阿托伐他汀对高葡萄糖诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的研究阿托伐他汀对醛糖还原酶(AR)和核因子NF-κB的表达及血管平滑肌细胞增殖的影响,探讨阿托伐他汀抗细胞增殖的可能机制.方法用高浓度葡萄糖诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)AR基因表达,然后加入不同浓度的阿托伐他汀,培养3 d后用台盼蓝染色行细胞计数.并采用RT-PCR、免疫组化、原位杂交等方法,观察阿托伐他汀对NF-κB和AR基因表达及VSMC增殖的影响.结果 1)随着阿托伐他汀浓度的提高,VSMC计数逐渐减少.2)正常浓度葡萄糖(5.6 mmol/L)时, NF-κB表达不明显,高浓度葡萄糖(22.5 mmol/L)时,NF-κB表达强阳性,阿托伐他汀则可明显抑制这一表达,0.1 μmol/L阿托伐他汀时, NF-κB表达即有降低,10 μmol/L阿托伐他汀几乎完全抑制NF-κB的表达.3)高浓度葡萄糖可明显诱导AR基因的表达,阿托伐他汀对其表达有抑制作用,且呈剂量依赖性.与高浓度葡萄糖组相比,阿托伐他汀0.1、1、10 μmol/L分别使VSMC的AR mRNA下调12%、45%和80%(P均＜0.05).结论 1)阿托伐他汀可抑制VSMC增殖.2)阿托伐他汀可抑制AR及NF-κB的表达.3)阿托伐他汀可能是通过抑制AR及NF-κB的表达继而抑制VSMC的增殖.     

阿托伐他汀抑制C反应蛋白对肺动脉平滑肌细胞的促炎作用研究

目的观察C反应蛋白(CRP)和阿托伐他汀对人肺动脉平滑肌细胞(hPASMCs)炎性因子分泌的影响。方法体外培养hPASMCs,培养液只加FBS为对照组,培养液中加5、10、20、50、100、200 mg/L CRP依次分为CRP5组、CRP10组、CRP20组、CRP50组、CRP100组、CRP200组;加入0.1、1.0、10μmo1/L阿托伐他汀依次为阿托0.1组、阿托1.0组、阿托10组,另用CRP100 mg/L刺激不同时间,以非变性凝胶电泳迁移率方法分析NF-κB的激活。以RT-PCR和ELISA方法对白细胞介素6(IL-6)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA和蛋白水平检测。结果CRP以浓度和时间依赖的方式促进IL6和MCP-1 mRNA表达和蛋白的合成。与对照组比较,除CRP5组外,CRP各浓度组IL-6和MCP-1蛋白和mRNA均显著增加(P<0.05,P<0.01),阿托伐他汀各浓度组无显著差异(P>0.05)。CRP显著诱导NF-κB的激活,阿托伐他汀抑制NF-κB激活。结论CRP促进hPASMCs对IL-6和MCP-1的表达,阿托伐他汀可能通过抑制NF-κB的激活而显著降低CRP对hPASMCs IL-6和MCP-1合成,起到对肺血管疾病的保护作用。     

阿托伐他汀对C反应蛋白诱导的CD14+单核细胞Toll样受体4表达影响的实验研究

目的 观察阿托伐他汀对C反应蛋白(CRP)诱导的外周血CD14+单核细胞Toll样受体4(TLR4)表达,以及TLR4信号传导下游炎症因子肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素-6(IL-6)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的影响,探讨阿托伐他汀的抗炎机制.方法 不同浓度(0、5、25、50、100 μg/ml)和不同作用时间(0、6、12、24、48 h)的C反应蛋白(CRP)刺激正常人外周血CD14+单核细胞.给予CRP 50 μg/ml预先干预CD14+单核细胞2 h后,再用不同浓度的阿托伐他汀(1.0、2.5、5.0、7.5、10.0 μmol/L)进行干预.应用流式细胞仪检测细胞表面TLR4蛋白的表达,并应用定量PCR方法检测TLR4 mRNA和髓样分化蛋白2(myeloid differentiation protein,MD2)mRNA的表达,ELISA法检测刺激前后细胞上清液TNFα、IL-6和MMP-9的蛋白水平.结果 (1)CRP 0 μg/ml组TLR4蛋白表达量为19.59%,CRP 5 μg/ml组的TLR4蛋白表达为29.33%,差异有统计学意义(P<0.01),并随着CRP浓度的增加,TLR4蛋白表达量逐渐增加.以CRP 0 h组为空白对照,CRP 6 h组的TLR4蛋白表达量为25.75%,差异有统计学意义(P<0.01),并随着时间的增加,TLR4表达量逐渐增加.(2)以CRP 50 μg/ml组为对照组,CRP 50 μg/ml和阿托伐他汀1.0 μmol/L组、2.5 μmol/L组、5.0 μmol/L组、7.5 μmol/L组、10.0 μmol/L组,TLR4蛋白表达分别为(68.17±1.71)%、(52.43±1.38)%、(27.72±4.55)%、(17.46±3.20)%、(9.99±2.81)%.(3)以CRP 50 μg/ml组为标准,CRP 50 μg/ml〖JP〗和阿托伐他汀1.0 μmol/L组、2.5 μmol/L组、5.0 μmol/L组、7.5 μmol/L组、10.0 μmol/L组,TLR4 mRNA分别为对照组的82.72%、67.34%、48.16%、30.88%、13.85%.MD2 mRNA分别为对照组的81.78%、71.04%、47.85%、27.06%、18.30%.随着阿托伐他汀浓度增加,TLR4和MD2的mRNA含量减少.(4)当单核细胞未受CRP和阿托伐他汀刺激时,分泌TNFα、IL-6和MMP-9的基础值分别为(16.3±5.8)pg/ml、(31.1±9.5)pg/ml 和(155.0±47.2)ng/ml.CRP 50 μg/ml组,单核细胞分泌TNFα、IL-6和MMP-9分别为(106.9±7.5)pg/ml、(566.9±10.0)pg/ml和(416.9±37.1)ng/ml,与空白对照组比较,差异均有统计学意义,P均<0.01.而CRP和阿托伐他汀2.5 μmol/L组,单核细胞分泌TNFα、IL-6和MMP-9分别为(81.1±5.4)pg/ml、(433.9±18.1)pg/ml和(310.5±16.3)ng/ml,与CRP 50 μg/ml组比较差异均有统计学意义,P均<0.01.结论 CRP可剂量依赖性和时间依赖性地增加CD14+单核细胞TLR4和MD2的表达,阿托伐他汀通过抑制CRP诱导单核细胞TLR4信号转导途径,降低炎症因子TNFα、IL-6和MMP-9的分泌,是其抗炎作用的机制之一.

Abstract：

Objective To investigate the effects of atorvastatin on C-reactive protein (CRP)induced Toll-Like receptor 4(TLR4)expression on CD14+ monocyte, and the production of proinflammatory cytokines tumor necrosis factor α (TNFα), interleukin-6 (IL-6), matrix metalloproteinases-9 (MMP-9), and to study the anti-inflammatory mechanisms of statins. Methods The monocytes were isolated from blood of healthy volunteers by the Ficoll density gradient and stimulated by CRP with different doses (5, 25, 50, 100 μg/ml)and different exposure time (6, 12, 24, 48 h). Cells were also incubated with atorvastatin of different doses (1.0, 2.5, 5.0, 7.5, 10.0 μmol/L)in the presence of CRP 50 μg/ml. The protein expression of TLR4 was measured by flow cytometry, mRNA expression of TLR4 and of myeloid differentiation protein (MD2)was detected by quantitative PCR. TNFα, IL-6, MMP-9 concentrations in supernatants of cultured medium were measured by ELISA.Results (1)Compared with the un-stimulated control group, enhanced TLR4 protein expression was already detected at a concentration of 5 μg/ml of CRP and increased in a dose-dependent manner (32.22±2.80)%, (49.94±5.58)%, (74.82±3.24)% and (90.82±2.88)% at 5, 25, 50 and 100 μg/ml CRP. (2)TLR4 protein expression on 50 μg/ml CRP stimulated cells also increased in a time-dependent manner (29.80±2.70)%, (47.44±4.41)%, (81.71±2.92)% and (50.57±3.34)% after 6 h, 12 h, 24 h, 48 h.(3)When monocytes were incubated with CRP 50 μg/ml and atorvastatin (1.0, 2.5, 5.0, 7.5, 10.0 μmol/L), protein expression [(68.17±1.71)%, (52.43±1.38)%, (27.72±4.55)%, (17.46±3.20)%, (9.99±2.81)%］and mRNA expression (82.72%, 67.34%, 48.16%, 30.88%, 13.85%)of TLR4 as well as mRNA expression of MD2 (81.78%, 71.04%, 47.85%, 27.06%, 18.30%)were reduced in a dose-dependent manner. (4)Level of TNFα, IL-6 and MMP-9 in supernatants was significantly reduced by atorvastatin (2.5 μmol/L)compared with control group(P<0.01). When monocyte incubated with CRP 50 μg/ml and atorvastatin 10.0 μmol/L, the level of TNFα, IL-6, MMP-9 decreased to (25.8±2.5)pg/ml, (128.2±14.7)pg/ml, (65.2±12.3)ng/ml, respectively.Conclusion CRP increased the protein expression of TLR4 on CD14+ monocyte in a dose-dependent and time-dependent manner. Atorvastatin can inhibit the signal transduction of TLR4 and reduce proinflammatory cytokines release induced by CRP on CD14+ monocyte, and this might be one of the anti-inflammatory mechanisms of atorvastatin.     

过氧化物酶增殖物激活受体-γ调节体外诱导培养的人巨噬细胞表达基质金属蛋白酶-9及其抑制物-1的作用及机制

目的 探讨过氧化物酶增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)在调节急性冠状动脉综合征(ACS)患者外周血单核细胞源性巨噬细胞(MDM)表达基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)中的作用及可能机制.方法选取ACS患者48例(ACS组)、对照者28例(对照组),提取外周血单个核细胞,刺激培养为MDM.随机将ACS组及对照组MDM分别分为罗格列酮0、1、10和20 μmol/L亚组,分别于相应亚组加入血清、1、10和20 μmol/L浓度的罗格列酮干预.然后测定各亚组MDM上清液中MMP-9、TIMP-1浓度及MDM细胞中PPAR-γ、MMP-9、TIMP-1 mRNA表达强度,并用免疫组织化学法测定核因子-κB(NF-κB)蛋白表达变化.分析比较ACS组与对照组间不同浓度罗格列酮干预亚组表达PPAR-γ、MMP-9、TIMP-1 mRNA及MMP-9、TIMP-1、核因子-κ B P65(NF-κ B P65)蛋白水平上的差异.结果罗格列酮干预后,ACS组及对照组MDM中PPAR-γ mRNA表达明显上调[PPAR-γ mRNA,ACS组:0.25±0.05,0.26±0.07,0.74±0.12,0.86±0.12,1.16±0.26,1、10、20 μmoL/L亚组与干预前及0 μmol/L亚组比JP2较P均＜0.01;对照组:0.39±0.06,0.37±0.04,0.99±0.10,0.99±0.09,1.00±0.12,1、10、20μmol/L亚组与干预前及0 μmol/L亚组比较P均＜0.01;数据排列顺序为干预前、0、1、10、20μmol/L亚组,下同],在ACS组中表达强度与罗格列酮浓度呈正比关系.ACS组及对照组MDM上清液中MMP-9浓度下降[MMP-9浓度(mmol/L),ACS组:231±51,215±47,181±36,172±30,151±24,1、10、20 μmol/L亚组与干预前及0 μmol/L亚组比较P均＜0.01;对照组:138±15,127±15,119±13,112±17,107±18,1 μmoL/L亚组与干预前比较P＜0.05,10、20 μmol/L亚组与干预前比较P均＜0.01,10 μmol/L亚组与0 μmol/L亚组比较P＜0.05,20 μmol/L亚组与0 μmol/L亚组比较P＜0.01];MDM中MMP-9 mRNA表达下调[MMP-9 mRNA,ACS组:0.67±0.11,0.62±0.10,0.54±0.05,0.48±0.10,0.41±0.06,1、10、20 μmol/L亚组与干预前比较P均＜0.01,10、20 panoL/L亚组与0 μmol/L亚组比较P均＜0.01,1 μmoL/L亚组与0 μmol/L亚组比较P＜0.05;对照组:0.24±0.08,0.26±0.09,0.20±0.05,0.22±0.05,0.20±0.04,10、20μmoL/L亚组与干预前及0μmol/L亚组比较P均＜0.01,1 μmol/L亚组与干预前比较P＜0.05],ACS组中下调程度与罗格列酮浓度呈反比关系.ACS组和对照组上清液中TIMP-1浓度及MDM中TIMP-1mRNA的表达无明显变化.ACS组和对照组MDM中NF-κB P65表达下调[NF-κB P65 OD值,ACS组:0.42±0.09,0.41±0.09,0.34±0.04,0.34±0.04,0.32±0.05,1、10、20μmol/L亚组与干预前及0μmol/L亚组比较P均＜0.01;对照组:0.28±0.03,0.25±0.04,0.23±0.03,0.23±0.04,0.22±0.05,1、10、20 μmol/L亚组与干预前及0 μmol/L亚组比较P均＜0.05],不同浓度罗格列酮亚组问差异无统计学意义.结论罗格列酮可能通过上调PPAR-γ表达,减低ACS组NF-κB水平,而下调ACS患者MDM表达MMP-9,但TMPI-1表达小受此调节.罗格列酮町能具有稳定ACS患者动脉粥样斑块的作用.     

阿托伐他汀对高葡萄糖诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的研究阿托伐他汀对醛糖还原酶(AR)和核因子NF-κB的表达及血管平滑肌细胞增殖的影响,探讨阿托伐他汀抗细胞增殖的可能机制。方法用高浓度葡萄糖诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)AR基因表达,然后加入不同浓度的阿托伐他汀,培养3d后用台盼蓝染色行细胞计数。并采用RT-PCR、免疫组化、原位杂交等方法,观察阿托伐他汀对NF-κB和AR基因表达及VSMC增殖的影响。结果1)随着阿托伐他汀浓度的提高,VSMC计数逐渐减少。2)正常浓度葡萄糖(5·6mmol/L)时,NF-κB表达不明显,高浓度葡萄糖(22·5mmol/L)时,NF-κB表达强阳性,阿托伐他汀则可明显抑制这一表达,0·1μmol/L阿托伐他汀时,NF-κB表达即有降低,10μmol/L阿托伐他汀几乎完全抑制NF-κB的表达。3)高浓度葡萄糖可明显诱导AR基因的表达,阿托伐他汀对其表达有抑制作用,且呈剂量依赖性。与高浓度葡萄糖组相比,阿托伐他汀0·1、1、10μmol/L分别使VSMC的ARmRNA下调12%、45%和80%(P均<0·05)。结论1)阿托伐他汀可抑制VSMC增殖。2)阿托伐他汀可抑制AR及NF-κB的表达。3)阿托伐他汀可能是通过抑制AR及NF-κB的表达继而抑制VSMC的增殖。     

阿托伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞迁移和组织蛋白酶S表达的影响

目的 观察阿托伐他汀对白细胞介素1β诱导的大鼠血管平滑肌细胞迁移及组织蛋白酶S和核因子κB表达的影响.方法 取SD大鼠胸主动脉进行血管平滑肌细胞培养,采用Boyden小室实验评价不同浓度阿托伐他汀对白细胞介素1β诱导大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响,用细胞免疫化学和逆转录聚合酶链反应法检测各组组织蛋白酶S和核因子κB表达的变化.结果 与正常对照组相比,白细胞介素1β组血管平滑肌细胞迁移增多,核因子κB和组织蛋白酶s表达明显增加(P<0.01).1 μmol/L和10 μmol/L阿托伐他汀组可呈剂量依赖性地抑制白细胞介素1β所致的细胞迁移以及组织蛋白酶S和核因子κB表达(P<0.01).结论 阿托伐他汀可能通过抑制核因子κB使组织蛋白酶S表达减少,从而抑制血管平滑肌细胞迁移.     

HDL和阿托伐他汀对oxLDL刺激下脂肪细胞炎症反应的影响

目的 观察高密度脂蛋白（HDL）及阿托伐他汀对氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）刺激下3T3-L1脂肪细胞肿瘤坏死因子-α（TNFα）分泌及mRNA表达的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 3T3-L1脂肪细胞促分化成熟后,oxLDL刺激脂肪细胞,给予不同浓度的HDL（10～100 μg/mL）和阿托伐他汀（0.1～10 μM）,及H-89（10 μM）＋HDL（100 μg/mL）干预,收集细胞,测定脂肪细胞TNFα水平、TNFα mRNA表达水平、核因子-κB（NF-κB）活性及NF-κB抑制单位（IκB）蛋白浓度.结果 oxLDL刺激使3T3-L1脂肪细胞TNFα分泌、mRNA表达水平及NF-κB活性明显增强.阿托伐他汀浓度依赖性降低TNFα 分泌及mRNA表达,抑制NF-κB活化.10 μM阿托伐他汀使oxLDL诱导的脂肪细胞TNFα mRNA表达降低56.5%,NF-κB活性减少41.2%.HDL也呈浓度依赖性抑制TNFα分泌及mRNA表达,降低NF-κB活性,减少IκB降解.与oxLDL刺激组比较,100 μg/ml HDL使TNFα mRNA表达降低64.5%,NF-κB活性减少49%,并明显增加IκB蛋白水平.HDL的这些抗炎效应能被蛋白激酶A（PKA）抑制剂（应放在H89第一次出现之处）H-89部分抑制.结论 HDL能抑制oxLDL诱导的3T3-L1脂肪细胞TNFα分泌和mRNA表达,PKA-IκB-NF-κB信号通路可能是其中作用途径之一,该效应不需要HDL与oxLDL的直接接触作用.阿托伐他汀亦通过NF-κB途径抑制oxLDL诱导的3T3-L1脂肪细胞TNFα分泌和mRNA表达.HDL的抗炎作用强度与阿托伐他汀相似.     

阿托伐他汀对THP-1巨噬细胞CD36表达的影响

目的研究阿托伐他汀(atorvastatin)对THP-1巨噬细胞B类清道夫受体CD36表达的影响。方法用5!mol/L阿托伐他汀与THP-1巨噬细胞孵育不同时间;用不同浓度的阿托伐他汀与THP-1巨噬细胞共同孵育24h,采用RT-PCR与Westernblotting分别检测THP-1巨噬细胞CD36mRNA与蛋白质的表达。结果阿托伐他汀使THP-1巨噬细胞CD36mRNA与蛋白质的表达下调(P<0.05),且时间与剂量呈依赖关系。结论阿托伐他汀能抑制THP-1巨噬细胞CD36的表达。     

罗格列酮联合阿托伐他汀对单个核细胞合成组织因子的影响

目的:研究罗格列酮联合阿托伐他汀干预对无糖尿病的急性冠状动脉综合征(ACS)患者外周血单核细胞合成组织因子水平及组织因子活性的影响.方法:分离无糖尿病的ACS患者外周血单核细胞,分成对照组(等容积的二甲基亚砜)、阿托伐他汀(1 μmol·L-1)组、罗格列酮(1 μmol·L-1)组及二者联合组(阿托伐他汀1 μmol·L-1加罗格列酮1 μmol·L-1)组4个组,分别与所分离的外周血单核细胞共同孵育24 h后,用夹心酶联免疫吸附测定法检测细胞组织因子水平,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定组织因子mRNA的表达,同时用底物发光法检测组织因子的活性.结果:与对照组相比较,阿托伐他汀组、罗格列酮组及罗格列酮联合阿托伐他汀组对无糖尿病ACS患者外周血单核细胞合成组织因子分别为[(3.69±0.91)ng/L、(3.27±0.46)ng/L、(1.90±0.26)ng/L:(5.78±1.29)ng/L,均P<0.01]、组织因子的活性分别为[(4.28±0.84)pmol/L、(5.37±0.59)pmol/L、(2.15±0.37) pmol/L:(16.21±3.23)pmol/L, 均P<0.01),及组织因子mRNA的相对半定量A值分别为[(0.22±0.07), (0.31±0.09), (0.14±0.05):(0.42±0.11),均P<0.01)均降低,且罗格列酮联合阿托伐他汀组比阿托伐他汀组、罗格列酮组降低更显著(P均<0.01).结论:阿托伐他汀和罗格列酮都可通过降低无糖尿病的ACS患者外周血单核细胞合成组织因子及组织因子活性,发挥抗组织因子、抗血栓形成的作用,且二者联合干预具有协同作用.因此,罗格列酮联合阿托伐他汀,可能有更佳的防治ACS作用.     

阿托伐他汀对血管紧张素Ⅱ诱导的人血管内皮细胞炎性因子的影响

目的观察阿托伐他汀对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)单核细胞趋化因子(MCP-1)和NF-κB抑制因子IκB-α蛋白表达的影响。方法无菌取新生儿脐带,体外培养HUVECs,取3～5代细胞加入AngⅡ10~(-6)mol/L为实验组,不加培养液为对照组,分别培养2、4、6、10、12 h。另取HUVECs,分为培养组(仅加培养液)、AngⅡ组(加AngⅡ)、阻断剂组(加AngⅡ和NF-κB抑制剂)、药物组(加AngⅡ和阿托伐他汀),每组6例,培养12 h,采用硝酸还原酶法测定NO含量,蛋白印迹法检测MCP-1和IκB-α蛋白表达。结果实验组各时间点NO含量均低于对照组(P<0.01).而MCP-1蛋白表达则显著高于对照组(P<0.01),且呈时间依赖性。阻断剂组和药物组NO含量较AngⅡ组均明显升高(P<0.01),但仍低于培养组(P<0.01);MCP-1蛋白表达较AngⅡ组均减少,但高于培养组(P<0.01)。与AngⅡ组比较,阻断剂组和药物组IκB-α蛋白表达显著升高(P<0.01),但仍低于培养组。结论阿托伐他汀对AngⅡ诱导的内皮细胞损伤具有保护作用。     

大鼠抑郁障碍与心血管组织炎性标记物的相关性研究

目的探讨强迫游泳抑郁模型大鼠抑郁障碍与炎性标记物的相关性。方法健康SD大鼠随机抽签分为对照组和模型组,应用21 d强迫游泳试验建立大鼠抑郁模型,模型组大鼠包括SS组(9只,应激+生理盐水腹腔注射)、SF组(8只,应激+氟西汀腹腔注射)和SI组(8只,应激+丙咪嗪腹腔注射)。对照组大鼠包括CS组(10只,生理盐水腹腔注射),CI组(7只,丙咪嗪腹腔注射)。应用透射免疫比浊法和酶联免疫法检测外周血炎性标记物高敏C反应蛋白(hsCRP)、单核细胞趋化因子1(MCP-1)水平,应用免疫组织化学染色法和蛋白印迹法检测血管组织核因子-κB(NF-κB)p65、抑制蛋白κB(IκB)-α、MCP-1表达水平。结果应激后模型组外周血hsCRP和MCP-1含量明显高于CS、CI组,SS组与CS组hsCRP水平分别为(0.26±0.07)mg/L和(0.15±0.06)mg/L(P<0.01),SS组与CS组MCP-1水平分别为(52.02±18.83)ng/L和(22.52±8.45)ng/L(P<0.01)。血管组织中MCP-1、NF-κB p65表达显著增强,SS组与CS组MCP-1水平分别为(1.78±0.36)mg/L和(0.85±0.15)mg/L,SS组与CS组NF-κB p65水平分别为(0.88±0.16)和(0.12±0.04)(P<0.01),胞浆中IκB-α表达显著减少,SS组与CS组IκB-α水平分别为(0.48±0.07)和(2.07±0.48)(P<0.01)。结论抑郁障碍通过NF-κB表达增强来启动炎症反应。     

罗格列酮对慢性阻塞性肺疾病患者过氧化物酶体增殖物激活受体-γ信号通路的影响

目的 探讨罗格列酮对COPD患者过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)、核因子-κB及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法 2010年4-11月,选择COPD急性加重期患者30例,其中男22例,女8例,年龄54～87岁,平均(72±9)岁;健康体检者(对照组)24例,其中男18例,女6例,年龄52 ～80岁,平均(69±10)岁.抽取受试者空腹肘静脉血10 ml,分离培养外周血单个核细胞(PBMCs).将30例COPD患者的PBMCs均分为3份,分别根据不同的药物干预分为非干预组、罗格列酮干预组(罗格列酮组)和罗格列酮联合GW9662干预组(联合干预组),对照组PBMCs不加任何药物干预.采用实时荧光定量PCR检测PBMCs中PPAR-γ和核因子-κB的mRNA表达,细胞免疫荧光法结合激光扫描共聚焦显微镜检测PPAR-γ和核因子-κB蛋白表达及核转位,酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清液中TNF-α含量.多组间比较采用方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,相关性分析采用Pearson检验.结果 mRNA(2-ΔΔCt值)和蛋白表达(荧光强度值):非干预组PPAR-γ(0.52±0.10和55±11)低于对照组(1和85±9),核因子-κB(1.69±0.07和145±17)高于对照组(1和118±7);罗格列酮组PPAR-γ(4.47±0.11和204±12)高于非干预组,核因子-κB(0.33±0.04和59±14)低于非干预组;联合干预组PPAR-γ(2.25±0.31和142±23)低于罗格列酮组,高于非干预组,核因子-κB(0.64±0.02和90±10)高于罗格列酮组,低于非干预组;组间比较差异均有统计学意义(F值为29.21～567.42,均P＜0.01).TNF-α浓度(μg/L):非干预组(96.2±1.4)高于对照组(85.3±1.0),罗格列酮组(63.0±2.5)低于非干预组,联合干预组(83.3±1.9)高于罗格列酮组,低于非干预组,组间比较差异有统计学意义(F值为293.72,P＜0.01).非干预组PPAR-γ蛋白主要位于细胞质,核因子-kB蛋白主要位于细胞核;对照组PPAR-γ和核因子-κB蛋白在PBMCs细胞质和细胞核中均有表达;罗格列酮组PPAR-γ蛋白转位于细胞核,核因子-kB蛋白转位于细胞质;联合干预组PPAR-γ蛋白转回细胞质,核因子-κB蛋白部分转移至细胞核.相关分析结果表明,PPAR-γ蛋白表达与核因子-κB蛋白表达及TNF-α浓度均呈负相关(r值分别为-0.935和-0.924,均P＜0.01),核因子-κB蛋白表达与TNF-α的浓度呈正相关(r=0.846,P＜0.01).结论 COPD的炎症可能与PPAR-γ表达及活性不足有关,罗格列酮能通过上调PPAR-γ表达和活性抑制核因子-kB,进而抑制TNF-α分泌,在COPD炎症中起着重要作用.     

急性冠状动脉综合征患者巨噬细胞表达过氧化体增殖物激活型受体γ及炎症相关因子的变化

目的 探讨急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞表达过氧化体增殖物激活型受体γ核因子κB、基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的变化及其间的关系.方法 选取急性冠状动脉综合征患者48例、稳定型心绞痛患者22例为研究对象,抽取外周动脉血20 mL,分离单个核细胞,加巨噬细胞集落刺激因子培养得单核细胞源性巨噬细胞;用CD40配体刺激后,酶联免疫吸附法测定上清液中基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1浓度,逆转录聚合酶链反应检测过氧化体增殖物激活型受体γ、基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1 mRNA表达,免疫组织化学法检测核因子κ亚单位P65表达.结果 急性冠状动脉综合征组过氧化体增殖物激活型受体γ mRNA表达低于稳定型心绞痛组(0.24±0.04比0.39±0.06,P<0.001),核因子κ P65表达高于稳定型心绞痛组(0.42±0.06比0.27±0.02,P<0.001),基质金属蛋白酶9在上清液中的浓度及其mRNA表达明显高于稳定型心绞痛组(231.11±51.47μg/L比126.02±13.26μg/L和0.674±0.11比0.24±0.05,P<0.001),组织型基质金属蛋白酶抑制剂1在上清液中的浓度及其mRNA表达强度高于稳定型心绞痛组(139.80±31.54μg/L比112.25±12.68μg/L和0.42±0.09比0.33±0.06,P<0.05).过氧化体增殖物激活型受体γ mRNA表达与核因子κ P65和基质金属蛋白酶9的表达强度呈负相关(P<0.001),与组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的表达强度不相关(P>0.05);核因子κ P65与基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的表达强度呈正相关(P<0.001).结论 急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ表达下调,核因子κ活性增强,基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1表达上调;过氧化体增殖物激活型受体γ可能通过调节核因子κ活性而调节基质金属蛋白酶9基因转录;但组织型基质金属蛋白酶抑制剂1表达可能不受过氧化体增殖物激活型受体γ调节.     

前列腺素E1对人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的 探讨前列腺素E1(PGE1)对人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattactant protein-1,MCP-1)表达的影响及可能机制.方法 用培养的人脐静脉内皮细胞观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对MCP-1、核因子(NF)-κB表达的影响及PGE1的干预作用.采用ELISA检测上清液MCP-1浓度,原位杂交检测MCP-1 mRNA的表达,免疫印迹检测NF-κB蛋白表达.结果 (1)PGE1(0.001、0.010、0.100 mol/L)组与ox-LDL(100 μg/ml)组比较,MCP-1蛋白表达为(0.327±0.051)、(0.214±0.213)、(0.247±0.228)pg/ml对(0.655±0.013)pg/ml,MCP-1mRNA表达为(0.061±0.008)、(0.033±0.006)、(0.026±0.004)吸光度(A)/μm2对(0.220±0.032)A/μm2,PGE1显著抑制了ox-LDL所诱导的MCP-1改变.(2)Western blot结果显示,PGE1呈浓度依赖性抑制ox-LDL所诱导的NF-κB P65蛋白表达.结论 PGE1可抑制ox-LDL诱导的内皮细胞MCP-1及NF-κB表达上调,这可能与PGE1介导的血管内皮保护作用有关.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对大鼠胰腺腺泡细胞信号传导途径的影响

目的 了解经雨蛙肽处理的胰腺腺泡细胞AR42J中过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPARγ)与核因子(NF)-κB活性间的关系.方法 将胰腺腺泡AR42J细胞分为对照组(常规培养)、吡咯列酮组(40 μmol/L吡咯列酮)、吡咯列酮+雨蛙肽组(40 μmol/L吡咯列酮+10~(-8) mol/L雨蛙肽)、雨蛙肽组(40 μmol/L二甲基哑砜+10~(-8)mol/L雨蛙肽)和吡咯列酮+GW9662+雨蛙肽组(40 μmol/L吡咯列酮+5 μmol/L GW9662+10~(-8)mol/L雨蛙肽),各组培养30 min后检测PPARγ和NF-κB活性.Western印迹法检测NF-κB、PPARγ蛋白和磷酸化NF-κB抑制物(IκB)α抗体、IκB激酶(IKK)β和IκBα的表达差异、IKKβ活性和IκBα磷酸化的变化.免疫荧光法和Western印迹法检测NF-κB(p65和p50)的核移位.免疫沉淀法检测IκBα与NF-κB的变化.结果 吡咯列酮不仅抑制IKKβ活性(吡咯列酮+雨蛙肽组:雨蛙肽组为1.6;3.7)及IκBα的磷酸化(吡咯列酮+雨蚌肽组:雨蛙肽组为0.9:1.5),还能加强IκBα与NF-κB的结合(吡咯列酮+雨蛙肽组:雨蛙肽组为0.8:0.3),抑制NF-κB的核移位及NF-κB的转录活性(P<0.01),而PPARγ拮抗剂GW9662则逆转了吡咯列酮对NF-κB活性的抑制作用(P<0.05).结论 在雨蛙肽处理的AR42J细胞中PPARγ通过干扰NF-κB的活化产生抗炎作用.     

叉头状转录因子O1与吡格列酮干预对肝癌HepG-2细胞葡萄糖消耗的影响

目的研究叉头状转录因子O1（FoxO1）及吡格列酮干预对高胰岛素诱导的肝癌HepG-2细胞葡萄糖消耗的影响及机制。方法1×10^-6mol／L胰岛素培养HepG．2细胞24h后,诱发培养基葡萄糖消耗减少建立细胞模型,将细胞分为对照组、空白质粒组、FoxOlsiRNA载体组、1×10^-5mol／L吡格列酮组。以普通培养基培养的细胞作为空白对照组。37℃、5％CO2培养箱中孵育24h,葡萄糖氧化酶法检测培养基中葡萄糖含量,逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测FoxO1mRNA和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）mRNA表达,Westernblot法检测PPAR-γ蛋白表达。将FoxO1mRNA、PPAR-γ mRNA、PPAR-γ蛋白表达与葡萄糖消耗量进行相关分析和曲线拟合。采用单因素方差分析及多样本均数两两比较进行统计学分析。结果高胰岛素培养24h较未诱导细胞培养基的葡萄糖消耗降低[分别为（1．36±0．03）和（2．93±0．05）mmol／L,P〈0．01],细胞Fox01mRNA升高（分别为0．513±0．016和0．425±0．011,P〈0．05）,PPAR-γmRNA降低（分别为0．260±0．025和0．441±0．012,P〈0．05）,PPAR-γ蛋白降低（分别为0．312±0．032和0．600±0．046,P〈0．05）。在抑制FoxO1和吡格列酮干预后此趋势有所缓解,逐渐接近于空白对照组。FoxO1mRNA、PPAR-γ mRNA和PPAR-γ蛋白表达与葡萄糖消耗量高度相关。结论FoxO1表达升高或降低对葡萄糖代谢产生不利影响;增强PPAR-γ表达可有效恢复高胰岛素诱导的高糖,增加肝细胞的胰岛素敏感性。     

血管紧张素Ⅱ对巨噬细胞和泡沫细胞ACAT-1及PPAR-γ表达的影响

目的:观察血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)对巨噬细胞和泡沫细胞过氧化体增殖物激活型受体γ(PPAR-γ)和酰基辅酶A:胆同醇酰基转移酶-1(ACAT-1)表达的影响.方法:将单核细胞株THP-I与160 nmol/L佛波酯(PMA)孵育48 h,使之分化为巨噬细胞,继以100 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨...     

川芎嗪对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨川芎嗪对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用及其分子机制。方法体外培养人冠状动脉内皮细胞,并随机分为对照组、ox-LDL组、不同浓度川芎嗪为1μmol/L组、10μmol/L组、100μmol/L组。用RT-PCR及Western blot法检测单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)基因和蛋白表达;采用免疫荧光法观察NF-κB p65蛋白的核转位。结果与对照组比较,ox-LDL组MCP-1、ICAM-1基因和蛋白表达明显升高(P<0.01);与ox-LDL组比较,10μmol/L组、100μmol/L组MCP-1、ICAM-1基因表达明显降低(P<0.01),1μmol/L组、10μmol/L组MCP-1、ICAM-1蛋白表达明显降低(P<0.01)。免疫荧光显示,1μmol/L组、10μmol/L组可抑制NF-κB p65亚基的核转位。结论川芎嗪对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用。     

TLR4/NF-κB信号通路在ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞分泌MCP-1中的作用

目的:探讨Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路在氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)分泌单核细胞趋化因子-1(MCP-1)中的作用。方法:取SD大鼠胸主动脉中膜培养血管平滑肌细胞,以2.5mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L的TLR4中和抗体(TLR4阻断剂)、5μmol/L、10μmol/L、、20μmol/LPDTC(NF-κB特异性阻断剂)分别进行干预,并分别设置空白对照组和ox-LDL组,观察其对血管平滑肌细胞中ox-LDL诱导的MCP-1表达的影响。结果:与空白对照组比较,ox-LDL组VSMCs MCP-1mRNA及蛋白的表达明显升高(P<0.05);与ox-LDL组比较,用TLR4中和抗体预孵育后Anti-TLR4三组MCP-1mRNA[(1.23±0.21)比(0.81±0.02)、(0.75±0.01)、(0.49±0.01)]及其蛋白的表达[(0.64±0.05)ng/ml比(0.41±0.12)ng/ml、(0.32±0.07)ng/ml、(0.21±0.02)ng/ml]明显降低(P均<0.01),且呈浓度依赖性;用PDTC预孵育后PDTC三组MCP-1mRNA[(1.37±0.19)比(1.02±0.08)、(0.87±0.01)、(0.56±0.02)]及其蛋白的表达[(0.65±0.07)ng/ml比(0.51±0.07)ng/ml、(0.30±0.08)ng/ml、(0.19±0.02)ng/ml]亦明显降低(P均<0.01),且呈浓度依赖性。结论:氧化性低密度脂蛋白是TLR4的内源性配体;氧化性低密度脂蛋白通过或部分通过TLR4/NF-κB信号通路介导血管平滑肌细胞单核细胞趋化因子-1的表达。