免疫滴金技术检测肾综合征出血热特异性抗体例的研究——附152例肝功能检查分析

目的为探索一种更为简便、快速、特异、灵敏的肾综合征出血热(HFRS)抗体的检测方法。方法458例HFRS病人血清同时采用免疫滴金法(CGIDA)与酶联免疫吸附法(ELISA)对比检测特异性免疫球蛋M抗体(抗HFRS—IgM)、免疫荧光法(IFAT)对比检测特异性免疫球蛋c抗体(抗HFRS—IgG)并以20例发热待查、48例病毒性肝炎血清作对照。对152例肾综合征出血热病人作肝功能检查。结果458例HFRS病人血清，以CGIDA法检测抗HFRS—IgM，阳性358例，与ELLISA法作结果评价时，CGIDA灵敏度80％，特异度100％；以CGIDA法检测抗HFRS-IgG，阳性386例，与IFAT法作结果评价时，CGIDA灵敏度91％，特异度100％。152例肝功能检查发现86例ATL升高，占56．6％，胆红素升高者33例，占28．3％。结论CGIDA法检测HFRS特异性抗体分别与ELLISA法及IFAT法对照，均有简便、快速、特异、灵敏之优点，检测抗HFRS—IgM，CGIDA法敏感性差于ELLISA法，但是无假阳性；检测抗HFRS—IgG，CGIDA法的灵敏度高于IFAT法。肝功能检查表明肾综合征出血热并发肝损害发生率较高临床表现轻，大多在多尿期恢复正常。     

免疫滴金技术检测肾综合征出血热特异性抗体458例

目的：为探索一种更为简便、快速、特异、灵敏的肾综合征出血热（HFRS）抗体的检测方法。方法：458例HFRS病人血清同时采用免疫滴金法（CGIDA）与酶联免疫吸附法（ELLISA）对比检测特异性免疫球蛋白M抗体（抗HV－IgM）、免疫荧光法（IFAT）对比检测特异性免疫球蛋G抗体（抗HV－IgG0并以20例发热待查、48例病毒性肝炎血清作对照。结果：458例HFRS病人血清，以CGIDA法检测抗HV－IgM，阳性358例，与ELISA法作结果评价时，CGIDA灵敏度80％，特异度100％；以CGIDA法检测抗HV－IgG，阳性386例，与IFAT法作结果评价时，CGIDA灵敏度91％，特异度100％。结论：CGIDA法检测HFRS特异性抗体分别与ELLISA法及IFAT法对照，均有简便、快速、特异、灵敏之优点，检测抗HV－IgM，CGIDA法敏感性差于ELISA法，但是无假阳性；检测抗HV－IgM，CGIDA法的灵敏度高于IFAT法。     

肾综合征出血热特异性抗体的检测与中西医结合治疗的研究

目的探索一种更为简便、快速、特异、灵敏的肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS)抗体的检测方法及更为有效的中西医结合治疗手段.方法559例HFRS患者血清同时采用免疫滴金法(colloidal gold immuno-dot assay,CGIDA)与酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对比检测特异性免疫球蛋白M抗体(抗HFRS-IgM),间接免疫荧光法(indirect fluorescent antibody test,IFAT)对比检测特异性免疫球蛋白G抗体(抗HFRS-IgG).101例HFRS患者分组进行中西医结合治疗,治疗组50例用苦黄注射液、参麦注射液联合黄芪口服液,对照组51例用利巴韦林注射液联合甘利欣注射液,针对老年患者的临床特点,及早采用综合性防治措施.结果559例HFRS患者血清,以CGIDA法检测抗HFRS-IgM,阳性396例(70.8%);以CGIDA法检测抗HFRS-IgG,阳性489例(87.5%).治疗组与对照组用药后退热天数、主要症状和体征缓解天数相似(P＞0.05);肾功能恢复天数,对照组优于治疗组(P<0.01);在越期方面,治疗组越休克期数明显高于对照组(P<0.01). 结论CGIDA法检测HFRS特异性抗体分别与ELISA法及IFAT法对照,均有简便、快速、特异、灵敏之优点,检测抗HFRS-IgM,CGIDA法敏感性差于ELISA法,但是无假阳性;检测抗HFRS-IgG,CGIDA法的灵敏度高于IFAT法.苦黄注射液、参麦注射液联合黄芪口服液与利巴韦林注射液联合甘利欣注射液相比较,疗效无明显差别,但前者优于改善休克情况,后者强于改善肾功能.     

免疫滴金技术检测肾综合征出血热特异性抗体与中西医结合治疗的研究

为探索一种更为简便、快速、特异、敏感的肾综合征出血热(HFRS)抗体的检测方法及中西医结合治疗该病的有效手段。186例HFRS病人血清同时采用免疫滴金法(CGIDA)与酶联免疫吸附法(ELISA)对比检测特异性免疫球蛋白M抗体(抗HFRS-IgM)、免疫荧光法(IFAT)对比检测特异性免疫球蛋白G抗体(抗HFRS-IgG),并以20例发热待排、48例病毒性肝炎血清作对照;101例HFRS病人分组进行中西医结合治疗,治疗组用苦黄、参麦注射液联合黄芪汤,对照组用利巴韦林联合甘利欣注射液。186例HFRS病人血清,以CGIDA检测者5～10分钟出结果,抗HFRS-IgM阳性132例(70.9％),抗HFRS-IgG阳性163例(87.1％);ELISA法检测抗HFRS-IgM4小时出结果,阳性167例(89.7％),IFAT法检测抗HFRS-IgG阳性135例(72.5％)。对照组均呈阴性结果。治疗组50例与对照组51例用药后退热天数、主要症状、体征缓解天数相似(P>0.05),尿蛋白消失天数及肾功能恢复天数,对照组优于治疗组(P<0.05),在越期方面,越休克期治疗组优于对照组(P<0.05),越少尿期及从发热期直接进入多尿期,两组情况相似(P>0.05)。CGIDA检测HFRS特异性抗体分别与ELISA及IFAT对照,均具有快速、简便之优点。检测抗HFRS-IgM,CGIDA敏感性稍差于ELISA,但特异性高于后者;检测抗HFRS-IgG,CGIDA的敏感性及特异性均高于IFAT。。苦黄、参麦注射液联合黄芪汤治疗HFRS与利巴韦林联合甘利欣注射液相比较,疗效无明显差别,但前者优于改善休克情况,后者强于改善肾功能。     

应用间接荧光法检测抗弓形体抗体

本文报道在国内首先采用间接免疫荧光法(IFAT)检测血清抗弓形体抗体,应用此方法检测北京地区正常人914例血清抗弓形体IgG抗体,阳性率为11.3％。IFAT方法具有特异、灵敏、快速及可重复性强,方法简便等优点,值得进一步推广使用。     

重组核衣壳蛋白免疫滴金检测肾综合征出血热抗体差异的研究

目的比较重组核蛋白抗原制备的胶体金免疫试剂盒与病毒悬液抗原制备的胶体金免疫试剂盒在检测肾综合征出血热特异性抗体的差异。方法以汉坦76—118病毒M14626株s片段为模板，克隆334bp片段，重组表达核衣壳蛋白，以此蛋白作为抗原，制备胶体金试剂盒，与以病毒悬液为抗原的胶体金试剂盒进行平行检测300例肾综合征出血热血清IgM和IgG抗体。并与酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接免疫荧光法（IFA）对比检测。结果成功构建了重组核蛋白原核表达载体pGEX-4T-1-S，获得高纯度的抗原，分子量约12kD，以此蛋白为抗原制备胶体金试剂盒。检测300例HFRS病人血清抗HFRSigM，rNPCGIDA阳性检出率为90．7％，后者高于前者，差异有显著性（X^2=32．9，P〈0．05）。用rNP与天然NP平行检测蛋白表达法HFRSIgM76.3％，HFRSIgG84．2％；细胞培养法HFRSIgM86．8％，HFRSIgG92．1％。HFRSIgM符合率达89．7％，HFRSIgG符合率达92．3％；CGIDA法检测HFRS IgM的敏感性为75.0％，特异性为100％；CGIDA法检测HFRSIgG的敏感性为83．1％，特异性为100％。结论该重组核蛋白的CGIDA对HFRS的早期诊断具有较好的应用价值。但是敏感性及特异性均低于细胞培养法的CGIDA。     

McAb-ELISA间接夹心法检测家鼠型HFRS疫区人和动物血清中特异性抗体

用McAb-ELISA间接夹心注和IFAT或酶标SPA染色法平行检测山西地区(家鼠型HFRS疫区)的人及动物血清中HFRS病毒特异性IgM和/或IgG抗体。结果ELISA检测174份HFRS患者血清的阳性率及抗体滴度均明显高于IFAT。检测295份无明确HFRS病史的健康人血清,ELISA的阳性率也高于IFAT。检测215份鼠类血清、102份兔血清及108份猪血清,ELISA的阳性检出率与IFAT或酶标SPA染色法基本相同。用阻断试验等证明本ELISA检出的抗体确为HFRS病毒特异性抗体。     

单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病人血清IgM和IgG抗体的研究

肾综合征出血热(HFRS)早期临床症状不典型,因此在病人血清中检出特异性抗体,特别是IgM抗体,对辅助临床早期诊断和流行病学监测均有重要意义。间接免疫荧光法(IFAT )和免疫酶染色法,虽已被广泛用于上述目的,但尚存在需用荧光显微镜或判定结果有一定主观性等不足之处。血凝抑制试验测出的则主要是IgG抗体。本文采用抗HFRS病毒单克隆抗体(McAb)和粗纯抗原建立了一种ELISA间接夹心法,以检测HFRS病人血清中IgM和lgG抗体,并与IFAT进行了比较。     

肾综合征出血热患者病后和人群疫苗接种后远期免疫学效果研究

目的 了解肾综合征出血热(HFRS)疫苗接种人群和HFRS患者病后的远期(5年以上)免疫学效果。方法 采用间接免疫荧光试验(IFAT)检测血清HFRS特异性IgG抗体，1：20为阳性。对接种组人群抗体滴度＜1：320者，强化免疫1针，15d后静脉采血，同样方法检测IgG抗体。结果接种组人群95例，抗体阳性率100％，GMT40．29；强化免疫人群59例，GMT71．13；疫苗接种组人群在强化免疫前后GMT有显著性差异(P＜0．01)。HFRS患者55例，抗体阳性率100％，GMT97．87；疫苗接种与否对患者病后的血清特异性IgG抗体水平无显著影响。近9年免疫人群的年发病率为16．38／10万，对照人群为73．92／10万，年均保护率77．84％。结论 HFRS疫苗的远期免疫学和流行病学效果较好；HFRS患者病后具有较持久的免疫力。     

反向间接血凝抑制试验检测EHF抗体

作者应用反向间接血凝抑制试验(RPHI)检测疑似EHF急性期也者血清183例、疑似恢复期患者血清186例、家鼠(黄胸鼠、沟鼠)血清148份,并与常规的免疫荧光抗体法(IFAT)作特异性比较.检测结果二者阳性符合率达99.44%。与IFAT、ELISA、HI作敏感代比较,RPHI法敏感性略低于IFAT,与ELISA接近,但明显优于HI法.     

Detections of HFRS Virus Antigen and Antibody by a McAb ELISA Indirect Sandwich Method

An ELISA indirect sandwich method using monoclonal antibodies(McAb)against hem-orrhagic fever with renal syndrome(HFRS)virus has been developed fordetections of HFRS virus antigen and specific antibody.Dynamic changes of HFRS virusantigens in the cells infected and their culture supernatants were observed by indirectfluorescence-antibody technique(IFAT)and ELISA separately.It was shown that HFRSvirus antigens in the cells and in the supernatants peaked separately 8 days and 14 daysafter infection.A hundred and seventy-nine brain and lung specimens of suckling miceinfected were examined by ELISA and IFAT.The positive rates were 72.1% and 68.2%,respectively.Furthermore,the IgM antibodies of 121 sera from HFRS patients wereexamined by ELISA and IFAT.The positive rates were 90.1% and 83.5% respectively.The IgG antibodies of 178 sera from HFRS patients were also examined by the twomethods,and both of the positive rates were 89.3%.The antibody titer measured byELISA was higher than the titer by IFAT.The above results suggest that the ELISA is aspecific and sensitive method and can be used for early diagnosis,epidemiologicalsurveillance and etiological study of HFRS.     

双单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病毒抗原的实验研究

间接荧光抗体技术(IFAT)已广泛用于肾综合征出血热(HFRS)病毒抗原的检测,其不足之处是需用荧光显微镜,有一定主观性及不能检测可溶性抗原。本文建立了以同样的抗HFRS病毒单克隆抗体(McAb)作为包被和第二抗体,以酶标葡萄球菌A蛋白(SpA)作指示抗体的双McAb ELISA间接夹心法,初步用于感染细胞培养上清及组织标本中HFRS病毒抗原的检测,获得较满意结果。     

重组PP150抗原用于胶体金免疫斑点技术检测抗HCMV-IgM

目的: 探索应用重组人巨细胞病毒(HCMV)PP150抗原用于免疫滴金技术检测血清中抗HCMV-IgM的诊断价值. 方法: PCR扩增HCMV pp150抗原决定簇(840～1048aa)编码基因片段,插入原核表探索应用重组人巨细胞病毒(HCMV)PP150抗原用于胶体金免疫斑点技术(CGIDA)检测血清中抗HCMV-IgM的诊断价值. 达载体pMAl-p2,转化宿主菌E.coli,诱导表达及纯化. 重组抗原CGIDA与酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒对比检测. 结果: 重组抗原CGIDA与ELISA试剂盒比较,符合率达96.0%;CGIDA检测HCMV-IgM的敏感度为74.2%,特异性为100%. 结论: 重组抗原pp150用于 CGIDA对HCMV的早期诊断,具有较好应用价值.     

三种特异性血清学方法诊断流行性出血热的评价

本文用IFAT、ELISA、HI平行检测了出血热患者血清161份的出血热病毒抗体，阳性57.9～95.1％；ELISA、HI和IFAT分别于2、4病日出现阳性；ELISA、IFAT分别于60、90病日阴转，HI94病日仍阳性；HI的阳性率（95.1％）高于IFAT（IgM57.9％、IgG88.4％）及ELISA（IgM75.6％、IgG65.9％），其发热期阳性率亦高于其他两法；ELISA-IgM、IgG的阳性率及ELISA-IgM、HI抗体的滴度随病情加重而增加。因此，ELISA（主要是ELISA-IgM）和HI具有高度特异性、敏感度，阳性出现早，HI在三法中灵敏度最高。     

人血清中青霉素抗体的酶联免疫吸附测定

目的: 建立检测青霉素抗体的ELISA法,并探讨其临床意义。方法: 以氨苄西林用SPDP法与兔血清白蛋白交联,用此交联物为包被抗原,HRP-抗人IgG为酶标抗体,建立检测青霉素抗体的ELISA法,并对部分临床标本进行青霉素抗体检测。结果: 建立的方法其批内、批间变异系数分别为6.8%、8.4%。氨苄西林-兔白蛋白交联物免疫家兔获得兔抗氨苄西林的抗体,以此抗体作阻断试验,抑制HRP-抗人IgG的显色。临床标本检测结果表明,不同疾病患者青霉素抗体的阳性率不同。结论: ELISA可用于临床对青霉素抗体的检测,具有较好的特异性、敏感性和重复性。     

逆转录聚合酶链反应及酶联免疫吸附试验在诊断肾病综合征出血热中的价值

寻找一种快速、敏感、特异的诊断肾病综合征出血热 (HFRS)方法。方法　采用碘化钠 -异硫氰酸胍 -氯仿法抽提病毒核酸 ,逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR)检测不同病程中 HFRS患者血清中的汉坦病毒感染情况 ,并采用间接酶联免疫吸附试验 (EL ISA)检测特异性 Ig M抗体。结果　 84.7%患者血清中汉坦病毒核酸检测为阳性 ,其中病程为 1周内者检出率为 10 0 % ,1～ 2周者为 6 0 % ,超过 2周者为 33.3% ,而特异性 Ig M的总检出率为 70 .0 5 % ,病程在 1周、1～ 2周、超过 2周者检出率分别为 6 4%、90 %、6 6 .6 %。结论　RT-PCR和 ELISA都是 HFRS的特异性诊断方法 ,两者可相互补充 ,提高诊断率