原发性非小细胞肺癌中K-ras基因突变的研究

目的：探讨非小细胞肺癌（Non－small cell lung cancer NSCLC）组织中K－ras第12密码子点突变与NSCLC发生和发展的相关性。方法：采用针对K－ras基因第12密码子特异点突变方式的引物进行PCR及银染法,分析175例新鲜NSCLC手术切除标本、43例癌旁组织及5例良性肺部疾患组织中K－ras基因第12密码子中CGT、GTT和GAT三种不同点突变方式。结果：175例NSCLC组织中出现K－ras 12密码子GGT→CGT突变率为34．86％（61／175）,GGT→GTT突变率40．57％（71／175）及GGT→GAT突变率37．71％（66／175）,总突变率为62．3％（109／175）。其中,同时出现CGT／GTT二个点突变为10．1％ 11／109CGT／GAT 9．2％10／109 GTT／GAT 12．8％ 14／109,而 CGT／GTT／GAT均出现突变占23．9％26／109。其中Ⅰ期、 Ⅱ期、Ⅲ期突变率分别为64．3％、56．8％及64．0％,另外腺癌突变率为63．8％、鳞癌为60．5％及腺鳞癌为64．5％因此K－ras点突变与肺癌的分期及病理类型均无相关性（P＞0．05）。然而,37例腺癌突变组中出现GTT／GAT突变率为17．2％ 10／58明显高于鳞癌的3．5％3／86二者具有明显差异（P＜0．01）。43例癌旁组织与5例良性肺部疾患组织均未发现K－ras点突变。结论：K－ras12密码     

原发性非小细胞肺癌的P^16基因变异

采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术，对２７例原发性非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）的癌组织标本进行了Ｐ＾１６基因外显子２的缺失和突变的检测，结果发现６例基因缺失和３例基因突变，且Ｐ＾１６基因的变异多发生在ＮＳＣＬＣ的晚期。结论Ｐ＾１６基因的变异在ＮＳＣＬＣ的形成和发展中起重要作用。     

PCR—SSCP法检测非小细胞肺癌p53基因的突变

目的 分析原发性非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中ｐ５３基因５～８外显子点突变发生及意义。方法 动用聚合酶链反应－单链构象多态性分析方法（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析法）进行检测。结果 发现８例肺良性疾病均无点突变发生,４０例ＮＳＣＬＣ中１９例（４７．５％）有点突变发生,点突变发与性别,年龄,组织学类型和组织发级无明显相关性（Ｐ〉０．０５）,但与临床分期和淋巴结累及状态明显相关（Ｐ〈０．０１,Ｐ〈０．０５）。Ｘ     

非小细胞肺癌EGFR基因突变的临床意义研究

  目的   探讨非小细胞肺癌EGFR基因外显子突变与其临床病理特征的关系。   方法   利用ADx-ARMS?EGFR基因突变检测试剂盒,检测214例未接受过Gefitinib治疗的非小细胞肺癌患者组织中EGFR基因外显子18、19、20和21突变。   结果   非小细胞肺癌组织中EGFR基因总突变率为45.8%（98/214）,外显子18、19、20和21的突变率分别为0.93%（2/214）、22.0%（47/214）、2.3%（5/ 214）和20.6%（44/214）。另有2例19和21外显子双重突变。EGFR基因在肺腺癌组织中的总突变率为50.3%（93/185）明显高于肺鳞状细胞癌17.2%（5/29）（P=0.001）。EGFR基因在女性患者中的突变率57.0%（57/100）高于男性36.0%（41/114）（P=0.002）,EGFR基因在NSCLC淋巴结转移患者中的突变率（66.7%）显著高于无淋巴结转移患者（39.5%）（P < 0.05）,但EGFR基因突变率与肺癌患者的年龄、肿瘤分级和临床分期均无显著性差异（P>0.05）。   结论   中国肺癌尤其是肺腺癌患者存在EGFR基因的较高突变率,EGFR外显子19、21突变结合肺癌的临床病理特征有望成为评估TKI治疗非小细胞肺癌疗效的分子标志。      

非小细胞肺癌EGFR基因突变异质性研究进展

 表皮生长因子受体（EGFR）酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）在EGFR基因活化突变阳性晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者中疗效显著,然而,同样是EGFR活化突变阳性的NSCLC患者接受EGFR-TKIs治疗后,疗效仍有明显差异;同一个患者的不同瘤灶也会对EGFR-TKIs出现不同的反应,这些现象可能与EGFR基因突变异质性有关,同一瘤灶的不同部分、同一患者的不同瘤灶、以及同一瘤灶治疗前后EGFR突变状态都有可能不一致。本文将从这三个方面对EGFR突变异质性研究进展作一综述。     

PCR-SSCP法检测非小细胞肺癌中E-cadherin基因突变的研究

目的 探讨E-cadherin基因突变在人非小细胞肺癌中的作用。方法 采用PCR－SSCP方法检测了53例非小细胞肺癌原发灶组织和5例肺部其他良恶性病变组织的E－cadherin基因突变的情况。结果 共有3例发生E-cadherin基因的突变。E-cadherin基因的突变与非小细胞肺癌的淋巴结转移情况有关（P＜0.005)，但与肿瘤的病理类型以及肿瘤的原发灶情况无关（P＞0.05)，而且在非小细胞肺癌与肺部其他病变之间，E-cadherin基因的突变无显著性差异。结论 E－cadherin基因能够较好地预测非小细胞肺癌的淋巴结转移情况。     

ⅢA期非小细胞肺癌K-ras基因突变对新辅助化疗的影响

目的探讨ⅢA期非小细胞肺癌(NSCLC)的K-ras基因突变对新辅助化疗的可能影响.方法确诊ⅢA期NSCLC的24例患者接受了2个周期的新辅助化疗,然后手术;观察手术切除肿瘤标本的病理组织学反应,并采用PCR-SSCP分析技术检测手术标本的K-ras基因突变.结果化疗的临床有效率为41.7%(10/24).手术切除率95.8%(23/24),完全性切除率62.5%(15/24).化疗的组织学有效率为43.5%(10/23).23例手术切除标本中9例(31.9%)发生K-ras基因突变.化疗后组织学有效患者的K-ras基因突变率(20.0%)明显低于组织学无效患者(53.8%,P＜0.05),获手术完全性切除的患者K-ras基因突变率(20.0%)显著低于手术不完全性切除患者(75.0%)(P＜0.05).结论新辅助化疗后组织学有效的患者K-ras基因突变率低可能是化疗药物杀灭肿瘤细胞同时也消除了突变的K-ras基因的结果,而不一定是K-ras基因突变影响了新辅助化疗并进而影响患者的预后.进一步增加病例数深入研究是有必要的.     

非小细胞肺癌p16基因突变的初步研究

为了解非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）ｐ１６基因突变的情况,本研究应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测了２４例ＮＳＣＬＣ肿瘤组织中ｐ１６基因外显子２的突变情况,现将结果报告如下。１　材料与方法２４例ＮＳＣＬＣ肿瘤组织及同一病例非肿瘤肺组织均为住院病例手术切除标本,并经病理证实。按常规方法提取ＤＮＡ。ＰＣＲ反应在ＰＥ９６００热循环仪中进行,扩增ｐ１６基因第２外显子,引物序列：　　ＰＳ１：５′－ＡＣＡＡＧＣＴＴＣＣＣＴＴＣＣＧＴＣＡＴＧＣ－３′ＰＳ２：５′－ＴＣＴＧＡＧＣＴＴＴＧＧＡＡＧＣＴＣＴＣＡＧ－３′循…     

PCR-SSCP法检测非小细胞肺癌中nm23基因突变的研究

目的：探讨nm23基因突变在人非小细胞肺癌中的作用。方法：采用PCR－SSCP方法检测了53例非小细胞肺癌原发灶组织和5例肺部其他良恶性病变组织的nm23基因突变情况，结果：所有病例均未发生nm23基因的突变。结论：nm23基因的突不一定能有效地预测非小细胞肺癌的侵袭力和转移倾向。     

非小细胞肺癌治疗现状及进展

非小细胞肺癌 (ＮＳＣＬＣ)约占全部肺癌的 80 % ,为肺癌中最常见的类型。ＮＳＣＬＣ有多种类型 ,其中以鳞型、腺型为主 ,其生物学行为、发展、分子生物学、药物敏感性、预后等相似之处较多 ,但仍存在各自特点[1] 。故在决定治疗方案时 ,就有着不同的要求。1　ＮＳＣＬＣ的临床生物学特点1.1　ＮＳＣＬＣ的恶性程度较低 ,局部发展慢 ,但存在微转移灶的可能 ,而这是治疗成败的焦点。ＮＳＣＬＣ的生长速度较小细胞肺癌 (ＳＣＬＣ)慢 ,其倍增时间 (ＴＤ)在鳞癌、腺癌中分别为 92天和 168天。然而倍增时间是根据Ｘ线中肺部原发灶计算的 ,而ＮＳ…     

角蛋白19片段K19-2G2检测在肺癌中的临床意义

[目的]探讨角蛋白19片段K19-2G2检测在肺癌中的临床意义。[方法]应用化学发光免疫分析法和电化学发光法检测345例肺癌、150例肺部良性疾病和500例健康体检者(对照组)血清K19-2G2和CYFRA21-1。[结果]肺癌组患者血清K19-2G2和CYFRA21-1浓度均显著高于肺部良性疾病和对照组(P<0.01);K19-2G2检测对肺癌的灵敏性和特异性分别为61.45%和97.69%均高于CYFRA21-1(P<0.05)。K19-2G2和CYFRA21-1在非小细胞肺癌的血清浓度显著高于小细胞肺癌(P均<0.05)。早期非小细胞肺癌和进展期非小细胞肺癌血清K19-2G2浓度和阳性率相近。[结论]K19-2G2对肺癌尤其是非小细胞肺癌的具有较高的灵敏性和特异性,可能有助于非小细胞肺癌早期诊断。     

非霍奇金淋巴瘤血清90K/Mac-2BP水平的测定及临床意义

背景与目的：90K／Mac-2BP是-种分泌性糖蛋白，有研究报道在-些肿瘤血清90K／Mac-2BP水平升高与肿瘤预后有关。本研究分析90K／Mac-2BP作为非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin’s lymphoma，NHL）肿瘤标志物的临床价值。方法：采用酶联免疫吸附（ELISA）的方法测定30例正常人、160例（30例缓解、30例复发以及100例初治）NHL患者血清90K／Mac-2BP水平，分析90K／Mac-2BP在NHL患者不同疾病时期（初治治疗前、缓解、复发治疗前）血清水平的差异，以及初治治疗前NHL患者血清90K／Mac-2BP水平和临床病理特征之间的关系：结果：初治组治疗前、复发组治疗前血清90K／Mac-2BP的水平高于正常组和缓解组，差异具有显著性（P〈0．05），初治组治疗前和复发组治疗前血清90K水平无显著性差异（P〉0．05），正常组和缓解组血清90K／Mac-2BP差异也无显著性（P〉0．05）；初治治疗前NHL患者血清90K／Mac-2BP水平与年龄、性别、病理分型、体力状态、临床分期、IPI、LDH、骨髓侵犯以及有无巨大包块均无相关性（P〉0．05）。结论：血清90K／Mac，2BP水平住NHL不同疾病时期有差异，能否成为NHL的一个肿瘤标记物还需进-步研究。     

胃肠道间质瘤PI3K-Akt信号转导通路介导的细胞凋亡相关因子的检测及其意义

目的：研究PI3K/Akt信号转导通路介导的细胞凋亡相关因子在胃肠道间质瘤（GIST）中的表达及意义。方法：RT-PCR检测PI3K、NF-κB、XIAP、bcl-2与survivin在124例GIST及癌旁正常组织中mRNA水平。结果：在GIST中,PI3K、NF-κBmRNA表达与NIH分级、肿瘤侵袭转移、黏膜受侵密切相关,而与年龄、性别、组织学类型无关。XIAPmRNA随NIH分级表达上调;XIAP表达与GIST组织分化程度呈负相关,即分化程度越低,XIAP阳性表达率愈高,伴有肿瘤侵袭转移的GIST病例XIAP表达水平较高,同时XIAP的表达与黏膜受侵密切相关,而与年龄、性别、组织学类型无关。bcl-2mRNA水平表达上调,与NIH分级、黏膜受侵有关,而与年龄、性别、组织学类型、转移复发及周围组织浸润无关。survivinmRNA在GIST中的表达与NIH分级、肿瘤侵袭转移、黏膜受侵等因素有关,而与年龄、性别以及组织学类型无关。由于NF-κB的调控作用,各指标之间mRNA的水平变化呈正相关。结论：GIST中PI3K/Akt信号转导通路的活化可以进一步激活NF-κBmRNA,从而进入细胞核内调控凋亡相关因子XIAP、bcl-2以及survivinmRNA水平的表达。     

胃肠道间质瘤PI3K-Akt信号转导通路介导的细胞凋亡相关因子的检测及其意义

目的:研究P13K/Akt信号转导通路介导的细胞凋亡相关因子在胃肠道间质瘤(GIST)中的表达及意义.方法:RT-PCR检测P13K、NF-κB、XIAP、bcl-2与survivin在:124例GIST及癌旁正常组织中mRNA水平.结果:在GIST中,PI3K、NF-κB mRNA表达与NIH分级、肿瘤侵袭转移、黏膜受侵密切相关,而与年龄、性别、组织学类型无关.XIAP mRNA随NIH分级表达上调;XIAP表达与GIST组织分化程度呈负相关,即分化程度越低,XIAP阳性表达率愈高,伴有肿瘤侵袭转移的GIST病例XIAP表达水平较高,同时XIAP的表达与黏膜受侵密切相关,而与年龄、性别、组织学类型无关.bcl-2 mRNA水平表达上调,与NIH分级、黏膜受侵有关,而与年龄、性别、组织学类型、转移复发及周围组织浸润无关.survivin mRNA在GIST中的表达与NIH分级、肿瘤侵袭转移、黏膜受侵等因素有关,而与年龄、性别以及组织学类型无关.由于NF-κB的调控作用,各指标之间mRNA的水平变化旱正相关.结论:GIST中PI3K/Akt信号转导通路的活化可以进一步激活NF-κB mRNA,从而进入细胞核内调控凋亡相天因子XIAP、bcl-2以及survivin mRNA水平的表达.     

胃肠道间质瘤PI3K-Akt 信号转导通路促进血管生成相关因子的检测及其意义*

目的:研究胃肠道间质瘤PI 3K-Akt 信号转导通路促进血管生成相关因子的检测及其意义。方法:Western印迹法检测PI 3K、Akt、PTEN在GIST中的表达,免疫组织化学法检测HIF-1 α 、NOS 2、VEGF在GIST中的表达。结果:在GIST中,随着NIH 分级增高,PI 3K、Akt的蛋白表达水平上调,低危组分别为82.14、115.16;中危组分别为101.34、142.52;高危组分别为138.52、180.55（P<0.05或P<0.01）,而抑癌基因PTEN 的蛋白表达水平下调,低危组为114.28;中危组为73.24;高危组为60.12（P<0.05或P<0.01）。 HIF-1 α 、NOS 2 和VEGF的表达与GIST的NIH 分级、黏膜受侵及侵袭转移关系密切（P<0.05或P<0.01）。 有侵袭转移组的阳性率明显高于无侵袭转移组。Ⅰ、Ⅱ级与Ⅲ、Ⅳ级患者的HIF-1 α 的阳性率分别为46.2% 、68.4%（P<0.01）;黏膜受侵和无受侵组的患者HIF-1 α 阳性率分别为88.2% 、54.4%（P<0.05）;Ⅰ、Ⅱ级与Ⅲ、Ⅳ级患者NOS 2 的阳性率分别为42.3% 、70.4%（P<0.05）;黏膜受侵和无受侵组的患者NOS 2 阳性率分别为88.2% 、55.7%（P<0.01）;Ⅰ、Ⅱ级与Ⅲ、Ⅳ级患者的VEGF的阳性率分别为46.2% 、61.2%（P<0.01）;黏膜受侵和无受侵组的患者VEGF阳性率分别为79.4% 、50.6%（P<0.01）;HIF-1 α 、NOS 2 和VEGF的的表达未发现与其他临床病理特征有明显的相关性（P>0.05）。 HIF-1 α与NOS 2 蛋白阳性表达之间呈显著正相关（r=0.392,P=0.026）;HIF-1 α与VEGF蛋白阳性表达之间呈显著正相关（r=0.368,P=0.034）;NOS 2 和VEGF蛋白阳性表达之间呈显著正相关（r=0.452,P=0.021）。 结论:PI 3K-Akt 信号途径可能通过抑癌基因PTEN的调控来调节HIF-1 α 蛋白的表达,HIF-1 α 、NOS 2 和VEGF以及MVD的表达与GIST的NIH 分级、黏膜受侵及肿瘤侵袭转移关系密切。      

A comprehensive review of vitamin K and vitamin K antagonists

For more than 60 years, vitamin K-dependent proteins have been known to play an important role in regulating blood coagulation. During recent years it has become clear, however, that vitamin K is also involved in other physiologic processes, including bone metabolism and vascular biology. Because the vitamin K requirement of bone and vessel wall is higher than that of the liver (where the clotting factors are produced) recommended daily allowance (RDA) values for K vitamins must be redefined. According to the new definition, a substantial part of the population is mildly deficient in vitamin K, and at later ages this deficiency may contribute to increased bone fracture risk, arterial calcification, and cardiovascular disease.     

Detection of mutated K12-ras in histologically negative lymph nodes as an indicator of poor prognosis in stage II colorectal cancer

Stage II colorectal carcinoma is characterized by negative lymph node pathology as determined by conventional microscopic examination. These patients generally do not receive adjuvant therapy although 20%-30% will die from metastatic disease. To determine whether K-ras mutations at codon 12 could be used as a sensitive indicator of occult lymph node metastasis in stage II colon carcinoma, a retrospective study was performed using restriction endonuclease-mediated selective polymerase chain reaction (REMS-PCR) amplification. Of 106 colonic tumors analyzed, 46 were identified as positive for a K12-ras mutation in the primary tumor. Multiple lymph node samples from 38 of these 46 patients were examined by a sensitive nested PCR protocol for the presence of a K12-ras mutation. Of these 38 patients, 14 had 1 or more positive lymph nodes by PCR (37%) and 24 were negative for the mutation (63%). Of the 14 patients with a K12-ras mutation detected in lymph nodes, 8 died of the disease within 5 years (57%) compared to only 4 of the 24 patients with ras-negative lymph nodes (17%). The difference in time to death from disease, stratified using K12-ras status of lymph nodes, was statistically significant (P = 0.036; log-rank test). These results suggest K-ras mutation status of lymph nodes in patients with stage II colon cancer might identify a subgroup of patients who are more likely to develop recurrent and/or metastatic disease and benefit from adjuvant therapy. Larger studies are indicated to determine whether detection of K-ras mutation positivity in histologically negative lymph nodes portends a poor prognosis and to determine whether more aggressive use of adjuvant therapy is warranted.     

RT—PCR检测K19 mRNA诊断直肠癌区域淋巴结微转移

目的：探讨RT—PCR检测K19 mRNA诊断直肠癌区域淋巴结微转移的价值及其应用前景。方法：通过病理组织学及RT—PCR扩增K19 mRNA对19例直肠癌患者的癌组织标本和51个淋巴结进行检测。结果：19例直肠癌患者癌组织均有K19 mRNA表达；51个淋巴结中组织学阳性16个（31．4％），而RT—PCR阳性21个（41．2％）。RT—PCR扩增K19 mRNA及内参照β—actin后，所有癌组织及转移淋巴结显示461bp和221bp的扩增片断，而非肿瘤患者的8个淋巴结仅显示221bp扩增片断。结论：RT—PCR扩增K19 mRNA检测直肠癌区域淋巴结微转移是一种敏感、特异的检测方法，优于常规病理组织学方法。     

RT-PCR检测K19 mRNA诊断直肠癌区域淋巴结微转移

目的：探讨RT—PCR检测K19 mRNA诊断直肠癌区域淋巴结微转移的价值及其应用前景。方法：通过病理组织学及RT—PCR扩增K19 mRNA对19例直肠癌患者的癌组织标本和51个淋巴结进行检测。结果：19例直肠癌患者癌组织均有K19 mRNA表达；51个淋巴结中组织学阳性16个（31．4％），而RT—PCR阳性21个（41．2％）。RT—PCR扩增K19 mRNA及内参照β—actin后，所有癌组织及转移淋巴结显示461bp和221bp的扩增片断，而非肿瘤患者的8个淋巴结仅显示221bp扩增片断。结论：RT—PCR扩增K19 mRNA检测直肠癌区域淋巴结微转移是一种敏感、特异的检测方法，优于常规病理组织学方法。     

Antitumor effects of vitamins K1, K2 and K3 on hepatocellular carcinoma in vitro and in vivo

A number of studies have shown that various K vitamins, specifically vitamins K2 and K3, possess antitumor activity on various types of rodent- and human-derived neoplastic cell lines. In the present study, we examined the antitumor effects of vitamins K1, K2 and K3 on PLC/PRF/5 human hepatocellular carcinoma (HCC) cells in vitro and in vivo. Furthermore, we examined the mechanisms of antitumor actions of these vitamins in vitro and in vivo. Although vitamin K1 did not inhibit proliferation of PLC/PRF/5 cells at a 90-microM concentration (the highest tested), vitamins K2 and K3 suppressed proliferation of the cells at concentrations of 90 and 9 microM, respectively. By flow cytometric analysis, it was shown that not only vitamin K1, but also vitamin K2 did not induce apoptosis or cell cycle arrest on PLC/PRF/5 cells. In contrast, vitamin K3 induced G1 arrest, but not apoptosis on PLC/PRF/5 cells. Subsequent in vivo study using subcutaneous HCC-bearing athymic nude mice demonstrated that both vitamins K2 and K3 markedly suppressed the growth of HCC tumors to similar extent. Protein expression of cyclin D1 and cyclin-dependent kinase 4 (Cdk4), but not p16INK4a Cdk inhibitor in the tumor was significantly reduced by vitamin K2 or K3 treatment, indicating that vitamins K2 and K3 may induce G1 arrest of cell cycle on PLC/PRF/5 cells in vivo. Taken collectively, vitamins K2 and K3 were able to induce potent antitumor effects on HCC in vitro and in vivo, at least in part, by inducing G1 arrest of the cell cycle. The results indicate that vitamins K2 and K3 may be useful agents for the treatment of patients with HCC.