘤抑制作用

目的：研究重组人血管内皮抑制素（rhuEndostatin）对小鼠Lewis肺癌肿瘤生长的抑制作用，寻找其量效关系及其作用机制。方法：每只小鼠剃毛背部皮下接种Lewis肺癌细胞，待肿瘤长至100 mm3左右时，随机分为低、中、高3个剂量组，每次分别注射rhuEndostatin 5 mg/（kg·d）， 15 mg/(kg·d)或30 mg/（kg·d），每天1次，连续21 d。同时设置生理盐水对照组和注射用环磷酰胺\[100 mg/（kg·d）\]治疗对照组。于第22天断颈处死小鼠，称皮下肿瘤的重量，并取脑、肺、肝、脾和肾切片做病理学检查。结果： 血管内皮抑制素治疗组的曲线下面积明显小于肿瘤对照组（P<0.01）。病理切片检查显示，治疗组肿瘤有大面积的坏死，瘤周毛细血管消失。结论：rhuEndostatin可明显抑制小鼠Lewis肺癌肿瘤的生长（高剂量组可达588%）、转移和新生毛细血管的形成。     

重组人血管内皮抑制素联合化疗治疗晚期恶性肿瘤

目的 观察重组人血管内皮抑制素（恩度）联合化疗治疗晚期恶性肿瘤的疗效和毒副反应.方法 25例经病理组织学或细胞学检查确诊的晚期恶性肿瘤患者,均采用恩度联合化疗方案,恩度15 mg静脉滴注3～4h,d1-14连续给药,同时给予以往未使用过的或既往治疗无交叉耐药的化疗药物,每3周重复.2个周期后评价疗效和毒副反应.结果 2...     

The effect of rh-endostatin on micrangium and angiogenic factors in tumor and myocardium tissue

Objective  

The aim of this study was to compare effect of rh-endostatin on microvasculature in tumor and myocardium tissue.     

重组人血管内皮抑素联合培美曲塞和卡铂方案一线治疗高龄晚期肺腺癌患者的临床观察

目的探讨重组人血管内皮抑素（恩度）联合培美曲塞和卡铂（PC）方案一线治疗年龄大于70岁的晚期肺腺癌患者的疗效和不良反应。方法回顾性分析41例经病理组织学证实的高龄肺腺癌患者,给予重组人血管内皮抑素（恩度）联合培美曲塞和卡铂（Pc）方案化疗。恩度15mg／d静滴,第1-14天;培美曲塞500mg／m2,第1天;卡铂取AUC为5,第1天,21天为1个周期,记录治疗的有效率（RR）、无疾病进展生存时间（PFS）、总生存期（OS）和不良反应。按实体瘤疗效评价标准评价治疗效果。结果41例均可评价疗效,完全缓解（CR）2例,部分缓解（PR）13例,稳定（SD）15例,进展（PD）11例。有效率（CR＋PR）为36．6％,疾病控制率（CR＋PR＋SD）为73．2％,中位PFS为7．9个月,中位OS为13个月。主要不良反应为Ⅰ-Ⅱ级的胃肠道反应和骨髓抑制,Ⅲ～Ⅳ级不良反应包括中性粒细胞缺乏4例,无化疗相关性死亡。结论重组人血管内皮抑素联合PC方案一线治疗高龄晚期肺腺癌患者疗效较好,不良反应可以耐受。     

重组人血管内皮抑素联合化疗一线治疗转移性结直肠癌的临床观察

目的　探讨重组人血管内皮抑素（恩度）联合化疗一线治疗转移性结直肠癌的安全性与疗效。方法　１６例转移性结直肠癌患者,在常规化疗基础上联合恩度进行一线治疗,化疗方案包括ＸＥＬＯＸ方案、ＸＥＬＩＲＩ方案和卡培他滨单药,恩度１５ｍｇ／天静滴,第１～１４天。３周为１周期,共进行４～６个周期。结果　１６例患者共完成８３个周期的治疗,平均５.２个周期,均可评价不良反应和客观疗效。主要不良反应为骨髓抑制、胃肠道反应、神经毒性和手足综合征,多为１～２级,且与化疗相关。疗效评价获ＰＲ６例,ＳＤ７例,ＰＤ３例,客观缓解率为３７.５％,疾病控制率为８１.３％;中位无进展生存期为９.２０个月（９５％ＣＩ：３.３９～１５０１）,中位生存期为１５.３个月（９５％ ＣＩ：６.１８～２４.４２）;与治疗前相比,治疗后ＣＥＡ（Ｐ＝０.０４９）和ＣＡ１９９（Ｐ＝０.０４８）均显著下降。结论　恩度联合化疗一线治疗转移性结直肠癌安全有效。     

重组人血管内皮抑素联合FOLFIRI方案治疗结直肠癌肝转移的临床观察

目的 探讨重组人血管内皮抑素（恩度）联合FOLFIRI方案治疗结直肠癌肝转移的疗效和安全性。方法 收集2006年9月至2011年1月29例结直肠癌肝转移患者,给予恩度联合FOLFIRI方案治疗。恩度15mg静滴,d1～d10,14天为1周期。FOLFIRI方案：伊立替康180mg／m2静滴,d1;亚叶酸钙400mg／m2静滴,d1;氟尿嘧啶400mg／m2静推,d1,2400mg／m2持续静滴46～48h,14天为1周期。每周期评价不良反应,3～4个周期评价疗效。结果 29例患者中有27例可评价疗效,获CR 1 例,PR 10例,SD 9例,PD 7例,有效率为40.7％,疾病控制率为741％,14例患者生活质量改善;全组有27例获随访,中位无进展生存期为7.8个月（95％CI：5.3～10.2个月）。毒副反应主要为血液学毒性、恶心呕吐和迟发性腹泻,以1～2级为主,未出现严重的心血管系统毒副反应。结论 恩度联合FOLFIRI方案治疗结直肠癌肝转移疗效较好,毒副反应可耐受。     

重组人血管内皮抑制素和沙利度胺联合化疗治疗转移性结直肠癌的临床观察

目的 观察重组人血管内皮抑制素（恩度）、沙利度胺与细胞毒药物联合治疗晚期结直肠癌的疗效和安全性。方法 研究纳入47例2006年1月至2013年1月于中国医学科学院肿瘤医院接受恩度、沙利度胺联合细胞毒药物治疗的转移性结直肠癌患者。分别按照实体瘤的疗效评价标准（RECIST）1.0和国立癌症研究所毒性判定标准（NCI-CTC）4.0评价疗效和毒副反应,同时随访其生存情况。具体给药方案：恩度15 mg/d,加入生理盐水500 ml静脉滴注,d1~d10;沙利度胺150 mg或200 mg,每晚睡前顿服,d1~d10;14 d为1周期。与恩度和沙利度胺联用的化疗方案均为双周方案,包括奥沙利铂+氟尿嘧啶类药物（18例）,奥沙利铂+雷替曲塞（1例）,伊立替康+氟尿嘧啶类药物（26例）及伊立替康+雷替曲塞（2例）。结果 一线、二线、三线及三线以上接受含恩度+沙利度胺联合化疗方案者的中位生存期依次为26.1（95%CI： 21.9~30.2）、15.3（95%CI：9.5~21.0）和7.5（95%CI：4.2~10.7）个月,中位无进展生存期依次为：11.1（95%CI：8.6~13.7）、7.9（95%CI：4.7~11.2）和4.2（95%CI：1.5~7.0）个月,有效率依次为63.1%、37.5%和16.7%,疾病控制率依次为84.2%、68.7%和66.7%。全组的常见不良反应多为1~2级,包括白细胞减少、中性粒细胞减少、贫血、恶心和呕吐,3、4级毒副反应包括中性粒细胞减少（8.5%）、血小板减少（6.4%）、恶心（4.3%）、呕吐（4.3%）、便秘（4.3%）、疲乏（2.1%）和周围神经毒性（2.1%）。结论 恩度、沙利度胺联合细胞毒药物对初治和复治的转移性结直肠癌患者有较好的疗效及安全性。     

microRNA-486对结直肠癌裸鼠皮下移植瘤生长抑制作用及其机制的研究

背景与目的：越来越多的证据表明microRNA在生物进程的各个阶段发挥重要作用。在不同的恶性肿瘤中microRNA-486表达上调或者下调,但microRNA-486对人结直肠癌潜在的作用尚不清楚。该研究旨在探讨其对细胞系SW620裸鼠皮下移植瘤生长情况的影响及其可能的作用机制。方法：取18只裸鼠,按简单随机法分为实验组、阴性对照组和空白对照组。每组5只,分别皮下接种SW620细胞。造模成功后实验组、阴性对照组、空白对照组每3天分别于瘤周注射miRNA-486过表达质粒、空白载体及等量PBS,比较各组裸鼠皮下瘤体的体积,接种3周后处死裸鼠,取出皮下瘤组织,用免疫组织化学法和Western blot法分析比较neuropilin-2的表达。结果：实验组瘤体生长速度明显低于阴性对照组和空白对照组;实验组裸鼠皮下种植瘤的大小为(0.32±0.12) cm³,阴性对照组为(0.77±0.31) cm³,空白对照组为(0.82±0.18) cm³;实验组瘤体体积显著小于其他两组体积(P=0.006);实验组瘤体质量为(0.40±0.08) g,明显低于阴性对照组(0.75±0.18) g及空白对照组(0.79±0.18) g(P=0.008);实验组种植瘤中neuropilin-2的表达量较另外两组下降(P=0.000)。结论：注射miR-486过表达质粒后结直肠癌细胞SW620裸鼠皮下移植瘤的生长可受到抑制,其作用可能是通过降低neuropilin-2的表达来实现的。miR-486有望成为结直肠癌治疗新的靶点。     

c-jun基因沉默对放射抗拒鼻咽癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响

目的 探讨c-jun基因沉默对人鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响。方法 用携带shRAN慢病毒载体感染CNE-2R细胞以沉默c-jun基因,构建c-jun-shRNA-CNE-2R细胞组（c-jun-shRNA组）以及阴性对照NC-shRNA-CNE-2R细胞组（NC组）,以CNE-2R细胞为空白对照组,采用Western blot 检测3组细胞中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白的表达水平。构建裸鼠模型,观察3组细胞裸鼠皮下种植瘤生长曲线及体积;采用免疫组化法检测移植瘤组织中VEGF、CD34的表达,并检测组织内微血管密度（microvessel density,MVD）。结果 Western blot 结果显示,c-jun-shRNA组细胞VEGF蛋白表达较NC组及空白对照组明显下调（P<0.05）。裸鼠模型实验中,c-jun-shRNA组移植瘤体积为（720.85±72.10） mm³,质量为（0.42±0.04）g,MVD为11.69±3.30;NC组移植瘤体积为（1 196.81±90.69） mm³,质量为（0.80±0.08）g,MVD为32.56±7.33;空白对照组移植瘤体积为（1 203.76±100.42） mm³,质量为（0.83±0.05）g,MVD为35.45±4.87;c-jun-shRNA组种植瘤体积、质量、MVD较NC组和空白对照组低（P<0.05）。免疫组化检测结果显示,移植瘤组织中VEGF蛋白表达c-jun-shRNA组呈弱阳性,NC组及空白对照组组均呈强阳性。结论 c- jun基因沉默可抑制放射抗拒性鼻咽癌移植瘤生长及血管生成。     

Lipid A controls the robustness of intratumoral accumulation of attenuated Salmonella in mice

Engineered Salmonella have the potential to treat cancers that are not responsive to standard molecular therapies. This potential has not been realized because colonization in human tumors is insufficient and variable as shown in preliminary phase I trials. Recent studies have shown that Salmonella colonization is associated with an inflammatory response mediated by tumor necrosis factor (TNF). An injectable agent, molecular lipid A, could be used to control bacterial accumulation because it induces TNF production and is rapidly cleared. We hypothesized that concurrently administrating lipid A with attenuated Salmonella would increase intratumoral accumulation, improve the robustness of tumor‐targeting and be nontoxic. To test this hypothesis, Salmonella and lipid A were injected into mice with 4T1 mammary tumors. Colonization was quantified after 48 hr using anti‐Salmonella immunofluorescence. A 2 μg/mouse dose of lipid A increased the area of colonized tissue fourfold, reduced variance 50% and ensured colonization in all mice. Comparatively, Salmonella failed to colonize some control mice, similar to human trials. No toxicity was observed in any treated mice. The fraction of tumor tissue with more than 25% bacterial coverage was eight times greater for treated mice compared to controls. Lipid A treatment also reduced the maximum average distance of tissue to Salmonella colonies from 1348 to 260 μm. A mathematical model of bacterial drug production predicted that 2 μg lipid A would increase tumor cell death by 82%. These results suggest that lipid A could solve the clinical challenges of Salmonella therapy and enable safe and robust treatment of cancer with bacteria.     

Growth-inhibiting effect of intratumoral recombinant human tumor necrosis factor on an experimental model of primitive neuroectodermal tumor

The effect of intratumoral administration of recombinant human tumor necrosis factor on an experimental model of primitive neuroectodermal neoplasia was studied. A clear inhibition of tumor growth was achieved by immunotherapy that consisted in intralesion injections of 100 g of tumor necrosis factor daily, the first three days of each week, for a period of four weeks. At this time, tumor size was 2.21 ± 0.66 cm² (mean ±standard deviation) in the treated group, versus 7.62 ± 0.43 cm² in the control group. These data support previous studies on the influence of tumor necrosis factor on the development of ethyl-nitrosourea-induced tumors, and suggest the potential usefulness of this cytokine in human primitive neuroectodermal neoplasms.     

平阳霉素与硒联用对小鼠移植瘤局部瘤体注射效果的实验研究

 采取BLM_A5与SeO₂合用对C₅₇BL/6小鼠移植的黑色素瘤B₁₆进行局部瘤体注射的治疗实验，结果：BLM_A5与SeO₂单用抑瘤率分别为79.24%，74.00%，BLM_A5＋SeO₂水剂抑瘤率为94.04%（P＜0.05）其乳剂为97.83%（P＜0.01），可见SeO₂增强了BLM_A5的抗癌作用。