内皮素对瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成作用的实验研究

目的：探讨内皮素（ET）在瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成中的作用及一氧化氮（NO）、粉防已碱（Tet）的拮抗效应。方法：体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞，以^3H-TdR掺入法测定细胞增殖；以^3H-脯氨酸掺入量判断细胞胶原合成。结果：ET呈浓度依赖性促进瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成，随着ET浓度（2．5－100ng/ml）的增加，^3H-TdR掺入值较对照组分别增加了1．8、4．0和4．9倍；^3H－脯氨酸掺入值较对照组分别增加了1．1、3．1和3．8倍（P＜0．01）。用NO供体亚硝基乙酰青霉胺（S-nitroso-N-acetyl penicillamine,SNAP)50μg/ml单独处理成纤维细胞，对^3H-TdR掺入值无明显影响（与对照组相比，P＞0．05），但对^3H-脯氨酸掺入值有下调作用；SNAP可拮抗ET－1（25ng/ml）刺激细胞增殖作用（抑制率为22．89％，P＜0．05）；对ET－1的促胶原合成作用无明显影响（P＞0．05）。Tet在不抑制细胞DNA合成的药物浓度（3μg/ml）即可明显减少瘢痕成纤维细胞^3H-脯氨酸掺入值，并能显著降低由ET介导的瘢痕成纤维细胞^3H-TdR掺入值（抑制率为33．21％，P＜0．01）。结论：ET对体外培养的瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成具有显著促进作用，此效应可部分被SNAP、Tet所阻抗。     

血小板衍生性生长因子(PDGF)与胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)对成骨细胞增殖及分化的影响

目的探讨PDGF与IGF-Ⅰ对体外培养成骨细胞增殖与分化的影响。方法将兔成骨细胞分别与PDGF(10ng/ml),IGF-Ⅰ(100ng/ml),PDGF(10ng/ml)+IGF-Ⅰ(100ng/ml)共同培养,于1、3、5d分别进行3H-TdR、3H-Proline的掺入量以及碱性磷酸酶合成量的检测。结果PDGF与IGF-1联合应用对3H-TdR、3H-Proline的掺入量与单独使用因子组、对照组相比,在各个时段均存在显著性差异(P<0.01);PDGF与IGF-1联合应用对碱性磷酸酶合成量与对照组、PDGF组相比有显著性差异(P<0.01),与IGF-1组相比,未见明显差异(P>0.05)。结论PDGF与IGF-Ⅰ联合应用可显著促进成骨细胞DNA、胶原蛋白、碱性磷酸酶的合成,对促进成骨细胞的增殖与分化功能具有协同作用。     

白细胞介素1受体拮抗剂对人肾成纤维细胞增殖及产生纤连蛋白的影响

目的：研究白细胞介素1受体拮抗剂（IL－1β诱导人肾成纤维细胞（KFB）增殖及产生纤连蛋白（FN）的影响。方法：体外培养KFB,经IL－1β刺激后,分别采用^3H-TdR掺入法和ELISA法测定KFB的增殖及其FN的分泌。结果IL－1β（25－100ng/ml)可促进KFB增殖（P＜05）及分泌FN（P＜0．05）,IL－Ira(125-1000ng/ml)及IL－1ra(250-1000ng/ml)可以分别抑制IL－1β（50ng/ml)引起的KFB增殖（P＜0．05）及FN分泌（P＜0．05）。结论：IL-1β在肾间质纤维化中起了一定的致病作用,IL-lra sk c beggon IL-β的作用,从而为IL－l防治肾间质纤维化提供一定的实验依据。     

重组大鼠肝再生增强因子对系膜细胞增殖及分泌转化生长因子β的影响

目的 探讨重组大鼠肝再生增强因子（rrALR)对大鼠肾小球系膜细胞在白介素1β（IL－1β）刺激下生物活性的变化。方法 用^3H-TdR掺入法检测大鼠肾小球系膜细胞（GMC）的增殖情况，用ELISA法检测大鼠肾小球系膜细胞培养上清中TGF－β蛋白的含量。结果 rrALR在0.005pg/ml到0.1ng/ml的浓度范围内对IL－1β刺激下的GMC的增殖以及TGF－β的分泌有促进作用，并呈一定量效关系。而rrALR与无IL－1β刺激的大鼠GMC共培养则与对照组差异无显著性意义。结论 rrALR可促进IL－1β刺激下的GMC增殖及TGF－β的产生，具有炎症协同作用，同时对不同靶细胞具有不同作用。     

转化生长因子 - β1对肌腱细胞增殖的调控作用

目的：探讨转化生长因子－β1（TGF－β1）对人胚腱细胞增殖的调控作用。方法：采用^3H-TdR掺入法观察TGF-β1人胚腱细胞的DNA合成剂量效应和时间效应;采用流式细胞仪观察TGF－β1对细胞周期及增殖指数PI值（S＋G2M）的影响。结果：在0．5％胎牛血清条件下TGF－β1可刺激腱细胞增殖,其作用在0．5－10ng/ml之间呈剂依赖性增强,当剂量为10ng/ml时,促NDA合成作用达到饱和。10ng/mlTGF-β1作用36h时开始增殖显著,并可持续到72h。细胞周期分析表明：在TGF－β1作用,G0／G1%呈降低趋势,而S％呈升高趋势,反映细胞增殖活力的PI值也呈升高趋势,尤以5ng/ml以上浓度时为显著。结论：TGF－β1可能通过促进腱细胞增殖参与肌腱的修复。     

反义N-ras寡脱氧核苷酸对前列腺癌细胞增殖的影响

目的：探讨N-ras反义寡脱氧核苷酸（ASODN）对前列腺癌细胞增殖的影响。方法：针对N-ras基因转录、翻译起始区分别合成硫代修饰的ASODN，采用^3H-TdR掺入、流式细胞荧光免疫和斑点杂交法检测LNCaP细胞增殖和N-ras基因表达。结果：两种ASODN单独作用后，LNCaP细胞内N-ras mRNA、p21蛋白和PSA表达水平以及^3H-TdR掺入率明显低于对照组，10μmol/L浓度对细胞生长的抑制率分别达63％，51％；二者联合应用后，N-ras基因表达、PSA水平以及^3H-TdR掺入率进一步降低，细胞生长抑制率进一步增高达85％。结论：N-ras ASODN可有效抑制前列腺癌细胞增殖；同时证明N-ras在前列腺癌发生发展中起重要作用。     

姜黄素对内毒素所致肾脏炎症的抑制作用

目的：肾脏的急慢性炎症与肾脏疾病的进展密切相关,本研究拟探讨姜黄素对内毒素（LPS）所致肾脏炎症的抑制作用。方法：SPF级昆明种小鼠40只,鼠龄6～8周,体重20～25g。小鼠分为3组：（1）正常对照组：腹腔注射生理盐水;（2）模型组（LPS组）：腹腔注射LPS（1mg/kg和5mg/kg）;（3）治疗组（LPS＋姜黄素）：动物先腹腔注射姜黄素（1mg/kg或5mg/kg）3d,然后腹腔注射LPS1mg/kg或5mg/kg。于处理后6h取材,切取部分肾组织用10%甲醛固定,HE染色,进行病理学观察。部分肾组织用于MCP-1mRNA检测。将肾小管上皮细胞（HK-2细胞）培养于KSF培养液中,设正常对照组给予正常培养液,LPS刺激组（1ng/ml,100ng/ml和10μg/ml）,LPS刺激＋姜黄素（5μmol/L和50μmol/L）处理组,分别培养4h和24h后收集细胞,应用Real-timePCR检测各组细胞MCP-1的表达。ELISA检测细胞培养上清液中MCP-1的表达。EMSA检测肾小管上皮细胞NF-κB的活性。结果：腹腔注射LPS（1mg/kg和5mg/kg）虽未引起光镜下肾脏组织的病理改变,但可显著增加小鼠肾脏MCP-1 mRNA的表达,分别增加20倍和26倍,而姜黄素处理可降低LPS所诱导的肾脏MCP-1 mRNA的表达,尤以LPS（1mg/kg）＋姜黄素（1mg/kg）为明显（下降至基础值的2.5倍）。应用不同浓度的LPS刺激HK-2细胞4h,HK-2细胞MCP-1 mRNA表达量显著增加,且呈剂量依赖的效应（分别增加1.60、2.15和14.7倍）。而以100ng/ml的LPS刺激HK-2细胞4h,观察姜黄素的干预作用,可见不同浓度的姜黄素（5μmol/L和50μmol/L）可显著抑制LPS所诱导的HK-2细胞MCP-1 mRNA的表达,且以50μmol/L姜黄素干预组为明显。同时ELSA检测细胞上清液中MCP-1的表达结果相似。EMSA结果显示NF-κB的DNA结合活性随LPS的浓度增加而增加,而应用姜黄素预处理后,由LPS所诱导的增高的NF-κB的DNA结合活性随之下降。结论：早期给予姜黄素治疗,能明显改善LPS诱导的小鼠肾脏趋化因子MCP-1的表达,从而发挥其肾脏损伤的保护功能;而体外研究表明姜黄素可抑制LPS所诱导的肾小管上皮细胞MCP-1表达,其作用可能与抑制细胞NF-κB的活性有关。     

HB-EGF对系膜细胞增殖及转化生长因子-β1表达的影响

目的：观察肝素结合性表皮生长因子样生长因子（HB-EGF）对肾小球系膜细胞（GMC）增殖及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的作用。方法：以原代培养大鼠肾小球系膜细胞为细胞模型,采用MTT、ELISA、RT-PCR等方法观察外源性HB-EGF对系膜细胞增殖及TGF-β1表达的影响。结果：（1）不同浓度HB-EGF对系膜细胞增殖有不同影响,10ng/ml时无刺激GMC增殖作用（P〉0.05）,100、1000ng/ml均能刺激GMC增殖（P〈0.01）,100ng/ml作用最明显。（2）HB-EGF（10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml）能刺激系膜细胞TGF-β1的表达（P〈0.01）,100ng/ml时作用最强。（3）100ng/mlHB-EGF刺激GMC24h、36h、48h,系膜细胞TGF-β1的表达均增加,随作用时间而变化,刺激36h和48h比24h作用更明显（P〈0.05）。结论：一定浓度范围内HB-EGF刺激GMC增殖,促进系膜细胞TGF-β1的表达,且具有一定的时间及浓度依赖性。     

舒芬太尼或氯胺酮预先给药对成人静脉血辅助性T淋巴细胞分化的影响

目的 观察不同浓度舒芬太尼或氯胺酮预先给药对成人静脉血辅助性T细胞（Th细胞）分化的影响。方法 采集22名健康志愿者外周静脉血20ml。进行全血和外周血单个核细胞（PBMCs）培养。每一份血样均用于下列各组研究：空白对照组（C组）、不同浓度舒芬太尼组[0．05ng／ml（S1组）、0．5ng／ml（S2组）、5ng／ml（S3组）]及不同浓度氯胺酮组[100ng／ml（K1组）、500ng／ml（K2组）、2500ng／ml（K3组）]。培养的全血和PBMCs在体外均用相应浓度药物预先作用24h，然后加入相应的刺激剂（全血：氟波醇乙酯、离子霉素及蛋白质转运抑制剂，刺激4h；PBMCs：植物血凝素，刺激48h）。刺激结束后，采用流式细胞技术测定全血及PBMCs中20000个淋巴细胞中Th1及Th2亚群比例，并计算Th1细胞与Th2细胞的比值（TM／Th2）。结果 与C组比较，S2组及S3组Th1亚群比例下降，Th2亚群比例升高，S3组Th1／Th2下降；K2组及K3组Th1和Th2亚群比例均下降，K3组Th1／Th2升高（P〈0．05）。S1及K1组两种药物的上述作用均不明显。结论 舒芬太尼可促使111细胞向Th2细胞分化，氯胺酮则对Thl和Th2细胞的分化均有抑制作用，且以抑制Th2的程度更明显，以上作用均呈剂量依赖性。     

瑞芬太尼对老年病人呼吸功能的影响

目的 探讨不同血浆靶浓度瑞芬太尼对老年病人呼吸功能的影响。方法 择期全麻手术病人30例，ASAⅠ或Ⅱ级，根据年龄分为2组（n=15）：成年组（18～64岁）和老年组（≥65岁）。记录入室时（基础值）及瑞芬太尼达到不同血浆靶浓度3min后的血压、心率（HR）、脉搏血氧饱和度（SpO2）及潮气量（VT）、呼吸频率（RR）、分钟通气量（MV）、吸入气峰流速（PIFR）、吸气时间比（TI/TT）。靶控输注瑞芬太尼，初始血浆靶浓度为1ng/ml，3min后测定呼吸参数，再增加靶浓度1ng／ml后重复测定，直至血浆靶浓度为3ng/ml。若SpO2〈90％达15s以上，则停止该例病人试验。结果 2组病人各呼吸参数基础值的比较差异无统计学意义（P〉0．05）。2组病人不同血浆靶浓度的Vτ之间两两比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。与基础值比较，老年组瑞芬太尼血浆靶浓度为3ng／ml时，RR减慢（P〈0．05）；血浆靶浓度为1、2、3ng/ml时MV下降（P〈0．05），下降幅度成年组为74％、45％、25％，老年组为67％、38％、17％。与瑞芬太尼血浆靶浓度为1ng/ml时比较，2组血浆靶浓度为2、3ng／ml时PIFR均降低，TI/TT增加（P〈0．05）。结论瑞芬太尼可抑制病人的呼吸，特别是老年病人。当瑞芬太尼血浆靶浓度≥2ng／ml时，其呼吸抑制作用明显增加。     

胫骨干骨折的手术治疗对策

目的：明确不同固定器械在胫骨干不同骨折类型固定中的特点，以指导临床应用。方法：68例胫骨干骨折，行加压钢板螺钉、交锁髓内钉、单侧外固定架固定后，作临床疗效分析。结果：加压钢板固定组42例，感染5例，骨不连1例，平均愈合时间3．8个月；交锁髓内钉固定组13例，无感染及骨不连，平均愈合时间5．4个月；单侧外固定架组13例，骨不连1例，踝关节背伸受限3例，平均愈合时间4．5个月。结论：胫骨骨折交锁髓内钉固定并发症少，功能恢复好，适用范围广，但要注意及时进行动力加压。加压钢板及外固定架固定应选择各自的最佳适应证，以达到理想的疗效。