肿瘤坏死因子-α诱导肝细胞凋亡在暴发性肝衰竭中的作用

目的 研究肿瘤坏死因子－α（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ－α,ＴＮＦ－α）诱导肝细胞凋亡细胞凋亡在暴发性肝衰竭中的作用机制。方法 分别注射脂多糖（ｌｉｐｏｐ ｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ,ＬＰＳ）和ＴＮＦ－α于Ｄ－氨基半乳糖（Ｄ－ｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ,ＧａｌＮ）致敏的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠造成暴发性肝衰竭模型,用脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口原位末端标记（ｉｎ ｓｉｔｅ ｅｎｄ ｌａｂｅ     

人可溶性肿瘤坏死因子受体1基因转染对肿瘤坏死因子α诱导肝细胞凋亡的影响

TNFα能诱导肝细胞凋亡,其过度表达是肝衰竭发生发展过程中的一个重要因素。可溶性TNFα受体1（sTNFR1）可中和TNFα的部分毒性作用。为有效抑制TNFα诱导的细胞凋亡以及治疗肝衰竭,我们拟构建sTNFR1的真核表达载体,并将重组质粒pcDNA3-1（-）sTNFR 1瞬时转染QSG7701细胞,研究其对TNFα诱导细胞凋亡的抑制作用。[第一段]     

卡维地洛与阿替洛尔对肿瘤坏死因子α诱导内皮细胞凋亡的影响

本研究通过体外培养人肺静脉血管内皮细胞,观察卡维地洛与阿替洛尔对肿瘤坏死因子(TNF α)诱导内皮细胞凋亡的影响。一、资料与方法1.传4～6代生长良好的人肺静脉血管内皮细胞,消化,离心,用10 %的16 4 0培养液配成1×10 6/ml浓度的细胞悬液;6孔培养板每孔加入1×10 6/ml的细胞悬液1ml,再分别加入1mmol/L浓度卡维地洛(山东齐鲁制药厂) 0、2 5、5、10、15 μl(此时培养液中的卡维地洛浓度分别为0、2 5、5、10、15 μmol/L) ,然后加入10mg/LTNF α10 μl,每种处理5个复孔,置于37℃含5 %CO2 的饱和水汽培养箱中培养。阿替洛尔(Sigma公司)…     

肿瘤坏死因子-α介导凋亡肝细胞内胱门蛋白酶-3的表达

目的 研究小鼠暴发性肝衰竭（FHF）动物模型凋亡肝细胞中凋亡基因胱门蛋白酶（cas-pase-3)mRNA及蛋白的表达及意义。方法 尾静脉注射肿瘤坏死因子-α（TNF-α）于D-氨基半乳糖（GalN)致敏的BALB/c小鼠,造成暴发性肝衰竭模型。用脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口原位末端标记（ISEL）技术、电镜及琼脂糖凝胶电泳检测肝组织DNALadder观察肝细胞凋亡,分别用免疫组化和半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测凋亡基因caspase-3蛋白及mRNA表达情况。结果 肝细胞凋亡率分别为0.0%(1.5h),0.3%(3.5h),3.15%(6h)和3.19%(9h)。肝组织中caspase-3mRNA和蛋白表达与肝细胞凋亡率成正相关趋势,结论 在TNF-α介导的小鼠暴发性肝衰竭模型中,caspase-3蛋白和mRNA表达上调并激活肝细胞凋亡的级联过程,最终导致肝细胞凋亡和坏死。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体与肝细胞凋亡的相关性

肿瘤坏死因子相关的调亡诱导配体是TNF家族成员之一,通过其死亡受体诱导凋亡.研究显示TRAIL/死亡受体途径参与多种肝脏病理过程,本文就TRAIL/死亡受体途径的特性、致凋亡的机制及与肝细胞凋亡关系的最新进展作一综述.     

TNF-α体外介导小鼠肝细胞凋亡和坏死

目的探讨TNF-α在体外作用于小鼠肝细胞时肝细胞所发生的病理及生化改变.方法采用原位灌洗法分离小鼠肝细胞,体外培养后分别加入TNF-α,GalN和GalN/TNF-α 5,10,20和30 h后,观察其形态学改变,测定培养上清液ALT和AST,抽提肝组织DNA,琼脂糖凝胶电泳观察生化学性质改变.结果 TNF-α单独作用于培养肝细胞,无肝细胞凋亡和坏死,经GalN致敏后,TNF-α可诱导大量肝细胞凋亡,早期(10 h)为凋亡,随后(20 h以后)出现肝细胞坏死,其程度随培养时间延长和药物剂量的增加而明显.单独使用GalN也可造成肝细胞凋亡和坏死,但程度较GalN/TNF-α合用轻.结论 TNF-α可诱导肝细胞凋亡和坏死,但须有肝细胞转录过程的抑制.     

肿瘤坏死因子-α介导肝细胞凋亡其相关死亡区蛋白及mRNA的表达

目的：研究凋亡调节基因Fas相关死亡区蛋白（FADD)mRNA及蛋白在肿瘤坏死因子α（TNFα）介导的凋亡肝细胞中的表达及意义,方法：尾静脉注射TNFα于D－氨基半乳糖（Ga1N）致敏的BALB／c小鼠,赞成暴发性肝衰模型,用脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口原位末端标记技术,电镜及琼脂糖凝胶电泳检测肝组织DNA Ladder观察肝细胞凋亡,分别用免疫组织化学和RT－PCR方法检测FADDmRNA和蛋白的表达情况,结果：TNFα可介导GalN致敏小鼠肝细胞凋亡,坏死,最终肝功能衰竭死亡,细胞凋亡率分别为0（1．5）h,0.3%(3.5h),3.15%(6h)和3．19％（9h),肝组织中FADD蛋白表达阳性率分别为0．2％（1．5h),3.3%(3.5h),14.2%(6h)和16．7％（6h)（9h),各时间点FADDmRNAg表达的相对单位（FADD积分值／β－actin积分值）不同,分别为0．48（正常对照组）,0．64（3．5h),(0.59(6h)和0.65(9h),结论：TNFa可通过上调FADD达引发肝细胞凋亡的级联过程。     

Bcl—2腺病毒载体抗肿瘤坏死因子α及氨基半乳糖诱导小鼠肝细胞凋亡

目的　探讨Bcl-2家族蛋白在TNFα致肝损伤及肝细胞凋亡中的作用。方法　以TNFα联合D-氨基半乳糖诱发小鼠肝损伤,以免疫组织化学法检测Bax、Bak蛋白在鼠肝组织中的表达情况;并以Bcl-2腺病毒载体感染肝细胞,观察其抗肝细胞凋亡作用。结果　TNFα可引起严重的肝损伤并有广泛的肝细胞凋亡,伴Bax、Bak蛋白在肝细胞中表达增强;Bcl-2腺病毒感染可使肝损伤小鼠ALT水平由（1372.9±251.4）U/L下降至（796.5±78.7）U/L,统计分析差异有显著意义（P＜0.0005）。结论　TNFα诱导肝细胞凋亡可能与其诱导Bax、Bak蛋白在肝细胞中表达增强有关;Bcl-2腺病毒载体可在小鼠肝细胞中持续表达至少一个月并可部分抵抗TNFα诱发的肝细胞凋亡。     

肿瘤坏死因子α致暴发性肝功能衰竭小鼠肠上皮细胞凋亡的作用

目的研究肿瘤坏死因子α(TNFα)对暴发性肝功能衰竭(FHF)小鼠肠黏膜上皮细胞凋亡的作用。方法用D-氨基半乳糖(GalN) 脂多糖(LPS)或TNFα造FHF小鼠模型;酶联免疫吸附法测定血清TNFα含量;光学显微镜和电子显微镜观察肠组织;末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法检测肠组织细胞凋亡情况;免疫组织化学法检测肿瘤坏死因子受体I(TNFRⅠ)蛋白在肠组织的表达与分布。结果实验各组动物各时间点光学显微镜下肠黏膜上皮细胞结构均保持完整,电镜下可见肝功能衰竭组有典型的凋亡细胞;对照组、LPS组、GalN组血清TNFα水平几乎正常,凋亡率低且基本没有TNFRⅠ蛋白表达;GalN LPS组血清TNFα水平12h明显升高(P<0.01),且TNFRⅠ蛋白在6h(大肠:2.82e 4±4.60e 3;小肠:1.14e 4±2.13e 3)即有表达,此时肠上皮细胞凋亡不明显,9h和12hTNFRⅠ蛋白表达明显增加,同时肠上皮细胞凋亡也明显。用GalN TNFα造FHF模型,结果也与GalN LPS组类似。应用抗TNFα抗体,可降低TNFRⅠ蛋白表达和减少肠上皮细胞凋亡的发生。结论TNFα能诱导肝功能衰竭小鼠肠上皮细胞凋亡,抗TNFα抗体能阻断这一作用;在FHF的模型动物中,TNFRⅠ蛋白表达增多,TNFRⅠ蛋白表达与肠上皮细胞凋亡在一定程度上呈正相关。     

脂多糖提高巨噬细胞可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的表达并诱导肝细胞凋亡

目的探讨脂多糖(LPS)、巨噬细胞表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和肝细胞凋亡的相互关系。方法LPS刺激巨噬细胞后,以流式细胞仪测定细胞表面的TRAIL表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测培养上清中可溶性TRAIL的表达;以(?)铬释放试验测定可溶性TRAIL和膜性TRAIL 对HepG2细胞的毒性作用,并用Annexin V染色法验证凋亡细胞的产生。结果经100 ng/ml LPS刺激后, 只有9.8%的巨噬细胞有TRAIL的表达,而培养上清中可溶性TRAIL达(67.4±5.1)ng/ml,有明显增加。巨噬细胞培养上清液中可溶性TRAIL能溶解HepG2细胞,经Annexin V染色法证实为细胞凋亡,此作用可被特异性TRAIL抗体阻断。结论LPS能增加巨噬细胞可溶性TRAIL表达,并诱导肝细胞凋亡,提示TRAIL在病毒性肝炎发病机制中有重要作用。     

Bcl-xl阻断肿瘤坏死因子α诱导的caspase 8活化及细胞凋亡

目的探讨BCl-xl对肿瘤坏死因子α(TNFα)介导的细胞凋亡信号通路以及细胞凋亡的影响。方法将iκBα负性突变体质粒pmiκB与绿色荧光蛋白(GFP)表达质粒pEGFP-Cl，pmiκB、DBcl-xl／HA与pEGFP-Cl分别共转染HeLa细胞；将pBcl-xl／HA转染核因子κB(NFκB)／p65基因敲除的p65／MEF细胞，并用嘌呤霉素筛选及westernblot鉴定获得稳定表达Bcl-xl的细胞系p65／／Bcl-xlMEF。用TNFα处理HeI。a／miκB、IteLa／miκB／Bcl-xl细胞以及p65／MEF、p65／／Bcl-xlMEF细胞，并在冠微镜下观察细胞形态变化、台盼蓝染色计算死亡细胞以检测各组细胞凋亡情况；采用western blot检测凋亡信号通路中caspase8活化及腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)裂解情况。结果单独转染pmiκB的HeLa细胞，TNFα诱导的细胞凋亡明显，表现为细胞变圆、脱落、死亡，而PBCl-xl／HA与PmiκB共转染的HeLa细胞，TNFα处理后未见细胞凋亡。P65／MEF细胞经TNIrα处理发生凋亡，该作用在TNFα处理后4h即可出现，处理12h后绌胞死亡率为90％，而在表达Bcl-xl的p65／／Bcl-xlMEF细胞，TNFα处理24h也未见细胞凋亡或死亡发生。Westernblot检测表明单独转染pmiκB的HeLa细胞，TNFα诱导了caspase8裂解活化及PARP裂解，而pBcl-xl／HA与pmiκB共转染、表达Bcl-xl的HeLa细胞，TNFα诱导的caspase8裂解活化及PARP裂解被阻断。结论在NFκB被抑制的实验细胞系统，Bcl-xl能阻断TNFα介导的细胞凋亡信号通路以及细胞凋亡，这对于进一步研究TNFα相关疾病发生机制及治疗措施有重要价值。     

肿瘤坏死因子α通过丝裂原活化蛋白激酶激酶6诱导LA795肺腺癌细胞凋亡

目的：为了研究肿瘤坏死因子α（TNF－α）诱导肺癌细胞凋亡的分子机制，寻找肺癌基因治疗的新方法。方法：建立TNF－α诱导LA795肺腺癌细胞凋亡的细胞模型；使用人胚肾293包装细胞制备丝裂原活化蛋白激酶激酶6（mitogen-activated protein kinase kinase 6,MKK6)及其结构活性和无活性突变体的重组腺病毒；使用激酶活性测定法检测细胞内MKK6的激酶活性。结果：TNF－α刺激可明显诱导LA795肺腺癌细胞MKK6激活；用TNF－α刺激肺腺癌细胞可明显诱导细胞凋亡；MKK6结构活性突变体也可明显诱导LA795细胞凋亡；而MKK6无活性突变体可明显抑制TNF－α诱导的LA795细胞凋亡。结论：TNF－α诱导LA795肺腺癌细胞凋亡是通过MKK6发挥作用的，MKK6的重组腺病毒有希望用于肺癌的基因治疗。     

TNF-alpha体外介导小鼠肝细胞凋亡和坏死

目的探讨TNF-α在体外作用于小鼠肝细胞时肝细胞所发生的病理及生化改变.方法采用原位灌洗法分离小鼠肝细胞,体外培养后分别加入TNF-α,GalN和GalN/TNF-α 5,10,20和30 h后,观察其形态学改变,测定培养上清液ALT和AST,抽提肝组织DNA,琼脂糖凝胶电泳观察生化学性质改变.结果 TNF-α单独作用于培养肝细胞,无肝细胞凋亡和坏死,经GalN致敏后,TNF-α可诱导大量肝细胞凋亡,早期(10 h)为凋亡,随后(20 h以后)出现肝细胞坏死,其程度随培养时间延长和药物剂量的增加而明显.单独使用GalN也可造成肝细胞凋亡和坏死,但程度较GalN/TNF-α合用轻.结论 TNF-α可诱导肝细胞凋亡和坏死,但须有肝细胞转录过程的抑制.     

肿瘤坏死因子α与梗阻性黄疸

梗阻性黄疽（Obstructivejaundice,OJ）是一种常见病,病因很多,多数可通过外科手术解决。但是术后并发症和死亡率较高,其主要原因是内毒素血症（endotoxerma,ETM）和多脏器损害。近十七年研究表明,肿瘤坏死因子α（tumornecrosisfactor－α,TNF－α）在OJ所致的ETM及多脏器损害中起着极其重要的作用。本文就其作用及作用机理作一综述。1TNF－α的概念TNF－α是由单核细胞、巨噬细胞、T细胞和肥大细胞等产生的一种细胞因子。人类TNF－α基因位于第6号染色体上,TNF－α以前体形式被合成,以跨膜型和分泌型两科形式存在。研…     

雌激素对肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞凋亡的影响

目的 观察17β-雌二醇(E2)及肿瘤坏死因子(TNFα)对培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响.方法 将HUVEC分为4组,空白对照组、TNFα(40 μg/L)组、TNFα(40 μg/L)加E2(1 μmol/L)和E2(10 μmol/L)组,各组细胞经维持液培养48 h使细胞生长同步,加入相应药物培养24 h后收获细胞.采用免疫组化方法测定bcl-2蛋白表达及流式细胞仪测定细胞凋亡发生百分率.结果 TNFα诱导的细胞凋亡发生率较正常对照组明显增多(P＜0.001),bcl-2蛋白表达少,DNA直方图上可见高大的凋亡峰,而雌激素干预后凋亡发生率明显降低(P＜0.001),bcl-2蛋白表达增加.结论 E2可增加bcl-2蛋白的表达,抑制TNFα诱导的人内皮细胞细胞凋亡的发生率,维持内皮细胞结构和功能的完整,可能为其抗动脉粥样硬化的机制之一.     

肿瘤坏死因子-α与心力衰竭

自从 1975年Ｃａｒｓｗｅｌｌ等人发现肿瘤坏死因子(ＴＮＦ)以来 ,有关ＴＮＦ的研究不断展开 ,并取得了重大进展。特别是 2 0世纪 90年代以来 ,肿瘤坏死因子 α(ＴＮＦ α)与心力衰竭发生发展的密切关系引起了医学界的广泛关注 ,目前普遍认为包括ＴＮＦ α在内的细胞因子的激活是慢性充血性心力衰竭的重要病理生理机制之一[1] 。1　ＴＮＦ α概述ＴＮＦ 浕又称恶液质素 (Ｃａｃｈｅｃｔｉｎ) ,主要由激活的单核巨噬细胞产生 ,活化的Ｔ细胞、ＮＫ细胞和肥大细胞也可产生分泌ＴＮＦ α。此外 ,包括成熟心肌细胞在内的多种非免疫细胞在某些应激…     

低氧诱导因子1α进大鼠肺泡巨噬细胞肿瘤坏死因子α的产生

低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)是介导细胞缺氧反应的关键核转录因子，在巨噬细胞等髓系细胞介导的炎症反应中发挥着重要的作用。肺部和气道的慢性非特异性炎症是慢性阻塞性肺疾病(COPD)的重要特征，活化的巨噬细胞及其释放的炎症介质如肿瘤坏死因子α(TNF-α)等与这一慢性炎症过程密切相关。     

肿瘤坏死因子—α与脑缺血再灌注损伤

脑缺血再灌注后脑内肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）的表达增加,在再增注损伤病理过程中ＴＮＦ－α具有损伤与修复双重作用。其作用机制与致炎、促凝血机制、血脑屏障破坏,诱导缺血耐受及神经生长因子生成等有关。     

肿瘤坏死因子诱导细胞凋亡的信号传导机制

1肿瘤坏死因子的分子生物学特性 TNF的研究可追溯到一百多年前.早在19世纪末,人们发现有些恶性肿瘤患者在伴细菌感染时,可导致肿瘤的自发消退,提示细菌感染和肿瘤消退之间存在一定关系.1893年美国学者Coley et al尝试在肿瘤患者体内诱发细菌感染以及注射死亡细菌的混合物来治疗肿瘤.这就是有关TNF的最早记录[1].本世纪80年代以来,随着分子生物学的飞速发展,对TNF研究不断深入,人们发现其具有多种生物学活性,除对免疫细胞有活化、促增殖和分化等作用外,对某些非肿瘤细胞和大多数肿瘤细胞具有诱导凋亡(Apoptosis)的作用[2].当机体处于炎症如病毒、细菌、寄生虫感染,或创伤等病理状态时,这些作用对清除受损细胞、维持机体内环境平衡,起着重要的作用.