白细胞介素1β对气道上皮细胞表达转化生长因子-β1和胰岛素样生长因子-1的影响

目的研究前炎症因子白细胞介素-1β（IL-1β）对体外培养的气道上皮细胞转化生长因子-β1（TGF-β1）和胰岛素样生长因子-1（IGF-1）的调控,以探讨其在气道重塑中的作用。方法分离新西兰白兔的气道上皮细胞并体外培养,分别收集IL-1β作用后不同时间点和不同浓度的IL-1β作用后的培养上清液及贴有细胞的盖玻片;用双抗体夹心ELISA法和免疫细胞化学染色法分别测定TGF-β1和IGF-1蛋白的表达。结果①经IL-1β1ng/ml处理后不同时间点,IGF-1的表达在16h、24h、48h均高于对照组,差异有显著性（P〈0.05）,而这三时间点之间比较无显著性;TGF-β1的表达在8h、16h、24h、48h均高于对照组,差异有显著性（P〈0.05）;其中24h点TGF-β1表达水平明显高于其余各时间点（P〈0.05）。②不同浓度IL-1β处理气道上皮细胞后,IGF-1和TGF-β1的表达在IL-1β0.1ng/ml组、IL-1β1ng/ml组、IL-1β10ng/ml组均高于对照组,差异有显著性（P〈0.05）;IL-1β10ng/ml组TGF-β1和IGF-1表达水平均明显高于其余各组（P〈0.05）。结论前炎症因子IL-1β可上调气道上皮细胞TGF-β和IGF-1的表达,当过度调节后可导致气道重塑。     

IL-1β诱导支气管上皮细胞高迁移率族蛋白1主动释放

目的：研究IL‐1β对健康人支气管上皮细胞（HBE）高迁移率族蛋白1（HMGB1）表达和释放的影响。方法培养HBE135‐E6E7,四唑盐（MTT）法检测不同浓度IL‐1β对支气管上皮细胞活力的影响,荧光定量PCR检测IL‐1β刺激HBE后HMGB1mRNA表达,双抗体夹心ELISA法检测细胞上清液中HMGB1水平,蛋白免疫印迹方法检测IL‐1β刺激HBE总蛋白、胞核、胞质HMGB1表达。免疫荧光观察IL‐1β刺激后对HBEHMGB1的移位的影响。结果0．1、1．0、10．0ng／mLIL‐1β刺激HBE24h对其活力无影响。IL‐1β以浓度和时间依赖性方式刺激HBE的HMGB1mRNA水平升高,IL‐1β增加HBE的HMGB1蛋白表达水平。在浓度依赖性实验,与对照组比较,1．0、10．0ng／mLIL‐1β刺激HBE24h后培养上清液HMGB1水平显著增加;在时间依赖性实验中,与对照组比较,10．0ng／mLIL‐1β刺激HBE12h、24h后细胞上清液中的HMGB1显著升高（P＜0．05）;10．0ng／mLIL‐1β刺激HBE24h后,HBE胞质蛋白明显增加,胞核蛋白减少。免疫荧光检测显示,HMGB1主要表达正常HBE的细胞核内,少量分布于细胞质,IL‐1β（10．0ng／mL）刺激HBE24h,HMGB1明显从HBE胞核向胞质转位。结论IL‐1β可以显著诱导支气管上皮细胞HMGB1的表达和主动释放,提示HMGB1可能参与了IL‐1β介导慢性气道炎症过程。     

沙利度胺对IL-1β介导的支气管上皮细胞炎症反应的影响

目的探讨沙利度胺干预对IL-1β介导的人支气管上皮细胞株HBE细胞炎症反应的影响和可能参与的信号分子。方法通过炎症因子IL-1β处理HBE细胞,体外建立支气管上皮细胞炎症模型。MTT法检测IL-1β处理对HBE细胞的活力;DAPI/PI荧光染色和荧光显微镜下观察IL-1β处理和沙利度胺干预后HBE细胞形态变化和细胞凋亡情况;RT-PCR和Westernblot法检测HBE细胞中血管内皮生长因子（VEGF）和高迁移率族蛋白B1（HMGB1）mRNA和蛋白表达水平。结果不同浓度IL-1β处理后,HBE细胞的活力没有受到明显抑制,但发生形态变化并出现胞核聚集,PI染色发现50ng/mlIL-1β处理组阳性细胞数明显多于对照组和5滋g/ml沙利度胺干预组。5、10和50ng/mlIL-1β处理HBE细胞后VEGF和HMGB1mRNA表达水平较对照组均上调（均P＜0.05）;10滋g/ml沙利度胺干预组HMGB1mRNA表达水平较5、10和50ng/mlIL-1β处理组均下调,5、10滋g/ml沙利度胺干预组VEGFmRNA表达水平较5、10和50ng/mlIL-1β处理组均下调（均P＜0.05）。50ng/mlIL-1β处理组VEGF蛋白表达水平较对照组上调,5、10和50ng/mlIL-1β处理组HMGB1蛋白表达水平均较对照组上调（均P＜0.05）;5、10滋g/ml沙利度胺干预组VEGF和HMGB1蛋白表达水平较5、10和50ng/mlIL-1β对照组均上调（均P＜0.05）。结论IL-1β可以诱导HBE细胞发生炎症损伤以及相关炎症因子表达;沙利度胺可以抑制IL-1β诱导的HBE细胞炎症损伤,其机制可能与抑制VEGF和HMGB1的表达有关。     

白介素1-β对人肺腺癌细胞COX-2表达的作用及调节机制

目的 探讨细胞因子白介素-1β（IL-1β）对人肺腺癌细胞株A549细胞环氧合酶2（COX-2）表达的影响及调节机制。方法 A549细胞培养达80％融合后，用不同浓度的IL-1β（0、0.1、1、5和10ng／mL）干预或用5ng/mL IL-1β干预不同时间（0、3、6、9、12和24h）观察白介素-1β（IL-1β）对A549细胞COX-2表达的影响；用5ng／mL IL-1β与有丝分裂原激活的细胞外调节激酶（ERK）抑制剂PD098059、P38有丝分裂原激活的蛋白激酶（MAPK）抑制剂SB203580、蛋白激酶C（PKC）抑制剂H-7共同干预A549细胞观察IL-1β诱导A549细胞COX-2表达的信号传导途径；用COX-2系列报告基因质粒及对照质粒转染A549细胞后予以IL-1β干预，以不加IL-1β干预的细胞为对照组观察IL-1β对COX-2启动子的影响；westem blot检测COX-2蛋白表达，RT—PCR检测COX-2 mRNA表达。COX-2报告基因活性应用荧光素酶活性分析法测定。结果 A549细胞COX-2蛋白表达和mRNA表达呈IL-1β浓度依赖性表达增加，干预9h表达达高峰；SB203580、H-7可明显抑制IL-1β诱导A549细胞COX-2表达，PD098059对IL-1β诱导A549细胞COX-2表达无影响；IL-1β对COX-2报告基因无影响。结论 PKC途径和P38 MAPK途径参与IL-1β诱导A549细胞COX-2蛋白表达。     

雷公藤多甙下调IL-1β诱导的呼吸道上皮细胞TGF-β1的表达

目的研究雷公藤提取物(雷公藤多甙)对前炎症因子白介素-1β(IL-1β)诱导的气道上皮细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的调控,以探讨雷公藤在气道重塑中作用的分子机制。方法原代分离新西兰白兔气道上皮细胞,体外培养,随机分5组:正常对照组,IL-1β处理组(加入终浓度为10ng/ml的IL-1β),IL-1β 雷公藤共处理A、B、C组(分别加入终浓度为5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml的雷公藤溶液预处理半小时后再给予终浓度为10ng/ml的IL-1β),作用24h收集细胞爬片,采用免疫细胞化学染色方法,观察各组TGF-β1的表达。结果IL-1β处理组(0.511±0.012)TGF-β1表达较对照组(0.138±0·009)显著增强,差异有显著性(均P<0.01),IL-1β 雷公藤共处理A、B、C组(0.353±0.046,0.245±0.034,0.218±0·024)TGF-β1表达较IL-1β处理组减少,差异均有显著性(均P<0.01)。在5-20μg/ml浓度范围内,随雷公藤浓度的增加,气道上皮TGF-β1表达呈浓度依赖性减少。结论雷公藤多甙抑制由IL-1β诱导的气道上皮TGF-β1的过度表达,从而可减轻气道重塑的发生,为雷公藤防治哮喘气道重塑作用的分子机制之一。     

红霉素抑制人支气管上皮细胞白介素-8基因的表达

目的 从分子水平上探讨红霉素(EM)的抗炎作用机制,为临床长期应用小剂量红霉素治疗慢性气道感染性疾病提供理论依据.方法 体外培养人支气管上皮细胞(16HBE),将细胞随机分为8组,先加入红霉素干预,后加入肿瘤坏死因子(TNF-α)刺激.分组如下:(1)空白对照组;(2)TNF-α(20ng/mL,16h);(3)EM(0.3μg/mL,24h)+TNF-α(20ng/mL,16h);(4)EM(3μg/mL,24h)+TNF-α(20ng/mL,16h);(5)EM(30μg/mL,24h)+TNF-α(20ng/mL,16h);(6)EM(0.3μg/mL,48h)+TNF-α(20ng/mL,16h);(7)EM(3μg/mL,48h)+TNF-α(20ng/mL,16h);(8)EM(30μg/mL,48h)+TNF-α(20ng/mL,16h).然后收集各组细胞分别提取RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测白介素-8(IL-8)mRNA.结果 用前炎因子TNF-α刺激人支气管上皮细胞(16HBE)后,RT-PCR结果显示细胞IL-8mRNA表达增高.先加入不同浓度及作用时间的红霉素,后加入前炎因子TNF-α刺激人支气管上皮细胞(16HBE),RT-PCR结果显示各组细胞IL-8mRNA表达均降低,但其降低的水平与红霉素作用浓度及时间无明显关系.结论 前炎因子TNF-α能激活人支气管上皮细胞IL-8基因的表达,使其表达增高,促进炎症的发生发展,在炎症进程中发挥着重要作用.红霉素能抑制人支气管上皮细胞白介素-8基因表达,这可能是红霉素的抗炎作用机制之一.     

早产儿气管抽吸物中白介素-1β导致气道上皮细胞通过NF-κB依赖性途径诱导白介素-8表达

辅助呼吸的早产儿气道抽吸物中白介素-8的浓度和气道上皮细胞中白介素-8表达均升高。本文作者研究影响白介素-8表达的细胞因子。收集了18例机械通气早产儿气道中的抽吸物。抽吸物中的白介素-8蛋白含量较高(平均5806±4923μg/L)。其中也发现有IL-1α(平均20±6μg/L),IL-1β(平均67±46μg/L),及肿瘤坏死因子α(TN F-α)(平均8±2μg/L)将16H BE14o(人气管上皮细胞)细胞株与气管抽吸物混合培养,结果在细胞溶解产物和上清液中IL-8蛋白均增加,IL-8启动子转录结果显示也是如此。抽吸物也能诱导激活核因子-κB(NF-κB)。IL-8启动因子N…     

高迁移率族蛋白1协同屋尘螨对人气道上皮细胞通透性及连接蛋白损伤的影响

目的探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)协同屋尘螨(HDM)对人气道上皮细胞系16HBE通透性及连接蛋白表达和分布的影响。方法将细胞分为正常对照组(加入无刺激物培养基)、HDM(100 U/mL)刺激组、HMGB1(400 ng/mL)刺激组和HDM(100 U/mL)+HMGB1(400 ng/mL)联合刺激组。处理细胞24 h,并通过MTT比色法测定16HBE细胞存活和生长。通过测定紧密连接相关的单层细胞的跨膜电阻值(TER)及FITC-右旋糖苷通透性,观察处理因素对16HBE细胞通透性的影响;蛋白质印迹法(Western bolt)测定E-cadherin,β-catenin,claudin-1和occludin4种连接蛋白水平的表达;共聚焦显微镜观察连接蛋白的分布。结果与正常对照组比较,HDM可引起TER一过性下降,降低occludin和claudin-1蛋白表达,差异有统计学意义(P0.05);与HDM刺激组比较,联合刺激组显著增加16HBE细胞通透性,减少16HBE细胞TER值,增加FITC-右旋糖苷通透性,差异有统计学意义(P0.05)。与HDM和HMGB1刺激组比较,联合刺激组降低连接蛋白occludin和claudin-1蛋白表达,差异有统计学意义(P0.05),促进粘附连接蛋白E-cadherin及β-catenin再分布。结论 HMGB1协同HDM增加人气道上皮细胞16HBE通透性及连接蛋白表达异常,为HMGB1可能参与了哮喘上皮屏障功能异常提供新的证据。     

TGF-β1诱导的肿瘤细胞CSRNP1/AXUD1 基因的表达及转录调节机制

目的探讨TGF-β1诱导的肿瘤细胞中CSRNP1/AXUD1基因的表达及其调控机制。方法分别用不同浓度的TGF-β1或
相同浓度下不同处理时间处理指数生长期的人肺腺癌细胞A549和人前列腺癌细胞PC-3,荧光定量RT-PCR检测TGF-β1对两
种肿瘤细胞中半胱氨酸-丝氨酸蛋白（cystein-serine-rich nuclear protein, CSRNP1）基因表达的剂量和时间依赖性效应;培养的
A549细胞血清饥饿后,分别在有无TGF-β1（20 ng/ml）和环己亚胺（30 μg/ml）作用下处理24 h,检测TGF-β1诱导的CSRNP1基
因的表达是否需要新蛋白的合成;最后,分别将SMAD3表达质粒flag-SMAD3和显性失活突变体表达质粒（flag-SMAD3-mu
转染A549细胞中,并以空质粒pcDNA3.1作为对照。血清饥饿后,进行有无TGF-β1（20 ng/ml）处理24 h,Western blot 确定外
源性SMAD3的过表达,荧光定量RT-PCR检测SMAD3的过表达对TGF-β1诱导的CSRNP1基因表达的影响。结果TGF-β1以
浓度和时间依赖的方式诱导肿瘤细胞中CSRNP1 基因的表达,并需要新的蛋白合成。SMAD3 的过表达增加TGF-β1 诱导的
CSRNP1的表达,而显性失活的SMAD3突变体（SMAD3-mu）的过表达则显著降低TGF-β1诱导的CSRNP1的表达。结论肿瘤
细胞中TGF-β1可能通过激活SMAD3 及其下游信号通路而诱导CSRNP1基因的表达。
     

白介素-22诱导肺泡上皮2型人β防御素表达的初步研究

目的:初步探讨对于直接或间接引起的肺内感染,炎症反应产生的白介素(IL)-22能否刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞,并且诱导其生成?释放2型人β防御素(human β-defensin-2,HBD-2)发挥抗感染作用?方法:流式细胞术检测肺泡Ⅱ型上皮细胞细胞膜表面IL-22R表达水平?重组人IL-22(20 ng/ml)刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞,RT-PCR检测不同时间(0?2?4?8?16?24 h)HBD-2表达情况?不同浓度的重组人IL-22(0?4?20?100?500 ng/ml)刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞,RT-PCR检测HBD-2表达情况?结果:肺泡Ⅱ型上皮细胞膜表面IL-22R表达呈强阳性,阳性率达(99.90 ± 0.13)%?比较6个时间点HBD-2表达差异,发现HBD-2表达具有时间依赖性?比较不同浓度IL-22处理下HBD-2表达差异,IL-22 100 ng/ml为最佳干预浓度,且HBD-2表达与IL-22浓度具有依赖关系?结论:IL-22能显著诱导肺泡上皮细胞生成并释放HBD-2,且具有时间和剂量依赖性?     

TGF-β1/Smad2通路参与IL-17诱导的A549细胞上皮-间质转化

目的:探讨白细胞介素(IL)-17对A549细胞上皮-间质转化的影响及TGF-β1/Smad2信号通路在其中的作用。方法:用不同浓度(0,10,25,50,100ng/ml)IL-17刺激A549细胞48h,RT-PCR检测E-钙黏蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、TGF-β1的表达。将体外培养的细胞分为3组:对照组、IL-17(100ng/ml)组、IL-17+SB431542组。48h后收集各组细胞,RT-PCR和Western Blot检测E-cad、α-SMA、TGF-β1、Smad2、和p-Smad2的表达。结果:不同浓度的IL-17作用后,E-cad在50ng/ml IL-17组时表达下调,与浓度呈负相关;α-SMA在100ng/ml IL-17组时表达上调;TGF-β1在25ng/ml IL-17组时表达上调,与浓度呈正相关。与对照组相比,IL-17组E-cad表达下调,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2表达均增加,Smad2蛋白表达水平无明显变化;与IL-17组比较,IL-17+SB431542组Smad2蛋白表达水平无明显变化,TGF-β1、p-Smad2、α-SMA蛋白表达均降低,E-cad的表达明显增加。结论:TGF-β1/Smad2通路参与IL-17诱导的A549细胞上皮-间质转化。     

盐酸椒苯酮胺对耳蜗缺血再灌注后白介素-1β、肿瘤坏死因子-α mRNA及Fas 蛋白表达的影响

目的探讨豚鼠耳蜗白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA、Fas蛋白表达与耳蜗缺血再灌注损伤关系及盐酸
椒苯酮胺（PPTA）对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤保护机制。方法豚鼠64只随机分为4组,每组16只,分别为正常组、空白对照组、
缺血再灌注对照组和缺血再灌注PPTA组,每组随机选6只用于RT-PCR检测,剩余10只用于免疫组化。微血管夹夹闭双侧椎
动脉及右侧颈总动脉1 h松开动脉夹以制造耳蜗缺血模型,缺血再灌注PPTA组于缺血1 h再灌注后立即经股静脉注射PPTA
（10 mg/kg）,缺血再灌注对照组注射等量生理盐水,24 h后取标本。用RT-PCR法检测IL-1β和TNF-α的mRNA的表达。结果
缺血再灌注对照组耳蜗组织IL-1β、TNF-α mRNA表达量显著高于正常组和空白对照组（P<0.001）;缺血再灌注PPTA组耳蜗组
织IL-1β mRNA、TNF-α mRNA表达量显著低于缺血再灌注对照组（P<0.001）;缺血再灌注组Corti器、螺旋神经节和血管纹Fas
表达阳性,积分光密度值（IOD）值较其它三组明显增高（P<0.05）,缺血再灌注PPTA干预组IOD值与正常组及空白对照组差异
无统计学意义（P>0.05）。结论PPTA可抑制缺血再灌注耳蜗各部位IL-1β、TNF-α mRNA、Fas蛋白表达;PPTA可能通过抑制炎
性反应及抑制细胞凋亡实现对耳蜗缺血再灌注损伤的拮抗作用。
     

大黄素对病毒性心肌炎小鼠IL-23/IL-17炎症轴、Th17细胞及病毒复制的影响

目的探讨大黄素对病毒性心肌炎（VMC）小鼠心肌的保护作用及其分子机制。方法55只雄性BALB/c小鼠随机分为对
照组（n=15）、模型组（n=20）及大黄素组（n=20）,模型组、大黄素组小鼠腹腔接种0.1 ml内含柯萨奇病毒B3（CVB3）的Eagle’s液
建立VMC模型,对照组仅注射Eagle’s液,于接种当天,大黄素组以3 mg/ml大黄素溶液0.1 ml灌胃,其余2组以0.1 ml蒸馏水灌
胃,1次/d,共21 d,记录实验期间小鼠死亡数目,比较各组死亡率。第7天每组处死5只小鼠,取心脏,测定病毒滴度。第22天称
体质量（BW）后处死全部小鼠,收集外周血,剥离心脏,称心脏质量（HW）,计算HW/BW,行HE染色计算心肌病理积分,采用荧
光实时定量PCR、Western blotting分别检测心肌白介素-23（IL-23）、白介素-17（IL-17）mRNA和蛋白表达,通过酶联免疫吸附法
测定血清IL-23、IL-17浓度,流式细胞术分析Th17细胞频率,利用Western blotting测定心肌细胞核内核因子-κB（NF-κB）p65表
达,ELISA分析心肌白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量。结果大黄素组死亡率、心肌病理积分及
病毒滴度较模型组减少（P<0.05）。模型组HW/BW、心肌IL-23及IL-17 mRNA与蛋白表达水平、血清IL-23和IL-17浓度、Th17
细胞频率、胞核NF-κB p65表达水平及心肌IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著高于对照组（P<0.01）,与模型组比较,大黄素组上述指
标明显降低（P<0.05）。结论大黄素可能通过抑制IL-23/IL-17炎症轴、Th17细胞增殖及病毒复制发挥抗VMC作用。
     

脂多糖及前炎症细胞因子诱导人原代气道上皮细胞β防御素-2表达的实验研究

目的观察脂多糖（LPS）及前炎症细胞因子白细胞介素1w（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF—α）诱导人原代气道上皮细胞人β防御素-2（hBD-2）的表达,探讨呼吸道先天性病原体防御机制。方法LPS、IL-1β及TNF-α刺激培养人原代气道上皮细胞后,RT-PCR法检测hBD-2mRNA的表达,Westernblot和免疫组化法检测hBD-2mRNA蛋白的表达。结果正常人原代上皮细胞有微量hBD-2mRNA表达,不同质量浓度的12S、IL-1β及TNF-α刺激细胞后,hBD-2mRNA表达呈剂量依赖性增加,与对照组差异显著。0．1μg／mL的LPS、1ng／mL的IL-1β和10ng／mL的TNF-α刺激上皮细胞4h后,细胞均可见hBD-2蛋白表达。结论一定剂量的12S及前炎症细胞因子可诱导人气道上皮细胞hBD-2表达,且诱导hBD-2表达时间较短,hBD-2的表达可能是气道最初的防御反应。     

IL-1β诱导子宫内膜异位症间质细胞activin A及相关因子的表达

目的探讨白细胞介素1β（IL-1β）对子宫内膜异位症（内异症）在位内膜间质细胞activin A、follistatin、cripto的表达及蛋白
分泌的影响。方法分离培养内异症在位内膜间质细胞,加入不同浓度IL-1β（250 pg/ml,500 pg/ml,750 pg/ml）干预。实时荧光
定量PCR技术及酶联免疫吸附试验,分别从mRNA及蛋白水平检测activin A、follistatin、cripto 的变化。结果经IL-1β刺激,
activin A及follistatin mRNA表达及蛋白分泌较对照组呈IL-1β剂量依赖性增加;cripto mRNA表达较对照组呈IL-1β剂量依赖
性增加。结论IL-1β可影响内异症在位内膜activin A、follistatin、cripto的分泌及表达。
     

细胞因子在气道上皮细胞iNOS表达中的作用研究

目的　探讨气道上皮细胞表达诱导型一氧化氮合成酶 (inducible nitric oxide synthase,i NOS)的能力及炎性细胞因子在气道上皮细胞一氧化氮 (NO)产生中的调节作用。方法　取原代培养的大鼠气道上皮细胞用 IL- 1β(10 ng/ ml)或 TNF- α(5 ng/ m l)处理 16小时 ,而后用特异性引物 RT- PCR研究 i NOS m RNA的表达 ,用特异性抗 i NOS单克隆抗体免疫细胞化学方法研究 i NOS蛋白的表达。NO的终末产物硝酸盐及亚硝酸盐水平的测定采用改良 Griess法。结果　 RT- PCR显示 ,经 IL- 1β及 TNF- α处理 16小时的大鼠气道上皮细胞表达 i NOS m R-NA。免疫组织化学提示 ,IL- 1β及 TNF- α可诱导大鼠气道上皮细胞 i NOS蛋白的表达并刺激 NO产生 ,其硝酸盐及亚硝酸盐水平较正常对照组增高 (P<0 .0 1)。结论　气道上皮细胞具有表达 i NOS的能力。细胞因子 IL- 1β及TNF- α可诱导大鼠气道上皮细胞 i NOS的表达及 NO产生     

HMGB1对人鼻咽癌细胞株C666-1体外增殖的影响

目的观察高迁移率族蛋白1（HMGB1）对人鼻咽癌细胞株C666-1增殖的影响并探讨其可能的机制。方法用siRNA干扰
鼻咽癌细胞株C666-1 HMGB1基因,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测cyclin D1,CDK6及相
关通路蛋白表达。用带GFP的HMGB1质粒转染鼻咽癌细胞株C666-1,EDU和CCK-8检测细胞增殖。结果干扰HMGB1的表
达后,细胞增殖明显减慢（P<0.001）;细胞周期分析显示处于G1期细胞比例增多（P<0.001）,S期细胞比例明显下降（P<0.001）;
Western blot结果显示cyclin D1、CDK6的表达下调,STAT3,P-STAT3的表达也下调。过表达HMGB1后,EDU显示处于S期细
胞比例增多（P<0.05）;CCK-8显示细胞增殖明显增快（P<0.001）。结论HMGB1促进人鼻咽癌细胞株C666-1的增殖,可能通过
STAT3信号通路上调cyclin D1、CDK6促进鼻咽癌细胞株C666-1由G1期进入S期从而调控其增殖。
     

细胞因子在气道上皮细胞iNOS表达中的作用研究

目的：探讨气道上皮细胞表达诱导型一氧化氮合成酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS)的能力及炎性细胞因子在气道上皮细胞一氧化氮（NO）产生中的调节作用。方法：取原代培养的大鼠气道 上皮细胞用IL－1β(10ng/ml)或TNF－α（5ng/ml)处理16小时，而后用特异性引物RT－PCR研究iNOS mRNA的表达，用特异性抗iNOS单克隆抗体免疫细胞化学方法研究iNOS蛋白的表达。NO的终末产物硝酸盐及亚硝酸盐水平的测定采用改良Griess法。结果：RT－PCR显示，经IL－1β及TNF－α处理16小时的大鼠气道上皮细胞表达iNOS mRNA。免疫组织化学提示，IL－1β及TNF－α可诱导大鼠气道上皮细胞iNOS蛋白的表达并刺激NO产生，其硝酸盐及亚硝酸盐水平较正常对照组增高（P＜0．01）。结论：气道上此细胞具有表达iNOS的能力。细胞因子IL－1β及TNF-α可诱导大鼠气道上皮细胞iNOS的表达及NO产生。     

人气道上皮细胞内皮素转换酶-1反义RNA构建

目的　研究内皮素转换酶 -1(ECE -1)反义RNA对人气道上皮细胞ECE -1表达的抑制作用。方法　构建ECE -1反义RNA表达载体 ,用脂质体 (FuGENG 6)转染人气道上皮细胞株 (16HBE) ,G418筛选得到稳定表达反义ECE -1RNA的细胞株 (anti -16HBE)。RT -PCR检测转染细胞ECE -1mRNA的表达 ,Westernbloting检测细胞ECE蛋白表达情况。结果　①经酶切及DNA测序鉴定证明 ,0 7kb的ECE -1DNA片段反向连接到带有萤光蛋白基因为报告基因的pEGPC1表达载体 ;荧光倒置显微镜显示大量细胞分泌荧光蛋白并能反复传代稳定表达 ;②anti -16HBE细胞ECEmRNA基因表达 (ECE/actinβ 0 0 12 5± 0 0 5 8)比 16HBE细胞 (ECE/actinβ 0 13 4 7± 0 0 67)明显低 (P <0 0 5 ) ;而Westerbloting亦显示anti -16HBE细胞ECE表达量比 16HBE细胞明显低。结论　ECE反义RNA表达载体可抑制人气道上皮细胞ECE -1表达与分泌     

白三烯C_4对人气道结构细胞内皮素1基因表达及分泌水平的影响

目的 :探讨白三烯C4 (LTC4 )对体外培养人气道上皮细胞和平滑肌细胞内皮素 1(ET 1)基因表达及分泌水平的影响。方法 :在离体培养人气道上皮细胞株 (16 HBE)及气道平滑肌细胞 (ASMC)培养液中加入不同浓度LTC4 ,采用酶联免疫吸附 (ELISA)法测定培养液ET 1水平 ,用逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)方法检测ET 1mR NA表达水平。结果 :LTC4 能使离体培养的 16 HBE及ASMC两种细胞ET 1mRNA的表达水平显著上调 ,并刺激ET 1释放 ,当LTC4 浓度≥ 10 -8mol/L时 ,两种细胞ET 1分泌水平均显著高于对照组。结论 :LTC4 能上调 16 HBE及ASMC两种细胞ET 1mRNA的表达并刺激ET 1释放 ,这可能是白三烯致哮喘气道炎症及重塑的重要机制之一。