γ-catenin在白血病细胞中的表达

目的检测白血病骨髓标本及白血病细胞株中γ-catenin的表达情况,探讨γ-catenin在白血病细胞中的作用。方法以RT-PCR检测76例白血病骨髓标本、8例正常骨髓标本和白血病细胞株K562、HL-60、U-937、Jurkat中γ-catenin的mRNA表达情况,以Western blot和免疫细胞化学法检测上述白血病细胞株中γ-catenin蛋白表达及其分布情况。结果正常骨髓标本中γ-catenin表达阳性率为0（0/8）,急性髓细胞白血病（AML）骨髓标本中γ-catenin表达阳性率为40.0%[12/30,其中M2型的阳性率为50.0%（7/14）],慢性髓细胞白血病（CML）骨髓标本中γ-catenin表达阳性率为13.6%（3/22）,急性淋巴细胞白血病（ALL）和慢性淋巴细胞白血病（CLL）骨髓标本中γ-catenin表达阳性率均为25.0%（3/12）。白血病组γ-catenin表达阳性率与正常组相比,AML组有显著性差异（P〈0.05,其中M2型最为显著）,其余各组均无显著性差异（P〉0.05）。RT-PCR及免疫组化检测可见HL-60和K562细胞γ-catenin呈强阳性,U-937和Jurkat细胞呈弱阳性表达,且γ-catenin主要表达于细胞质中。Western blot检测见K562和HL-60细胞γ-catenin呈阳性表达,而U-937和Jurkat细胞未见表达。结论作为细胞内信号传导分子,γ-catenin表达于AML组、HL-60及K562细胞中,可能与急性髓细胞白血病（特别是M2型）的发生有关。     

JTV1对K562细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的观察上调JTV1基因的表达对人白血病K562细胞系增殖与凋亡的影响并探讨其机制。方法将携带有JTV1基因的pcDNA3.1-JTV1载体转染人K562细胞作为阳性转染组,转染pcDNA3.1空载体作为空载体转染组,未转染的K562细胞为未转染组。通过集落形成实验检测各组K562细胞的增殖能力,采用流式细胞术与Annexin-PI双染色结合分析细胞周期和细胞凋亡率,同时采用RT-PCR法检测JTV1基因及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc mRNA水平的变化,采用Western blotting检测基因JTV1及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc蛋白水平的变化。结果集落形成实验结果显示上调JTV1基因表达后K562细胞的增殖能力明显降低。流式细胞术与Annexin-PI双染色检测结果显示,与空载体转染组及未转染组相比,阳性转染组K562细胞的G期细胞比例明显升高(P<0.05);阳性转染组中Bax基因的mRNA水平和蛋白水平较空载体转染组及未转染组均明显上升,而Bcl-2基因和C-myc基因的mRNA水平和蛋白水平则明显下调(P<0.05)。结论 JTV1基因过表达可能通过抑制基因Bcl-2和C-myc的表达增强基因Bax的表达,从而抑制K562细胞系的增殖并促进其凋亡。     

ASPP家族成员mRNA在乳腺癌细胞株中的表达及意义

p53凋亡刺激蛋白(apoptosis-stimulating protein of p53,ASPP)家族包括ASPP1、ASPP2和iASPP(inhibitory member of the ASPP family)3个成员[1],它们在结构上极为相似,都具有3个典型的特征性结构:4个锚蛋白重复序列、SH3结构域和富含脯氨酸的结构域.本研究旨在了解ASPP家族成员在乳腺癌细胞株中的表达状况及其对细胞凋亡的影响,为进一步研究乳腺癌的靶向治疗奠定基础.     

慢性粒细胞性白血病中SHIP1基因的表达变化及机制探讨

目的观察SHIP1基因在慢性粒细胞性白血病(CML)患者中的表达变化,并通过特异性小干扰RNA(siRNA)封闭K562细胞株BCR-ABL基因的表达,探讨BCR-ABL基因表达对SHIP1基因的影响。方法应用RQ-PCR方法检测CML患者骨髓、正常人外周血白细胞及白血病细胞株K562中SHIP1基因表达的差异。另取K562细胞分为3组:空白对照组(不加任何干扰成分);非特异性siRNA处理组(加非特异性siRNA);特异性siRNA处理组(加入特异性siRNA封闭BCR/ABL融合基因),应用RQ-PCR及Western blot方法分别检测3组中BCR/ABL、SHIP1基因的mRNA及其相应蛋白P210(BCR/ABL编码)、P145(SHIP1基因编码)的表达,并比较各组中表达水平的变化。结果CML患者骨髓白细胞和K562细胞中SHIP1基因的表达明显低于正常人的外周血白细胞。特异性siRNA处理组中BCR-ABL基因mRNA和P210蛋白的表达水平明显下降,SHIP1基因mRNA和P145蛋白表达水平随BCR-ABL表达下降而增加;非特异性siRNA处理组与空白组相比无明显差异。结论CML患者SHIP1基因的表达低于正常人;特异性siRNA能够抑制BCR-ABL基因的表达;BCR-ABL基因能抑制SHIP1基因及其蛋白表达。     

转染野生型p53基因介导的HL—60细胞凋亡与p21蛋白表达的关系

目的：探讨野生型p53基因对HL－60细胞的作用机制,并检测p21的表达,探讨二者在白血病中的关系。方法：用脂质体介导的方法将野生型p53基因导入p53基因严重缺失的人髓细胞白血病细胞系HL－60中,用形态学,电镜,流式细胞仪,间接免疫荧光等方法检测p53对HL－60细胞的促凋亡作用及对p21表达的调节作用。结果：野生型p53基因能促进HL－60细胞凋亡及上调p21表达。结论：p21可能在p53促HL－60细胞凋亡中起协同作用。     

β3肾上腺素能受体激动剂对小鼠巨噬细胞胞葬的影响

目的 探讨β₃肾上腺素能受体(β₃ adrenoceptor,β₃ AR)激动剂对小鼠巨噬细胞胞葬的影响及其可能机制。方法 (1)紫外线照射诱导Jurkat细胞凋亡。紫外线分别照射Jurkat细胞60、75、90 min后,以Annexin V-FITC/PI标记,运用流式细胞仪检测Jurkat细胞凋亡率。(2)构建巨噬细胞胞葬模型。以荧光探针分别标记RAW264.7细胞和Jurkat细胞,将紫外线照射后凋亡Jurkat细胞加入巨噬细胞中共培养,构建巨噬细胞胞葬模型。运用流式细胞术分别比较加药组和对照组巨噬细胞胞葬率。(3)检测β₃ AR及胞葬相关分子mRNA表达水平。运用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)进一步检测对照组和1μmol/L β₃ AR激动剂组β₃ AR及胞葬相关分子mRNA表达水平。结果 (1)与对照组比较,紫外线照射60、75、90 min后Jurkat细胞晚期凋亡率均显著升高[(8.17±1.27)%vs(39.7±14.63)%...     

维甲酸诱导白血病细胞分化对WT1基因表达的影响

为了解WT1基因的表达与白血病细胞分化的关系以及WT1基因在白血病细胞分化中的作用。本文采用全反式维甲酸（ATRA）诱导HL-60、K562细胞系分化,然后应用NBT还原试验和RT-PCR方法分别测定细胞分化程度笔WT1基因表达的变化。结果发现,ATRA作用5天后可以诱导HL-60细胞分化,WT1的表达随着HL-60细胞的分化而降低;ATRA对K562细胞无诱导分化作用。其WT1的表达也无显著变化。提示WT1基因的表达与造血细胞分化呈负相关,与白血病细胞的分化有密切联系。     

147Pm照射对人白血病HL-60细胞bc-l2和bax基因表达的研究

目的 研究了¹⁴⁷Pm照射对人白血病HL60细胞bcl-2和bax基因表达作用。方法 运用免疫组织化学技术探讨147Pm对HL-60细胞bcl-2/bax的蛋白表达, 以及RNA分子杂交技术探讨¹⁴⁷Pm对HL-60细胞bcl-2mRNA的转录水平表达。结果 发现对照HL-60细胞中bcl-2蛋白呈高度表达, 为88%;在¹⁴⁷Pm照射下, 可下调至53%.bax在对照细胞中的表达很低;¹⁴⁷Pm作用后, 未见明显改变。而受¹⁴⁷Pm照射后, 可使HL-60细胞中bcl2mRNA表达呈明显下调, 并随受照射时间的延长, 下调作用更加显着。结论 ¹⁴⁷Pm诱发人白血病HL-60细胞的凋亡作用, 与其下调凋亡相关基因bcl-2的表达相关联。     

三氧化二砷对白血病细胞DNA损伤及凋亡相关基因表达的影响

目的：研究三氧化二砷（As2O3)对HL－60，K562和NB4细胞DNA的损伤及凋亡相关基因的调控。方法：用荧光显微技术，单细胞彗星电泳观察As2O3对HL－60，K562及NB4细胞DNA的损伤，用流式细胞术测定As2O3对HL－60，K562及NB4细胞凋亡相关基因Bcl-2和p53的表达，结果：As2O3诱导HL－60，K562和NB4细胞的凋亡时造成了DNA损伤；显著下调三种细胞内Bcl-2蛋白的表达，且Bcl-2下调程度与凋亡有密切关系，上调了p53蛋白的表达。结论：As2O3诱导细胞凋亡时发生了DNA的损伤，诱导凋亡主要是通过下调Bcl-2和上调p53来实现。     

髓细胞白血病β—catenin表达及与外源性Wnt5a的作用关系

目的调查β-catenin在髓细胞白血病标本及细胞株中的表达,明确外源性Wnt5a与K562细胞β-catenin表达的关系。方法首先以RT-PCR和免疫组化检测β-catenin在髓细胞白血病标本及细胞株中的表达,再以Wnt5a条件培养液处理K562细胞,然后用Westernblot检测β-catenin表达变化。结果β-catenin在髓细胞系白血病标本及细胞株中有普遍表达,但外源性Wnt5a不能明显下调K562细胞β-catenin表达。结论外源性Wnt5a对K562细胞Wnt／β-catenin信号传导途径无明显抑制作用。