T细胞因子4基因表达与肝癌侵袭转移的关系

目的　研究人T细胞因子 4基因 (hTcf- 4)在原发性肝癌及肝癌细胞株中表达情况 ,以探讨hTcf- 4基因与肝癌发生发展的关系。方法　用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR) ,检测了 32例原发性肝癌组织、癌旁组织及 5株肝癌细胞株中hTcf- 4基因表达。结果　hTcf- 4mRNA在癌旁组织中的表达率为 71 9% ,而在癌组织中的表达率达 90 6 %。且癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织 (P <0 0 0 1)。同时在肿瘤包膜不完整及有转移的癌组织中该基因表达明显增高。不同细胞株中均有hTcf- 4基因表达。肝癌细胞株中表达水平高于正常肝细胞株 (P <0 0 0 1) ,而高转移肝癌细胞株MHCC97中表达水平又高于低转移肝癌细胞株 (P <0 0 5 )。结论　hTcf- 4基因表达增高与肝癌发生发展及侵袭转移有关 ,提示hTcf- 4可能成为协助肝癌诊断、判断预后及疗效评价的指标。     

T细胞因子4基因表达与肝癌侵袭转移的关系

目的 研究人T细胞因子4基因（hTcf-4)在原发性肝癌及肝癌细胞株中表达情况，以探讨hTcf-4基因与肝癌发生发展的关系。方法 用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR），检测了32例原发性肝癌组织、癌旁组织及5株肝癌细胞株中hTcf-4基因表达。结果 hTcf-4 mRNA在癌旁组织中的表达率为71．9％，而在癌组织中的表达率达90．6％。且癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织（P＜0．001）。同时在肿瘤包膜不完整及有转移的癌组织中该基因表达明显增高。不同细胞株中均有hTcf-4基因表达。肝癌细胞株中表达水平高于正常肝细胞株（P＜0．001），而高转移肝癌细胞株MHCC97中表达水平又高于低转移肝癌细胞株（P＜0．05）。结论 hTcf-4基因表达增高与肝癌发生发展及侵袭转移有关，提示hTcf-4可能成为协助肝癌诊断、判断预后及疗效评价的指标。     

一个肝癌相关基因的生物信息学及其基因表达分析

筛选并克隆肝癌相关基因，探讨肝癌发病机制。方法：在国家人类基因组南方研究中心肝癌基因表达谱及其功能研究的工作基础上，发现1个未知功能基因（暂命名LLC基因），其DNA拷贝数在肝癌基因组中呈降低的趋势。本研究利用生物信息学和RT-PCR的方法，对其进行功能预测并在转录组水平检测该基因的表达。结果：LLC基因定位于染色体8p23.3区段，全长为6706bp，含有2个外显子，1个内含子，其开放阅读框长为1871bp，编码1个含有623个氨基酸的蛋白。该基因在67%（16/24）肝癌组织中呈现下调趋势。同时其在人体内多种组织均有表达。结论：LLC基因有可能是一个新的肝癌相关抑癌基因。     

肝细胞癌患者外周血甲胎蛋白mRNA的检测及意义

目的：探讨肝细胞癌患者外周血中微小转移及其临床意义。方法：用巢式逆转录聚合酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测６５例肝细胞癌、２１例非肝癌的恶性肿瘤、２２例慢性乙型肝炎或肝硬化患者及２１例健康志愿者外周静脉血中的甲胎蛋白（ＡＦＰ）ｍＲＮＡ。结果： ＡＦＰ－ｍＲＮＡ在健康志愿者、非肝癌恶性肿瘤患者外周血中均为阴性;在肝细胞癌组外周血中ＡＦＰ－ｍＲＮＡ的检出率（６７．７％,４４／６５）明显高于慢性乙型肝炎或肝硬化组（９．１％,２／２２,Ｐ＜０．０１）。ＡＦＰ－ｍＲＮＡ检出率与临床分期、门静脉癌栓、肝外转移显著相关。经１年的随访发现治疗后外周血ＡＦＰ－ｍＲＮＡ阳性与肝癌患者预后有显著相关。在１２例血清ＡＦＰ＜２５μｇ／Ｌ的肝癌病人血中,７例（５８． ３％）可检出ＡＦＰ－ｍＲＮＡ。结论： ＡＦＰ－ｍＲＮＡ可作为血循环中有肝癌细胞或肝细胞的标志物,在肝癌患者,阳性预示有血源性转移的可能,可作为预测肝癌复发、转移的参考指标;并且ＡＦＰ－ｍＲＮＡ对血清ＡＦＰ阴性或低值的肝癌患者能起到补充诊断作用。     

肝癌微环境与调节性T细胞

调节性T细胞(Treg)的浸润是肿瘤免疫微环境抑制的重要机制之一.Treg在多种肿瘤患者的外周血和肿瘤组织呈现高表达,其高表达很可能通过抑制CD4+、CD8+T淋巴细胞的肿瘤杀伤效应或引起效应性T淋巴细胞对肿瘤抗原的耐受,而不产生急性或记忆性效应性T淋巴细胞反应,最终逃避免疫攻击,营造了机体免疫抑制微环境,介导肿瘤的免疫逃逸.

Abstract：

Regulatory T cell (Treg) infiltration is an important mechanism for inhibition of tumor immune microenvironment. Treg is highly expressed in peripheral blood and tumor tissue of various cancer patients. A high expression of Treg may inhibit the antitumor effect of CD4 + CD8 + T lymphocytes or induce immunological resistance to tumor antigens among cytotoxic T lymphocytes(CTL) without producing acute or memory CTL responses, resulting in tumor escape from immuneattack and immune suppressionin in the tumor microenvironment.     

肝癌微环境与调节性T细胞

调节性T细胞(Treg)的浸润是肿瘤免疫微环境抑制的重要机制之一.Treg在多种肿瘤患者的外周血和肿瘤组织呈现高表达,其高表达很可能通过抑制CD4+、CD8+T淋巴细胞的肿瘤杀伤效应或引起效应性T淋巴细胞对肿瘤抗原的耐受,而不产生急性或记忆性效应性T淋巴细胞反应,最终逃避免疫攻击,营造了机体免疫抑制微环境,介导肿瘤的免...     

卵巢癌肿瘤浸润淋巴细胞某些细胞因子基因表达的研究

目的:研究卵巢癌肿瘤浸润淋巴细胞在体外扩增后某些细胞因子的表达.方法:利用RT-PCR和免疫学方法,分离5例刚分离的上皮性卵巢癌肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)和其中3例腹水标本中肿瘤相关淋巴细胞(TAL),检测其在体外扩增后,IL-2,IL-2R,TNF-α,IFN-γ,IL-6等细胞因子基因的表达的水平与变化;测定细胞培养上清液中细胞因子的活性,分析TIL或TAL扩增前后杀伤肿瘤细胞的能力和免疫学特性的变化.结果:TIL在扩增前后的4周时间内,仅TNF-α mRNA基因表达是持续的,并可维持相当长一段时间;IFN-γmRNA基因的表达缺乏;IL-2mRNA基因表达只是一过性.体外加入抗CD3单抗或PHA(合适浓度)刺激TIL或TAL,IL-2,TNF-α,IhN-γmRNA表达明显增强.和TIL细胞因子基因表达不尽相同的是,TAL表达IL-6 mR-NA.结果还发现,体外IL-2的浓度对TIL的免疫学特性有很大的影响.结论:TIL在体外经rIL-2扩增后,免疫活性有明显提高.TIL的抗肿瘤活性在很大程度上依靠其分泌的多种细胞因子.     

应用p53基因型探索肝细胞肝癌起源的研究

应用多聚酶链反应扩增肝癌组织中ｐ５３基因第７外显子，结合ＨａｅⅢ酶切研究１１例肝癌病人２９个初发灶和再发灶石蜡标本中ｐ５３基因２４９编码子点突变初发灶和再发灶的基因型，以及ｐ５３基因点突变和肝癌再发之间的关系。我们以基因型分析为基础，结合二次手术前血清甲胎蛋白水平以及再发时间对１１例病人的２９个初发灶及再发灶肝癌的起源进行了分析。１４个初发灶中，有１０个ｐ５３基因点突变（７１．４％）。１５个再发灶中，有１０个ｐ５３基因点突变（６６．７％）。１２个多结节肝癌标本中，有１０个ｐ５３基因点突变（８３．３％）。６对标本具有不同的基因型，５对标本具有相同的基因型，５个多结节标本均为相同的基因型。７个再发灶肝癌为多中心起源，４个再发灶肝癌为单中心起源。研究结果表明，肝癌具有两种起源，ｐ５３基因２４９编码子点突变易导致肝癌的转移性复发     

食管癌细胞和癌旁组织中核转录因子NF-κB mRNA的表达

目的:探讨核转录因子(nuclearfac-torkappaB,NF-κB)基因在食管癌组织和细胞系中的表达状况。方法:采用RT-PCR方法检测食管癌组织、食管癌细胞系和食管上皮永生化细胞系中NF-κBmRNA基因的表达状况。结果:NF-κBp65、NF-κBp50mRNA在正常组织中未见表达,食管癌细胞系EC109、EC1、EC18和食管上皮永生化细胞系NECA6-E6E7和NECA6-E6E7-hTERT均出现NF-κBp65、NF-κBp50mRNA的表达。在癌旁组织中,NF-κBp65和NF-κBp50mRNA的表达率分别为30%(6/20)和25%(5/20),在食管癌组织中分别为65%(13/20)和55%(11/20),在食管癌变过程中表达率呈上升趋势。结论:NF-κB基因可能参与了食管癌的癌变过程。     

抑癌基因FHIT第8和第5外显子在原发性肝癌中纯合性缺失与点突变的研究

目的　对 2 0例原发性肝细胞肝癌 (HCC)的抑癌基因 FHIT外显子 5、外显子 8的纯合性缺失和点突变进行检测。方法　收集 HCC手术标本 ,提取癌细胞 DNA,采用 PCR方法研究 FHIT外显子 5、外显子 8的纯合性缺失 ;使用 PCR- SSCP方法研究 FHIT外显子 5和外显子 8的点突变。结果　发现在 2 0例 HCC中外显子 5的纯合性缺失率为 10 .0 (2 / 2 0 ) ,外显子 8的纯合性缺失率为 30 .0 % (6 / 2 0 ) ;有 1例外显子 5和外显子 8均缺失 ;FHIT的异常率为 35 .0 % (7/ 2 0 )。在被检的肿瘤组织细胞中 ,未发现 FHIT外显子 5和外显子 8存在点突变。在被检的正常细胞中未发现 FHIT缺失和点突变的情况。结论　 FHIT的缺失只发生在 HCC的肿瘤细胞中。在 HCC中 ,外显子 (尤其是外显子 8)的纯合性缺失是 FHIT基因失活的重要方式之一。点突变可能不是 HCC中 FHIT失活的主要方式     

食管鳞状细胞癌p16基因突变及表达分析

目的探讨食管鳞状细胞癌p16基因突变及mRNA表达情况与临床病理的关系。方法采用PCR-SSCP、DNA测序技术及RT-PCR技术检测31例ESCCp16基因突变及mRNA表达情况。结果31例ESCC有6例发生基因突变,3例发生基因纯合性缺失,p16基因mRNA表达癌组织显著低于癌旁正常组织(P<0.05)。在癌组织中p16基因变异组mRNA表达显著低于p16基因正常组(P<0.05),mRNA表达与性别、年龄、浸润深度、淋巴结转移、远处转移等无显著性相关。结论p16基因mRNA的异常表达可能与ESCC发生有关,但单纯检测p16基因mRNA表达水平与预测ES-CC患者预后的意义不大。     

OCT4在肝细胞癌中的表达及其临床意义

背景与目的:近年关于肝癌干细胞问题备受关注,已发现部分干细胞标志物在肝细胞癌中表达并与预后有关,其中OCT4基因是POU转录因子的重要组员,是维持胚胎干细胞自我更新能力和分化潜能的关键因子。本研究旨在检测OCT4A在肝细胞癌中的表达情况,并探讨其与病理因素和预后的关系。方法:用半定量RT-PCR检测5株人肝癌细胞系和1株永生化肝细胞系,以及107例肝细胞癌组织、相应的癌旁肝组织和20例正常无肝硬化肝组织中OCT4A mRNA的表达,并结合肝癌临床病理因素及预后进行分析。结果:OCT4A mRNA在人肝癌细胞系SMMC-7721、BEL-7402、Hep-G2、MHCC-97L、MHCC-97H中均表达,而在永生化肝细胞系L-02中无表达。OCT4A mRNA在肝癌组织中表达率为72.0%,明显高于癌旁肝组织的30.8%(P<0.001),在正常无肝硬化肝组织中无表达。肝癌组织中OCT4A mRNA的表达与肿瘤大小、血管侵犯及TNM分期有关(P<0.05)。OCT4A mRNA阳性肝癌患者及阴性患者的3年总生存率分别为48.0%和83.7%,3年无瘤生存率分别为34.1%和58.0%,差异均有统计学意义(P<0...     

肝癌中c-fms癌基因突变及其临床意义

目的探讨c-fms癌基因与肝癌的关系及意义,为进一步阐明肝癌的发生机制提供依据.方法通过PCR-SSCP方法检测肝癌c-fms第301密码子的突变,并对肝癌组织行Ed-mondson分级来探讨与肝癌的临床关系.结果 PCR扩增产物长度与预期一致,特异性高.SSCP检测发现18例肝癌组织第301位密码子DNA单链出现泳动变位,第969位密码子片段未出现异常泳动单链.测序示CSF-IR第301位密码子发生亮氨酸Leu(TTG)→丝氨酸Ser(TCG)置换,发生该位点突变的肝癌组织学分类为EdmondsonⅢ级11例、Ⅳ级7例,具有恶性程度高、发病年龄轻的特点.结论 c-fms癌基因第301位密码子突变是肝癌发生发展的一种分子机制.     

顺铂诱导肝癌细胞凋亡过程中的Survivin表达变化及意义

目的:研究顺铂体外对肝癌细胞株HepG2 Survivin基因表达的影响。方法:培养人肝癌细胞株HepG2,加入2μg/ml的顺铂,对照组和加药后24h、48h分别以PT-PCR和免疫印迹技术检测Survivin mRNA和蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率变化。结果:顺铂体外对肝癌HepG2细胞作用后,对照组和加药后24h和48h的细胞凋亡率分别是(1.74±0.36)%,(9.38±1.10)%,(16.87±2.26)%;其Survivin mRNA则分别比对照组提高了1.3倍和2.8倍;蛋白分别提高了1.2倍和3.5倍。结论:顺铂可促使肝癌细胞内Survivin的表达上调,抵抗其诱导的细胞凋亡。     

顺铂诱导肝癌细胞凋亡过程中的Survivin表达变化及意义

目的：研究顺铂体外对肝癌细胞株HepG2 Survivin基因表达的影响。方法：培养人肝癌细胞株HepG2,加入2μg/ml的顺铂,对照组和加药后24h、48h分别以PT-PCR和免疫印迹技术检测Survivin mRNA和蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率变化。结果：顺铂体外对肝癌HepG2细胞作用后,对照组和加药后24h和48h的细胞凋亡率分别是（1.74±0.36）%,（9.38±1.10）%,（16.87±2.26）%;其Survivin mRNA则分别比对照组提高了1.3倍和2.8倍;蛋白分别提高了1.2倍和3.5倍。结论：顺铂可促使肝癌细胞内Survivin的表达上调,抵抗其诱导的细胞凋亡。     

肝癌发生中RTN4C基因突变研究

为研究肝癌发生过程中RTN4C基因突变，利用直接序列分析、PCR—SSCP等研究了肝癌(HCC)中RTN4C突变与杂合性缺失(LOH)。HCC中，RTN4CP突变为62．9％，LOH为68．4％。90％LOH的肝癌中RTN4C发生突变。RTN4C突变相关的肝癌发生中LOH起重要作用。     

肝癌高低转移细胞株差异表达基因的初步研究

目的：肝癌高低转移细胞株的基因表达谱的比较。方法：应用cDNA microarray技术，对肝癌高低转移细胞株的基因表达谱进行比较，并应用RT—PCR对部分差异表达的基因进行了验证。结果：肝癌高转移细胞株与低转移细胞株相比，有384个基因存在差异表达，其中12个是位于染色体8p上。选取4个基因用RT—PCR验证，结果与cDNA microarray结论基本一致。结论：肝癌高低转移细胞株基因表达存在明显差别。染色体8p上可能存在促进和抑制肝癌转移的基因。     

JUNB基因和TOB1基因在肝细胞癌中的表达及意义

目的：探讨JUNB基因和TOB1基因的表达在原发性肝细胞癌（HCC）发生发展中的作用.方法：应用半定量逆转录聚合酶链（RT-PCR）技术检测55例肝癌患者、55例其它肿瘤患者和33例对照组患者外周血JUNB基因和TOB1基因的表达.结果：各组间外周血JUNB基因和TOB1基因阳性表达率无差异,JUNB基因和TOB1基因在肝癌患者外周血中的表达水平明显高于其他组（分别为P=0.003和P=0.000）,其他组之间无差异.结论：JUNB基因和TOB1基因在外周血中的mRNA表达水平可能与肝癌发生密切相关,提示其表达水平可能与预测HCC发生、发展有明显相关性.     

子宫内膜癌p16基因突变及蛋白表达异常的分子学探讨

目的　研究 p16基因的突变及蛋白表达异常在人子宫内膜癌发生中的作用。方法　应用 PCR- SSCP、DNA测序及免疫组化对 4 1例子宫内膜癌中 p16基因第二外显子进行检测 ,研究 p16基因的蛋白表达情况。结果　4 1例子宫内膜癌中 12例存在 p16基因第二外显子 5 2 2 bp的纯合缺失 ,10例存在点突变 (二个突变位点相同 ) ,突变位点之一为第 12 6密码子碱基 GTC→ AAT(错义突变 ) ,另一突变点为 12 7密码子 GCA→ GCG(同义突变 )。缺失及突变共占 5 3.7%。 12例第二外显子缺失标本全部呈现 p16蛋白表达阴性 ,10例点突变标本有 9例出现 p16蛋白表达积分下降呈弱阳性 ,p16蛋白表达异常占 5 6 .0 %。结论　 p16基因的突变及蛋白表达异常与子宫内膜癌的发生有明显相关性