膀胱肿瘤多药耐药机制的研究

肿瘤细胞对化疗药物产生耐药是肿瘤难以治愈的主要原因。本文概述了膀胱肿瘤多药耐药的几种可能机制,包括P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)、谷胱甘肽(GSH)、拓扑异构酶Ⅱ(Topo-Ⅱ)等,同时对近年来多药耐药的逆转机制作了简要的介绍。     

缺氧诱导因子1a依赖性缺氧诱导人肝癌细胞多药耐药相关基因的表达及意义

目的探讨缺氧环境下人肝癌细胞中多药耐药相关基因和缺氧诱导因子1a(HIF-1a)的表达和意义，从而部分阐明肝细胞癌发生多药耐药的机制，为逆转肝癌耐药提供新的分子靶点。方法将人肝癌细胞系HepG2细胞分别行不同时间低氧培养和转染HIF-1a/PCDNA3质粒；应用荧光定量聚合酶链反应技术和蛋白免疫印迹技术分别检测每组HepG2细胞中多药耐药相关基因(mdr1)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和肺耐药相关蛋白(LRP)在mRNA和蛋白水平的表达。结果在缺氧组，随着缺氧时间的延长HepG2细胞中多药耐药相关基因mdr1、MRP1和LRP的表达均逐渐增高，且以MRP1变化更为显著；而且这些多药耐药相关基因的表达升高与缺氧诱导因子-1a的表达呈同步化改变。在HIF-1a/PCDNA3质粒转染细胞中这些多药耐药相关基因的表达亦明显升高。结论缺氧可通过核转录因子HIF-1a上调肝癌细胞内mdr1，LRP、MRP1等多药耐药相关基因的表达，从而使肝细胞癌获得多药耐药性。生长局部微环境的缺氧是诱导肝癌产生多药耐药性的重要原因之一。核转录因子HIF-1a和这些多药耐药相关基因将可能成为逆转肝癌耐药的新的分子靶点。     

缺氧诱导因子1α依赖性缺氧诱导人肝癌细胞多药耐药相关基因的表达及意义

目的探讨缺氧环境下人肝癌细胞中多药耐药相关基因和缺氧诱导因子1α(HIF1α)的表达和意义,从而部分阐明肝细胞癌发生多药耐药的机制,为逆转肝癌耐药提供新的分子靶点。方法将人肝癌细胞系HepG2细胞分别行不同时间低氧培养和转染HIF1α/PCDNA3质粒;应用荧光定量聚合酶链反应技术和蛋白免疫印迹技术分别检测每组HepG2细胞中多药耐药相关基因(mdr1)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和肺耐药相关蛋白(LRP)在mRNA和蛋白水平的表达。结果在缺氧组,随着缺氧时间的延长HepG2细胞中多药耐药相关基因mdr1、MRP1和LRP的表达均逐渐增高,且以MRP1变化更为显著;而且这些多药耐药相关基因的表达升高与缺氧诱导因子1α的表达呈同步化改变。在HIF1α/PCDNA3质粒转染细胞中这些多药耐药相关基因的表达亦明显升高。结论缺氧可通过核转录因子HIF1α上调肝癌细胞内mdr1,LRP、MRP1等多药耐药相关基因的表达,从而使肝细胞癌获得多药耐药性。生长局部微环境的缺氧是诱导肝癌产生多药耐药性的重要原因之一。核转录因子HIF1α和这些多药耐药相关基因将可能成为逆转肝癌耐药的新的分子靶点。     

人肝癌HepG2多药耐药细胞系的部分生物学性状研究

目的　研究人肝癌多药耐药 (MDR)的机制 ,建立HepG2多药耐药细胞系并研究其部分生物学性状。方法　应用HepG2细胞系 ,通过培养液中阿霉素 (ADM )的浓度梯度增加法 ,得到肝癌多药耐药株HepG2 /ADM。Westernblot增强化学发光法 (ECL)检测细胞株表面多药耐药基因(MDR1)的表达产物P 糖蛋白 (P 170 )、多药耐药相关蛋白 (MRP)及肺耐药蛋白 (LRP)的表达水平。结果　耐药细胞的倍增时间延长 2 .0 5倍。该耐药模型的P 170表达水平较亲本细胞升高3 .90倍 (P <0 .0 1) ,但MRP及LRP无明显变化。结论　HepG2 /ADM同其亲本细胞相比 ,其耐药性、倍增时间有明显改变 ;多药耐药性主要与MDR1的高表达有关。     

应用蛋白质组学方法筛选人骨肉瘤多药耐药蛋白

多药耐药(MDR)是导致肿瘤化疗失败的一个重要原因[1].大量研究表明[2,3],骨肉瘤多药耐药与P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)、谷胱甘肽转移酶(GST)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(Topo Ⅱ)等异常表达有关,我们应用蛋白质组学方法筛选耐药细胞与亲本细胞中差异表达的蛋白.     

糖基化神经酰胺合成酶及相关基因的表达与人胆囊癌多药耐药

糖基化神经酰胺合成酶(glucoceramidesynthase,GCS)是调控神经酰胺代谢的关键酶之一,其活性增高可能是引起肿瘤获得性多药耐药产生的原因之一。为明确该靶点在人胆囊癌先天性多药耐药产生机制中的作用,我们采用免疫组化方法检测了35例胆囊癌手术切除标本中GCS的表达情况,同时检     

多种耐药蛋白在肝外胆管癌组织中的表达及其意义

我们以IHC方法检测肝外胆管癌(ECC)中多药耐药基因(MDR1)、多药耐药相关蛋白(MRP)、谷胱甘肽转移酶π(GST-π)、拓扑异构酶，IIa(Top-IIa)和肺癌耐药蛋白(LRP)表达情况。初步说明ECC的可能耐药机制及特点。     

裸鼠人肝癌原位移植多药耐药模型的建立及其耐药机制的探讨

目的　在体内建立人肝癌裸小鼠原位移植多药耐药模型,并研究其耐药机理。方法采用人肝癌（BEL-7402）裸小鼠（4～6周龄）原位移植,给予阿霉素(1.5mg/kg体重,每周1次)腹腔注射诱导耐药（共8周）,经四唑蓝(MTT)快速比色法检测原代培养的耐药细胞对抗癌药的敏感性,以流式细胞仪检测癌细胞表面mdr1基因产物P-糖蛋白（P-gp）的表达,并用罗丹明试验观察该蛋白功能。结果　移植瘤组织形态及生物学方面符合人肝癌特征,实验组肝癌细胞表面P-gp表达为(75.45±5.67)%,而对照组表达仅(4.25±1.28)%,差异有非常显著性（P＜0.01）,对阿霉素的耐药倍数提高了16.67倍,对羟基喜树碱具有交叉耐受性（13.67倍）。耐药细胞表面P-gp有较强的药物外排功能。结论　阿霉素较易诱导原位移植于裸小鼠的人肝癌多药耐药性的产生,其耐药倍数与临床肝细胞癌相似。该模型的建立对研究肝癌多药耐药的产生机制以及逆转其多药耐药性具有重要价值。     

单基因人肝癌耐药细胞株(HepG2/MRP1)的构建及其生物学意义

目的 对抗肿瘤药的天然耐药和化疗过程中产生的继发性耐药是肝癌化疗敏感性差的重要原因之一,为探讨体外逆转肝癌多药耐药(muhidrug resistance,MDR)的新方法,笔者建立了单因素人肝癌细胞多药耐药模型HepG2/mrp1,并研究其牛物学特性.方法 双酶切克隆质粒pGEMmrp1获得人全长多药耐药相关蛋白基因(mrp1),并将其插入哺乳动物表达载体pCI-neo的多克隆位点,构建重组载体,利用质脂体法将重组载体转入人肝癌细胞HepG2,建立单基因耐药细胞株HepG2/mrp1.观察细胞的生长规律;MTT法检测其多药耐药性;流式细胞仪检测细胞表面多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein,MRP)的表达;RT-PCR检测MRP1 mRNA表达量.结果 与HepG2细胞相比较,HepG2/mrp1细胞的倍增时间延长30.86 h.该细胞对多种抗肿瘤药耐药,HepG2/mrp1对阿霉素和柔红霉素的耐药指数比亲本细胞增加了11.4倍和8倍,细胞表面MRPl的表达明显增加,mrp1 mRNA明显增加.结论 HepG2/mrp1细胞稳定高表达MRP1,具有多药耐药性,为进一步研究肝癌的多药耐药构建了一个技术平台.     

胃癌及食管癌中肿瘤耐药标志物P-糖蛋白和谷胱甘肽转移酶表达的研究

肿瘤细胞的多药耐药性的产生与P-糖蛋白(P-gP)及谷胱甘肽转移酶(GST)等的过度表达有密切关系.为进一步了解胃和食管恶性肿瘤细胞的耐药机理,为化疗中克服耐药,制定合理、高效的化疗方案提供依据.     

原发性肝癌MDR耐药性逆转的研究进展

在肝癌的综合治疗中化学药物治疗是其重要方法,但多药耐药(multidrug resistance,MDR)的存在一直是影响其疗效的主要因素.多药耐药是指肿瘤细胞对某一化疗药物产生耐药性后对其他化学结构及机理不同的化疗药物也产生交叉耐药,分为原发性MDR和获得性MDR.研究MDR的作用机制及逆转MDR从而提高肝癌化疗效果成为目前肝癌研究的热点.本文简要介绍MDR产生的机制,主要对其逆转策略方面的进展作一综述.     

多药耐药膀胱癌细胞株构建的研究现状及展望

多药耐药(multidrug resiatance,MDR)是最重要、最常见的肿瘤耐药现象,是近年来肿瘤临床和基础研究中的热点,多药耐药细胞株是研究MDR现象的主要工具之一,但建立合适的耐药细胞模型却很困难.目前主要采用两类方法来构建多药耐药细胞株:即药物诱导法及转基因法.本文就目前多药耐药膀胱癌细胞株如何构建的研究现状作一综述,并讨论目前多药耐药膀胱癌细胞株构建的利弊、展望未来将如何以更优越的方法构建一高效、稳定的膀胱癌多药耐药模型.     

多药耐药相关蛋白与骨肉瘤化疗耐药相关性

多药耐药是导致骨肉瘤患者化疗失败的重要原因之一,而多药耐药相关蛋白(MRP)表达增加是介导多药耐药重要机制之一。MRP是一类三磷酸腺苷能量依赖型跨膜转运蛋白,可有选择性和特异性地将细胞内药物外排至细胞外。作为药物排出泵,MRP导致细胞内化疗药物浓度降低,使肿瘤细胞对多种抗肿瘤药物产生耐药。研究发现骨肉瘤一线化疗药物阿霉素、顺铂、甲氨蝶呤、异环磷酰胺及部分二线化疗药物均为MRP的药物底物。深入研究MRP与肿瘤化疗耐药的关系,可为防止骨肉瘤及其他肿瘤化疗耐药开辟新途径。该文就MRP与骨肉瘤化疗耐药相关性研究进展作一综述。     

胃癌组织中多药耐药和多药耐药相关蛋白基因的表达及其意义

我们通过检测胃癌组织中多药耐药(multidrug resistance，MDR1)和多药耐药相关蛋白(multidrug resistanceassociated protein，MRP)基因表达，探讨其与肿瘤临床病理特征及其预后的关系。     

黄芪甲苷对耐药肝癌细胞株HepG2/GCS逆转作用的研究

近年来,葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosylceramide synthase,GCS)在肿瘤多药耐药中的作用逐渐受到重视.我们前期实验已证实GCS基因参与了肝癌细胞HepG2多药耐药的发生,通过基因转染使细胞内GCS基因高表达的肝癌细胞株HepG2/GCS具有多药耐药性[1].本实验观察黄芪甲苷(astragalosideⅣ)对肝癌耐药细胞株HepG2/GCS耐药性的影响,进一步探讨其逆转肿瘤多药耐药的作用机制.     

高表达GCS基因对肝癌细胞株HepG2耐药性的影响

多药耐药(multidrug resistance,MDR)是导致肝癌化疗失败的主要原因.近年来,葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosylceramide synthase,GCS)在肿瘤多药耐药中的作用逐渐受到重视.我们通过基因转染使肝癌细胞HepG2内GCS高表达,观察肝癌细胞对5-Fu敏感性的变化,进一步探讨肝癌细胞多药耐药的发生机制.     

葡萄糖神经酰胺合成酶在肝癌细胞多药耐药中的作用机制

近年来葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)在肿瘤多药耐药(MDR)中的作用逐渐受到重视.我们在构建GCS基因真核表达质粒pEGFP-GCS的基础上,应用基因转染技术使GCS基因在肝癌细胞HepG2内高表达,观察HepG2细胞内多药耐药基因MDR1的表达,以及细胞耐药性的变化,探讨GCS基因参与肝癌细胞HepG2多药耐药的机制.     

人结肠癌耐药细胞系SW480/ADM的建立及其生物学特性

目的　建立人结肠癌SW4 8 0耐阿霉素细胞系 (SW4 8 0 /ADM) ,研究其耐药机制及逆转。方法　应用人结肠癌细胞系SW4 8 0,以递增阿霉素 (ADM)浓度的方法,体外连续培养建成一株SW4 8 0 /ADM。观察该细胞生长规律。用MTT比色法检测该耐药细胞系的多药耐药性;以流式细胞术检测该耐药细胞的细胞周期分布、细胞表面多药耐药基因 (MDR)的表达产物P-糖蛋白 (P gp) 、多药耐药相关蛋白 (MRP)及谷胱甘肽硫转移系统 (GSH/GST)的表达;用高效液相色谱仪检测耐药细胞内阿霉素含量。结果　SW4 8 0 /ADM细胞与SW4 8 0细胞相比,生长缓慢,倍增时间延长,细胞周期分布发生改变;SW4 8 0 /ADM细胞较SW4 8 0的阿霉素半数抑制浓度 (IC50 )增大 1 3. 2 2倍,并对多种抗癌药物产生耐药性。SW4 8 0 /ADM细胞表面MDR的表达产物P gp,MRP和GSH/GST的表达均较SW4 8 0细胞显著升高 (P< 0. 0 1 )。SW4 8 0 /ADM细胞内阿霉素含量明显低于SW4 8 0细胞。结论　SW4 8 0 /ADM细胞对阿霉素的耐药是获得性的,并呈多药耐药性特征,可用于对人结肠癌耐药、逆转和MDR机制等方面的研究。     

胰腺癌耐药细胞株SW1990/Fu产生获得性耐药机制的研究

目的探讨胰腺癌耐药细胞株SW1990/Fu产生获得性耐药的可能机制。方法以体外诱导建立的人胰腺癌耐药株SW1990/Fu为模型,通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学(ICC)方法测定耐药相关基因在SW1990/Fu产生获得性耐药前后的变化;罗丹明外排实验检测SW1990/Fu细胞膜上的P-gp泵功能。结果RT-PCR结果显示多药耐药基因1(MDR)和肺耐药相关蛋白基因(LRP)在SW1990/Fu中的表达率分别为0.97±0.23和0.95±0.34,而在SW1990中的表达率仅分别为0.67±0.19和0.53±0.16,两者差异有统计学意义(P<0.05);多药耐药相关基因(MRP)和谷胱甘肽-S-转移酶(GST-π)在2株细胞中的表达水平无明显变化。ICC与RT-PCR的结果一致。在罗丹明浓度为0.5mg/L时,只检测到(11.4±2.5)%的SW1990/Fu细胞内有荧光染科积蓄,在亲本细胞中罗丹明阳性细胞为(57.9±5.4)%,而在P-gp阴性的HL60细胞中,(99.5±3.3)%的细胞内存在罗丹明的积聚。当罗丹明浓度增加时,其在SW1990/Fu细胞内的积聚也明显增加。结论耐药基因MDR1和LRP表达增强可能是胰腺癌耐药细胞株SW1990/Fu产生获得性耐药的主要机制。     

人类免疫缺陷病毒/结核分枝杆菌双重感染者结核分枝杆菌分离株一线药物耐药特征

目的分析人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者的结核分枝杆菌(MTB)分离株对一线抗结核分枝杆菌药物的耐药特征,为临床治疗HIV/MTB双重感染提供参考依据。 方法选取上海市公共卫生临床中心2012年1月至2016年12月收治的HIV合并MTB感染者154例(实验组)和单纯结核分枝杆菌感染者357例(对照组),进行异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(STR)4种一线药物耐药性检测,比较两组患者MTB的总耐药率和总耐多药率,初始及获得性耐药、耐多药率。 结果HIV/MTB双重感染组患者总耐药率(44.2%,68/154)、初始耐药率(42.2%,19/45)、初始耐多药率(13.3%,6/45)、STR总耐药率(31.8%,49/154)和初始耐药率(28.9%,13/45)显著高于单纯结核分枝杆菌感染组(33.9%、25.0%、3.8%、22.7%、11.4%)(P均<0.05)。INH、RFP、EMB耐药率与单纯结核分枝杆菌感染组差异无统计学意义(P均> 0.05)。单纯结核分枝杆菌感染组患者获得性耐药率(39.1%,88/225)和获得性耐多药率(19.1%,43/225)分别高于初始耐药率(25.0%,33/132)和初始耐多药率(3.8%,5/132)(χ²= 16.785、P < 0.001;χ²= 7.393、P = 0.004)。 结论HIV/MTB感染者分离的MTB对一线抗结核分枝杆菌药物耐药率和耐多药率高,其中STR耐药最为严重,提示临床治疗应重视HIV/MTB双重感染者的结核耐药问题,及时采取预防措施和制定个体化治疗方案。