着色性干皮病皮肤成纤维细胞系(XP4SH)的建立及其生物学特性

着色性干皮病是先天性DNA修复功能缺陷的常染色体隐性遗传疾病。是研究人类DNA修复系统与肿瘤发生机理的理想实验模型。本文报告的XP4SH细胞系来源于XP患者皮肤,经体外培养表现为成纤维细胞的形态和生长特性,染色体众数为2n=46,双着丝粒染色体为其畸变的特征,经紫外线诱发的SCE率显著增高,而UDS水平则明显低下,细胞融合基因互补分析证实该细胞系归属于A互补群。     

人鼻咽癌DNA对Rat-Ⅰ细胞株的转化活性及其基因表达的研究

为了解EB病毒基因组阳性人鼻咽癌DNA在转染正常细胞后可能发生的生物学作用,作者将人鼻咽癌活检组织的DNA(EB病毒基因组阳性),用磷酸钙方法转染正常Rat-Ⅰ细胞,使其恶转;用软琼脂培养的转化细胞能贴壁生长,并形成克隆;转化细胞易与PHA发生凝集;克隆接种裸鼠形成纤维肉瘤;转化细胞和裸鼠肿瘤组织用抗C_3补体免疫荧光法检测EBNA呈阳性;染色体原位杂交显示在某些细胞中期染色体上有银粒出现。     

棉酚对体外人肥大前列腺成纤维细胞的作用

棉酚对体外人肥大前列腺成纤维细胞的生长、ＤＮＡ合成及形态学的作用结果表明：棉酚可以明显地抑制细胞的生长，且抑制作用与时间－剂量相关：用３Ｈ－胸腺嘧啶掺入法测定细胞的ＤＮＡ合成，结果也相同：细胞超微结构的改变主要为细胞质空泡化，内质网、线粒体的损害和核固缩，其中线粒体对棉酚最为敏感，损害最明显。作者还对棉酚抑制体外人肥大前列腺成纤维细胞增殖的作用机理及棉酚用于治疗前列腺肥大症的可能性进行了初步的探讨。     

EB病毒基因片段转化细胞的基因定位与移植裸鼠的致瘤性检測

EB病毒是DNA肿瘤病毒,它与人类的两种恶性肿瘤Burkitt氏淋巴瘤和鼻咽癌相关,前者是B淋巴细胞的肿瘤,而后者是低分化的鼻咽上皮癌。用EB病毒基因片段(BamHI W及相邻片段)通过转染的方法已成功地转化Rat-1细胞并接种裸鼠形成移植瘤。用~3H标记的EBV DNA探针与转化细胞染色体作核酸原位杂交,结果显示EB病毒的BamHI W片段与1、8号染色体DNA有同源性。经统计证明W片段定位在这两个染色体上,转化细胞与对照细胞结构及数目上并无明显的差异,但转化细胞DNA合成是对照细胞的5.69倍。转化细胞接种裸鼠形成移植瘤后并可传代。移植存活率达93.3%。随着传代代数的增加,肿瘤增大的速度有加快的倾向,细胞染色体众数逐渐增加,接近三倍体(62)。     

小鼠肝癌细胞系H_(22)—F_(25)/L的建立及其生物学特性

利用自建的小鼠肿瘤淋巴道转移模型(H22—F25)进行体外培养160代,建成了培养细胞系(H22—F25/L)瘤细胞呈悬浮生长,增殖迅速,生长稳定。细胞分裂指数高峰在48小时,细胞增殖高峰为96小时,增殖25倍,H22—F25/L仍保留低分化癌的特征,在615小鼠体内的致瘤率为100％,淋巴结转移率为50％,同时伴有肺转移率为10％。H22—F25/L是一个异质的细胞群体,染色体干系为43(占40％)和86(占32％),其余的旁系各占2～8％。他们有共同的标记染色体M_1、M_2、M_3、M_4,说明相互间有“血缘”关系。     

分泌甲胎蛋白和乙型肝炎病毒表面抗原的肝癌细胞株的建立

CZHC/8571细胞株来源于1例血清甲胎蛋白(AFP)和乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性的肝细胞型肝癌伴慢性活动性肝炎患者。采用组织块培养法,9个月共传25代。从第10代开始进行生物学特性检测,其细胞形态和糖原染色经光学和电子显微镜观察均与原始癌细胞一致;细胞生长指数、分裂指数和倍增时间分别为7.9、70‰和64h;染色体主流数为84;C组染色体数目普遍增多,结构异常可见单、双体断裂、易位和环状染色体;浓缩20倍的24h培养液中即可测及AFP(对流法阳性);分别以5×10~6个细胞接种3只裸鼠,50～60d后均形成移植瘤。结果表明CZHC/8571细胞株是具有能产生和分泌AFP、HBsAg功能的人类肝癌细胞株。     

ETM study of electroporation influence on cell morphology in human malignant melanoma and human primary gingival fibroblast cells

Objective

To estimate electroporation (EP) influence on malignant and normal cells.

Methods

Two cell lines including human malignant melanoma (Me-45) and normal human gingival fibroblast (HGFs) were used. EP parameters were the following: 250, 1 000, 1 750, 2 500 V/cm; 50 µs by 5 impulses for every case. The viability of cells after EP was estimated by MTT assay. The ultrastructural analysis was observed by transmission electron microscope (Zeiss EM 900).

Results

In the current study we observed the intracellular effect following EP on Me-45 and HGF cells. At the conditions applied, we did not observe any significant damage of mitochondrial activity in both cell lines treated by EP. Conversely, we showed that EP in some conditions can stimulate cells to proliferation. Some changes induced by EP were only visible in electron microscopy. In fibroblast cells we observed significant changes in lower parameters of EP (250 and 1 000 V/cm). After applying higher electric field intensities (2 500 V/cm) we detected many vacuoles, myelin-like bodies and swallowed endoplasmic reticulum. In melanoma cells such strong pathological modifications after EP were not observed, in comparison with control cells. The ultrastructure of both treated cell lines was changed according to the applied parameters of EP.

Conclusions

We can claim that EP conditions are cell line dependent. In terms of the intracellular morphology, human fibroblasts are more sensitive to electric field as compared with melanoma cells. Optimal conditions should be determined for each cell line. Summarizing our study, we can conclude that EP is not an invasive method for human normal and malignant cells. This technique can be safely applied in chemotherapy for delivering drugs into tumor cells.     

人成纤维细胞对人胚胎干细胞生长的支持作用

目的观察人成纤维细胞对人胚胎干细胞（hESC）生长的支持作用，建立完全非动物源性培养系统。方法采用人包皮成纤维细胞为饲养层，以血清替代品取代动物血清，支持人胚胎干细胞生长，观察其增殖和分化情况。结果包皮成纤维细胞能很好地支持人胚胎干细胞生长增殖，并保持87％左右未分化表型：碱性磷酸酶（AKP）染色强阳性，阶段特异性胚胎抗原3（SSEA-3），肿瘤排斥抗原160（TRA-1-60）表达强阳性，可见转录因子OCT-4mRNA表达。核型正常，体外能形成拟胚体。结论人成纤维细胞完全可以支持人胚胎干细胞增殖，可望为胚胎干细胞定向诱导分化应用于临床打下基础。     

THE STUDY ON RELATED GENES IN THE NEOPLASTIC TRANSFORMATION OF IMMORTALIZED HUMAN FETAL TRACHEAL FIBROBLAST CELLS INDUCED BY IRRADIATION

ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＬｕｎｇｃａｎｃｅｒｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｌｅａｄｉｎｇｃａｕｓｅｓｏｆｄｅａｔｈｉｎｔｈｅｗｏｒｌｄ．Ｍａｎｙｆａｃｔｏｒｓ，ｓｕｃｈａｓｃｈｅｍｉｃａｌ，ｐｈｙｓｉｃａｌｆａｃｔｏｒｓｅｔｃ．，ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｔｏｔｈｅ...     

CagA基因阳性Hp培养滤液对人胃粘膜上皮细胞系DNA损伤作用

目的 研究 CagA阳性幽门螺杆菌（Hp）培养滤液对人胃粘膜上皮细胞（GES－1）DNA的损伤作用。方法 制备Hp培养滤液,PCR鉴定CagA基因。采用单细胞微凝胶电泳观察Hp（CagA＋）培养滤液对GES－1细胞DNA的损伤作用。结果 Hp（CagA＋）培养滤流可使GES－1细胞形成彗星现象。结论 Hp（CagA＋）培养滤液可以导致GES－1细胞的DNA损伤。DNA损伤可能是CagA诱导GES－1细胞恶性转化的机制之一。     

番茄汁对DNA损伤的保护作用研究

目的 探讨番茄汁对人正常细胞和肿瘤细胞增殖的影响及DNA损伤的保护作用.方法 采用MTT法检测不同剂量的番茄汁对细胞增殖的影响,彗星实验检测不同剂量番茄汁对细胞DNA的影响及对DNA损伤的保护作用.结果 当番茄汁体积在培养液中所占比例低于15%时,对正常细胞和肿瘤细胞的增殖没有任何影响;当番茄汁在培养液中所占比例达到或超过20%时,此时的培养液不是细胞生长的最适条件,表现为细胞生长抑制.番茄汁在培养液中体积分数为50～500 μL/mL时没有引起细胞DNA损伤,而低浓度(20～100 μL/mL)番茄汁对重铬酸钾诱导的DNA损伤具有明显的保护作用,该作用随着番茄汁剂量的增加而增强,表现为拖尾细胞减少,尾长减短,番茄汁剂量与拖尾细胞尾长具有明显的剂量-反应关系,呈负相关(r=-0.917,P=0.00369).肿瘤细胞和正常细胞实验结果一致.结论 番茄汁不但不会引起细胞DNA损伤,而且对重铬酸钾诱导的DNA损伤具有明显的保护作用;此外,在研究番茄汁对细胞增殖影响时应该注意番茄汁在培养液中所占的体积,本实验显示番茄汁不能超过20%,否则会得到错误的结论.     

人类小涎腺腺样囊性癌NACC细胞系的建立及腺样囊性癌生物学特性的研究

目的：建立一个人类腭部涎腺腺样囊性癌细胞系并对其生物学特性作进一步探讨。方法：取人腭部小涎腺腺样囊性癌组织经原代培养并传代成系,命名为NACC细胞系,采用免疫组化法对NACC细胞系及另一涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83行多种细胞中间丝染色。结果：NACC细胞为亚三倍体核型,单层贴壁生长的上皮癌细胞系,异种接种可致瘤。NACC及SACC-83细胞均有抗keratin,CFAP,EMA,smooth muscle actin,vimentin,S-100蛋白不同程度阳性。结论：NACC细胞系生长稳定,为源自干细胞的不同分化程度和发育周期的癌细胞所组成的细胞群体。可能含有肿瘤性闰管细胞、肌上皮细胞及未分化的多潜能干细胞等细胞成分,保持了腺样囊性癌的大部分特性,行体内、外试验时能较好地反映该类肿瘤的生物学特性。     

稳定表达外源野生型p53基因人胆囊癌细胞系的建立和鉴定

目的：建立稳定表达外源野生型p53（wtp53）基因的人胆囊癌细胞系。方法：在脂质体lipofectamine^TM 2000介导下，将含有wtp53的真核表达质粒pCMV-p53导入胆囊癌细胞系GBC—SD中。经G418筛选抗性克隆，扩大培养，建立转染克隆细胞系。用聚合酶链反应（PCR）证实外源野生型p53基因的整合，用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）和蛋白印迹法分析目的基因及其蛋白表达。结果：野生型p53基因成功地导入胆囊癌细胞系GBC—SD，转染细胞中存在外源p53基因及蛋白的稳定表达。结论：GBC—SD胆囊癌细胞株能稳定表达外源野生型p53基因。     

细菌脂多糖对人外周血单核细胞来源的树突状细胞发育和功能的影响

目的 :探讨细菌脂多糖 (LPS)对正常成人外周血单核细胞来源的树突状细胞 (Dendritic cell,DC)表面分子表达及免疫功能的影响。方法 :分离正常人 (n=5 )外周血单个核细胞 (PBMC)以 GM-CSF、IL-4联合诱生 DC,实验组在培养的第 2天加入LPS,正常对照组不加。于第 4、8天 FACS检测 DC表面分子 CD1a、CD14、CD83、CD80、HL A-DR的表达。同期检测 DC的增殖和刺激同种异体 T淋巴细胞的增殖情况。结果 :经 LPS刺激后 ,正常人 DC早期、晚期表面分子 CD1a、CD83、CD80表达增高 ,CD14表达降低 (P<0 .0 5 )。DC数量的增加及刺激同种异体 T细胞能力明显增强。结论 :GM-SF、IL-4和 L PS联合刺激能促进正常人 DC的成熟和免疫功能的提高     

STUDIES ON THE RELATIONSHIP BETWEEN CHROMOSOME No15 AND THE BIOLOGICAL CHARACTERISTICS OF MALIGNANT TRANSFORMED SYRIAN HAMSTER FIBROBLAST CELL LINES

During the course of malignant transformation of mammalian cells in vitro,a regular varia-tion in chromosome number and structure is usually found.In order to elucidate the rela-tionship between chromosomal changes and maligannt expression,we isolated fire clonesfrom a malignant transformed Syrian hamster fibroblast cell line and analyzed their biologicalcharacteristics,as well as chromosomal changes.A positive correlation betweetn chromosomeNo 15 monosomy and the transformed and malignant phenotype was observed.We suggestthat a suppression gene may be located on chromosome No 15,and its deletion or the lossof the chromosome may result in expression of the malignant phenotype.     

ESTABLISHMENT OF A HUMAN T-LYMPHOMA CELL LINE（H-TL90） AND ANALYSIS OF ITS BIOLOGICAL CHARACTERISTICS

We established a human T-lymphoma cell line from the cancerous ascites of a male patient with prostate cancer which was named H-TL90. This cell line was characterized by its histological features, and by chromosomal and immunological analysis. Immunophenotypic analysis revealed that the cells expressed surface antigen CD3^- CD4^- CD7^ CD8^-. Biological analysis revealed that the cell can promote lymphocyte proliferation. This suggested that the cell line has an autosecretion function. Cytogenetic analysis revealed that H-TL90 was a hyperdlploid with 47 chromosomes and had characteristic translocation between chromosome 3 and 11, and the deletion of the long arm of chromosome 6. These results demonstrated the H-TL90 cell line can be a useful modal for the study of human T-lymphoma.     

去铁胺对HL-60细胞增殖的影响

本文研究了去铁胺(DFO)对人早幼粒白血病细胞株HL-60细胞增殖的影响,发现DFO在体外能较强的抑制HL-60细胞的DNA合成、细胞生长和集落形成。经流式细胞光度计分析,DFO特异地抑制了HL-60细胞周期的S期。结果说明DFO不仅是一种用于治疗铁负荷过多的铁螯合剂,而在体外亦有较强的抗白血病细胞增殖的使用。     

白细胞介素-3对小鼠淋巴瘤细胞生长的影响

用小鼠IL-3分泌细胞株WEHI-3和IL-3依赖细胞株32-D,获取了IL-3并对其活性进行了鉴定。在此基础上,选用国内实验性T-S-Z白血病系统中的一株小鼠淋巴瘤细胞克隆SAC-ⅡB_2,观察了IL-3对其增殖和分化的影响。结果表明,IL-3对SAC-ⅡB_2细胞有一短暂的刺激增殖作用;IL-3作用的SAC-ⅡB_2细胞未见成熟形态迹象出现,未见成熟T或B细胞表面标志Thy-1、Smlg的表达,也未显示成熟T、B细胞的功能。     

舌癌淋巴道转移模型中分离并建立舌癌细胞永生化细胞系

目的：在建立舌癌Tca8113淋巴道转移裸鼠模型的基础上,建立永生化的舌癌细胞系,并进一步探讨舌癌转移淋巴结组织中同源癌细胞相关标记物的表达情况,为舌癌干细胞研究提供基本的研究模型。方法：采用癌细胞足垫注射法建立淋巴道转移模型,4周后取淋巴结进行原代细胞培养并分离、纯化舌癌细胞进行连续传代培养、进行永生化细胞系的生物学特性鉴定。结果：在淋巴道转移模型中,HE染色与EMA免疫组化染色发现淋巴结有散在或灶性鳞状上皮癌细胞转移。进而取转移模型裸鼠的淋巴结组织进行原代细胞培养,经分离和纯化以及连续传代而建立舌癌永生化细胞系,命名为Tca8113-Ml,目前传代100余代,时间近2年,生长稳定,倍增时间为22.51h,染色体众数58,保持人染色体形态,细胞形态与Tca8113细胞相似。Tca8113-Ml在裸鼠体内的成瘤率为100%,裸鼠腋窝皮下成瘤的组织切片显示为典型的鳞状上皮细胞癌。结论：在舌癌淋巴道转移模型中,可分离培养与建立永生化的舌癌细胞系。     

人肺腺癌A549细胞系干细胞样细胞的培养检测及其抗顺铂能力的研究

目的:从人肺腺癌A549细胞系中培养获得含干细胞样细胞的球细胞(Sphere细胞),检测相关标志物表达及其对顺铂的耐药性.方法:采用含特定生长因子的无血清培养基诱导A549细胞的Sphere细胞形成,用亲脂荧光染料标记技术和免疫荧光法检测Sphere细胞中干细胞的存在,用流式细胞术检测干性标志物CD133,OCT4,C...