氯硝柳胺对钉螺酚氧化酶活性的影响

目的  探讨氯硝柳胺对钉螺体内酚氧化酶活性的影响。方法  利用酶生物化学技术，以邻 苯二酚为底物，测定并比较经0.1、0.5 mg/L和1．O mg/L的氯硝柳胺浸泡O、12、24、48 h后的钉螺 体内酚氧化酶的活性，并设无氯清水浸泡作为对照组。结果经O.l、0.5 mg/L和1．O mg/L的氯硝 柳胺浸泡o、12、24、48 h后的钉螺体内酚氧化酶的活性分别为181. 60±4.39、150.  43±3.52、102. 07 ±2. 12、73. 77±1.98 U/g,178. 17±2.37、128.  13±2.54、86.5±1.35、48. 63±2.32 U/g和181. 60 ±2. 09、105. 07±3.89、66. 07±2.54，33. 53±2.34 U/g。清水对照组浸泡O、12、24、48 h后的钉螺体 内酚氧化酶的活性分别为183. 47±3.25、182. 07±2.27、182.  63±4.91 U/g和182.  10±2.95 U/g。 经统计学分析，清水对照组各时间段及各组Oh间比较，差异均无统计学意义(P均>0.05)。各组分 别与同时间段清水对照组比较以及各组不同时间段与本组O h活性间比较，差异均有统计学意义 (P均<0.05)。结论氯硝柳胺杀灭钉螺的作用机制之一可能与降低钉螺体内酚氧化酶活性有关。     

湖北钉螺酚氧化酶的部分纯化及酶学特征

目的制备并纯化钉螺酚氧化酶,探讨该酶最适pH、最适温度及其底物专一性等特征。方法利用匀浆、离心等方法制备粗制酚氧化酶酶液,用盐析、凝胶层析进行酶液纯化;在不同pH、不同温度下测定该酶比活力,寻求最适pH、最适温度;根据测定不同底物(邻苯二酚、L-多巴、焦没食子酸)对该酶的酶促反应米氏常数(Km),判定其底物专一性。结果经纯化后酶活力提高了13.62倍。该酶对邻苯二酚、L-多巴和焦性没食子酸的Km值分别为5.66±0.84mmol/L、4.72±0.45mmol/L和20.64±2.36mmol/L(前两者比较P>0.05,分别与后者比较P均小于0.05)。酚氧化酶在pH6.0、40℃时活性最高。结论通过盐析、凝胶过滤层析等方法纯化可使酶活性明显提高;钉螺酚氧化酶对邻苯二酚的亲和力近似于L-多巴,两者均高于对焦性没食子酸的亲和力。     

EDTA与金属离子对钉螺酚氧化酶活性的影响

目的探讨EDTA与金属离子对钉螺酚氧化酶活性的影响。方法将钉螺软体匀浆、离心获取粗制酶液,再经盐析、透析及凝胶过滤层析得到部分纯化的酚氧化酶制剂。以在测活系统中分别加入不同浓度的EDTA、NaCl、KCl、Na2SO4、K2SO4、CuSO4、CaSO4、ZnSO4及MgSO4,以邻苯二酚为底物测定PO活性,计算相对活力。结果Na 和K 对钉螺酚氧化酶活性既无抑制作用也无增强效应;各浓度的EDTA对钉螺酚氧化酶活性均有明显抑制作用;Zn2 对该酶活性亦有抑制作用,但较EDTA弱;Mg2 和Ca2 有增强酶活性作用,低浓度Cu2 可提高酶活性,高浓度Cu2 则可降低酶活性,其IC50为0.57 mmol/L。结论EDTA及多种金属离子均可影响钉螺酚氧化酶活性,为研发以该酶为靶标的新型灭螺剂提供了理论基础。     

钉螺酚氧化酶分子质量测定

目的初步测定并分析钉螺酚氧化酶天然蛋白的分子质量及其亚基组成。方法通过匀浆、离心取得钉螺粗制酚氧化酶酶液，经盐析、透析、凝胶过滤等方法纯化酚氧化酶，并采用凝胶柱层析法和SDS-PAGE测定酚氧化酶的分子质量，测算其亚基组成。结果凝胶柱层析法初步测得钉螺酚氧化酶分子质量单位为91ku，SDS-PAGE4条主带分别位于87、40、37和33ku。结论钉螺体内酚氧化酶分子质量单位约为87-91ku，可能为单体酶或由3个分子质量介于33-40ku的亚基构成的寡聚酶。     

湖北钉螺酚氧化酶组织化学定位进一步研究

目的观察酚氧化酶（PO）在日本血吸虫中间宿主湖北钉螺体内的组织学分布。方法湖北钉螺成螺采自芜湖江滩,解剖后取无损伤软体组织整体,用冰冻切片定位法作连续切片,置于含25mmol／L邻苯二酚的磷酸盐缓冲液（pH6．8）中,温箱37℃孵育30rain后系统观察酚氧化酶与底物反应后的产物在螺体内的分布情况。结果光学显微镜下显示在钉螺体内的肝脏、外套膜、头足部、触角、腮叶等处都出现酶组织化学反应的黑色阳性颗粒。结论钉螺体内存在酚氧化酶,其分布于钉螺的肝脏、外套膜、头足部、触角、腮叶等组织。     

钉螺不同季节及不同螺龄酚氧化酶活力研究

目的对钉螺不同季节及不同螺龄酚氧化酶活力进行研究。方法将钉螺分为不同季节组及成、幼螺组。钉螺去壳,取软体组织通过匀浆、离心分别获取粗制酶液,以邻苯二酚为底物用比色法测定各组酶活力,结果进行方差分析。结果不同季节组(春季、夏季、秋季、冬季)钉螺体内酚氧化酶活力差异明显(P0.01),分别为383.32±3.09、271.43±4.16、351.34±2.89、237.37±5.05(U/g)。成、幼螺体内酚氧化酶活力差异明显(P0.01),分别为271.43±4.16、473.31±6.13(U/g)。结论钉螺酚氧化酶活力在不同季节及不同螺龄均有差异。     

湖北钉螺体内酚氧化酶及其组织学定位

目的 了解湖北钉螺体内是否存在酚氧化酶（P0），并观察其在钉螺体内分布情况。方法 酶组织化学染色法：湖北钉螺成螺（雄螺和雌螺）采自芜湖江滩，解剖后，将软体组织置含25mmol／L邻苯二酚的磷酸盐缓冲液（pH6．8）中，37℃孵育，体视显微镜下观察PO与底物反应后的产物在螺体内的分布情况。荧光组织化学染色法：解剖后的湖北钉螺成螺软体组织置含25mmol／L邻苯二酚的磷酸盐缓冲液（pH6．8）中，37℃孵育30min，吸去邻苯二酚，加入0．05％戊巴比妥钠溶液，5min后置荧光显微镜下观察PO催化产生的荧光物质在螺体内的分布情况。结果 酶组织化学染色法显示钉螺的肝脏初为淡浅灰色，5min时呈现浅灰色，15min时呈现灰色，30min时呈现黑色。荧光组织化学染色法显示钉螺的肝脏表面呈现荧光反应。结论 湖北钉螺体内存在PO，雌、雄螺体内的PO均定位于肝脏。     

湖北钉螺与中华圆田螺体内酚氧化酶活力比较

目的 比较湖北钉螺及中华圆田螺体内酚氧化酶活力差异。方法 以螺软体组织制备粗制酶液,以邻苯二酚为底物,测定肋壳钉螺、光壳钉螺和中华圆田螺体内酚氧化酶活力。结果 光壳钉螺、肋壳钉螺、中华圆田螺体内酚氧化酶活力值分别为（25.72 ± 2.27）、（14.56 ± 1.24） U/mL和（13.72 ± 1.06） U/mL,光壳钉螺体内酚氧化酶活力值高于肋壳钉螺（q = 21.46,P < 0.05）及中华圆田螺（q = 12.00,P < 0.05）,中华圆田螺与肋壳钉螺体内酚氧化酶活力值差异无统计学意义（q = 1.62,P > 0.05）。结论 湖北钉螺及中华圆田螺体内酚氧化酶活力存在差异,可能与螺的生活环境有关。     

氯硝柳胺及EDTA对不同螺龄湖北钉螺酚氧化酶活性的影响

目的 探讨氯硝柳胺及EDTA对不同螺龄湖北钉螺酚氧化酶（PO）活性的影响。方法 将不同螺龄湖北钉螺（即成螺、幼螺、螺卵）软体匀浆、离心获取粗制酶液,再依次通过盐析、透析及凝胶过滤层析而获取部分纯化的酚氧化酶酶液。以邻苯二酚作为底物,检测不同浓度氯硝柳胺及EDTA对不同螺龄湖北钉螺PO活性的影响。结果 随着氯硝柳胺和EDTA浓度的增大,不同螺龄湖北钉螺PO活性均逐渐降低。结论 氯硝柳胺和EDTA对不同螺龄湖北钉螺PO活性均有抑制作用。     

寄生虫酚氧化酶的研究进展

酚氧化酶(Phenol oxidse，PO)广泛存在于无脊椎动物、脊椎动物、植物、细菌和真菌等生物体内，人们已从多种动物体提取纯化并鉴定了PO。依据PO的不同，其分子质量、最适温度、最适pH、激活剂、抑制剂和催化功能均有所不同。本文就寄生虫酚氧化酶的命名、生化特性、组织学定位、生理功能和分子生物学等方面的研究进展作以下综述。     

钉螺对氯硝柳胺抗药性的实验研究

目的研究氯硝柳胺在现场长期使用后,钉螺对其产生抗药的可能性。方法捕捉安徽省铜陵县胥坝乡长期使用氯硝柳胺进行灭螺地区的钉螺作为实验螺,以该乡未使用过氯硝柳胺灭螺地区的钉螺作为对照螺。将氯硝柳胺用脱氯自来水配成有效浓度为2.0000、1.0000、0.5000、0.2500、0.1250、0.0625和0.0313mg/L的药液,在(24±1)℃下对实验和对照钉螺进行室内浸杀试验,观察钉螺死亡情况,计算半数致死浓度(LC50)等指标。结果浸杀24、72和120h后,实验组钉螺LC50分别为0.337、0.175和0.136mg/L,对照组钉螺的LC50分别为0.165、0.090和0.061mg/L;氯硝柳胺浓度为0.0625～0.0250mg/L时,实验组钉螺的死亡率均显著低于对照组。结论氯硝柳胺在现场长期使用后,钉螺可能对其产生抗药性。     

静水不同水深条件下钉螺运动实验研究

目的掌握静水不同水深条件下钉螺上爬运动状态,为探索新的防止钉螺扩散模式提供技术支撑。方法在实验室内观测玻璃圆管中不同水深钉螺上爬行为,记录钉螺上爬时间和高度,并分析静水水压对钉螺上爬运动的影响。结果通过观测,获得了钉螺静水空间分布特征,即在不同水深的玻璃管中,钉螺主要分布于静水水表和水底两层;通过拟合静水压强与钉螺上爬速度的关系,得到静水水深与钉螺爬离水面高度的回归方程,确定静水中60 cm水深是钉螺对水压敏感性的分界点;距水面80 cm以内静水中钉螺离水面高度差异不大,钉螺在深度80 cm以内的静水中爬出水面后主要集中在距水面13 cm处附近。结论钉螺在静水中的上爬速度与静水压强成反比,钉螺爬出水面后距水面高度与水体深度成反比。     

钉螺在巢湖生存繁殖的现场研究

目的了解钉螺能否在巢湖生存繁殖.方法选择巢湖湖区的马尾河口和巢湖闸两处为实验区,巢湖东岸高林山区为对照区,投放无为县江外滩的肋壳钉螺和巢湖东岸高林山区的光壳钉螺,观察钉螺在放养不同时间后的生存繁殖情况.结果1年后,实验区和对照区均有相当数量存活的肋壳钉螺和光壳钉螺成螺;研究期间在实验区和对照区均检获了一定数量的光壳钉螺和肋壳钉螺幼螺;产卵期间实验区和对照区肋壳钉螺存活率差异无显著性(P＞0.05),而光壳钉螺存活率差异具有显著性(P＜0.05);产卵期间无论是光壳钉螺还是肋壳钉螺,各实验区雌螺卵巢中所含螺卵数与同一月份对照区同类雌螺卵巢中所含螺卵数的差异均无显著性(P均＞0.05).结论肋壳钉螺、光壳钉螺均能够在巢湖生存繁殖,但光壳钉螺在巢湖的生存状况不及其在高林山区的生存状况理想.     

钉螺过冷却现象的实验研究

目的实验室内观察钉螺的过冷却现象,推测钉螺的耐寒机制。方法现场采集安徽贵池的湖北钉螺,利用万用电表 热敏电阻法测定钉螺的过冷却点,比较钉螺数量性状指标、潮湿度与过冷却点关系。结果干燥钉螺的过冷却点为(-12.79±1.17)℃(n=30)。潮湿钉螺的过冷却点显著高于干燥钉螺(P<0.01)。不同性别钉螺过冷却点差异无显著性(P=0.4246)。钉螺的壳高与过冷却点显著相关(P=0.0334)。结论钉螺存在过冷却现象,钉螺越冬的耐寒机制很可能是冷不耐受型。     

非螺区输入钉螺分布及扩散规律的初步观察

目的了解输入钉螺的分布及扩散规律,为制定钉螺监测技术方案提供科学依据。方法选择约666 m^2的荒地,用宽50 cm、深30 cm的水沟按棋盘分布分隔成约2 m^2的方块,在一端的一块输入活钉螺1 600只,逐月抽样查螺观察有螺框率、活钉螺密度、幼螺密度、交配、分布距离、天气、温湿度等。结果2008年3～12月观察期间,有螺框率在20.00%～38.18%之间;晴天与阴雨天有螺框出现率分别为22.88%和29.24%,差异有统计学意义（χ^2=4.113,P〈0.05）;荒地台地和小水沟边/底的有螺框率分别为9.38%和35.99%,差异有统计学意义（χ^2=67.246,P〈0.01）,显示有螺框查出率与天气、环境等密切相关。9个月的观察期,有螺框钉螺、活钉螺、2代幼螺密度变化范围分别在2.17～5.71只/框、2.03～5.54只/框和0～4.56只/框之间,活钉螺、2代幼螺密度荒地台地明显低于小水沟边/底,分别为1.22只/框、0.78只/框和3.72只/框、2.82只/框;推算钉螺输入繁殖的2代钉螺生长至成熟可交配的钉螺的时间仅为5个月。观察期间,在第3条小水沟外未查获钉螺,单向扩散距离最远为4.5 m。结论钉螺主要分布在荒地有水区边缘如水氹、水沟边／底等潮湿、水分充足的地方,并沿水沟边扩散为主;输入钉螺阴雨天较活跃,查出率较高。     

钉螺耐寒能力的实验研究

目的实验室恒温条件下初步观察钉螺的耐寒能力,推测钉螺在空气环境下的致死低温.方法现场采集安徽贵池的湖北钉螺指名亚种(Oncomelania hupenisis hupensis),在实验室条件下测定钉螺在不同温度及不同时间下的存活情况.结果钉螺直接暴露在空气中的死亡率和温度、暴露时间关系的logistic回归方程为MORTALITY=1-1/[1+e(-6.0518-0.6584×TEMPERATURE+0.1014×TIME)],温度和时间的OR值分别是0.518(95%CI=0.503,0.534)、1.107(95%CI=1.096,1.119).结论干燥环境下钉螺暴露0.125～24 h的LT50在-9.17～-5.49℃之间,在-15℃暴露5 min以上则全部死亡.