错配修复和微卫星不稳定性与食管癌的关系

目的探讨DNA错配修复基因、微卫星不稳定性与食管癌发生发展的关系。方法采用放射性同位素为基础的聚合酶链式反应(PCR)技术,对96例食管癌中错配修复基因和4个位点微卫星不稳定性进行了检测。结果 96例食管癌中hmsh3、hmsh6基因突变率分别为10.4%和25%,4个位点微卫星不稳定性阳性率分别为D2S123(12.5%)、BAT-26(18.8%)、D17S261(10.4%)、D17S799(8.3%),hmsh3、hmsh6基因突变和微卫星不稳定性多为分化不良的癌,而与患者的性别、淋巴结转移无关。结论错配修复基因突变与微卫星不稳定性是食管癌发生的早期分子事件,是除LOH致癌途径以外的又一新的致癌途径。     

ADAM33基因S2位点突变与COPD患者病程及年龄的相关性研究

目的探讨解整合素—金属蛋白酶33(ADAM33)基因S2位点多态性与慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病以及患者病程长短、年龄大小的相关性。方法对84例COPD患者(COPD组)和96例健康者(对照组),应用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及DNA测序的方法,以对ADAM33基因S2位点多态性与患者病程及年龄进行分析。结果 COPD组ADAM33基因S2位点C/C和C/G基因型频率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。但C/C、C/G、G/G基因型频率与COPD病程长短、年龄大小比较均无统计学意义(P>0.05)。结论 ADAM33基因S2位点单核苷酸多态性(SNPs)与COPD相关;ADAM33SNPsS2突变可能为先天性基因突变。     

怀柔区新生儿耳聋易感基因携带情况调查与分析

目的调查分析怀柔地区新生儿耳聋易感基因携带情况。方法应用微阵列芯片法对2013～2017年在怀柔区出生的17290例新生儿GJB2、SLC26A4、GJB3和线粒体12SrRNA等4个常见耳聋相关致病基因的9个热点突变位点进行检测,分析各基因突变位点的检测阳性率。结果 17290例新生儿中耳聋基因筛查阳性805例,阳性率为4.66%。不同年份,阳性率差异无统计学意义(P 0.05)。其中GJB2突变410例,(2.37%),SLC26A4突变286例(1.65%),GJB3突变56例(0.32%),线粒体12SrRNA基因突变1555A G位点47例(0.27%),双基因复合杂合突变6例(0.03%)。结论耳聋易感基因检测有利于迟发型高危新生儿或致病基因携带新生儿筛查,有助于遗传性耳聋早发现、早诊断、早治疗。     

微卫星不稳定性与甲状腺癌的相关性研究

目的 探讨特定位点微卫星DNA序列不稳定性(MSI)与人甲状腺癌发生、临床病理特征及预后的关系.方法 选取THRA1,D2S123,D11F012,BAT-26四个位点,应用聚合酶链屋应(PCR)和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对30例人甲状腺癌中MSI表达情况进行研究,术后随访5年,了解预后.结果 THRAI位点MSI检出频率较高,为43.3%.D2S123为36.7%;甲状腺滤泡癌中D2S123检出率为100%,没有检测到BAT-26;D18S58的检出率为26.7%;在直肠癌中高表达的BAT-26在甲状腺癌中检出率最低,为6.7%.术后随访5年,MSI阳性的甲状腺癌较阴性者生存期更长(P<0.05).在2号和18号染色体中检测到微卫星阳性率较高;D2S123位点MSI与滤泡型甲状腺癌相关性有统计学意义;D18S58位点MSI的阳性率与高龄患者、晚期肿瘤密切相关;在直肠癌中高表达的BAT-26在甲状腺癌中检出率最低.结论 MSI导致基因组不稳定,在甲状腺肿瘤发生过程中发挥作用.MSI阳性的甲状腺癌患者较阴性者生存期更长,并具有统计学意叉(P<0.05).     

马兜铃酸诱导小鼠淋巴瘤细胞突变的机制

目的为研究马兜铃酸(Aristolochic Acid,AA)的致突变机制提供实验依据。方法挑取对照组和100μg/ml AA处理小鼠淋巴瘤L5178Y tk /--3.7.2-细胞得到的胸苷激酶(Thymidine kinase,tk)基因突变克隆,提取DNA,用基于PCR的杂合性缺失(Loss of heterozygosity,LOH)的分析方法检测含功能性tk基因(tk )的11号染色体(11 b)上的断裂情况。结果100μg/ml AA诱导的突变体中tk 基因缺失率为99.01%,其中所有的小克隆(Small Clone,SC)都失去了tk 基因,而大克隆(Large Clone,LC)的LOH发生率为96.6%。进一步分析11号染色体上的分布的3个微卫星位点(D11Mit42,D11Mit29,D11Mit74)的LOH状况如下:6 cm长度的DNA断裂频率为76%,38 cm长度DNA即超过染色体一半长度的DNA断裂频率为34%,整条染色体的缺失率为16%。另外LC在3个微卫星位点(D11Mit42,D11Mit29,D11Mit74)上的LOH发生率分别是:88%,60%和24%;SC的分别为:64%,8%和8%。结论AA是一个强染色体断裂剂。在11b染色体上LC的染色体断裂情况比LC严重。     

宫颈染色体3p14杂合性缺失和微卫星不稳定性研究

目的探讨宫颈癌染色体3p14区域D3S1300、D3S1600位点微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSl)及等位基因杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)频率,为准确定位宫颈癌相关肿瘤抑制基因位点提供实验依据,并探讨LOH及MSI与宫颈癌临床分期、病理分级的相关性。方法选择3p14区域两个微卫星多态性位点,显微分离提取41例宫颈癌石蜡切片中的正常组织和肿瘤组织,经PCR扩增及聚丙烯酰胺凝胶电泳和硝酸银染色,进行LOH及MSI研究。结果41例样本中有25例至少存在一个位点的LOH,D3S1300位点LOH的频率为35%,D3S1600位点LOH的频率为28%。MSI发生频率相对较低,D3S1300的MSI频率为7.5%,D3S1600的MSI频率为12.8%。D3S1300、D3S1600位点LOH的发生率与临床分期、病理分级相关性有显著意义(P<0.05),而MSI与之无显著的差别(P>0.05)。结论3p14区域内D3S1300、D3S1600位点具有较高的LOH,提示这两个微卫星位点附近可能存在尚未克隆的与宫颈癌发生、发展相关的肿瘤抑制基因。宫颈癌染色体3p14区域LOH与临床分期、病理分级成正相关,提示检测该区域的LOH可作为病程进展及预后的重要参考指标。MSI在本研究中与宫颈癌临床分期、病理分级无明显相关。     

非综合征重度-极重度聋儿249例常见耳聋基因突变分析

目的 探讨非综合征型听力障碍患儿常见耳聋基因突变类型,了解重度-极重度患儿耳聋致病基因热点突变谱系及频率。方法 选取我院就诊的249例非综合征型重度以上感音神经性聋患儿,进行4个常见耳聋基因(GJB2、SLC26A4、GJB3、12SrRNA)共20个突变位点的检测。结果 249例非综合征型聋儿中,93例(37.35%)携带不同基因突变,其中纯合突变25例(10.04%),复合杂合突变26例(10.44%),单杂合突变33例(13.25%),线粒体突变9例(3.61%)。GJB2基因突变49例(19.68%),SLC26A4基因突变35例(14.06%), MT-RNR1(12SrRNA)基因突变9例(3.61%),均为1555A>G同质突变;GJB3基因突变未检测出有患儿携带。SLC26A4基因突变35例(70耳)中,声诱发短潜伏期负反应(ASNR)引出率58.57%。结论 非综合征型重度以上听力障碍患儿以GJB2基因和SLC26A4基因为最主要的致病基因,ASNR的出现可作为前庭水管扩大(LVAS)的诊断依据之一。     

新生儿非综合征型聋常见耳聋基因突变研究

目的分析新生儿非综合征型聋常见耳聋基因突变状况。方法选取2016年1~12月在我院分娩的3702例新生儿,采集脐静脉血进行耳聋基因芯片检测,检测结果为阳性的患儿进行基因测序,GJB3基因位点不需要测序,进行遗传咨询;线粒体突变不需要测序,发药物性卡片,本研究共检测9个位点,包括GJB2基因位点(35)、GJB2基因位点(176)、GJB2基因位点(235)、GJB2基因位点(299)、GJB3基因位点(538)、SLC26A4基因位点(2168)、SLC26A4基因位点(IVS7-2)、线粒体12S r RNA基因位点(1555)、线粒体12S r RNA基因位点(1494),对检测结果进行统计分析。结果 152例新生儿阳性结果中,其中94例携带GJB2基因,携带率为2.5%,5例携带GJB3基因,携带率为0.13%,43例携带SLC26A4基因,携带率为1.16%,10例携带线粒体12S r RNA基因,携带率为0.27%。总携带率为4.11%。结论耳聋基因筛查有利于明确新生儿非综合征型聋的发病分子学基础,可为临床大规模筛查和辅助诊断新生儿非综合征型聋提供参考依据。     

一个遗传性对称性色素异常症大家系基因突变检测

目的检测一个遗传性对称性色素异常症家系中ADAR1基因突变位点。方法收集该家系成员的外周静脉血,PCR扩增ADAR1全部外显子后直接Sanger法测序进行突变检测。结果该家系中的患者均存在A-DAR1基因中第3169位碱基C发生了缺失,可导致1057位后的氨基酸产生移码突变,并产生提前终止密码子,而在该家系的正常成员和100例正常人对照中则没有该突变。结论 ADAR1基因的移码突变c.3169delC(p.L1057fs)是该DSH家系的致病突变位点。     

MODY患者染色体基因突变的初步研究

目的 探索MODY相关基因的染色体突变及临床MODY确诊方法。方法 运用FISH测定MODY患者周围淋巴细胞染色体突变位点，并应用PCR进行验证。结果 在86例5-35岁2型糖尿病患者中检出HNF-1α突变4例，HNF-4α基因突变3例，GCK基因突变6例，结论 FISH技术比传统细胞遗传学方法更敏感，应用FISH法可对该病进行症状前诊断与确诊。并与1型糖尿病进行本质区分。     

5-氟尿嘧啶激活 TGF-β1／Smad 通路治疗结肠癌的机制研究

目的：探讨5-氟尿嘧啶（5-Fu）通过激活转化生长因子β1／Smad（TGF -β1／Smad）通路治疗结肠癌的机制。方法将24只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组,氧化偶氮甲烷处理组（ AOM组）和AOM及5-Fu处理组（ AOM＋5-Fu组）,每组8只。通过实时定量PCR、免疫印迹及免疫组织化学方法观测5-Fu处理后结肠癌组织中TGF-β1及其Ⅱ型受体（ TGF-βRⅡ）和下游Smad基因家族成员Smad4表达的变化。结果与对照组大鼠相比,AOM组大鼠TGF-β1 mRNA、TGF-βRⅡmRNA和Smad4 mRNA的表达显著降低（ P ＜0．01）;与AOM组大鼠相比,AOM＋5-Fu组TGF-β1 mRNA、TGF-βRII mRNA和Smad4 mRNA的表达显著增加（ P ＜0．01）,但没有恢复到对照组水平。与对照组大鼠相比,AOM组大鼠TGF-β1、TGF-βRⅡ和Smad4与β-actin的比值显著降低（ P ＜0．01）;与AOM组大鼠相比, AOM＋5-Fu组处理后TGF-β1、TGF-βRⅡ和Smad4与β-actin的比值显著增加（ P ＜0．01）,但没有恢复到对照组水平。与对照组大鼠相比,AOM组大鼠TGF-β1、TGF-βRⅡ和Smad4的AOD值显著降低（ P ＜0．01）;与AOM组大鼠相比,AOM＋5-Fu组处理后TGF-β1、TGF-βRⅡ和Smad4的AOD值显著增加（ P ＜0．01）,但没有恢复到对照组水平。结论5-Fu能够提高结肠癌组织中TGF-β1,TGF-βRⅡ和Smad4的表达,激活了TGF-β1／Smad通路。     

黄芪对尾加压素Ⅱ诱导的心脏成纤维细胞胶原合成及分泌转化生长因子-β_1的影响

目的观察黄芪注射液对尾加压素Ⅱ（UⅡ）诱导的心脏成纤维细胞合成胶原及分泌转化生长因子（TGF-β1）的影响。方法体外培养乳鼠心脏成纤维细胞,分成3组：对照组、UⅡ组、UⅡ＋黄芪组。作用一定时间后,Real-time RT-PCR法测定各组细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1基因表达情况,3H-脯氨酸掺入测定胶原合成情况,双抗体夹心ELISA法测定培养上清TGF-β1分泌情况。结果UⅡ可以促进乳鼠心脏成纤维细胞胶原合成,刺激TGF-β1的分泌,黄芪注射液可明显抑制UⅡ的上述作用。结论黄芪可以通过抑制UⅡ诱导的心脏成纤维细胞胶原合成及TGF-β1分泌,延缓心肌纤维化及心脏重构的进展。     

扶肾方调节各种细胞因子干预腹膜间皮细胞 EMT的实验研究

摘要：目的 探讨扶肾方对大鼠腹膜间皮细胞转化生长因子-β受体Ⅰ（TGF-βRⅠ）、TGF-βRⅡ、Smad泛素化相 关因子2（Smurf2）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、紧密连接蛋白-1（ZO-1）的影响及抑制上皮-间充质转分化（EMT）的作 用机制。方法 原代培养大鼠腹膜间皮细胞,传至第2代并鉴定后,分为空白对照（C）组,含药血清（B）组,模型（T） 组（40 μg/L TGF-β1）,模型+含药血清（T+B）组,模型+MG132（T+M）组。培养24 h后收集细胞和培养液上清液,采用 蛋白印迹法检测Smurf2蛋白水平,qPCR检测各组TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、E-cadherin、ZO-1的mRNA转录水平。结果 与C组比较,T组E-cadherin、ZO-1、TGF-β1RⅡ mRNA、Smurf2蛋白表达明显上调（P＜0.05）;与T组比较,B组 E-cadherin、ZO-1 mRNA 表达均上调,T+B 组E-cadherin、ZO-1、TGF-β1RⅡ mRNA 表达均上调,Smurf2蛋白表达下 调,T+M组E-cadherin、ZO-1、TGF-β1RⅠ mRNA、Smurf2蛋白表达均下调,TGF-β1RⅡ mRNA表达上调（P＜0.05）;与 B组比较,T+B组和T+M组E-cadherin mRNA表达下调,T+M组ZO-1、TGF-β1RⅠ mRNA表达下调（P＜0.05）;与T+B 组比较,T+M组E-cadherin、ZO-1、TGF-β1R,TGF-β1RⅡ mRNA表达均下调（P＜0.05）。结论 扶肾方抑制大鼠腹膜 间皮细胞EMT可能与上调TGF-βRⅡ mRNA转录,下调Smurf2蛋白含量,促进E-cadherin、ZO-1 mRNA的转录相关。     

人真核表达慢病毒质粒载体plenti6/V5-D-TOPO(R)-T13RⅡ Dnglytk的构建及意义

目的:构建含有T13R Ⅱ DNglytk的慢病毒质粒载体plenti6/V5-D-TOPO(R)-TβR Ⅱ DNglytk,用含有TβR ⅡDNglytk质粒的慢病毒感染T淋巴细胞使其对转化生长因子-β(TGF-β)失敏感.恢复其对肿瘤的杀伤活性.方法:以原始质粒为模板,PCR扩增TβRⅡ DN和HSV-tk基因,运用重组PCR方法将2个基因连接起来,获得TβR Ⅱ DNglytk融合基因,再以此基因为模板,PCR扩增获得其对照基因TRANSglytk.应用Invitrogen公司提供的系统,通过TOPO技术将2个融合基因分别连接到慢病毒表达质粒,并经过测序验证.结果:完成慢病毒表达质粒载体TβR Ⅱ DNglytk的构建,经测序验证序列正确,可以用于相应慢病毒的生产.结论:运用重组PCR技术和TOPO技术成功构建了plenti6/V5-D-TOPO(R)-T13RⅡDNglytI[载体,为产生对TGF-β不敏感的人肿瘤特异性淋巴细胞,并用于肿瘤的免疫治疗提供了基础.     

The CC genotype of transforming growth factor-β1 increases the risk of late-onset Alzheimer's disease and is associated with AD-related depression

Transforming growth factor-β1 (TGF-β1) is a neurotrophic factor that exerts neuroprotective effects against β-amyloid-induced neurodegeneration. Recently, a specific impairment of the TGF-β1 signaling pathway has been demonstrated in Alzheimer's disease (AD) brain. TGF-β1 is also involved in the pathogenesis of depressive disorders, which may occur in 30-40% of AD patients. The TGF-β1 gene contains single nucleotide polymorphisms (SNPs) at codon +10 (T/C) and +25 (G/C), which are known to influence the level of expression of TGF-β1. We investigated TGF-β1 +10 (T/C) and +25 (G/C) SNPs and allele frequencies in 131 sporadic AD patients and in 135 healthy age- and sex-matched controls. Genotypes of the TGF-β1 SNPs at codon +10 (T/C) and +25 (G/C) did not differ between AD patients and controls, whereas the allele frequencies of codon +10 polymorphism showed a significant difference (P = 0.0306). We also found a different distribution of the +10 (C/C) phenotype (continuity-corrected χ(2) test with one degree of freedom = 4.460, P = 0.0347) between late onset AD (LOAD) patients and controls (P = 0.0126), but not between early onset AD (EOAD) patients and controls. In addition, the presence of the C/C genotype increased the risk of LOAD regardless of the status of apolipoprotein E4 (odds ratio [OR] = 2.34; 95% CI = 1.19-4.59). Compared to patients bearing the T/T and C/T polymorphisms, LOAD TGF-β1 C/C carriers also showed > 5-fold risk to develop depressive symptoms independently of a history of depression (OR = 5.50; 95% CI = 1.33-22.69). An association was also found between the TGF-β1 C/C genotype and the severity of depressive symptoms (HAM-D(17) ≥ 14) (P < 0.05). These results suggest that the CC genotype of the TGF-β1 gene increases the risk to develop LOAD and is also associated with depressive symptoms in AD.     

转化生长因子-β1及其受体TβRⅠ、Ⅱ在鼠牙髓炎组织中的表达及意义

目的 观察转化生长因子（TGF）-β1及其受体TβRⅠ、TβRⅡ在大鼠可复性牙髓炎模型中不同时间的动态表达及定位情况,探讨TGF-β1及其受体TβRⅠ、TβRⅡ在大鼠牙髓炎症发展过程中可能的作用机制及在牙髓损伤修复中的意义.方法 通过对大鼠上颌第1磨牙进行机械性不喷水均匀磨除釉质,后用酸蚀剂处理暴露的牙本质,建立实验性大鼠可复性牙髓炎模型.然后对牙髓炎组织连续切片采用免疫组化法分析,并进行单因素方差分析（ANOVA）、Tukey检验.结果 在炎症牙髓中TGF-β1及其受体TβRⅠ、TβRⅡ的表达明显增强,且随时间呈动态变化趋势;TGF-β1在5 d达到高峰,之后明显下降.TβRⅠ、TβRⅡ在3 d达到最高,之后略有下降.在0～3 d TGF-β1及TβRⅠ、TβRⅡ均呈上升趋势,但不成正比例关系.结论 TGF-β1通过与受体TβRⅠ、TβRⅡ结合,参与牙髓组织损伤修复并发挥重要作用,TGF-β1可上调TβRⅠ、TβRⅡ表达,但不成正比例关系.     

转化生长因子β_1单核苷酸多态性及血清水平与高血压左室肥厚的关系

目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)基因+869、+915位点等位基因频率及基因型在高血压左室肥厚患者中的分布,初步分析其基因型及血清水平与高血压左室肥厚的关系。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP),检测186例高血压患者(其中91例伴左室肥厚)及105名对照组TGF-β1基因+869T/C、+915G/C多态性,同时采用双抗体夹心ABC-酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定血清TGF-β1水平。结果高血压左室肥厚组血清TGF-β1水平显著高于高血压非左室肥厚组和对照组(P均<0.05),TGF-β1+869T/C多态性在两组人群中的分布差异有统计学意义(P均<0.05),C等位基因携带者患高血压左室肥厚的风险是T等位基因的1.787倍(OR=1.787,95%CI:1.194~2.673),携带C等位基因的高血压左室肥厚患者血清TGF-β1水平高于不携带者(P<0.05)。结论TGF-β1基因+869T/C多态性与高血压左室肥厚的发病具有相关性,C等位基因可能是高血压左室肥厚发病的遗传易感基因;携带C等位基因的个体可能通过促进TGF-β1的高度表达,进而增加了高血压左室肥厚的发病风险。     

丹参抑制人粘连成纤维细胞增殖的作用研究

目的:研究丹参对人粘连成纤维细胞增殖的抑制作用。方法:从人体腹膜粘连组织中原代培养出成纤维细胞(AFB),以地塞米松为阳性对照,考察丹参及其主要成分丹参素、丹参酮ⅡA对AFB增殖活性与生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达的影响。结果:丹参冻干粉、丹参素作用下AFB活性下降幅度大,而且半数抑制浓度(IC50)显著低于丹参酮ⅡA,TGF-β1mRNA表达水平亦显著降低(P<0.01或P<0.05),丹参酮ⅡA对TGF-β1表达无显著影响。结论:丹参通过下调AFBTGF-β1mRNA表达抑制其增殖,主要起效成分为丹参素。     

一种新型的截短型转化生长因子-βⅡ型受体的构建

目的设计并构建一种新型的截短型转化生长因子-βⅡ受体(tTGF-βRⅡ)。方法 RT-PCR方法扩增TGF-βⅠ的CDS序列、tTGF-βRⅡ,并将其分别克隆至pGBKT7和pGADT7载体中。利用酵母双杂交和GST-pulldown试验检测tTGF-βRⅡ与TGF-βⅠ间的相互作用。人工合成该tTGF-βRⅡ多肽。结果成功地设计并克隆了一种新的tTGF-βRⅡ,其可以与配体TGF-βⅠ结合。结论制备的tTGF-βRⅡ可以作为TGF-βRⅡ的拮抗剂,竞争性的与TGF-βⅠ结合,为瘢痕治疗奠定了基础。     

转化生长因子β1及成纤维细胞生长因子基因敲除对尘肺小鼠肺纤维化的影响

目的 探讨转化生长因子β1(TGF-ββ1)、成纤维细胞生长因子(FGF)基因敲除对尘肺小鼠肺纤维化的影响.方法 将160只雄性BALB/c白色纯合子小鼠随机分为空白对照组、尘肺模型组、TGF-β1及FGF基因敲除组,每组40只.TGF-ββ1及FGF基因敲除组分别敲除TGF-β1及FGF基因.除空白对照组气道内灌入生理盐水外,其他3组于气道内灌入煤粉尘生理盐水混悬液,继续饲养,第16周测定TGF-β1、FGF水平并取肺组织行HE染色观察,分析血清及肺组织匀浆TGF-β1与FGF水平的相关性.结果 与空白对照组比较,尘肺模型组、TGF-β1及FGF基因敲除组第16周肺系数、血清及肺组织匀浆TGF-ββ1、FGF水平增高(P＜0.05);与尘肺模型组比较,TGF-β1及FGF基因敲除组第16周上述指标均降低(P＜0.05).尘肺模型组血清及肺组织匀浆TGF-β1与FGF呈正相关(r=0.420、0.512,P ＜0.05).结论 TGF-β1及FGF参与尘肺小鼠肺纤维化过程,TGF-β1及FGF基因敲除能抑制肺纤维化.