冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系K562/A02凋亡、逆转耐药性的研究

目的:探讨冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系K562/A02凋亡、逆转耐药性的作用.方法:以不同浓度的冬凌草甲素处理K562/A02及敏感株K562/S细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测半数抑制率(IC50),分析冬凌草甲素对两种细胞柔红霉素(DNR)、高三尖杉酯碱(HHT)敏感性的影响,流式细胞仪检测冬凌草甲素对两种细胞内DNR浓度的影响.结果:冬凌草甲素可诱导两种细胞凋亡,两者在各浓度、各时点无显著差异;可显著逆转K562/A02细胞对DNR、HHT的耐药性,提高该细胞内DNR的浓度.结论:冬凌草甲素对K562/A02细胞有诱导凋亡、逆转耐药性的作用,是一种很有希望的抗白血病中药.     

蝙蝠葛碱逆转K562/ADM细胞多耐药性的研究

目的：研究具有钙拮抗作用的中药蝙蝠葛碱对多耐药性的逆转作用。方法：选用异搏定作阳性对照，观察其对多药耐药细胞株K562/ADM多药耐药性的逆转作用。结果：蝙蝠葛碱在非细胞毒性剂量下能使K562/ADM对阿霉素的浓度升高，但对细胞表面的糖蛋白P-170却没有影响。结论：蝙蝠葛碱具有逆转白血病细胞株K562/ADM多药耐药性的作用。     

HPLC法测定蝙蝠葛酚性碱片中蝙蝠葛碱

蝙蝠葛酚性碱片是由从蝙蝠葛Menispermumdauricum DC.干燥根茎中提取的以蝙蝠葛碱为主的酚性生物碱制成的片剂,具有活血化瘀,行气止痛,扩张冠脉血管,改善心肌缺血作用,用于预防和治疗冠心病,心绞痛以及瘀血内阻之胸痹、眩晕、气短、心悸,胸闷或痛等病症。在前期研究[1,2]基础上,本实验采用高效液相色谱法测定了蝙蝠葛碱,以期为建立该制剂科学合理的质量控制方法提供依据。1仪器与试剂美国光谱物理公司SP2000泵,UV1000紫外检测器,N2000色谱工作站,AS3120超声波处理器。蝙蝠葛酚性碱片、蝙蝠葛碱对照品(质量分数>99.3%)由华中科技大学同济…     

冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系K562／A02凋亡,逆转耐药性？…

目的：探讨冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系Ｋ５６２／Ａ０２凋亡、逆转耐药性的作用。方法：以不同浓度的冬凌草甲素处理Ｋ５６２／Ａ０２及敏感株Ｋ５６２／Ｓ细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）比色法检测半数抑制率（ＩＣ５０）,分析冬凌草甲素对两种细胞柔红霉素（ＤＮＲ）、高三尖杉酯碱（ＨＨＴ）敏感性的影响,流式细胞仪检测冬凌草甲素对两种细胞内ＤＮＲ浓度的影响。结果：冬凌草甲素可诱导两种细胞     

蝙蝠葛酚性碱与胰腺癌研究

主要分析中药成分蝙蝠葛酚性碱对胰腺癌的作用研究,分别从中药成分蝙蝠葛酚性碱的来源、药理作用及其对胰腺癌的抗肿瘤分子机制进行总结,为寻求中医药防治恶性肿瘤的新途径和研制新药提供实验和理论依据。     

蝙蝠葛酚性碱对K562、BXPC-3增殖的影响

目的观察蝙蝠葛酚性碱（PAMD）在体外的广谱抗肿瘤作用。方法采用MTT比色法测定不同质量浓度的蝙蝠葛酚性碱对体外处理白血病细胞株（K562）、人胰腺癌细胞株（BXPC-3）24h的存活率,同时测定药物处理不同细胞株的细胞增殖抑制率和IC50及IC90。实验设立阴性空白对照组和氟尿嘧啶阳性对照组。结果不同质量浓度蝙蝠葛酚性碱对K562、BXPC-3细胞株的细胞增殖具有抑制作用,抑制作用均与质量浓度呈梯度关系。结论蝙蝠葛酚性碱对体外培养人肿瘤细胞株的增殖有明显的抑制和杀伤作用,揭示其具有细胞毒效应,蝙蝠葛酚性碱产生抗肿瘤生物学效应的机理有待进一步研究。     

蝙蝠葛酚性生物碱的提取工艺研究

报道了蝙蝠葛酚性生物碱的提取工艺，收率比文献有较大提高。采用不同碱液萃取法，适合于较大量的蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱的制备。     

蝙蝠葛酚性碱对脑缺血大鼠细胞凋亡相关蛋白PKB表达的影响

目的:探讨蝙蝠葛酚性碱(phenolic alkaloids fromMenispermum dauricum,PAMD)预处理对脑缺血后大脑皮质细胞凋亡蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)表达的影响。方法:采用线栓阻塞大脑中动脉方法制备大鼠脑缺血模型,并用受试药物术前连续预处理模型大鼠7 d。采用免疫组织化学方法测定假手术组,模型组,PAMD高、中、低剂量组,尼莫地平、银杏叶片预处理组大鼠缺血后24,48,72 h大脑皮质中细胞凋亡相关蛋白PKB表达变化。结果:行大脑中动脉闭塞后大鼠大脑皮质PKB均被诱导表达,PAMD预处理7 d后,缺血后各时间点大鼠大脑皮质PKB表达明显升高。结论:PAMD能明显促进缺血脑损伤后抑制细胞凋亡相关蛋白PKB表达水平,从而在缺血性脑损伤中起到神经保护作用。     

蝙蝠葛酚性碱抗突变作用的研究

目的应用昆明小鼠股骨骨髓嗜多染红细胞微核实验,研究蝙蝠葛酚性碱(phenolic alkaloids from menispermum dauricum,PAMD)的致突变作用和抗突变作用.方法均在10～40 mg/kg剂量下,连续腹腔注射给药11d,在致突变实验,末次给药6 h后处死小鼠,检测骨髓嗜多染红细胞微核率.在抗突变实验,小鼠在于处死前的24 h,腹腔注射40 mg/kg环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)或2 mg/kg丝裂霉素C(mitomycinc,MC),末次给药6 h后取样.结果蝙蝠葛酚性碱与对照组相比未诱发骨髓嗜多染红细胞微核率的增高(微核细胞率＜3‰).蝙蝠葛酚性碱可使环磷酰胺和丝裂霉素C诱发的骨髓细胞微核率增高数值出现明显的降低.PAMD CP组微核细胞抑制率分别为61.83%、43.51%和22.52%.PAMD MC组微核细胞抑制率分别为31.09%、21.50%和8.29%.结论蝙蝠葛酚性碱具有一定的抗突变作用,而无致突变作用.     

蝙蝠葛酚性碱对大鼠致畸胎及行为致畸试验研究

本文报道了蝙蝠葛酚性碱对大鼠致畸胎及行为致畸试验研究,结果表明,蝙蝠葛酚性碱灌胃的各剂量组母鼠在体重增长、脏器系数及血清锌和铜含量上与对照组均无差异,未发现外观畸形和内脏畸形,但可使胎鼠胸骨缺失率增高,蝶、枕骨骨化迟缓率显著高于对照组,且有一定的剂量一效应关系,表明蝙蝠葛酚性碱有一定的胚胎毒性。观察蝙蝠酚性碱对大鼠后代发育和行为的影响,发现80mg/kg的剂量使仔鼠早期体重增长迟缓,负趋地反射迟缓,旷场试验中排便与修饰次数增多,提示蝙蝠葛酚性碱对仔鼠早期生长及断乳后仔鼠情感有一定的影响。     

蝙蝠葛酚性碱抗神经元缺血再灌注损伤的作用机制

目的 探讨蝙蝠葛酚性碱(PAMd)抗神经元细胞缺血再灌注损伤的作用机制.方法 体外培养小鼠神经母细胞瘤细胞株N2a,缺糖、缺氧和缺血清(OGSD)培养90 min,更换正常培养液并加入不同浓度的PAMd,继续培养不同时间后,收集细胞培养液,测定乳酸脱氢酶(LDH)活性和神经递质含量;收集细胞,测定以下指标:①MTT法检测细胞生存活力;②荧光光度法分析胞质活性氧(ROS)含量;③激光共聚焦分析线粒体跨膜电位;④Western blot检测胞质细胞色素C(Cyt C);⑤采用Caspase 3可见光底物DEVD-pNa测定Caspase 3活性.结果 ①PAMd促进OGSD处理后的N2a细胞存活;②PAMd抑制OGSD处理后的N2a细胞释放兴奋性神经递质;③PAMd直接清除细胞内的ROS;④PAMd能维持线粒体跨膜电位的稳定;⑤PAMd抑制线粒体Cyt C释放和抑制胞质Caspase 3活性.结论 PAMd通过阻断线粒体凋亡途径和抗氧化作用发挥神经元保护作用.     

汉防己甲素逆转白血病细胞株K562/A02耐药的机制

目的:研究汉防己甲素（TTD）对白血病细胞株K562/A02多药耐药(MDR)逆转的机理。方法：以白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562/A02为TTD作用的靶细胞。细胞水平检测实验分5组（K562组、K562/A02组、K562+ADM组、K562/A02+ADM组和K562/A02+TTD+ADM组）,采用MTT法检测TTD对K562和K562/A02细胞的非细胞毒性剂量,流式细胞术检测细胞内阿霉素(ADM)的浓度,基因、酶学、蛋白水平检测实验分3组（K562组、K562/A02组和K562/A02+TTD组）,采用RT-PCR法检测mdr1 mRNA的表达,免疫细胞化学方法检测谷胱甘肽S转移酶π（GST-π）和拓扑异构酶Ⅱ（Topo Ⅱ）的表达水平,Western-blotting法检测P-糖蛋白（P-gp）和bcl-2表达。结果：1.562 5 mg•L^-1的TTD处理K562/A02细胞后,细胞内ADM的浓度较单用ADM组明显提高（P<0.01）;与空白对照组比较,K562/A02细胞内mdr1 mRNA/P-gp的表达量减少（P<0.01）;GST-π和TopoⅡ表达无明显变化;凋亡抑制基因bcl-2的表达量减少（P<0.01）。结论:TTD主要通过增加细胞内ADM浓度,下调mdr1/P-gp和bcl-2表达逆转耐药。     

蝙蝠葛酚性碱对BXPC-3裸鼠抑瘤作用及对VEGF表达的影响

目的研究蝙蝠葛酚性碱（PAMD）对BXPC-3裸鼠抑瘤作用及对肿瘤新生血管内皮因子（VEGF）表达的影响,并进一步探讨其作用机制。方法建立BXPC-3裸鼠的动物模型,检测蝙蝠葛酚性碱对转移瘤的抑瘤率,采用免疫组织化学方法检测各组BXPC3小鼠肿瘤组织VEGF的表达水平。结果蝙蝠葛酚性碱对BXPC-3胰腺癌裸鼠瘤组织具有一定的抑制作用,与模型对照组比较具有统计学意义（P〈0．01）。PAMD各剂量均能明显降低BXPC-3胰腺癌裸鼠瘤组织VEGF的表达水平。结论蝙蝠葛酚性碱对BXPC-3裸鼠胰腺癌具有明显的抑制作用。其机制可能是通过改善裸鼠免疫功能,抑制肿瘤新生血管形成来实现的。     

甲孕酮联合苦参碱对耐药细胞株K562/AO2多药耐药逆转作用的研究

目的应用甲孕酮(MPA)联合苦参碱(MAT)逆转人白血病细胞株K562/AO2对阿霉素的耐药性,观察联合用药逆转耐药的疗效。方法用MTT法检测MPA与MAT的细胞毒性,荧光分光光度法检测各组细胞内药物(ADM)浓度的改变,流式细胞仪测定细胞凋亡的情况,流式细胞术检测细胞的p-gp表达情况。结果(1)确定了甲孕酮及苦参碱对K562/AO2细胞的非细胞毒性剂量和低细胞毒性剂量,确定了非细胞毒性剂量的两药联合应用后未出现毒性叠加。(2)在与ADM合用时,K562/AO2+甲孕酮及K562/AO2+苦参碱组,细胞凋亡百分率均高于K562/AO2耐药组(P<0.05,P<0.01),但均低于K562/AO2+甲孕酮+苦参碱组(P<0.01,P<0.05)。(3)与K562比较,K562/AO2细胞中P-gP呈高表达;与K562/AO2耐药组比较,K562/AO2十苦参碱组及K562/AO2+甲孕酮组P-gp表达量降低(P<0.01),但当两者联合应用时作用大于两者单独作用。(4)与ADM组比较苦参碱、甲孕酮均能提高K562/AO2细胞内ADM浓度,P均<0.01,两者联合应用时作用大于两者单独作用。结论非细胞毒性剂量的...     

HL-60/ADM细胞系耐药性检测

目的　检测 HL- 6 0 / ADM细胞化疗药物敏感性及 MRP表达。方法　以 HL- 6 0 / ADM细胞为实验对象 ,对化疗敏感的 HL - 6 0细胞为对照 ,MTT法检测药物敏感性 ,免疫细胞化学法检测 MRP蛋白的表达 ,PT- PCR法检测MRP m RNA表达。结果　两种细胞生长周期基本一致 ;HL - 6 0 / ADM细胞对 ADM、MTZ、VCR、H四种化疗药物 IC50 显著高于 HL- 6 0细胞 (P<0 .0 1) ,RF均在 2 0倍以上 ;HL- 6 0 / ADM表达 MRP m RNA,细胞膜表面 MRP阳性。结论　 HL-6 0 / ADM细胞系适合体外 MDR研究。     

川芎嗪对转基因多药耐药细胞K562/MDR耐药性的逆转作用

目的：研究川芎嗪（TMP）与环孢菌素A（CsA）单独及联合逆转人红白血病多药耐药细胞K562/MDR的多药耐药性（MDR）,并进一步探讨其耐药逆转机制。方法：分别以倍比稀释后不同浓度的TMP（50～6　400 mg?L^-1 ）和CsA（0.5～256 mg·L^-1 ）作用于体外培养的K562/MDR细胞72 h,采用MTT法检测细胞生长率,确定TMP和CsA的非细胞毒性剂量;采用非细胞毒性剂量,实验分为5组：G1组（TMP+ADM+K562/MDR）、G2组（CsA+ADM+K562/MDR）、G3组（TMP+CsA+ADM+K562/MDR）、阴性对照组（以K562/S代替K562/MDR）、空白对照组（以1640培养基代替药物）,检测各组细胞生长抑制50%的ADM浓度,即IC₅₀,计算耐药倍数和逆转倍数;利用荧光分光光度法检测各组细胞内ADM浓度;流式细胞术检测跨膜糖蛋白P-gp的表达情况。结果：TMP及CsA的非细胞毒性剂量分别为320和2.0 mg·L^-1,K562/MDR细胞的耐药倍数为19.2倍;TMP及CsA均能降低K562/MDR细胞的耐药性,逆转倍数分别为5.2及9.6倍,并且两者联合应用,逆转倍数为15.6倍;TMP和CsA单独及联合应用均能明显增加K562/MDR细胞内ADM浓度;TMP及CsA单独应用均能降低K562/MDR细胞P-gp的表达,并且两者联合应用使K562/MDR细胞P-gp的表达率明显降低,与阴性对照组比较差异有显著性（P<0.01)。结论：TMP和CsA单独及联合应用可逆转K562/MDR细胞对化疗药物ADM的MDR,且两者具有协同作用。其逆转机制可能为降低P-gp水平,升高细胞内ADM浓度,增强对ADM的敏感性,从而发挥治疗肿瘤的作用。     

苦参碱逆转人白血病K562/ADM细胞对阿霉素耐药性的研究

[目的] 探讨苦参碱对人白血病K562／ADM细胞对阿霉素耐药性的逆转作用。[方法] MTT法测定苦参碱的细胞毒性及其对K562／ADM细胞药敏性的影响,荧光分光光度法检测细胞内药物浓度的改变,流式细胞术检测耐药细胞凋亡百分率的变化。[结果] 苦参碱的非细胞毒性剂量为50μg／mL,低细胞毒性剂量为125μg／mL。50μg／mL苦参碱可增加K562／ADM细胞内阿霉素(ADM)浓度和K562／ADM细胞凋亡百分率,使K562／ADM细胞的IC50由原来的35．2μg／mL降低至15．8μg／mL,其逆转倍数为2．2倍。[结论] 苦参碱可部分逆转人白血病K562／ADM细胞对阿霉素的耐药性,其逆转机制与增加细胞内药物积累有关。     

siRNA逆转乳腺癌多药耐药的研究

目的研究siRNA(small interfering RNA)对乳腺癌多药耐药性的逆转作用。方法设计针对MRP基因的siRNA,转染乳腺癌MCF-7/adr细胞,用实时荧光定量PCR分析MRP mRNA的表达;流式细胞仪检测MRP蛋白表达和细胞内柔红霉素积累量。结果该siRNA能使耐药细胞株MCF-7/adr中MRP基因的mRNA及蛋白表达水平分别下调(58.16±1.36)%、(51.87±1.90)%(P<0.05),细胞内柔红霉素积累量显著增加(P<0.01)。结论siRNA可逆转乳腺癌的多药耐药。     

CSA逆转白血病细胞株K562/ADM耐药的实验研究

目的研究不同浓度环孢霉素A(2、0.3、0μg/mL)和粒细胞集落刺激因子以及小剂量化疗药物(米托蒽醌 替尼泊甙 阿糖胞苷)组合后,不同组合对耐药白血病细胞株K562/ADM的作用情况,为环孢霉素A逆转耐药的临床应用提供实验依据。方法采用四唑氮蓝(MTT)药敏法测定K562/ADM细胞株的增殖抑制率,观察细胞形态学改变,在不同培养时间进行细胞活力测定,并采用流式细胞仪检测K562/ADM细胞株的P-糖蛋白表达和细胞周期分析。结果在每个时间点,大剂量环孢霉素A(2μg/mL) 粒细胞集落刺激因子 化疗组对K562/ADM细胞株的抑制率最大;培养96 h后,P-糖蛋白平均荧光强度下降最明显(P<0.01)。粒细胞集落刺激因子 小剂量化疗药与不同浓度环孢霉素A结合的三组组合,在培养72 h后,大量细胞出现S期阻滞。结论大剂量环孢霉素A既降低了细胞耐药性,粒细胞集落刺激因子预激又促使细胞进入细胞周期,有利化疗对于白血病细胞进行最大限度的杀伤,二者有明显协同作用。