大肠癌肝转移动物模型建立方法的改进及评价

目的 对鼠源大肠癌细胞肝转移动物模型的建立方法进行改良,为研究大肠癌肝转移机制及生物学行为提供稳定平台.方法 选取鼠大肠癌细胞株CT26经皮下传3代后制成细胞悬液与CT26细胞悬液分别接种于BALB/ c小鼠脾脏内,实验组为经皮下传3代后脾脏接种,对照组为CT26细胞悬液直接脾脏接种.5 min后切除脾脏.观察其成瘤情况、肝脏转移率、淋巴转移率、肺转移率及生存期,并对2种模型进行初步比较.结果 术后第12天实验组肝脏转移率(75.0%)高于对照组(28.6%)(P<0.05);术后第15天及21天后实验组肝脏转移率(93.7%、100.0%)也明显高于对照组(50.0%、66.7%)(P<0.05),但肺脏转移率及淋巴转移率(12.5%、25.0%;26.7% 、53.3%)与对照组(0、6.25%;0%、16.7%)相比无明显差异(P>0.05).实验组平均生存期为(23.56±3.17) d,对照组为(28.14±4.19) d.病理结果证实肝转移肿瘤符合典型的低分化腺癌特征.结论 CT26 细胞在免疫功能完整的BALB/c小鼠体内,仍具有良好的成瘤性和转移率,并且经传代后的悬液成瘤时间更短,转移率更高.     

原位移植体内连续筛选法建立人胃恶性淋巴瘤裸小鼠高转移模型系统

目的 建立侵袭和转移潜能不同的人胃恶性淋巴瘤裸鼠原位移植高转移模型系统.方法 将外科手术切除的人原发性胃恶性淋巴瘤原发灶和肝转移灶新鲜瘤组织块分别植入裸小鼠胃壁黏膜下层内,通过鼠间连续原位传代技术筛选高转移和特异器官转移瘤株.观察原位移植的成瘤率、移植瘤的侵袭、转移特性,并进行形态学(光镜、电镜、免疫组织化学)、染色体核型和流式细胞分析.结果 人胃恶性淋巴瘤原发灶和肝转移灶新鲜组织均移植成功,建立了两株转移生物学特性不同的人胃(肝转移灶)恶性淋巴瘤裸鼠原位移植肝转移模型(HGBL-0304)和人胃(原发灶)恶性淋巴瘤裸鼠原位移植高转移模型(HGBL-0305).移植瘤组织病理学为胃弥漫大B细胞淋巴瘤.两株模型分别传至45代,共移植裸鼠419只,其中肿瘤移植生长率和液氮冻存复苏成活率均为100%.在转移时间、器官转移率、肝转移程度和宿主生存期上两株模型差异有统计学意义.HGBL-0304和HGBL-0305模型肝转移率为100%和69.5%,脾转移率为94.3%和55.6%,淋巴结转移率为62.6%和45.7%,腹腔种植转移率为43.5%和30.5%;肝、脾、淋巴结和腹腔种植转移出现时间分别为移植后2周和5周,3周和6周,2周和3周,3周和6周.HGBL-0304和HGBL-0305模型肝转移分别以弥漫累及肝左右叶为主和肝右叶累及为主.HGBL-0304和HGBL-0305模型荷瘤鼠平均生存期分别为54.3 d和106.9 d.结论 外科原位移植体内筛选法是一种建立人恶性淋巴瘤裸鼠高转移模型和特异器官转移模型的有效方法.HGBL-0304和HGBL-0305模型是首次成功建立的来自同一瘤源的两株侵袭和转移潜能不同的人胃恶性淋巴瘤裸鼠原位移植肝转移模型和高转移模型.     

人胰腺癌裸小鼠胰腺原位移植模型的建立

目的建立人胰腺癌高转移裸小鼠胰腺原位移植模型.方法将人胰腺癌细胞株SW1990分别接种于裸鼠皮下和裸鼠胰腺,比较两组移植瘤的生长和侵袭转移情况.结果胰腺癌皮下移植模型与胰腺原位移植模型的体内成瘤率、生长率和形态学上均无显著不同,但前者呈局限性生长,后者的9周转移率为93.8%,其中淋巴结转移、腹膜播散和肝转移发生率各占93.3%、73.3%和53.3%,且肝肿瘤结节CEA阳性,AFP阴性.结论胰腺癌细胞SW1990的胰腺原位移植模型明显优于皮下移植模型,为一较理想的"拟人”胰腺癌转移模型.     

不同转移潜能的人前列腺癌细胞原位转移模型的建立与比较

目的 建立不同转移潜能的人前列腺癌细胞转移模型，并比较其结果。方法 利用人前列腺癌细胞系PC3单克隆细胞株裸鼠皮下移植瘤，通过外科原位移植技术植入BALB／c-nu／nu雄性裸小鼠，建立人前列腺癌高、低转移细胞株转移模型；并观察比较两细胞株转移模型的原位成瘤率、自发转移率、两细胞株形态学特征和转移抑制基因CD44s的表达。结果 人前列腺癌高转移细胞株裸鼠原位种植后原位成瘤率100％，主动脉旁淋巴结转移率为100％，低转移细胞株裸鼠原位种植后原位成瘤率100％，主动脉旁淋巴结转移率为40％，两者主动脉旁淋巴结转移率差异有显著性（P〈0．05）。高、低转移细胞株形态学特征亦不同。CD44s蛋白在人前列腺癌高转移性单克隆细胞株PC3-H中的表达强度低于低转移性单克隆细胞株PC3-L。结论 遗传背景相似的人前列腺癌高、低转移细胞株原位移植转移模型为研究人前列腺癌转移机制提供了有力工具。     

人胰腺癌细胞CFPAC-1裸小鼠原位移植瘤模型的建立

目的:建立人胰腺癌裸小鼠原位移植瘤模型,并对其生物学特性进行研究.方法:将人胰腺癌细胞CFPAC-1接种于裸鼠皮下,并将皮下肿瘤组织原位移植于裸鼠胰腺,比较两种移植瘤的生长及转移情况.结果:胰腺癌皮下移植瘤模型与胰腺癌原位移植瘤模型的体内成瘤率、生长情况及形态学上均无显著差异.皮下移植瘤模型呈局限性生长,无一例发生远处转移;原位移植瘤模型远处转移率高达87.5%,发生75.0%腹膜转移,37.5%肝转移,12.5%肺转移,37.5%淋巴结转移,并保持分泌CA19-9的特性.结论:人胰腺癌裸小鼠原位种植瘤模型明显优于皮下移植瘤模型,较好地模拟了人胰腺癌自然生长和局部浸润及远处转移过程,是胰腺癌体内研究理想的动物模型.     

人胰腺癌裸小鼠胰腺原位移植模型的建立

目的：建立人胰腺癌高转移裸小鼠胰腺原位移植模型。方法：将人胰腺癌细胞株SW1990分别接种于裸鼠皮下和裸鼠胰腺,比较两组移植瘤的生长和侵袭转移情况。结果：胰腺癌皮下移植模型与胰腺原位移植模型的体内成瘤率、生长率和形态学上均无显著不同,但前者呈局限性生长,后者的9周转移率为93．8％,其中淋巴结转移、腹膜播散和肝转移发生率各占93．3％、73．3％和53．3％,且肝肿瘤结节CEA阳性,AFP阴性。结论：胰腺癌细胞SW1990的胰腺原位移植模型明显优于皮下移植模型,为一较理想的“拟人”胰腺癌转移模型。     

鼻咽癌细胞株裸鼠肝异位种植瘤肺转移动物模型的建立

目的建立鼻咽癌细胞株肝异位种植瘤肺转移裸鼠的动物模型。方法24只裸鼠分别通过门静脉（门静脉组）或肝包膜下（肝包膜组）注射鼻咽癌细胞株C666-1细胞悬液，建立鼻咽癌细胞株肝异位种植瘤肺转移裸鼠动物模型，3周后每组随机处死6只裸鼠，观察裸鼠腹水、肝脏成瘤、肺转移等情况，其余裸鼠观察其生存期。结果门静脉组和肝包膜组肝脏成瘤率、腹水形成率均为100％，肺转移率分别为66．7％和58．3％，两组经卡方检验差异无显著意义（P〉O．05）。平均生存期分别为（25．17士5．15）d及（22．50士3．89）d，经log-rank时序检验差异无显著性意义（P〉O．05）。结论两种方法均能成功建立鼻咽癌细胞株肝种植瘤肺转移裸鼠的动物模型。     

HL60/VCR耐药细胞荷瘤鼠模型的建立

目的建立白血病HL60/VCR耐药细胞株移植动物模型方法。方法将生长状态良好的耐药细胞株HL60/VCR1.0×107/0.2ml接种到BALB/c-nu/nu裸小鼠皮下,定期观察裸鼠生长状况,测量移植瘤大小,留取标本检测不同脏器肿瘤负荷及多药耐药基因MDR1表达情况。结果 2.0×106HL60/VCR细胞皮下接种BALB/c-nu/nu裸小鼠,成瘤率为67.7%,免疫组化检测荷瘤裸鼠肝脏和脾脏均可见巢状分布白血病细胞,PCR检测成瘤组织表达MDR1基因。结论皮下移植可成功建立耐药细胞株荷瘤鼠模型,为研究多药耐药细胞株动物体内生物学行为及逆转多药耐药提供了动物模型。     

盲肠造疝原位接种瘤块法建立小鼠大肠癌肝转移模型

目的 通过盲肠造疝原位接种瘤块法建立小鼠大肠癌肝转移模型.方法 将CT26细胞接种到BALB/c小鼠项背部,约10 d后获得实体瘤,再对30只BALB/c小鼠实行盲肠造疝原位接种瘤块术,术后随机将小鼠分为A,B两组.A组20只,分别于术后1,2,3,4周随机抽取5只用颈椎脱臼法处死,剖腹观察原位移植瘤体积大小、肝转移癌情况、其他脏器受累情况及有无腹水等,并对肝组织进行连续病理切片,HE染色,以观察肝转移情况.B组10只,观察其自然生存期.结果 盲肠造疝原位接种瘤块术后小鼠自然生存时间为(30.4±2.7)d.术后1,2周肝组织病理检查未见转移灶,术后3周1只(1/5)出现肝转移灶,术后4周3只(3/5)出现肝转移灶.结论 通过盲肠造疝原位接种瘤块法成功建立了小鼠大肠癌肝转移模型,并且是研究大肠癌肝转移的理想模型.     

日本2005年实验动物学会第52届年会将召开

目的探讨裸小鼠和SCID小鼠两种免疫缺陷动物人胃癌原位移植后肿瘤生长和转移等生物学特性的差异。方法将MKN-45细胞株接种至裸小鼠皮下,成瘤后采用组织学完整的组织块移植于裸小鼠和SCID小鼠胃壁建立原位移植模型,观察所建模型的原位成瘤率、移植瘤生长、侵袭和转移情况。结果①两种免疫缺陷动物的原位成瘤率都为100%;②裸小鼠原位移植瘤平均体积2884±1337mm3,腹腔淋巴结、肝、肺、膈转移率分别为67%、83%、33%和8%;③SCID小鼠原位移植瘤平均体积4582±1326 mm3(P<0.05),肝转移率90%(P>0.05),与裸小鼠较为接近, 腹腔淋巴结转移率90%,肺和膈转移率分别为100%(P<0.01)和60%(P<0.05)。结论证明应用T、B细胞联合免疫缺陷的SCID小鼠较裸小鼠更适用于建立胃癌的原位移植模型。     

整体可视化结肠癌原位动物模型及转移模型的建立

目的 建立整体可视化结肠癌原位动物模型及转移模型,实时观察结肠癌发展、转移的规律.方法 将pEGFP-N1表达质粒转染入人结肠癌细胞株SW480中,建立稳定表达绿色荧光蛋白(EGFP)的结肠癌细胞株SW480/EGFP;裸鼠皮下接种SW480/EGFP细胞,利用肿瘤细胞表达EGFP的特点,借助整体荧光成像系统,并利用IPP5.0软件采集、分析结肠癌细胞发出的荧光信号,实时观察结肠癌细胞在裸鼠皮下的生长情况;利用结肠癌外科原位手术移植方法建立结肠癌原位及转移动物模型,应用病理学方法对结肠癌原位及转移动物模型进行评价和鉴定.结果 结肠癌细胞SW480/EGFP稳定、高效表达EGFP.皮下接种SW480/EGFP细胞后,可以在动物活体外实时观察肿瘤的皮下生长情况,并进行定量分析;利用外科原位移植的方法建立的结肠癌原位动物模型,成功率达到100%.手术后2周,裸鼠结肠原位成瘤未发现有转移情况,手术后6周,75%裸鼠发生了腹腔转移,50%发生了肝转移.通过病理学方法验证了可视化模型的可靠性.结论 整体可视化结肠癌动物原位及转移模型是研究结肠癌发展及转移的可靠有效的观察模型.     

人结肠癌肝转移裸鼠肝组织中端粒酶逆转录酶的表达

目的建立人结肠癌HT-29裸鼠肝转移模型,检测肝脏组织中人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达。方法Balb/c裸鼠30只,腹腔内注射戊巴比妥麻醉,经脾脏注入人结肠癌HT-29细胞悬液,并切除脾脏,建立裸鼠肝转移模型。处死动物后观察肿瘤生长情况,并作病理学检查;采用RT-PCR方法检测裸鼠肝脏组织中hTERT mRNA的表达。结果30只裸鼠均发生人结肠癌肝转移,肝转移率100%,病理学证实肝转移发生,肝脏组织中hTERTmRNA表达阳性。结论脾种植HT-29细胞建立人结肠癌裸鼠肝转移模型,肝脏组织中hTERTmRNA阳性表达,提示hTERT在结肠癌肝转移早期诊治中的意义。     

半乳糖凝素-3在结肠癌肝转移中的表达及改良柑橘果胶对其抑制作用

目的 探讨半乳糖凝素-3(galectin-3,Gal-3)在小鼠结肠癌肝转移中的表达及改良柑橘果胶(MCP)对它的抑制作用.方法 75只Balb/c小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组和低、中、高浓度MCP组.阳性对照组和各MCP治疗组小鼠经脾脏下极包膜注入CT26结肠癌细胞建立结肠癌肝转移模型.MCP加入饮用水,浓度分别为0、0、0.01、0.025、0.05mg/ml.3周后观察各组小鼠肝转移情况.采用ELISA方法检测小鼠血清Gal-3浓度;制作肝转移瘤组织芯片,用免疫组化方法检测肝转移瘤组织中Gal-3的表达.结果 (1)除阴性对照组外各组肝转移率分别为100%、80%、73.3%和60%.高浓度MCP组肝转移灶数目明显低于对照组(P＜0.05).(2)除阴性对照组外各组脾脏原发瘤体积中位数分别为1.51、0.93、0.77和0.70 cm3.高浓度MCP组肿瘤体积较对照组明显缩小(P＜0.05).(3)阳性对照组和各治疗组血荊al-3浓度均明显高于阴性对照组(P＜0.01);阳性对照组与各治疗组比较无明显差异(P＞0.05).(4)除阴性对照组外各组肝转移瘤组织中Gal-3表达相互间比较无明显差异(P＞0.05).结论 Gal-3在结肠癌肝转移中呈高水平表达,MCP能明显抑制结肠癌肝转移.     

Correlation between calcified liver metastases and histopathology of primary colorectal carcinoma in Chinese

The study examined the association between calcified liver metastases and the histopathology of the primary colorectal carcinoma in Chinese.The clinical,pathological and CT data were retrospectively analyzed in 210 patients (mean age:54.2 years) with liver metastases from colorectal carcinoma.Plain CT scanning and contrast-enhanced scanning were performed in all the patients.For the contrast-enhanced examination,iohexol was injected by using a high pressure syringe at a flow rate of 2.5-3.0 mL/s.The arterial phase lasted approximately 25 s and the portal venous phase about 60 s.All patients had no history of chronic liver diseases and had never received interventional treatments.χ 2-test was used to analyze the rate of calcification in the liver metastasis from colorectal cancer of different differentiation degrees.Among the 210 cases of liver metastases,22 patients (10.5%) were found to have calcified liver metastases on CT scan.Two patients with calcified liver metastasis received lumpectomy and developed calcification in recurrent tumors.Another two patients had calcification in newly developed tumor masses.And the calcification in the newly developed masses was similar to that of their primary counterparts in terms of morphology and distribution.On the enhanced CT scan,the tumors exhibited no enhancement during hepatic arterial phase and showed slight rim enhancement during portal venous scan in the 22 cases.The calcification became obscure on contrast-enhanced scans.Histopathologically,the primary tumors were well-differentiated adenocarcinoma in 6 cases,moderately-differentiated adenocarcinoma in 10,poorly-differentiated adenocarcinoma in 4 and mucinous adenocarcinoma in 2 among the 22 cases.No statistical correlation was noted between the incidence of calcified liver metastasis and the pathological subtypes and differentiation degrees of the primary colorectal carcinoma.It was concluded that calcified liver metastases may result from colorectal adenocarcinomata of different differentiation degrees or muc     

BALB/c小鼠结肠癌肝转移模型建立

目的建立BALB/c小鼠结肠癌肝转移模型。方法以BALB/c小鼠为对象,随机分为3组,分别经腹腔脾脏内（分为保脾组和切脾组）、直肠粘膜内注射小鼠结肠癌CT-26细胞0.2ml（浓度为1×107 ml）,观察小鼠平均生存期、成瘤情况、肝转移率、肝脏转移肿瘤大小和其他脏器的转移情况。结果这3种方法均能建立大肠癌肝转移模型,切脾组小鼠平均生存期为（28±5）d,肝转移率为100%,均有肺、胃、膈肌转移及腹水形成,保脾组小鼠平均生存期为（30±5）d,肝转移率为95%,均有肺、胃、膈肌转移及腹水形成;直肠黏膜内注射组小鼠平均生存期为（20±5）d,肝转移率为30%,无肺、胃、膈肌转移及腹水形成。结论保脾组和切脾组比直肠黏膜注射组的成瘤率、转移率更高,小鼠平均生存期较长,同时也增加了其他脏器的肿瘤转移率,建模更稳定,观察期能更好地完成各项指标的评价。     

具有肝转移倾向的结肠癌细胞亚系的筛选与鉴定

目的 筛选人结肠癌SW480细胞中具有特定肝脏转移倾向的亚克隆,比较它与母系生物学特性的差异,为结肠癌肝转移机制的研究提供基本的实验材料.方法 采用外科原位接种、组织块细胞培养法从裸鼠体内获得SW480细胞系中具有肝脏转移倾向的亚克隆SW480/M5;体内体外实验验证它与母系细胞在生物学特性上的差异.结果 体内实验证明SW480具有广泛转移的潜能,而SW480/M5细胞只具有向肝脏转移的潜能;SW480/M5细胞原位瘤的质量较SW480细胞大且皮下瘤生长速度较快:体外实验证明SW480/M5细胞的克隆形成能力,体外增殖能力、体外运动及侵袭能力较SW480细胞强,而对FN的粘附能力较SW480细胞弱.结论 从结肠癌细胞系SW480中筛选出的细胞亚系SW480/M5转移方向明确,是结肠癌肝转移机制研究的理想细胞模型.     

结直肠癌肝转移个体化综合性治疗的研究进展

结直肠癌是临床上常见的消化道恶性肿瘤,近年来其发病率逐渐上升.肝脏是结直肠癌最常见的转移部位,并且肝转移是结直肠癌患者死亡的主要原因.结直肠癌肝转移患者通过手术治疗、新辅助治疗、分子靶向治疗、肝动脉导管化疗栓塞治疗、射频消融治疗等个体化综合治疗后,疾病进展可得到控制,并可改善生活质量,延长生存时间.本文就结直肠癌伴肝转移的个体化综合性治疗最新进展进行综述.     

结直肠癌肝转移γ-神经突触核蛋白高表达的临床意义

目的:探讨结直肠癌(CRC)肝转移患者γ-神经突触核蛋白(SNCG)高表达的临床意义。方法:根据术后癌细胞转移情况将219例患者分为肝转移组114例和无肝转移组105例。采用免疫组织化学法,分析SNCG表达水平与CRC患者术后肝转移的关系及其与术后无病生存时间和总生存时间的关系。结果:SNCG阳性率在肝转移组为71.96%,无肝转移组为28.04%。Logistic多因素分析显示,SNCG表达是判断CRC术后是否有肝转移的独立因素(P<0.01)。SNCG阳性表达与阴性表达的肝转移患者术后无病生存时间分别为(48.70±5.40)个月和(78.75±4.23)个月,总生存时间分别为(51.10±5.20)个月和(80.29±4.12)个月,SNCG阴性患者的生存时间均明显长于SNCG阳性患者(P<0.01)。结论:SNCG表达水平越高,CRC患者术后肝转移的风险越高,无病生存期越短。CRC组织中SNCG高表达可以作为预测肝转移的指标,值得临床推广。     

Early PET/CT after radiofrequency ablation in colorectal cancer liver metastases: is it useful?

Background Morphologic imaging after radiofrequency ablation （RFA） of liver metastases is hampered by an inflammatory response in the ablation margin, making the identification of local tumor progression （LTP） difficult. The aim of this study was to evaluate the efficacy of early ^18F-FDG PET/CT scanning to monitor the effectiveness of RFA in colorectal liver metastases. Methods Twelve patients with 20 metastases were treated with RFA for colorectal liver metastases. They underwent PET/CT within 2 weeks before RFA and within 24 hours after RFA （so termed ＂early PET/CT＂）. PET/CT was repeated at 1, 3, and 6 months, and then every 6 months after ablation. The standard of reference was based on available clinical and radiological follow-up data. Results Early PET/CT revealed total photopenia in 16 RFA-treated metastases, which were found to be without residual tumor on the final PET/CT scan. Three RFA-treated metastases with focal uptake were identified as local tumor progression, which necessitated further treatment. One RFA-treated metastasis with rim-shaped uptake was regarded as inflammation. The results of the early PET/CT scanning were consistent with the findings of the final follow-up. Conclusions PET/CT performed within 24 hours after RFA can effectively detect whether residual tumor exists for colorectal cancer liver metastases. The results can guide further treatment, and may improve the efficacy of RFA.     

融合基因GM-CSF/IL-2转基因瘤苗在肝癌特异性免疫治疗中的应用

目的 制备人白细胞介素2(hIL-2)与鼠粒-单核细胞集落刺激因子(mGM-CSF)融合基因修饰的H22肝癌全细胞瘤苗,探索融合基因GM.CSF/IL-2转基因瘤苗,在肝癌主动免疫治疗中特异性抗肿瘤作用.方法 用含hlL-2与mGM-CSF融合基因的真核表达载体在体外转染H22肝癌细胞,制成疫苗,皮下接种Balb/c小鼠,同时建立Balb/c小鼠荷瘤模型,ELISA法检测H22/pcDNA3.1( ).GM-CSF/IL-2瘤苗免疫组小鼠与各对照组小鼠(分别接种H22/pcDNA3.1( )瘤苗、H22瘤苗、PBS)血清中IL-10、IFN- γ水平,观察小鼠存活期;同时用51Cγ释放法测定H22/pcDNA3.1( )-GM-CSF/IL-2瘤苗免疫组小鼠与各对照组小鼠(单纯荷瘤组、正常组)脾细胞对亲本H22肝癌细胞的杀伤活性.结果 成功制备了含有hIL2与mGM-CSF融合基因的H22肝癌瘤苗,转基因瘤苗免疫组小鼠的脾细胞在体外对亲本H22肝癌细胞的杀伤率为38.3%,显著高于对照组小鼠的脾细胞对亲本H22肝癌细胞的杀伤率(分别为13.6%和7.5%),也高于其对S180细胞的杀伤率(9.1%)(P＜0.05).转基因瘤苗免疫组小鼠血清IFN-γ较对照组明显升高(P＜0.01),血清IL-10较对照组明显降低(P＜0.01).同时,转基因瘤苗免疫组小鼠生存期亦有明显延长.结论 转染hIL-2与mGM-CSF融合基因的同系肿瘤细胞瘤苗可激发特异性细胞介导的免疫反应,改善抗肿瘤免疫反应,延长荷瘤小鼠生存期.