抗人喉癌双功能抗体制备及对Hep—2细胞株杀伤作用的研究

目的：为了制备高效的，特异的抗人喉癌／抗菌麻毒素Ａ双功能单克隆抗体，观察其对Ｈｅｐ－２细胞株杀伤作用。方法：选用ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，分别行蓖麻毒素Ａ和人喉鳞状细胞癌腹腔免疫后，提取抗体，经与骨髓瘤细胞融合，制备成抗人喉癌／抗菌麻毒素Ａ双特异单克隆抗体。     

抗人喉癌／抗蓖麻毒素A双功能抗体制备及细胞毒活性研究

目的：研究制备抗人喉癌／抗蓖麻毒素A双功能抗体用以导向喉癌的治疗。方法：在制备抗人喉癌单克隆抗体杂交瘤细胞基础上，通过二次杂交瘤技术制备能够分泌抗人喉癌和抗蓖麻毒素A的杂交瘤细胞株。结果：该双功能抗体对Hep-2细胞株杀伤力比化学偶联法的双功能抗体强15倍。结论：采用二次杂交瘤技术制备的双功能抗体比化学偶联法的细胞毒性作用显著增高，优于化学偶联法。     

抗人喉癌双功能抗体制备及对Hep-2细胞株杀伤作用的研究

目的：为了制备高效的,特异的抗人喉癌／抗蓖麻毒素A双功能单克隆抗体,观察其对Hep－2细胞株杀伤作用。方法：选用BALB／C鼠,分别行蓖麻毒素A和人喉鳞状细胞癌腹腔免疫后,提取抗体,经与骨髓瘤细胞融合,制备成抗人喉癌／抗蓖麻毒素A双特异性单克隆抗体。结果：该双功能抗体与喉癌组织的特异性结合率为87％,对Hep－2细胞半数抑制浓度比游离环磷酰胺强40倍。结论：采用二次杂交瘤技术制备的双功能抗体优于化学偶联法,抗体效价具有均匀性和理想的信噪比,抗体易于标准化。     

喉癌相关抗原免疫电镜的定位研究

目的研究喉癌混合单克隆抗体相关抗原的定位,为喉癌的早期诊断及导向药物治疗奠定理论基础。方法采用三株喉癌单克隆抗体ＬＣ９、ＬＣ１１、ＬＣ１２混合对９０例病理证实的喉癌组织切片（病理Ⅰ级４９例,Ⅱ级４１例）、１４例喉癌前病变及１０例正常喉粘膜进行免疫组化染色（ＡＢＣ法）光镜观察,同时采用ＬＳＡＢ法对９例新鲜喉癌组织细胞行免疫过氧化物酶标记电镜包埋前染色,对混合单克隆抗体相应抗原进行超微结构的定位观察。结果喉癌组织中喉癌相关抗原检出率（９７．７％）与正常喉粘膜相比明显增高（Ｐ＜０．０１）;混合单克隆抗体相应抗原主要定位于细胞膜性结构,即细胞膜、核膜、线粒体膜和内质网膜。结论混合喉癌单克隆抗体具有良好的特异性,带有药物的单克隆抗体可通过膜性结构来攻击癌细胞,达到治疗作用。混合单克隆抗体检测的相关抗原均分布于细胞膜和／或细胞浆中,细胞核无着色。     

抗人喉癌/抗蓖麻毒素A双功能抗体制备及细胞毒活性研究

目的：研究制备抗人喉癌／抗蓖麻毒素Ａ双功能抗体用以导向喉癌的治疗。方法：在制备抗人喉癌单克隆抗体杂交瘤细胞基础上，通过二次杂交瘤技术制备能够分泌抗人喉癌和抗蓖麻毒素Ａ的杂交瘤细胞株。结果：该双功能抗体对Ｈｅｐ－２细胞株杀伤力比化学偶联法的双功能抗体强１５倍。结论：采用二次杂交瘤技术制备的双功能抗体比化学偶联法的细胞毒性作用显著增高，优于化学偶联法。     

抗人喉癌/抗蓖麻毒素A双功能抗体制备及细胞毒活性作用研究

目的研究制备抗人喉癌/抗蓖麻毒素A双功能抗体用以导向喉癌的治疗.方法在制备抗人喉癌单克隆抗体杂交瘤细胞基础上,通过二次杂交瘤技术制备能够分泌抗人喉癌和抗蓖麻毒素A的杂交瘤细胞株.结果该双功能抗体对Hep-2细胞株杀伤力比化学偶联法的双功能抗体强15倍.结论采用二次杂交瘤技术制备的双功能抗体比化学偶联法的细胞毒性作用显著增高,化于化学偶联法.     

喉癌相关抗原免疫电镜的定位研究

目的 研究喉癌混合单克隆抗体相关抗原的定位,为喉癌的早期诊断及导向药物治疗奠定理论基础。方法：采用三株喉癌单克隆抗体ＬＣ９、ＬＣ１１、ＬＣ１２混合对９０例病理证实的喉癌组织切片（病理Ⅰ级４９例,Ⅱ级４１）、１４例喉癌前病变及１０例正常喉粘膜进行免疫组化染色（ＡＢＣ法）光镜观察,同时采用ＬＳＡＢ法对９例新鲜喉癌组织细胞行免疫过氧化物酶标记电镜包埋前染色,对混合单克隆抗体相应抗原进行超微结构的定位观察     

喉癌患者红细胞免疫功能的检测

为观察喉癌患者的红细胞免疫功能，对３０例喉癌患者进行红细胞Ｃ３ｂ受体花环率（Ｃ２ｂ受体花环率）和红细胞免疫复合物花环率（ＩＣ花环率）检测。结果表明，喉癌患者Ｃ３ｂ受体花环率加ＩＣ花环率均较声带息肉患者和正常对照组降低（Ｐ〈０．０１）；喉癌患者术后２０天左右Ｃ３ｂ受体花环率和ＩＣ花环率较术前无明显改变（Ｐ〉０．０５）。结果提示喉癌患者红细胞免疫功能低下。     

喉癌间质浸润免疫细胞的电镜观察

为在细胞学水平进一步了解免疫细胞和喉癌细胞间的相互关系，对１２例喉鳞状细胞癌病例活检组织进行了光、电镜观察。光镜观察发现瘤体内免疫细胞浸润少，免疫细胞主要位于瘤体周边与下沉组织交界处，主要为淋巴细胞，少数为浆细胞，部分病例可见嗜酸性白细胞少数肥大细胞，电镜下发现儿癌细胞之间有三种累邻关系；（１）癌细胞团被大量免疫细胞民绕；（２）癌细胞团周围有少许免疫细胞；（３）单个或少数癌细胞被免疫细胞包绕，癌细     

抗人喉癌单克隆抗体对荷瘤裸鼠放射免疫定位显像的观察

目的 用喉癌裸鼠模型研究抗人喉癌单克隆抗体的免疫导向作用，为诊断和治疗提供依据和方向。方法 用高效碘标法标记三株混合抗人喉癌单克隆抗体（ＭｃＡｂＬＣ）经腹腔注入人喉癌裸鼠模型体内，用单光子发射计算机断层（ＥＣＴ）扫描显像并测定肿瘤、血液和组织单位质量浓集的放射性占注入总放射性的百分比（％ＩＤ／ｇ）和肿瘤与主要器官组织的放射性比值（Ｔ／ＮＴ）。结果 单克隆抗体在一定时限内能够选择性的浓集在移植瘤组织     

抗人喉癌单克隆抗体的制备及其特性研究

采用Ｂ淋巴细胞杂交瘤技术制备抗人喉鳞状细胞癌单克隆抗体（ＭｃＡｂ），经筛选得到４株分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株，全部收集到腹水型ＭｃＡｂ，并检测其特异性及生物学特性。结果该ＭｃＡｂ能与标准喉癌细胞株抗原特异性结合，抗体滴度≥１：１２８０倍，且能特异性地检测喉癌患者癌组织中的喉癌抗原；此ＭｃＡｂ纯度高，分子量在１００～２００ｋＤ之间。单克隆杂交瘤细胞染色体均为多倍体。     

抗人喉癌单克隆抗体对荷瘤裸鼠放射免疫定位显像的观察

目的用喉癌裸鼠模型研究抗人喉癌单克隆抗体的免疫导向作用，为诊断和治疗提供依据和方向。方法用高效碘标法标记三株混合抗人喉癌单克隆抗体（ＭｃＡｂＬＣ）经腹腔注入人喉癌裸鼠模型体内，用单光子发射计算机断层（ｓｉｎｇｌｅｐｈｏｔｏｎｅｍｉｓｓｉｏｎｃｏｍｐｕｔｅｄｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ，ＥＣＴ）扫描显像并测定肿瘤、血液和组织单位质量浓集的放射性占注入总放射性的百分比（％ＩＤ／ｇ）和肿瘤与主要器官组织的放射性比值（Ｔ／ＮＴ）。结果单克隆抗体在一定时限内能够选择性的浓集在移植瘤组织内，９６ｈ可获得满意的肿瘤显像，实验组肿瘤组织的％ＩＤ／ｇ为１８．８±０．６１，对照组肿瘤组织的％ＩＤ／ｇ为４．４６±０．８２，两组比较差异有显著性（Ｐ＜０．０１，ｔ＝３４．９７）。结论用放射性核素标记抗人喉癌单克隆抗体在活体内能选择性地与人喉癌细胞结合，用ＥＣＴ扫描可以识别肿瘤所在的部位和大小，对肿瘤病灶及转移病灶的定位诊断有一定的实用价值。     

喉癌间质浸润免疫细胞的电镜观察

为在细胞学水平进一步了解免疫细胞和喉癌细胞间的相互关系，对12例喉鳞状细胞癌病树活检组织进行了光、电镜观察。光镜观察发现瘤体内免疫细胞浸润少，免疫细胞主要位于瘤体周边与正常组织交界处，主要为淋巴细胞，少数为浆细胞，部分病例可见嗜酸性白细胞及少数肥大细胞。电镜下发现免疫细胞和癌细胞之间有三种毗邻关系：①癌细胞团被大量免疫细胞包绕；②癌细胞团周围有少许免疫细胞；③单个或少数癌细胞被免疫细胞包绕，癌细胞发生退变。提示增强局部免疫应能增强宿主对喉癌的抑制作用。     

喉癌功能保全性手术评价

喉癌治疗的目标是在不影响生存率的基础上保留喉的结构和功能,以取得满意的生存质量.达到这一目标应强调多学科综合治疗,包括手术、放疗和化疗等. 喉全切除术作为最有效的喉癌治疗手段,自1873年开展以来,在20世纪曾被广泛应用.尽管各种发声重建手术和电子喉等人工发声手段可以恢复患者发声功能,但其永久性气管造口却对患者生存质量带来了严重的负面影响.     

保留功能的喉癌手术70例报告

目的 :探讨喉部分切除术治疗声门型、声门上型喉癌的远期疗效和功能恢复。方法 :对 1978年 7月～1998年 8月间手术的 70例临床资料进行总结和随访。其中声门型喉癌 6 0例、声门上型喉癌 10例 ;施行喉裂开声带切除术 2 2例 ,垂直半喉切除术 2 2例 ,Majer- Piquet手术 17例 ,水平半喉切除术 7例 ,Arslan手术 2例。结果 :1、3及 5年生存率分别为 98.5 3%、87.0 4%和 78.2 6 %。拔管率为 10 0 %。全部病例恢复经口进食 ,一经拔管均能发音。并发症发生率和术后复发率各为 15 .71%和 13.0 4%。结论 :喉部分切除术是功能保全性喉部恶性肿瘤根治的有效术式。它在切除肿瘤、延长生命的同时可以较好地保留喉的生理功能 ,提高患者术后的生活质量     

抗人喉癌单克隆抗体的制备及其特性研究

采用Ｂ淋巴细胞杂交瘤技术制备抗人喉鳞状细胞癌单克隆抗体，经筛选得到４株分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株，全部收集到腹水型ＭｃＡｂ，并检测其特异性及生物学特性。结果该ＭｃＡｂ能与标准喉癌细胞株抗原特异性结合，抗体滴定≥１：１２８０倍，且能特异性地检测喉癌患者癌组织中的喉癌抗原；此ＭｃＡｂ纯度高，分子量在１００－２００ｋＤ之间，单克隆杂交瘤细胞染色体均为多倍体。     

喉癌患者红细胞免疫功能的检测

为观察喉癌患者的红细胞免疫功能，对３０例喉癌患者进行红细胞Ｃ＿３ｂ受体花环率（Ｃ＿３ｂ受体花环率）和红细胞免疫复合物花环率（ＩＣ花环率）检测。结果表明，喉癌患者Ｃ＿３ｂ受体花环率加ＩＣ花环率均较声带息肉患者和正常对照组降低（Ｐ＜０．０１）；喉癌患者术后２０天左右Ｃ＿３ｂ受体花环率和ＩＣ花环率较术前无明显改变（Ｐ＞０．０５）。结果提示喉癌患者红细胞免疫功能低下。     

保留喉功能的T3期声门上喉癌的手术治疗

目的：探讨T3期声门上喉癌喉功能保留手术的可行性、技术操作和临床疗效。方法：回顾性分析1994～2003年收治的T3期声门上癌70例，均行喉功能保留手术，其中喉声门上水平部分切除术42例，喉声门上水平垂直部分切除术19例，喉环状软骨上部分切除术8例，喉近全切除术1例。以胸骨舌骨肌肌筋膜瓣、颈阔肌肌皮瓣、双蒂接力肌甲状软骨膜瓣、甲状软骨膜瓣等修复喉腔组织缺损，重建喉功能。全部患者均接受术后放疗（剂量50～60Gy）。结果：3年生存率为79．2％，5年生存率为68．4％。70例患者中已拔管60例，拔管率为85．7％。全部患者均恢复经口进食，无明显呛咳及吞咽困难。所有患者均发声成功，无一例因喉腔闭锁而致发声失败。结论：T3期声门上癌虽属晚期喉癌，但只要严格掌握适应证，熟练运用多种修复方法，提高外科手术技巧，保留喉功能是可行的。     

喉癌患者的血小板聚集功能检测

以二磷酸腺苷（ＡＤＰ）及胶原为聚集剂，检测了８７例喉癌患者的血小板聚集功能，并与１６６例正常人和３０例头颈良性肿瘤对照，结果：①喉癌疗前组、复发组及转移组的血小板聚集功能比正常人组、头颈良性肿瘤组及喉癌疗后显著增高（Ｐ〈０．０１）；②喉癌患者的血小板聚集功能随临床分期的进展而升高。这些结果可作为喉癌发生、发展、复发、转移与疗效预后的参考。讨论了血小板与癌细胞间相互作用的机制，喉癌患者血小板聚集功能     

喉癌总RNA转染的树突状细胞诱导抗肿瘤免疫的实验研究

目的:探讨转染喉癌总RNA的树突状细胞(DCs)诱导抗喉癌反应的免疫效应.方法:用喉癌细胞总RNA转染从健康人外周血诱导的DCs以制备DCs疫苗,MTT法检测其激活的细胞毒T淋巴细胞(CTLs)在体外对喉癌的特异性杀伤作用.将此特异性CTLs预防性接种于裸鼠皮下,7 d后接种喉癌细胞,观察其移植瘤的发生率;再将此CTLs治疗性接种于已荷瘤裸鼠皮下(治疗组1次,加强治疗组2次),观察移植瘤的生长情况.结果:喉癌细胞总RNA转染的DCs能在体外激活CTLs,该CTLs能在体外诱导针对喉癌细胞的肿瘤特异性免疫杀伤及抑制作用.在CTLs预防性接种裸鼠后,其移植瘤的发生率明显低于对照组(预防组为33%,对照组为100%,P＜0.01);当给荷瘤鼠皮下注射CTLs后,治疗组与加强治疗组移植瘤体积明显小于对照组(P＜0.05或P＜0.01),且加强治疗组移植瘤体积明显小于治疗组(P＜0.05).结论:转染喉癌总RNA的DCs能在体外活化CTLs,此CTLs不仅在体外能诱导特异性抗喉癌免疫反应,而且能在裸鼠体内抑制移植瘤的发生与生长.