压板式瘢痕注射助推装置的研制及临床应用

增生型瘢痕和瘢痕疙瘩在临床中非常多见，由于它们都是发生在瘢痕体质的人身上，单靠手术切除常常使病情恶化，临床上对于颜面部和身体其他部位的较局限的增生型瘢痕和瘢痕疙瘩的治疗常采用瘢痕内注射，由于瘢痕注射非常费力，在实践的基础上，我们研制了压板式瘢痕注射助推装置，已获得了国家专利授权(zl：03201252.7)，不仅解决了注射时费力费时的特点，在临床应用中也取得了较好的效果。     

重组水蛭素的表达和纯化及临床应用进展

重组水蛭素为基因工程的产物,与天然水蛭素有相同的功效,为新一代高效安全的抗凝、防栓药物.文中综述了重组水蛭素的表达、纯化及临床应用的研究.     

磷酸,磷铵工业装置管道与阀门的选用

根据磷酸、磷铵生产过程中输送介质的特性，结合我国１５年来建设和生产磷酸、磷铵的实践经验，讨论并推荐磷酸、磷铵生产过程中管道与阀门的选取。     

一种防烫式温针灸装置的设计与应用

<正>温针灸是中医传统疗法之一,将艾绒或艾条段附着在针柄上燃烧,对穴位产生一种针刺效应和温热效应,从而激发人体正气,以达到温经散寒、通经活络的目的。但艾绒在针柄快速燃烧的过程中,短时间释放大量热能且无法控制,易烫伤患者皮肤。同时,艾绒燃烧过程中热量传导不集中,产生较多的热损耗,医务人员在收集及处理灰烬过程中易被烫伤。     

重组人粒细胞刺激因子在肿瘤内科的应用与护理

恶性肿瘤患者在放化疗期间引起的白细胞下降是临床常见问题。促白细胞生成素——重组人粒细胞刺激因子类药物的问世与应用,能有效地抑制和治疗恶性肿瘤患者化疗期间所致的白细胞减少,使治疗顺利进行[1]。现就重组人粒细胞刺激因子在肿瘤内科的应用和护理报道如下。     

分割式床垫的研制与应用

脊柱、骨盆骨折、关节置换、骨牵引等住院患者需长时间卧硬板床治疗。病房的传统床铺为棕垫上铺棉褥。由于受制动治疗的限制，患者不能定时、随意变动体位，不但压疮发生率高，也给日常护理工作带来不便。我科对床垫进行了研制改进，设计成分割式床垫，经多年试用效果较好，现报道如下。     

新型胸腔引流装置的临床应用及护理体会

胸腔闭式引流装置，是一种用于排除胸膜腔内的积气、积液，恢复胸腔内负压，以利肺复张的装置。其适用于外伤性、自发性气胸、血胸、脓胸等。TFR型胸腔引流装置是一种新型的胸腔闭式引流装置，2009年初我院引进了此类胸腔引流装置，在我科近一年的临床实际应用中取得了良好的临床效果。现报告如下。     

简易腔镜冲洗装置的设计与应用

<正>近年来,腔镜手术因创伤小、并发症少、术后恢复快等优势逐渐成为外科手术中的常用方法。冲洗是腔镜手术的关键步骤,可快速清除术区出血及组织碎块,从而创造充足的操作空间和清晰的手术视野,还可降低脏器局部热效应,保证手术安全^[1]。现有的简易冲洗装置是由输血器加用50 mL注射器来完成,在冲洗时洗手护士需将50 mL注射器抽吸冲洗液装在输血器的一端,冲洗完成后需要拆下注射器,再抽冲洗液重复上一步骤,如此反复操作,直至冲洗完成。     

卧床女患者排尿简易装置的研制与临床应用

临床护理工作中,因骨折、大手术、创伤,或年老体弱而又神志清楚的卧床女患者排尿均给予统一型号的一次性女便盆排尿。由于便盆容器高,质地硬,体积稍大,需要几人协助抬高臀部6-7cm后放置,接尿时因不慎导致盆接不全,渗尿、溢尿现象时有发生,从而污染床单、内裤,若不及时清洗更换,易引起皮肤湿疹或压疮;遇到肥胖体型患者使用便盆．不但搬动吃力且经常发生便盆压之变形甚至裂开现象，给病人带来痛苦，给家属带来负担．从而亦加重了护理工作量。     

CT定位应用改良式微创装置治疗高血压性脑出血58例研究

目的探讨高血压性脑出血的微创治疗方法及疗效。方法对本院2006年2月至2007年9月,应用CT定位应用改良式微创装置治疗高血压性脑出血58例进行总结。结果58例中出院时存活47例,19例意识清醒,肢体功能恢复,生活自理。21例意识清醒,但留有肢体转偏瘫或部分失语,生活部分自理 7例生活不能自理 死亡11例。结论CT定位应用改良式微创装置治疗高血压性脑出血,操作简便、创伤小、疗效好、费用低,易在基层医院中应用。     

人骨唾液酸蛋白酵母工程细胞的构建与表达

目的构建表达重组人骨唾液酸蛋白 (rhBSP)的巴斯德毕赤酵母工程细胞 ,实现rhBSP的酵母胞外分泌性高表达。方法通过PCR扩增获得人BSP基因后 ,构建重组表达载体pPICZaA hbsp ,经电转化导入到毕赤酵母GS115菌中 ,获得GS115 pPICZaA hbsp工程菌 ,通过Zeocin高抗性筛选和摇瓶发酵筛选出高表达rhBSP的菌株 ,并进行高密度发酵提高表达量。结果rhBSP分子量接近 6 6 0 0 0 ,产物可达上清液总蛋白的 80 % ,浓度约 0 .2 4 8g L。结论基因工程菌GS115 pPICZaA hbsp能高效地表达rhBSP并分泌到胞外     

双表达盒人骨唾液酸蛋白毕赤酵母工程细胞的构建

目的构建含人骨唾液酸蛋白(hBSP)双表达盒的毕赤酵母工程细胞,为hBSP在毕赤酵母中的高效非融合分泌表达奠定基础。方法用PCR方法扩增hBSP基因,将其亚克隆到毕赤酵母表达载体pPICZαA中,并在此基础上构建含有双表达盒的重组pPICZαAN-2×hBSP载体,电转化毕赤酵母GS115,通过Zeocin高抗性筛选转化子并对其表型进行PCR鉴定。结果得到GS115/pPICZαAN-hBSP和GS115/pPICZαAN-2×hBSP毕赤酵母工程细胞。结论GS115/pPICZαAN-2×hBSP毕赤酵母工程细胞中含双表达盒hBSP。     

Expression and processing of recombinant sarafotoxins precursor in Pichia pastoris.

Sarafotoxins are peptides isolated from the Atractaspis snake venom, with strong constrictor effect on cardiac and smooth muscle. They are structurally and functionally related to endothelins. The sarafotoxins precursor cDNA predicts an unusual structure 'rosary-type', with 12 successive similar stretches of sarafotoxin (SRTX) and spacer. In the present work, the recombinant precursor of SRTXs was sub-cloned and expressed in the yeast Pichia pastoris, and secreted to the culture medium. Characterization by SDS-PAGE, immunoblot, mass spectrometry and biological activity, suggests that intact precursor was expressed but processing into mature toxins also occurred. Furthermore, our results indicate that the correct proportion of sarafotoxin types as contained in the precursor, is obtained in the yeast culture medium. Contractile effects of the expressed toxins, on rat and Bothrops jararaca isolated aorta, were equivalent to 5x10(-10)M and 5x10(-11)M of sarafotoxin b, respectively. The enzymes responsible for the complete maturation of sarafotoxins precursor are still unknown. Our results strongly suggest that the yeast Pichia pastoris is able to perform such a maturation process. Thus, the yeast Pichia pastoris may offer an alternative to snake venom gland to tentatively identify the molecular process responsible for SRTXs release.     

重组Pichia pastoris的发酵条件初步研究

在摇瓶中进行重组Pichia pastoris菌株SIBAS 5071发酵条件的研究,考察了碳源、底物、pH、磷酸盐浓度、溶氧量等对该菌细胞生长和产生S-腺苷甲硫氨酸(sAM)的影响,初步确定的优化条件下发酵3 d后,SAM产量可达2.3 g/L(118 mg/g干细胞).     

重组rPA基因在毕赤酵母细胞中的胞内表达研究

目的构建含rPA全长基因的重组酵母胞内表达质粒pPIC9K rPA ,并在毕赤酵母中进行表达。方法用限制性内切酶BamHI和NotI将含有rPA全长基因的质粒pJZ1 6双酶切后 ,克隆至酵母表达载体pPIC9K中 ,构建酵母重组表达质粒。rPA基因经DNA序列测定准确无误。通过电穿孔法转染毕赤酵母菌GS1 1 5 ,PCR鉴定阳性酵母转化子 ,将rPA基因整合入酵母基因组DNA ,在毕赤酵母中实现了胞内非融合表达。表达产物进行SDS PAGE、Western blots以及溶纤维蛋白活性检测。结果表达产物以胞内包涵体的形式存在 ,未糖基化。SDS PAGE结果显示表达蛋白质的相对分子量约为 39kD。Western blots检测表明表达蛋白质能与单克隆抗体发生特异性反应。包涵体经 8mol L脲溶液溶解后 ,有明显的溶纤维蛋白活性。结论在毕赤酵母中成功地实现了rPA重组蛋白的胞内表达     

Enhancement of recombinant BmK AngM1 production in Pichia pastoris by regulating gene dosage,co-expressing with chaperones and fermenting in fed-batch mode

The scorpion peptide BmK AngM1 was reported to exhibit evident analgesic effect, but its yield by extraction from scorpion venom limits the research and application. The heterologous expression of BmK AngM1 was achieved in Pichia pastoris in our previous study. In order to realize high-level expression of recombinant BmK AngM1 (rBmK AngM1), the gene dosage of BmK AngM1 was optimized in engineered strains. The yield of rBmK AngM1 in the four-copy strain reached up to 100 mg/L, which was further enhanced to 190 mg/L by co-expressing with chaperones of PDI, BiP, and HAC1. Moreover, the yield of rBmK AngM1 was up to 1200 mg/L by high-density fermentation in 10 L fermenter. Finally, 360 mg rBmK AngM1 was purified from 1 L cultures by a two-step purification method. The efficient and convenient techniques presented in this study could facilitate further scale-up for industrial production of rBmK AngM1.     

High-level expression of a sika deer (Cervus nippon) Cu/Zn superoxide dismutase in Pichia pastoris and its characterization

Production of a sika deer Cu/Zn-SOD was achieved in Pichia pastoris after the reconstituted expression vector pPIC9K was transformed into the strain GS115. By employing Saccharomyces cerevisiae secretion signal peptide (α-factor) under the regulation of the methanol-inducible promoter of the gene of alcohol oxidase 1 (AOX1), sika deer Cu/Zn-SOD with a molecular mass of 16 kDa was expressed while recombinant sika deer Cu/Zn-SOD with an activity of 3500 U/mL was obtained from a 5 L bioreactor. After two successive steps of chromatography on DEAE-650 C and Superdex75, recombinant sika deer Cu/Zn-SOD was obtained with 13.8% yield, 14.5-fold purification, and a specific activity of 3447 U/mg. Its optimum temperature and optimum pH were 40 °C and 7.0, respectively.     

重组毕赤酵母生产干扰素α-2b的研究

目的为探求生产干扰素-α2b的方法。方法采用重组毕赤酵母发酵,纯化生产干扰素-α2b。结果重组毕赤酵母生产干扰素α-2b,产量高达70mg/L(发酵液),目标蛋白干扰素α-2b不需要复性,在纯化过程中,不需要价格昂贵的单抗柱,即可从发酵液中提取获得纯度达96%以上的目标蛋白,蛋白质比活性大于1.0×109IU/mg。结论PichiaPastoris高效酵母分泌表达系统取代大肠杆菌表达系统生产干扰素-α2b。结论采用重组毕赤酵母生产干扰素-α2b,能提高蛋白质比活性,简化生产工艺,降低生产成本。     

T4溶菌酶在毕赤酵母中的诱导表达及抑菌活性测定

目的利用毕赤酵母诱导表达T4溶菌酶蛋白并测定其抗菌活性。方法T4溶菌酶（T4lysozyme）基因以N端融合的方式被准确插入到质粒pPIC9K的EcoR I-Not I位点内,得到分泌型重组表达载体 pPIC9K-T4L。该载体首先经限制性内切酶Sal I酶切,进而采用电击方法将线性化的重组质粒DNA导入到毕赤酵母中。经过梯度筛选得到多个单拷贝和多拷贝转化重组子。随机挑取部分重组子PCR扩增阳性克隆,经菌体培养和甲醇诱导后获得了分泌表达,表达产物存在于培养上清液中。结果表达蛋白经琼脂孔扩散抗菌实验显示抑菌圈明显;重组蛋白对金黄色葡萄球菌与肺炎链球菌均具有显著抑制作用;多拷贝与单拷贝重组表达子没有抗菌活性差异与蛋白表达量的差异;加热煮沸对于T4溶菌酶蛋白的抗菌活性无明显影响。结论T4溶菌酶在毕赤酵母中得以成功诱导与表达;表达产物不受拷贝数影响并具热稳定性。     

人C-型利钠肽-血清白蛋白融合蛋白质的构建及在毕赤酵母中的分泌表达

目的构建重组表达人C-型利尿钠肽(CNP)-人血清白蛋白(HSA)融合蛋白质的毕赤酵母。方法重叠PCR拼接CNP(400 bp)-HSA(1 800 bp)成融合基因,双酶切后克隆至表达载体pPIC9K中。电穿孔法转染毕赤酵母菌KM71,摇瓶培养分泌表达。结果融合基因约为2 200 bp,序列测定正确。SDS-PAGE分析相对分子质量约为80 000,Western blot和RIA鉴定显示其为CNP与HSA的杂合分子。结论实现了HSA-CNP融合蛋白质在毕赤酵母中的分泌表达。