TGF-β3对病理性瘢痕中成纤维细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨TGF-β3,对病理性瘢痕成纤维细胞增殖-凋亡的作用.方法 收集病理性瘢痕标本58例、正常瘢痕标本42例和正常皮肤30例.采用免疫组织化学法检测TGF-β3、PCNA,以及TINEL检测标本中成纤维细胞凋亡水平.结果 TGF-β3在病理性瘢痕组织中的表达低于正常瘢痕组织(P＜0.05),而正常皮肤组织中TGF-β3呈阴性表达.而PCNA在病理性瘢痕成纤维细胞中表达水平与正常瘢痕及正常皮肤相比明显增高(P＜0.05),正常瘢痕中成纤维细胞PCNA表达情况亦高于正常皮肤(P＜0.05);另一方面,病理性瘢痕中成纤维细胞凋亡水平较正常瘢痕降低(P＜0.05).而正常皮肤与正常瘢痕间无显著性差异(P＞0.05);病理性瘢痕组织中成纤维细胞增殖指数增殖指数与TGF-β3呈负相关关系(P＜0.05).结论 TGF-β3可能是通过调节瘢痕组织中成纤维细胞的增殖和/或凋亡水平,来实现对瘢痕形成的调节.TGF-β3,表达水平的失控可能是病理性瘢痕形成的重要诱因之一.     

子宫肌瘤中细胞增殖和凋亡的研究

目的通过检测子宫肌瘤组织及正常子宫平滑肌组织中增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡调控基因bcl-2的表达,探讨细胞增殖和细胞凋亡在子宫肌瘤发病机制中的作用.方法用免疫组织化学ABC法检测40例(增生期22例,分泌期18例)子宫肌瘤组织和正常子宫平滑肌组织中的PCNA和bcl-2蛋白的表达.结果 PCNA和bcl-2在肌瘤组织中表达均强于正常子宫平滑肌组织,且分泌期强于增生期(P＜0.01).但在正常子宫平滑肌组织中两者增生期和分泌期的表达则无显著性差异(P＞0.05).结论 PCNA和bcl-2表达的增加可能在子宫肌瘤的肿瘤发生过程中起重要作用.子宫肌瘤的发生不仅与肌瘤细胞增殖活性增高有关,而且与肌瘤细胞的凋亡受抑制有关.这种作用可能受到孕激素的调节.     

加味左金丸对胃癌前病变大鼠胃黏膜组织细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨加味左金丸对胃癌前病变大鼠胃黏膜组织细胞增殖与凋亡的影响.方法 采用免疫组化SP法,TUNEL法检测胃黏膜组织细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、bcl-2蛋白及凋亡指数(AI)的表达情况.结果 加味左金丸能明显下调胃癌前病变组织细胞的PCNA、bcl-2的表达,上调AI.结论 抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡可能是该方的作用机制之一.     

miR-222通过MMP1对增生性瘢痕成纤维细胞的调控机制研究

目的观察成纤维胶原酶1（MMP1）和miR-222在增生性瘢痕（HS）成纤维细胞中的表达水平,探讨miR-222对HS发生、发展的调控机制。方法选取36例HS患者的HS组织,并各留取HS旁正常组织作为对照。分离培养出HS组织与正常组织的成纤维细胞;采用RT-PCR法检测成纤维细胞MMP1mRNA和miR-222表达水平;采用Westernblot法检测成纤维细胞MMP1蛋白表达水平;采用MTT法检测成纤维细胞增殖情况;采用双荧光素酶报告实验检测miR-222是否可调控MMP1基因。结果与正常组织比较,HS组织成纤维细胞MMP1mRNA、蛋白表达水平均下调（均P＜0.05）,miR-222表达水平上调（P＜0.05）。与空白对照成纤维细胞比较,HS组织转染MMP1过表达质粒后的成纤维细胞MMP1mRNA、蛋白表达水平均上调（均P＜0.05）,增殖速度明显减慢（P＜0.05）;转染antagomiR-222质粒后的成纤维细胞miR-222表达水平下调（P＜0.05）,MMP1mRNA表达水平上调（P＜0.05）,增殖速度明显减慢（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验结果表明miR-222能与MMP1基因的3′-UTR区相结合,从而调控其表达。结论miR-222在HS组织中存在过表达,miR-222或通过负调控其靶基因MMP1的表达而发挥其调控成纤维细胞增殖和凋亡的作用。     

早期激素性股骨头坏死骨细胞凋亡与bcl-2和p53表达的实验研究

目的 探讨细胞凋亡及其调控基因在早期激素性股骨头坏死中发挥的作用.方法 健康兔30只,将实验动物随机分为实验组15只,对照组15只.模型成功后,进行组织形态学、骨细胞凋亡、免疫组织化学染色检测.结果 光镜下实验组较对照组骨小梁变细、稀疏,细胞核变形,骨细胞少见,空骨陷窝明显增多.实验组凋亡细胞明显多于对照组,bcl-2阳性细胞比率低于对照组,p53阳性细胞比率高于对照组.结论 早期激素性股骨头坏死是骨细胞坏死和骨细胞凋亡共同作用的结果,大剂量激素抑制了bcl-2蛋白的表达,促进了p53蛋白的表达,bcl-2与p53共同调控骨细胞的凋亡.     

应用bcl-2基因及GDNF治疗大鼠脑缺血的研究

目的 观察胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)与bcl-2基因对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤(CIRI)的影响.方法 取健康Wistar大鼠40只,采用Longa改良栓线法制成大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,缺血2 h后再灌注,随机分4组:对照组、bcl-2组、GDNF组、bcl-2+GDNF组,于再灌注3 h后经侧脑室注射GDNF 10μl、经颈动脉注射pLXSN-bcl-2质粒10μg,MCAO后3d(n=5),14 d(n=5),通过免疫组化染色检测bcl-2蛋白和GDNF的表达情况,TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果 bcl-2+GDNF组bcl-2蛋白表达与GDNF表达水平均较其他组表达明显增加(P<0.05),bcl-2组、GDNF组较对照组明显增加(P<0.05);脑内细胞凋亡GDNF+bcl-2组较其他组明显减少(P<0.05),bcl-2组、GDNF组较对照组明显减少(P<0.05).结论 bcl-2基因和GDNF可能通过减少神经细胞凋亡,促进bcl-2与GDNF蛋白表达,增强对局灶性缺血脑组织的保护能力,加速中枢神经损伤的修复;bcl-2基因与GDNF协同作用,促使神经细胞在脑内的凋亡进一步减少,从而避免脑缺血再灌注后脑细胞进一步损伤.     

雌激素对兔视网膜缺血再灌注损伤中视网膜神经节细胞凋亡及bcl-2表达的影响

目的:探讨兔视网膜缺血再灌注中视网膜神经节细胞凋亡及bcl-2表达的变化及苯甲酸雌二醇对其的影响.方法:将实验兔随机分为正常假手术组、缺血组、雌激素治疗组.缺血组和治疗组分为再灌注后3、6、12、24、72 h5个时间段.制作兔视网膜缺血再灌注损伤模型,通过用缺口末端标记法检测视网膜组织神经节细胞凋亡的变化;免疫组织化学过氧化酶法检测不同时段视网膜组织中的bcl-2的表达变化.结果:雌激素治疗组视网膜神经节细胞凋亡阳性细胞数在再灌注后12、24和72 h均低于缺血组(P＜0.05 ～P ＜0.01).治疗组bcl-2阳性细胞数在再灌注12、24和72 h均较缺血组显著增加(P＜0.01).结论:苯甲酸雌二醇可以增加视网膜缺血再灌注损伤时抗凋亡基因bcl-2在视网膜的表达,进而抑制细胞凋亡来实现其对视网膜缺血再灌注损伤的治疗作用.     

泛素特异性蛋白酶4对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨泛素特异性蛋白酶4(USP4)对增生性瘢痕(HS)成纤维细胞增殖的影响.方法 体外培养人HS成纤维细胞(HSFB),并取第4代细胞用于试验.利用Vialinin A(USP4抑制剂)干预HS成纤维细胞,Western blot检测干预细胞中不同时间段(0、12、24、48 h)USP4、TβRI及Smad7蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测Vialinin A对HS成纤维细胞增殖的影响,分为试验组和对照组(不作干预).结果 Vialinin A作用后,随着时间推移,HSFB中的USP4蛋白表达逐渐减低,TβRI的蛋白也逐渐减低,在作用12 h后明显降低(P<0.05);Smad7的蛋白表达则逐渐升高(P<0.05).Vialinin A同一浓度作用后,随着时间推移,HSFB增殖活性逐渐受到抑制,试验组与对照组同一时间段比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 USP4可能通过调控TGF-β/Smad信号通路影响瘢痕细胞增殖,抑制其表达可使HS成纤维细胞增殖减慢.     

黄芪对脑缺血后细胞凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨黄芪对脑缺血后脑细胞凋亡相关基因的表达的影响。方法：用结扎双侧颈内动脉的方法复制脑缺血模型,免疫化和流式细胞仪分别检测bcl-2,p53免疫阳性细胞和凋亡细胞。结果：结扎双侧颈内动脉后,脑局部血流量下降,脑皮质促凋亡基因表家明显增强,但未出现凋亡群体细胞。通过腹腔注射黄芪注射液后可抑制p53表达、增强bcl-2表达,结论：黄芪可抑制缺血区促凋亡基因的表达,增强抑凋亡基因的表达。     

白毛藤多糖抑制人卵巢癌细胞增殖作用及其机制研究

目的：探讨白毛藤中多糖成分对人卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用。方法：将不同浓度白毛藤多糖作用SKOV3细胞后,通过MTT法检测细胞增殖抑制率,RT-PCR法检测bcl-2、caspase-3基因mRNA表达量的变化,荧光显微镜检测细胞凋亡情况。结果：白毛藤多糖明显抑制SKOV3细胞增殖,诱导细胞凋亡,并抑制bcl-2表达,上调caspase-3表达。结论：白毛藤多糖能通过激活caspase-3、抑制bcl-2表达从而抑制SKOV3细胞增殖,促进凋亡达到抗癌的目的。     

增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中细胞凋亡与增殖的研究

应用末端脱氧核苷酰转移酶介导的ｄ－ＵＴＰ生物素缺口末端标记技术和免疫组化技术原位检测增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中的凋亡细胞和增殖细胞核抗原的表达。结果表明：在上述瘢痕组织中,表皮基底层下细胞ＰＣＮＡ阳性评分明显升高,而凋亡指数与正常皮肤相比无明显差异。     

增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中细胞凋亡与增殖的研究

应用末端脱氧核苷酰转移酶 (TdT)介导的d UTP生物素缺口末端标记技术 (TUNEL)和免疫组化技术原位检测增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中的凋亡细胞和增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达。结果表明 :在上述瘢痕组织中 ,表皮基底层下细胞PCNA阳性评分明显升高 (P <0 .0 5 ) ,而凋亡指数与正常皮肤相比无明显差异 (P >0 .0 5 )。提示增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的形成可能与其表皮基底层下细胞过度增殖、凋亡不足有关。     

异常瘢痕成纤维细胞凋亡研究

目的：明确异常瘢痕成纤维细胞的凋亡特性及激素的机理。方法：以瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤（各６例）为材料,在体外对低血清和氟美松对不同成纤维细胞的细胞凋亡及怀凋亡有关的蛋白Ｂａｘ和Ｂｃｌ－２的表达的影响进行了研究;同时,对６例增生性瘢痕局部注射康宁克通后３ｄ和７ｄ的细胞凋亡和相关基因ｃ－ｍｙｃ的表达进行了在体研究。结果：在低血清中发生细胞凋亡正常皮肤成纤维细胞多于增生性瘢痕,增生性瘢痕多于瘢痕疙     

人参皂苷Rg3对兔耳增生性瘢痕的抑制作用

目的： 探讨人参皂甙Rg3(GS-Rg3)对兔耳增生性瘢痕形成的影响，为其抑制瘢痕增生研究提供实验依据。方法： 大耳白兔24只,切除2 cm×2 cm全层皮肤，每耳4～6处，建立瘢痕动物模型，左右耳自身对照。实验组每3 d局部注射1次GS-Rg3 0.1 mL(浓度3 g•L^-1)，对照组注射等体积的生理盐水。分别于用药后2、4及6周切取瘢痕组织，肉眼观察瘢痕组织的厚度，显微镜下观察组织形态学变化，检测增殖细胞核抗原（PCNA）、Bcl-2及Bax的表达情况。结果：对照组兔耳创面上皮化后3周时，增生厚度为兔耳腹侧皮肤全层厚度的3～4倍，镜下可见真皮组织明显增生、变厚，由大量成纤维细胞、胶原组织及血管组成，胶原排列不整齐，呈结节或旋涡状分布，部分可见对应处软骨细胞增生。实验组6周时皮肤变薄，胶原排列较整齐，成纤维细胞及血管数量减少。增生性瘢痕组织中有大量PCNA及Bcl-2蛋白质的表达，阳性表达率分别为（39.55±6.07）%和（56.92±10.56）％ ，明显高于对照侧正常皮肤组织的阳性表达率（11.18％±1.71%和12.12±2.87％）（P<0.01）。实验组在注射GS-Rg3 2周后Bcl-2蛋白质表达量逐渐下降，6周时明显减少，与注射前比较差异有显著性（P<0.01）；注射GS-Rg3 2周后Bax表达量明显增加，与注射前比较差异有显著性（P<0.01）。结论： GS-Rg3对兔耳增生性瘢痕有抑制作用,可使瘢痕组织的纤维化程度明显减轻。      

术前植入5-Fu缓释剂对大肠癌的治疗

目的探讨大肠癌术前直肠黏膜植入5-Fu缓释剂（5-FuSR）后，药代动力学、毒副作用、肿瘤细胞凋亡和增殖及其调控基因的变化。方法将25例大肠癌随机分为两组：试验组（Ⅰ组）和对照组（Ⅱ组），两组均在手术前后取癌组织及癌旁组织，观察癌组织病理形态和识别凋亡癌细胞，SP免疫组化法检查给药前、手术后肿瘤细胞增殖细胞核抗原（PCNA）、凋亡、p53及Bcl-2基因表达状况。结果Ⅰ组用药后24、48、72h外周5-Fu血药浓度维持较稳定，差异无显著性（P〉0．05）；72h时门静脉血浓度显著大于外周血（P=0．013）；癌组织浓度显著高于癌旁组织。Ⅰ组术后凋亡指数显著高于术前（P〈0．001）；术后癌细胞的增殖指数较术前明显降低（P〈0．01）；凋亡抑制基因Bcl-2表达术后较术前显著下调（P=0．03）；p53基因突变与非突变者，二者术后Bcl-2表达均较术前下调。结论直肠黏膜下植入抗肿瘤药是术前区域性化疗的最佳途径；5-FuSR药代动力学和药效学满意，大肠癌细胞凋亡增加，凋亡抑制基因Bcl-2表达明显下调，并且对p53基因突变者亦有较好疗效。     

三氧化二砷抑制人乳腺癌细胞生长及其作用机制的初步研究

目的观察三氧化二砷(As2O3)对人乳腺癌MDA MB231细胞的生物学效应及其作用机制。方法采用MTT法观察细胞毒性;膜联蛋白V(AnnexinV)异硫氰酸荧光素(FITC)+碘化丙啶(PI)双参数检测细胞凋亡;流式细胞术测定细胞周期、增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白Fas和bcl2阳性细胞百分率及细胞内钙离子(IECa2+)含量变化。结果As2O3可显著抑制MDA MB231细胞生长,且剂量效应关系差异有统计学意义(r=0.99,P<0.01),其IC50为6.65μmol/L;MDA MB231细胞经As2O3处理后可观察到凋亡;As2O3能上调Fas蛋白表达和IECa2+含量(P<0.01),下调PCNA蛋白表达(P<0.01),并使细胞周期阻滞在S+G2/M期,但对bcl2表达无影响(P>0.05)。结论As2O3在体外可显著抑制MDA MB231细胞生长并引起凋亡,其机制可能与上调Fas表达和IECa2+含量、降低PCNA表达及阻滞细胞周期有关。     

乳铁蛋白抗菌肽抑制胃癌细胞增殖诱导其凋亡的体外研究

目的 探讨乳铁蛋白抗菌肽(LfcinB)对人胃癌细胞株MGC803细胞增殖和细胞凋亡的影响.方法 用CCK-8法测定不同浓度LfcinB对胃癌细胞株MGC803 24、48和72 h细胞增殖影响.用流式细胞术检测胃癌MGC803细胞凋亡的变化.用RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2、bax和caspase-3 mRNA的变化情况.用Western blot检测MGC803细胞中的Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达.结果 LfcinB对胃癌细胞株MGC803的增殖具有抑制作用,促进胃癌细胞株MGC803细胞凋亡,并且具有时间和剂量依赖性(P<0.05,P<0.01);LfcinB能显著抑制胃癌细胞株MGC803 bcl-2 mRNA表达,同时促进bax和caspase-3 mRNA表达,并且随着LfcinB浓度的增高相关基因下降或上升越明显(P<0.05,P<0.01);Western blot结果也显示,LfcinB能抑制Bcl-2蛋白表达,促进Caspase-3和Bax蛋白表达,其变化规律与mRNA相同(P<0.05,P<0.01).结论 LfcinB通过调控相关基因,抑制胃癌细胞MGC803增殖,并诱导其细胞凋亡.     

移植静脉平滑肌细胞凋亡及相关基因表达与增殖关系的动态研究

目的 探讨移植静脉狭窄发生机制。方法 建立１００只Ｗｉｓｔａｒ大鼠自体颈静脉移植与肾下腹主动脉模型。采用透射电镜、原位ＤＮＡ片断末端标记（ＴＵＮＥＬ）和免疫组织化学法、检测移植静脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）凋亡及相关基因ｂａｌ－２、ｂａｘ蛋白和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达。结果 术后１￣８周,移植静脉ＴＵＮＥＬ及ＰＣＮＡ阳性ＶＳＭＣｓ多于对照静脉（Ｐ〈０．０１）;术后１￣２周为ＴＵＮＥＬ及Ｐ     

Bcl—2和p53蛋白表达对肝硬变和肝细胞癌中细胞增殖和凋亡的 …

利用原位ＤＮＡ末端转移酶标记技术及Ｓ 疫组织化学方法检测了肝硬变和肝细胞癌（ＨＣＣ）组织中凋亡细胞,ｐ５３,ｂｃｌ－２蛋白和ＰＣＮＡ的表达。结果显示：ＨＣＣ与肝硬变组织比较,凋亡细胞密度低,ＰＣＮＡ阳性细胞密度高ｐ５３和ｂｃｌ－２蛋白阳性强度高,且均与ＨＣＣ分化程序有关。提示ｐ５３和ｂｃｌ－２蛋白可能是通过其过度表达影响细胞增殖和细胞凋亡失衡,并以“选择性细胞增殖”形式导致的发生和发展。