利用等位基因特异PCR鉴别虎掌南星及其部分混淆品

目的:建立中药材虎掌南星的分子鉴定方法,为天南星药材质量控制提供依据。方法:GenBank中下载半夏属、天南星属、犁头尖属物种的叶绿体rpl20基因序列,利用DNAMAN进行比对分析,发现半夏属和虎掌南星的SNP位点,并设计鉴别引物Ptrpl94F,Ptrpl708R和Pprpl148F,Pprpl484R,采用等位基因特异PCR方法对虎掌南星、半夏、水半夏3个物种的10个样品进行扩增。结果:引物Pprpl148F和Pprpl484R仅对虎掌南星扩增333 bp条带,半夏、水半夏均无扩增,能准确鉴别虎掌南星。引物Ptrpl94F和Ptrpl708R对半夏、虎掌南星均扩增611 bp条带,水半夏无扩增。结论:本实验建立的等位基因特异PCR方法能准确区别出虎掌南星和半夏、水半夏,为虎掌南星及半夏的正确用药提供了保障。     

中药半夏的DNA分子与分子鉴别

目的 :分析半夏 [Pinelliaternata(Thunb .)Breit.]的核基因组 18SrRNA基因核苷酸序列 ,以中药半夏正品基原进行分子鉴别。方法 :采用PCR直接测序技术测定半夏及其伪品的 18SrRNA基因序列并作DNA序列变异分析。结果 :半夏和伪品虎掌的 18SrRNA序列长度均为 180 5bp ,两者存在 4个变异位点 ,而且在半夏 18SrRNA序列中有一个限制性内切酶AseⅠ识别位点 ,通过PCR RFLP图谱分析可以区别两者。结论 :通过DNA序列和PCR RFLP图谱差异分析 ,可对半夏正品基原进行准确而有效的分子鉴别     

中药材半夏及其混伪品的DNA条形码鉴定研究

目的：采用ITS2序列对中药材半夏及其混伪品进行DNA条形码鉴定研究,为规范中药材半夏的市场流通,保障临床用药安全及疗效提供参考依据。方法：对半夏及其混伪品共59份样品,通过DNA提取及聚合酶链式反应（PCR）扩增其ITS2序列,并采用Mega6.0软件进行多序列比对,计算种内及种间K2P遗传距离,采用邻接（NJ）法构建NJ系统聚类树。采用相似性搜索法、最小距离法、NJ 树法考察ITS2序列的鉴定能力。结果：半夏药材的ITS2序列长度为251 bp,应用相似性搜索法表明ITS2序列能够准确鉴定半夏药材及其混伪品;半夏种内最大K2P距离小于半夏与混伪品间的最小K2P距离;NJ树显示半夏药材可与其混伪品明显分开。结论：ITS2序列能准确、稳定鉴定中药材半夏药材及其混伪品。     

基于ITS2序列SNP位点鉴定白及药材及其混伪品

为建立白及药材的分子标记鉴定方法,该文提取白及及其混伪品药材的基因组DNA,利用PCR技术扩增rDNA ITS2片段,片段经双向测序、排序、比对,构建邻接树,查找SNP位点。结果显示,ITS2序列不仅能够有效地区分白及与其混伪品,而且存在可用作白及、黄花白及与其混伪药材鉴别的SNP位点。针对标记白及药材的SNP位点设计引物,通过筛选引物和优化特异性扩增条件后,获取引物BJ59-412F,BJ59-412R,HHBJ-225R在同一扩增条件下,可有效扩增白及、黄花白及,其产物长度分别约为350,520 bp,而混伪品则无PCR条带产生。该文所述引物和建立的反应条件可成功将白及、黄花白及与其混伪品药材进行同步鉴定,操作快速、简捷,结果可靠,可作为白及药材的快速分子鉴定方法。     

基因测序技术在中药质量研究中的应用(Ⅰ)——山东郓城猴头半夏基原的DNA测序鉴别

目的 :分析半夏Pinelliaternata(Thunb .)Breit.及其伪品虎掌南星PinelliapedatisectaSchott的核基因组序列 ,为半夏正品基原鉴别提供分子依据。方法 :采用PCR直接测序技术测定半夏及其伪品的18SrRNA基因核苷酸离列并作序列变异和选择性内切酶谱 (PCR SR )分析。结果 :半夏和伪品的 18SrRNA序列长度均为 180 5bp ,根据排序比较 ,半夏原植物与商品药材间的序列完全相同 ,虎掌南星亦如此。而半夏与其伪品虎掌南星间则存在序列差异 (有 4个变异位点 )。在半夏 18SrRNA序列中有一个限制性内切酶AseⅠ识别位点 ,通过PCR SR图谱显示 80 0bp和 90 0bp2个酶切片断 ,而虎掌南星则无此位点 ,PCR SR图谱显示 1个未消化的 180 0bp片断。 结论 :通过核基因组序列和PCR SR图谱差异 ,DNA测序技术可成为半夏正品基原鉴别准确而有效的分子方法     

特异性PCR方法鉴别鳖甲药材和饮片

鳖甲为临床常用的动物药材,炮制加工后鳖甲药材及饮片形态特征丢失,难以鉴别。为建立高效稳定的鳖甲DNA鉴别方法,该研究将SDS法与柱纯化相结合,使用通用引物进行PCR扩增和测序,并根据鳖甲及其混伪品序列差异,寻找特异性SNP位点设计了鉴别引物,对PCR反应条件进行优化,并进行适用性及准确性考察。当退火温度为62℃,循环次数为35,使用设计的鳖甲特异性鉴别引物Biejia-272.F/R进行PCR扩增,鳖甲药材、饮片及醋鳖甲均扩增获得约300 bp的特异性鉴别条带,混伪品无条带。该方法可作为一种快速准确鉴别鳖甲正伪品的鉴定方法。     

利用多重等位基因特异PCR鉴别人参、西洋参

目的：查找并发现参类药材的SNP位点,利用多重等位基因特异PCR同时鉴别人参、西洋参。方法：查找GenBank上已收载的参类药材序列,进行比对分析,根据人参、西洋参的SNP位点设计引物,对PCR反应体系进行优选。在此基础上,对20个不同来源的人参、西洋参样品进行PCR扩增,根据各自的特异条带进行鉴别。结果：当退火温度为66 ℃时,出现249 bp条带的为人参,1 049 bp条带的为西洋参。该鉴别反应特异性高、重复性好,能在同一反应中准确鉴别人参、西洋参。结论：多重等位基因特异PCR能成功地对人参、西洋参进行鉴别,在中药材分子鉴定中具有推广应用价值。     

杜仲药材特异性PCR的鉴定方法研究

目的:利用杜仲药材及其混伪品的rDNA-ITS序列差异设计DNA特异引物,实现杜仲药材的快速分子标记鉴定。方法:从NCBI数据库下载杜仲药材及其混伪品的rDNA-ITS序列,比对获得差异DNA片段,设计特异性引物,优化PCR扩增条件和检测方法。结果:扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和荧光反应检测,杜仲药材能扩增400bp的鉴定条带,加入SYBR GreenⅠ染料后在紫外光下有绿色荧光,而其混伪品不具特异条带和绿色荧光。结论:特异性PCR能有效鉴别杜仲药材及其混伪品,通过条件优化显著缩短PCR扩增时间,荧光染料检测能更直观显示鉴定结果,为杜仲药材的快速鉴定提供了新的思路和方法。     

基于ITS序列位点特异性PCR的肉苁蓉与其混伪品的鉴别研究

研究荒漠肉苁蓉、锁阳和黄花列当之间的DNA分子鉴别方法,采集不同产地的30份荒漠肉苁蓉,13份锁阳以及8份黄花列当,所有样品进行总DNA提取,通过对其ITS片段进行扩增,测序。再进行同源比对后根据其变异位点设计特异性鉴别引物,并对位点特异性PCR的反应条件进行了优化;另外,对位点特异性PCR法与DNA序列分析法的鉴别进行了比较。结果显示,该研究设计的位点特异引物在同一PCR反应中,荒漠肉苁蓉能扩增出331 bp的条带,而混伪品锁阳和黄花列当不能扩增出条带,从而实现了正伪品的鉴别。该文通过位点特异PCR的方法可以实现荒漠肉苁蓉与混伪品锁阳、黄花列当的快速、准确鉴别。     

半夏与其混伪品掌叶半夏SCAR标记鉴别研究

目的:建立快速准确的半夏和掌叶半夏分子标记鉴定方法。方法:通过RAPD随机引物的筛选,获得半夏特异的RAPD分子标记片段,经克隆、测序,重新设计特异性引物转化形成稳定的SCAR标记。结果:获得1条稳定扩增的半夏特异片段T350,根据该特异片段序列设计1对特异引物,分别对半夏和掌叶半夏DNA进行扩增,引物可从半夏DNA中扩增获得约330bp的片段,而掌叶半夏未扩增出该片段。结论:T350成功转化为SCAR分子标记,可对半夏和掌叶半夏进行快速有效的鉴定。     

基于气味指纹分析的半夏及其伪品鉴别研究

目的：根据半夏与半夏伪品的气味指纹特征快速鉴别半夏及其伪品。方法：搜集半夏常见掺伪样品水半夏与天南星,并制备半夏不同比例的混合掺伪样品。采用电子鼻技术获取半夏及其不同种类与比 例的掺伪样品气味指纹图谱,依据传感器响应特征值,利用方差分析（Analysis of Variance,ANOVA）、主成分分析（Principal Component Analysis,PCA）、判别因子分析（Discriminant Factor Analysis,DFA）等化学计量学方法对其响应值数据进行分析,并加以鉴别。结果：半夏及其伪品在气味特征上存在明显差异,PCA可明显区分半夏及其掺伪品,且随着半夏掺伪比例的增加其气味差异性越来越明显,其中水半夏掺伪品的电子鼻信息呈线性变化;DFA 模型累积方差总贡献率为100%,正确判别率不小于97%。结论：电子鼻技术可用于半夏及其伪品的快速鉴别,本研究可以为中药材的伪品鉴别提供新技术和新方法。     

半夏类药材研究概况

半夏作为一种传统的中药材，具有很好的药用价值。近年来，由于半夏资源匮乏，市场上出现了以其它半夏类药材代替半夏使用的现象。本文对半夏类药材就其生药学、化学成分、药理及毒性的研究情况作简要综述，以便进一步对它们进行比较研究提供参考，同时本文还就半夏类药材的研究前景提出自己的一些看法。     

半夏与其伪品掌叶半夏的RAPD鉴别

目的建立半夏及其伪品掌叶半夏的快速简单的分子鉴定方法。方法 SDS法提取半夏和掌叶半夏的基因组DNA,20个10碱基随机引物(S1-S20,上海生工)用于RAPD-PCR分析。结果 20个引物中有7个有效稳定的引物在半夏和掌叶半夏之间能显示出多态性指纹图谱,其中S10和S17在半夏和掌叶半夏之间显示较大差异。结论利用引物S10和S17进行RAPD-PCR能有效鉴别半夏和掌叶半夏。     

我国不同地区半夏rDNA序列分析

目的：研究我国不同地区半夏核糖体 ITS 碱基序列差异及其与其地理分布和外部形态的相关性。方法：运用PCR法对半夏 ITS1-5.8S-ITS2序列扩增后直接测序,用软件CLUSTRAL 1.83和 MEGA 3.1分析测序结果。结果： 得到我国半夏主要的16个居群18个样本rDNA中的ITS和5.8S rDNA完全序列。ITS1,5.8S和ITS2序列长度分别为276,162,246 bp。ITS2碱基频率差异显著,ITS1较为保守。根据两者序列以邻接法建立分子系统发生树。结论：半夏rDNA变异与其地理分布相关,与其外部形态关系有待进一步研究。     

半夏种质资源的随机扩增多态性DNA技术分析

目的分析半夏种质资源在分子水平上的遗传多样性。方法应用随机扩增多态性DNA技术(RAPD)对21份半夏种质资源进行检测。结果29个引物共得到162条扩增DNA片段,其中123条(75.9%)的片段具多态性,揭示了半夏居群间较丰富的遗传多样性。利用UPGMA法进行聚类分析表明,所有材料可划分为3类,根据RAPD遗传相似系数划分的类群同地理分布有一定关系。结论半夏种质资源在分子水平上确实存在较大遗传差异。RAPD标记可作为构建半夏DNA指纹图谱的有效工具。     

不同生境和加工方法对半夏质量的影响研究

目的　对不同生境和加工方法的半夏化学成分进行测定 ,比较其质量差异 ;方法　以三种化学成分为检测指标 ,分别采用比色法、薄层扫描法、高效液相色谱法对半夏样品进行比较分析 ;结果　栽培半夏和野生半夏的总生物碱含量差异较大 ;但 β-谷甾醇含量较为一致 ,以南充片区所产半夏为高 ;栽培半夏的鸟苷含量明显高于野生半夏。半夏皮中 3种化学成分含量均高于去皮和带皮的半夏 ,且硫熏会导致半夏中总生物碱含量明显降低。结论　不同生境的半夏化学成分有一定差异 ,而不同加工方法会对半夏质量产生明显影响     

半夏基因组DNA的提取及鉴定

目的探讨不同DNA提取方法对半夏DNA质量及RAPD-PCR标记结果的影响。方法对用不同方法提取的DNA进行电泳、紫外吸收A260/A280和RAPD-PCR分析。结果不同方法提取的DNA质量和产率差异不显著,对RAPD结果无影响。结论半夏在DNA提取前加入氯仿对材料预处理,可获得较高质量的DNA进行PCR扩增。     

不同居属地半夏有效成分有机酸的比较研究

目的对全国不同居群半夏进行初步的质量评价,为半夏品种选育提供科学依据。方法收集不同居群的半夏,以其有效成分(总有机酸)含量为评价指标,进行品种质量评价,以遴选出优良半夏品种。总有机酸含量(以琥珀酸计)采用电位返滴定法测定。结果不同居群半夏药材的总有机酸含量存在显著差异,有机酸含量以四川绵阳半夏最高。结论我国半夏种质参差不齐,要培育出优质半夏,需要通过各种人工方法对品质优良的半夏进行品种选育。     

半夏及不同炮制品中总游离有机酸含量比较

目的建立半夏及其不同炮制品中总游离有机酸的含量测定方法,比较半夏及其炮制品中总游离有机酸的含量。方法采用电位返滴定法,以琥珀酸为对照品,测定生品及炮制品中总游离有机酸的含量。结果分别测定了3批生品及清半夏、姜半夏中游离有机酸含量,姜半夏和清半夏中游离有机酸含量相对于生品有不同程度的提高。加样回收率为95．20％,RSD=1．81％。结论本法简便、准确、可靠,可作为半夏及其炮制品清半夏和姜半夏中游离有机酸测定方法。